根据GenBank中猪TP53诱导的糖酵解和凋亡调节因子（TP53-induced glycolysis and apoptosis regulator，TIGAR）mRNA序列（登录号：XM_001926543），设计合成了1对特异性引物，通过对反应条件的优化，建立了荧光定量RT-PCR技术检测猪TIGAR基因转录水平的方法，同时对长白猪宰后不同时间TIGAR mRNA转录水平进行了测定。结果表明，所建立的TIGAR基因标准曲线的R²为0.9995，内参基因β-actin标准曲线的R²为0.9996，2基因的扩增效率分别为103.7%和104.1%，扩增效率接近一致，可对TIGAR mRNA转录水平进行相对定量。该方法特异性强、灵敏度高，具有一定应用价值。

为探索极低密度脂蛋白受体(very low density lipoprotein receptor，VLDLR)和载脂蛋白E受体2(apolipoprotein E receptor 2，ApoER2)在鸭肌内脂肪性状发育中的作用机制，本研究应用实时荧光定量PCR检测了VLDLR和ApoER2基因在1~8周龄北京鸭胸肌、腿肌、心肌中的表达丰度，分析其在早期生长阶段的发育性变化。结果显示VLDLR和ApoER2在鸭不同肌肉中的表达具有组织特异性。VLDLR 基因mRNA丰度在3种肌肉组织中变化较大，且明显呈现上升—下降（胸肌）、下降—上升—下降—上升（腿肌）及下降—上升—下降（心肌）3种模式的变化；ApoER2基因mRNA表达量在胸肌第3周龄时达最高（P<0.01），在腿肌组织中前6周保持相对较低水平，在后2周迅速上升，且显著高于其余各周（P<0.01），而在心肌组织中呈上升—下降趋势，且在前2周表达量显著高于其余各周（P<0.01）。同周龄VLDLR和ApoER2基因mRNA的表达量在不同部位肌肉中表现出明显差异。以上结果说明，VLDLR和ApoER2基因在鸭肌内脂肪性状形成中起到了重要作用，且存在着时空特异性。

为分析2012年河南省猪流行性腹泻病毒（PEDV）的遗传变异情况，本研究设计合成2对扩增S1基因的特异性引物，利用RT-PCR方法，对2012年分离的5株PEDV毒株的S1基因进行扩增、克隆和序列测定，并对其进行遗传进化分析。结果表明，5株PEDV S1基因核苷酸和氨基酸同源性分别为98.3%～99.5% 和97.1%～98.9%；与2011年以来国内登录的PEDV流行变异株核苷酸同源性为88.6%～98.0%，氨基酸同源性为85.3%～98.7%；与经典毒株CV777核苷酸同源性为88.7%～89.1%，氨基酸同源性为87.3%～88.4%。5株分离株S1基因均存在相同的插入和缺失，与2011年以来国内登录的流行变异毒株相比没有大的变异，但与参考毒株CV777相比，在163—166 bp处有3个核苷酸插入；在173—174 bp之间有9个核苷酸插入；在405—406 bp之间有3个核苷酸插入；在463—464 bp之间有3个核苷酸缺失，这些位点核苷酸的插入和缺失导致了其编码的氨基酸相应改变。S1基因系统进化树分析结果表明，5株分离株与2011年以来国内登录的流行变异毒株均属于基因Ⅲ群，与2011年国内登录的少部分PEDV基因Ⅰ群流行毒株的核苷酸同源性为88.6%～89.3%，氨基酸同源性为85.3%～86.9%，而经典毒株CV777所在分支群属于基因Ⅱ群。本试验结果表明，2011年以来，中国流行的PEDV毒株中同时有基因Ⅲ和Ⅰ群的存在，但以基因Ⅲ群毒株为主，其致病性和抗原性差异仍有待进一步研究。

为快速检测柱状黄杆菌，本研究以纯化的柱状黄杆菌单克隆抗体为捕获抗体，以多克隆抗体为检测抗体，建立了双抗体夹心ELISA （DAS-ELISA）检测法。最佳的方案为用0.08 μg/孔纯化的单克隆抗体4 ℃包被过夜，30 g/L牛血清白蛋白37 ℃封闭90 min，多克隆抗体的工作浓度为0.11 μg/孔，检测抗原、多克隆抗体、酶标抗体均为37 ℃作用1 h，显色15 min后终止反应，当D_{492 nm}值≥0.776且P/N≥2.1时判定为阳性。该方法特异性强，与迟钝爱德华氏菌、大肠杆菌、嗜水气单胞菌、鳗弧菌、溶藻弧菌、副溶血弧菌、哈维氏弧菌等水产病原菌均无交叉反应。最低检测剂量为1×10³ CFU。本研究首次建立了检测柱状黄杆菌的双抗体夹心ELISA方法，经验证该方法特异性强、灵敏度高。

试验为制备抗κ-酪蛋白单克隆抗体并对其进行特性鉴定，采用足垫免疫κ-酪蛋白的方法刺激BALB/c小鼠产生免疫应答，将小鼠腘淋巴结细胞与骨髓瘤细胞在PEG诱导下进行融合，通过克隆化培养获得了能稳定分泌抗κ-酪蛋白抗体的杂交瘤细胞株，并利用Protein G亲和层析柱纯化腹水获得了单克隆抗体。试验获得了3株杂交瘤细胞株：1C4、3G3、3E6，所分泌的抗体亚类均为IgG1，其中3G3与3E6抗原识别表位不同，1C4与3E6抗原识别表位相近，1C4株腹水纯化后效价为1.28×10⁶，其亲和力常数为2.89×10⁸ mol/L。试验制备出了亲和力较好的抗κ-酪蛋白单克隆抗体，为牛奶酪蛋白的快速检测奠定了基础。

本研究利用一种高特异性PCR引物设计方法——双启动寡核苷酸引物 (dual-priming oligonucleotide, DPO)，以志贺氏菌属侵袭性质粒抗原（ipaH）基因为靶基因，设计DPO引物，建立了特异性检测志贺氏菌属的DPO-PCR方法。结果显示，所建立的DPO-PCR方法检测灵敏度为1.65×10² CFU/mL；与常规PCR引物相比，DPO引物设计简易，简化了PCR引物设计；DPO引物退火温度范围宽，在50～70 ℃退火温度内均可对靶基因进行高效扩增； DPO引物结构特殊，具有比常规PCR引物更高的特异性，反应中无非特异性扩增产生。实践检测结果显示，利用该方法对133份冻/鲜肉类、果蔬类、鲜牛奶、鸡蛋和熟食样本进行检测，共检出15份志贺氏菌阳性样本，经国标法(GB/T 4789.5—2012)复检，两者检测结果一致，显示出良好的实用性和可靠性，为志贺氏菌快速、准确的检测提供了新手段。

为了解猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)流行株的变异特点，本试验从广东省疑似猪繁殖与呼吸综合征发病猪场采集的血清中分离到2株PRRSV，经RT-PCR检测为阳性，通过Marc-145细胞进行传代，能产生明显细胞病变。2株病毒分别命名为LZ-GD和LB-GD株PRRSV。对2株病毒的ORF5和Nsp2高变区进行序列测定和进化分析，结果显示,LZ-GD和LB-GD株的ORF5核苷酸序列与欧洲型代表株Lelystad株的同源性相对较远，分别仅为63.5%和63.8%，与美洲株经典毒株VR-2332的同源性分别为88.7%和89.1%，与中国高致病美洲毒株JXA-1的同源性分别为99.2%和99.3%。在分离病毒的Nsp2上存在30个氨基酸的不连续缺失，与中国高致病性变异株JXA-1的缺失位置一致，且同源性为99.1%和98.9%，结果表明分离的2株PRRSV均属于美洲型的变异株PRRSV。

试验通过提取绒山羊皮肤总RNA，克隆角蛋白辅助蛋白1.1（keratin-associated protein 1.1，KAP1.1）基因，构建重组真核表达载体pEGFP-N3-KAP1.1，利用脂质体介导法将重组质粒转入内蒙古绒山羊体外培养的成纤维细胞中，研究该基因在真核细胞中的时空表达、亚细胞定位及表达规律。结果显示，2.0 μg重组质粒和6.0 μL脂质体的比例为适合本试验的最优化方案，KAP1.1基因能在内蒙古绒山羊成纤维细胞中成功表达，并在转染后48 h转染率达到峰值，该基因在真核体外培养细胞中细胞核、细胞质和细胞膜上均有表达，但以细胞核表达量最强。

本研究对水牛水通道蛋白8（aquaporin 8，AQP8）基因进行了克隆，并构建了真核表达载体,同时对AQP8基因在水牛卵巢组织中的表达进行了分析。结果发现，水牛AQP8基因编码区长度为732 bp，与黄牛及小鼠AQP8基因的氨基酸序列同源性为100%。AQP8蛋白在不同发育阶段水牛卵泡中均有表达，在次级卵泡中的表达显著高于原始卵泡和初级卵泡（P＜0.05），且集中表达于卵泡颗粒细胞。构建的pEGFP-N1-AQP8真核蛋白融合表达载体经脂质体法转染HEK293T细胞后，可观察到清晰的EGFP绿色荧光蛋白表达。该试验结果为深入研究AQP8基因在水牛卵泡发育及颗粒细胞凋亡中的功能奠定了基础。

试验据GenBank登载的牛环形泰勒虫裂殖子/梨浆虫表面抗原（the merozoite/piroplasm surface antigen，Tams1）基因序列（登录号：AF214842），设计1对特异性引物，经PCR扩增出696 bp的Tams1基因片段，将其插入pGEX-4T-2表达载体，提取质粒进行双酶切鉴定并测序，同源性达98%；将插入阳性质粒的BL21（DE3）菌种诱导表达重组蛋白，经优化后在37 ℃、0.5 mmol/L IPTG诱导4 h的表达条件下获得了表达量达1.39 mg/mL的可溶性融合蛋白，大小为53 ku；表达产物在Glutathione Sepharose 4B柱上纯化后，免疫印迹检测结果表明重组蛋白GST-P27具有良好的反应原性。

试验利用PCR方法检测101株不同源鼠伤寒沙门氏菌携带质粒的不相容群，共设计18对引物，PCR分为5个三重PCR和3个单一PCR，用来检测识别FIA、FIB、FIC、HI1、HI2、I1、L/M、N、P、W、T、A/C、K、B/O、X、Y、F 和FII复制子。101株不同源鼠伤寒沙门氏菌中94株（93.1%）携带质粒不相容群，共携带10种质粒不相容群，分别是Inc HI1、Inc HI2、Inc I1、Inc FIA、Inc FIB、Inc N、Inc Y、Inc P、Inc FIIA和Inc FrepB，其中76.6%的菌株携带2个或2个以上质粒不相容群。结合药物敏感性试验结果，追踪鼠伤寒沙门氏菌耐药传播机制。本研究调查了耐药性质粒在鼠伤寒沙门氏菌的水平传播特性，不同环境中大量的菌株介导特定多重耐药性质粒的扩散，对调查跟踪质粒赋予耐药的流行病学有重要意义。

利用腺病毒表达系统表达猪圆环病毒2型（porcine circovirus type 2，PCV2）的ORF2基因与T细胞表位（T cell epitope，TCE）基因，表达的融合蛋白具有反应原性，为研制PCV2新型疫苗奠定基础。以pMD18-T-ORF2、pMD18-T-TCE为模板，采用PCR方法扩增目的基因ORF2和TCE，以多肽接头（Gly₄Ser）₃为连接子，运用重叠延伸PCR技术将2段基因通过连接子（Gly₄Ser）₃进行融合连接。将融合基因定向克隆至腺病毒转移载体pShuttle-CMV构建重组质粒pShuttle-CMV-ORF2-TCE，将该重组质粒用PmeⅠ酶线性化后电转化大肠杆菌BJ5183感受态细胞（内含pAdEasy-1骨架质粒）进行同源重组获得重组腺病毒质粒pAd-ORF2-TCE。PacⅠ酶线性化pAd-ORF2-TCE质粒后转染AD293细胞包装病毒，重组腺病毒经3轮噬斑纯化后获得重组腺病毒rAd-ORF2-TCE，病毒滴度为10^12.3 TCID₅₀/mL。Western blotting及间接免疫荧光试验（indirect immunofluorecent assay，IFA）结果表明融合蛋白得到正确表达。

为实现山羊2种疫病病原体——小反刍兽疫病毒（PPRV）和山羊痘病毒（GTPV）的同步快速检测，基于PPRV的N基因及GTPV的ITR基因，分别设计合成2套特异性引物及探针；探针分别用5′FAM-TAMRA3′及5′JOE-Eclipse3′标记物进行标记以实现同步检测。试验结果显示，所建立的N-ITR二联探针实时荧光定量RT-PCR方法可同步检测PPRV和GTPV，产生特异性荧光信号，而对禽痘病毒（FPV）、犬瘟热病毒(CDV) 等相关病毒无荧光信号检出。以PPRV-N和GTPV-ITR的pMD18-T 载体质粒为标准品，构建了二联标准曲线，N-ITR探针对PPRV和GTPV的检测敏感度可分别达10²和10³拷贝/μL。本研究初步建立了可同步快速特异性检测PPRV和GTPV的二联实时荧光定量RT-PCR方法。

E₀基因编码的蛋白是牛病毒性腹泻—黏膜病病毒（BVDV）的主要保护性抗原之一，其是研制BVDV基因工程疫苗的候选者。E₀基因在卡介苗中难以表达，已有研究结果表明E₀蛋白具有RNase活性。根据卡介苗密码子使用频率分析E₀基因，发现其有多个稀有密码子。通过对该基因截短和密码子优化，在卡介苗中表达E₀基因，检测到了E₀蛋白的抗原活性，为构建可同时预防结核和牛病毒性腹泻—黏膜病的二价基因工程疫苗奠定基础。

本试验旨在建立同时检测鸭坦布苏病毒(DTMUV)和鸭瘟病毒(DPV)的二重荧光定量RT-PCR方法。针对GenBank中DTMUV E基因和DPV UL6基因的保守序列，设计合成了2对引物和2条TaqMan探针。通过优化反应体系、条件及评价其特异性、敏感性，建立了检测DTMUV和DPV的二重荧光定量RT-PCR方法。该方法对DTMUV和DPV的检测灵敏度均达100个模板拷贝数，同时该方法对鸭源新城疫病毒、鸭肝炎病毒、番鸭细小病毒、H9亚型禽流感病毒和减蛋综合征病毒的检测结果均为阴性。本研究建立的DTMUV和DPV二重荧光定量RT-PCR具有敏感、快速、特异、定量、重复性好等优点，可用于DTMUV和DPV感染的快速鉴别诊断。

为探讨泌乳乳腺中必需氨基酸与L型氨基酸转运载体1（L-type amino acid transporter 1，LAT1）表达之间的关系，本研究通过体外构建奶牛乳腺泌乳模型，采用免疫印迹方法检测生理浓度的必需氨基酸对乳腺腺泡中LAT1及其辅因子4F2重链（4F2 heavy chain, 4F2hc）表达变化的影响。结果表明，生理浓度的必需氨基酸显著上调体外培养的奶牛乳腺腺泡中LAT1和4F2hc的表达，提示LAT1是奶牛乳腺上皮细胞内负责转运必需氨基酸的主要转运载体，LAT1和4F2hc的表达受必需氨基酸的诱导。

从某发病鸡场分离获得1株嗜肾型鸡传染性支气管炎病毒（infectious bronchitis virus，IBV），命名为QD株，据GenBank发表的IBV S1基因序列设计1对特异性引物对QD分离株S1基因进行扩增、克隆及序列测定，并将其与国内流行株及参考毒株进行比对。结果显示，IBV QD株S1基因全长为1620 bp，S蛋白裂解识别位点为RRFRR。同源性分析结果表明，QD株与国内外疫苗毒株核苷酸同源性为78.8%～82.2%。遗传进化分析结果表明，QD株与国内外主要疫苗株亲缘关系较远，与近几年国内分离的肾型毒株亲缘关系最近。本试验结果表明IBV肾型毒株在中国广为流行，该毒株可作为肾型传染性支气管炎疫苗株的候选毒株。

本试验旨在建立一种能快速、灵敏、特异的检测沙门氏菌的LAMP方法。据GenBank公布的沙门氏菌高度保守的STN基因序列设计引物，继而进行一系列的LAMP反应条件的优化、特异性、敏感性、稳定性、酶切试验，并将LAMP与常规PCR进行比较。结果显示，LAMP方法最佳反应温度为65 ℃，只扩增沙门氏菌，最低可检出浓度为10¹ CFU/mL，比常规PCR的最低检出浓度高1个数量级。本试验结果表明LAMP方法对沙门氏菌的检测特异性强、敏感性高、耗时短、方法简便，有望发展成为快速检测沙门氏菌的有效手段。

从龙岩市48个规模化猪场分离到28株副猪嗜血杆菌(Haemophilus parasuis，Hps)，菌株经生化试验和PCR鉴定均符合Hps特征，血清学分型以4型、5型为流行菌株，以筛选出的4型LY04和5型LY05 2株代表性分离株为抗原研制Hps油乳剂灭活苗，免疫14日龄仔猪，保护率均为66.7%。

为更好的开展犬腹泻病的诊断与疫情监控，根据犬瘟热病毒（canine distemper virus，CDV）和犬冠状病毒（canine coronavirus，CCV）的基因特征，建立了可快速鉴别诊断CDV和CCV的双重PCR方法。对GenBank中登录的21株CDV和17株CCV的野毒株、疫苗株基因组全序列进行比对分析，分别针对H蛋白和S蛋白编码区各设计了1对特异引物，分别扩增出大小为550和225 bp的目的片段。回收目的片段插入到pMD18-T载体中进行测序鉴定，分别提取阳性质粒制备阳性标准DNA。通过优化试验条件，建立了检测CDV和CCV的双重PCR方法并对其进行灵敏度、特异性和临床验证。该双重PCR方法能特异的扩增CDV和CCV，且敏感性均达到0.1 ng/μL总核酸量。与胶体金试纸条方法对比检测67份临床样品，符合率较高，CDV达到92.5%，CCV达到94%。

为获得猪繁殖与呼吸综合征病毒（porcine reproductive and respiratory syndrome virus，PRRSV）核衣壳蛋白（N）和糖蛋白（E），试验通过RT-PCR反应获得ORF7和ORF5基因片段，分别克隆至原核表达载体 pET-28a(+)，转化至大肠杆菌 BL21（DE3）中诱导表达，SDS-PAGE分析目的蛋白表达情况，Western blotting 检测表达蛋白的免疫活性，采用亲和层析对表达蛋白进行纯化。结果表明，成功表达N和E融合蛋白，Western blotting结果表明表达蛋白具有良好的反应原性，纯化蛋白的纯度分别为89%和90%。融化蛋白的表达为PRRSV的分子生物学功能研究和测定抗体检测方法的建立奠定了基础。

microRNA(miRNA)是一类重要的转录后调控的非编码单链RNA，在基因表达调控方面具有广泛的作用。miRNA也已逐渐成为生命科学领域的研究热点。近些年miRNA关于骨骼肌发育中的重要调节作用也相继被报道。作者主要对调节骨骼肌发育的一些关键miRNA的研究进行了综述。

本试验旨在制备用于小尾寒羊瘦素长型受体（leptin receptor long form）基因实时荧光定量PCR的标准品质粒和标准曲线。提取初情期前小尾寒羊下丘脑弓状核组织总RNA，进行反转录合成第1链cDNA，然后进行PCR和目的基因片段的回收；通过T-A克隆将该基因片段插入pMD18-T载体中，构建回收产物的重组质粒；大量提取质粒，定量后进行标准曲线的制作和实时荧光定量PCR。重组质粒经PCR扩增和测序，结果表明，瘦素长型受体基因已成功克隆。提示，所构建的瘦素长型受体基因实时荧光定量标准曲线线性关系好，灵敏度和特异性高，准确可靠，此方法可作为实时荧光定量PCR检测瘦素长型受体基因的标准方法。

宏基因组学是不依赖人为培养技术，研究环境中全部微小生物遗传物质的总和，在研究胃肠道微生物代谢和开发瘤胃微生物资源中具有广泛的应用。动物胃肠道中存在大量共生微生物群，对宿主的生理功能、物质代谢、健康和疾病状况有重要影响。因此该技术有望解决骆驼等反刍动物代谢研究中诸多热点或难点问题。作者介绍了宏基因组文库构建和筛选流程及Roche454和Illumina高通量测序方法，并展望了宏基因组学的应用前景。

以1株肠炎沙门氏菌作为宿主菌，应用双层平板噬菌斑试验从污水中分离噬菌体并对其基本生物学特性进行研究。结果显示成功地从污水中分离出1株肠炎沙门氏菌噬菌体，噬菌斑呈圆形透明状，直径2 mm 左右(培养12 h)，边界清楚；电镜观察结果显示该噬菌体有1个正多面体立体对称的头部，头部直径约54 nm，无囊膜，有1长尾，无收缩尾鞘，尾长约110 nm；当感染复数（MOI）为2时，子代噬菌体滴度较高；按一步生长试验结果绘制出一步生长曲线，结果显示感染宿主菌的潜伏期约为10 min，裂解期约100 min，平均裂解量约为61。该试验结果为动物沙门氏菌病的进一步噬菌体生物防制研究提供了材料。

为寻找与猪流行性腹泻病毒（porcine epidemic diarrhea virus, PEDV）相互作用的Vero E6细胞蛋白，深入研究病毒感染机制，本试验建立了一个Vero E6 细胞酵母杂交cDNA文库。采用Trizol试剂从培养的Vero E6细胞中提取细胞总RNA，通过SMART技术合成双链cDNA，并利用同源重组的方法构建Vero E6 细胞的酵母cDNA文库。结果显示，文库滴度为9.7×10⁸CFU/mL，插入的双链cDNA片段大小为0.5～3 kb，平均长度约为1.6 kb，文库重组率为87%，此文库可以用来筛选与病毒相互作用的Vero E6蛋白。该文库的构建为发现和研究与PEDV结构蛋白相互作用的宿主细胞蛋白奠定基础。

本试验旨在研究2种不同菌剂（枯草芽孢杆菌和啤酒酵母）接种苹果渣原料进行微生物发酵的效果，并对混合菌种发酵结果的影响条件进行分析比较。通过3因素（浆料比、接种量、pH）正交试验设计，测定发酵产物中真蛋白质含量。结果表明，枯草芽孢杆菌和啤酒酵母混合菌种最佳发酵条件下真蛋白质含量最高,可达到13.58%，混合菌种发酵对产物中真蛋白质含量影响最大的因素是浆料比，其次是pH，推荐发酵参数为浆料比1.0∶1、枯草芽孢杆菌接种量3%、pH 5。酵母与菌剂之间呈协同作用可进一步提高发酵苹果渣中真蛋白质含量。

本试验旨在研究不同酸化剂及其水平对鲜饲料保质效果与生长期水貂腹泻的影响。选用100只雄性水貂，随机分为10组，每组10只，Ⅰ组为对照组饲喂基础日粮，Ⅱ～Ⅳ组分别在基础日粮中添加0.4%、0.6%、0.8%磷酸，Ⅴ～Ⅶ组分别在基础日粮中添加0.5%、1.0%、1.5%柠檬酸，Ⅷ～Ⅹ组分别在基础日粮中添加0.5%、1.0%、1.5%乳酸。试验期62 d。结果表明，酸化剂可降低长期冷冻保存鲜饲料的酸值（AV）、羰基值（COV）和挥发性盐基氮（TVBN）水平，抑制脂肪、蛋白质氧化变质过程，提高鲜饲料保质水平，其中添加1.5%乳酸保质效果最好；饲料酸化剂对37 ℃条件下鲜饲料中大肠杆菌菌落数影响显著，1 h时1.5%柠檬酸组大肠杆菌菌落数最低(P＜0.01)，4 h时0.4%磷酸组大肠杆菌菌落数最低(P＜0.05)，8 h时1.5%乳酸组大肠杆菌菌落数最低(P＜0.05)；应用饲料酸化剂可极显著降低生长期水貂腹泻指数、腹泻率(P＜0.01)，对缓解夏季水貂腹泻意义重大。提示，水貂日粮中添加1.5%乳酸综合效果较好。

维生素A是一种动物所必需的营养素和重要抗氧化剂，具有保护上皮组织完整性、促进骨骼发育、调节新陈代谢和胚胎发育、增强机体免疫力等功能。随着研究的深入，人们逐渐发现维生素A在肠黏膜免疫和诱导淋巴细胞的凋亡中也充当着重要的免疫佐剂。为进一步拓宽营养与免疫研究视野，作者就维生素A在免疫方面的最新研究进展进行综述。

脂肪是动物机体必不可少的营养物质和组成成分，作者回顾了近年来国内外与单胃动物相关的脂肪营养研究进展，结合脂肪在体内的消化吸收，分别从脂肪的生物学功能及其在动物生产中的应用等方面进行综述，为脂肪在动物生产上更好的利用及其作用机制的探讨提供参考。

作者综述了中国卵黄抗体作为新型饲料添加剂在仔猪、牛、家禽、犬、虾、蚕等动物生产过程中研发与应用的现状，指出了其工业化生产在安全性、稳定性、单一性、口服局限性及标准化规程中所面临的突出问题，旨在加速中国卵黄抗体产业化进程，使卵黄抗体技术在动物生产中得到广泛的推广应用。

本试验通过对牛粪进行富集培养、分离纯化，利用刚果红染色法和摇瓶复筛得到1株产酶活较高的纤维素分解菌N12，经形态观察、生化鉴定和16S rRNA遗传学鉴定为芽孢杆菌属的短小芽孢杆菌（Bacillus pumilus），并对其产酶条件进行了初步优化。结果表明，菌株N12以0.5%玉米粉为碳源、1%酵母粉为氮源、初始pH 3.0、42 ℃摇瓶培养54 h产酶活最高。

为了研究藏獒体细胞生物学特性和保存藏獒遗传资源，采用组织块法建立了2株藏獒成纤维细胞系，对体外培养的细胞形态、增殖能力和部分生物学特性进行了分析。结果表明，体外培养的藏獒细胞呈现典型的成纤维细胞形态，生长良好，增殖能力强，测定的细胞群体倍增时间为46.1 h；经免疫荧光染色，细胞表达波形蛋白；F5代细胞正常二倍体核型率为91.4%，藏獒核型2n=78，X染色体为亚中着丝粒染色体，Y染色体为端着丝粒染色体。本研究所建立的藏獒体细胞系为开展藏獒体细胞核移植研究提供了材料。

试验旨在研究葡萄糖对鹅肝细胞氧化应激的影响。通过RT-PCR方法扩增鹅肝脏谷胱甘肽过氧化物酶1（GPX1）和超氧化物歧化酶1（SOD1）基因的部分序列，分离、培养天府肉鹅原代肝细胞，并在添加不同浓度（0（对照组）、5、25、35 mmol/L）葡萄糖培养基中培养48 h，检测GPX和SOD活力及GPX1和SOD1 mRNA表达水平。结果表明，鹅GPX1与斑胸草雀的同源性最高，SOD1与原鸡的同源性最高；与对照组相比，5 mmol/L葡萄糖对GPX活力的影响不显著（P＞0.05），25和35 mmol/L葡萄糖均显著降低GPX活力（P＜0.05）；5 mmol/L葡萄糖显著增加SOD活力（P＜0.05），25和35 mmol/L葡萄糖对SOD活力均无显著影响（P＞0.05）；5和25 mmol/L葡萄糖对GPX1和SOD1 mRNA表达均无显著影响（P＞0.05），高浓度葡萄糖（35 mmol/L）可显著增加GPX1和SOD1基因的表达水平（P＜0.05）。提示，高浓度葡萄糖（35 mmol/L）能引起鹅肝细胞内氧化应激的产生。

本试验旨在研究白花蛇舌草超微粉对小鼠免疫功能的影响。试验将60只昆明小鼠随机等分为4组，高、中、低剂量组（1～3组）分别以小鼠每千克体重灌胃不同剂量白花蛇舌草超微粉悬液，剂量依次为1.75、1.25、0.75 g/kg，连续给药7 d；第4组为空白对照组，灌胃等量的生理盐水。最后一次给药后间隔12 h，各组小鼠用鸡新城疫弱毒疫苗接种，随后在给药结束后的第7、14和21天采集小鼠外周血用于分离淋巴细胞和血清，用CCK-8法测定外周血淋巴细胞增殖能力，微量血凝抑制试验评价血清中新城疫抗体水平；给药结束后21 d测定小鼠腹腔巨噬细胞吞噬能力，并测定脾脏指数。结果显示，高剂量白花蛇舌草超微粉可极显著提高小鼠外周血淋巴细胞增殖能力、免疫抗体水平(P＜0.01)，同时还能极显著提高腹腔巨噬细胞的吞噬能力和脾脏指数(P＜0.01)。试验结果表明白花蛇舌草超微粉能极显著提高机体的特异性免疫和非特异性免疫功能，为以后开发白花蛇舌草超微粉成为新型天然植物药、饲料添加剂提供了依据。

本试验研究了不同浓度的大豆苷（daidzin）和染料木苷（genistin）对山羊乳腺上皮细胞（mammary gland epithelial cells, MEC）增殖的影响，主要采用MTT法研究不同浓度的大豆苷和染料木苷刺激影响细胞增殖的状况。结果表明，2种苷纳克级别浓度组较微克级别浓度组对细胞增殖的影响更明显；处理细胞48 h较24和72 h对细胞增殖的影响更明显；10 ng/mL大豆苷和10、100 ng/mL染料木苷均能显著促进山羊MEC增殖（P<0.05）。

鸡生殖道相关淋巴组织作为泌尿生殖道抵御外界病原微生物入侵的第一道免疫屏障，研究其组成和发育有助于了解蛋鸡生殖道黏膜免疫状态的变化情况，尤其是出壳初期和产蛋期间的免疫状态，从而为蛋鸡生殖道疾病（尤其是沙门氏菌病）的防制提供理论依据，并最终为人们能够食用上健康无污染的鸡蛋奠定基础。因此，作者对鸡生殖道相关淋巴组织的结构基础、发育情况及其免疫功能进行了综述。

肺表面活性蛋白是磷脂发挥功能的重要载体，主要分布于支气管表面和肺泡气—液界面，具有降低表面张力的特性，可防止肺泡塌陷，有利于气体交换，维持肺残气量和保持肺部的顺应性。目前已发现4种蛋白，分别是SP-A、SP-B、SP-C和SP-D。这4种蛋白在肺部疾病防御及肺功能的维持中起重要作用。因此，作者从SP的结构、功能及其与疾病的相关性方面进行综述，为今后的研究提供基础依据。

为探讨评定吐鲁番斗鸡攻击行为表型强弱的行为谱和影响吐鲁番斗鸡攻击行为相关基因的SNP，采用镜像自斗法和配对打斗法分别观测相同的12只吐鲁番成年斗公鸡的攻击行为表型，并对103只吐鲁番斗鸡和71只新罗曼鸡单胺氧化酶A（monoamine oxidase A，MAOA）基因的第1、2外显子进行了PCR-SSCP分析。结果显示，2种打斗法的攻击行为表型的强弱排序基本一致，表明所编制的攻击行为的行为谱可用于吐鲁番斗鸡攻击行为强弱的表型评定；MAOA1在吐鲁番斗鸡和新罗曼鸡上检测到的多态性一致，而在MAOA2上检测到多态性并不完全一致，推测MAOA2位点与吐鲁番斗鸡的攻击行为具有一定的相关性。

试验对延边黄牛甲状腺球蛋白（thyroglobulin，TG）基因进行克隆测序，采用PCR-RFLP方法进行多态性检测，并与生长性状进行了关联分析。结果表明，在TG基因第48外显子上发现C218T和A430G 2个突变位点，其中C218T位点的不同基因型与胸宽存在显著相关（P＜0.05），TT基因型个体胸宽显著高于CT基因型个体（P＜0.05）。A430G位点的不同基因型与体重、尻长和坐骨端宽存在显著相关（P＜0.05），GG基因型个体的体重显著高于AA基因型个体（P＜0.05），AA和AG基因型个体的尻长显著高于GG基因型（P＜0.05），AG基因型个体的坐骨端宽显著高于GG基因型（P＜0.05）。其他性状在2个位点的不同基因型间差异不显著（P＞0.05）。因此, C218T和A430G位点可能是影响延边黄牛生长性状的分子标记。

试验旨在克隆鸡热休克蛋白70（heat shock protein 70，HSP70）基因，获得基因序列并分析基因结构和相关遗传变异，检测单核苷酸多态性（SNP）位点在文昌鸡和北京油鸡群体中的分布。试验利用PCR扩增鸡HSP70基因组序列，通过克隆测序寻找基因中的突变位点。在鸡HSP70基因组中共发现3处突变位点，分别位于启动子区（T-564C）、5′非翻译区（A-68G）和编码区（A-1044G）。使用PCR-RFLP方法检测T-564C位点后发现，等位基因C在文昌鸡和北京油鸡中的基因频率分别为0.87和0.55。利用生物信息学分析发现，鸡HSP70基因启动子区域存在一些潜在的转录因子结合位点，如Sp1、AP-1、GATA-1、CREB、MZF1和HSF2等。

本研究采用组织学和免疫组织化学方法探讨炔雌醚暴露对幼年小鼠睾丸生精细胞增殖与凋亡相关蛋白增殖细胞核抗原(PCNA)、半胱氨酸蛋白酶-3(Caspase-3)表达的影响。将20只4周龄雄性昆明小鼠随机分为4组，适应饲养1周后分别腹腔注射50 μL含0、1、10、100 mg/kg体重炔雌醚的橄榄油，每天1次，连续1周。小鼠8周龄时，取睾丸称重并制备组织切片，HE染色观察病理学变化，免疫组织化学法测定睾丸组织PCNA、Caspase-3的表达。结果显示，曲精小管的管壁变薄，生精细胞排列紊乱，细胞分层减少，间隙增大，管腔内有大量异常脱落的精母细胞和圆形精子细胞，少见长形精子细胞和精子。与对照组相比，PCNA表达随着炔雌醚剂量的增加而极显著减少（P＜0.01），Caspase-3的表达随着炔雌醚剂量的增加而极显著增加（P＜0.01）。结果表明，炔雌醚通过调节相关蛋白的表达，抑制生精细胞增殖，促进生精细胞凋亡，从而造成雄性生殖功能损伤。

长期以来，对细胞分化过程的研究，尤其是对干细胞及其谱系的功能差异分析，主要集中在基因的转录水平调控。然而，越来越多的研究发现，DNA的甲基化、染色质重塑、基因组印记、染色体失活、非编码RNA作用等表观遗传学机制对哺乳动物发育、胚胎细胞分化及癌细胞增殖过程发挥着重要的作用。其中以DNA甲基化这种形式最为常见。作者就DNA甲基化对影响转录、分子调控、神经元发育、遗传等方面的最新研究成果进行综述。

常规子宫颈人工授精(cervical artificial insemination，CAI)技术输精量大，存在浪费和不经济的问题，尤其在使用高附加值的精液产品时更为突出。近年来，一种高效利用猪精液的深部输精技术得到了研究和应用，这种技术与定时输精技术相结合，直接将精液输送至子宫体、子宫角和输卵管内，减少了每头母猪受孕所需精子数目，大幅度提高了良种公猪的利用价值，有助于实现冷冻保存精液和性控精液在养猪生产上的商业化应用。作者概述了猪人工授精中3种深部输精技术在液态保存、冷冻保存和性控精液上的研究和应用情况。无论实施哪种输精技术，公猪繁殖力、精子活力、母猪的饲养管理、输精时间和人工授精技术操作的规范性都是提高受胎率必须要考虑的因素。

水貂杯状病毒（calicivirus）为杯状病毒科成员，能够引起水貂出血性肺炎和胃肠炎等，该病在中国河北、山东等水貂养殖大省暴发并流行，致死性较高，已有学者从血性肺炎病例中分离并鉴定病毒。作者从水貂杯状病毒的分类地位、生物学特性、致病机理和疫病防制等方面进行了综述。

试验利用小鼠流感模型，研究适度运动能否减轻流感病毒引起的肺脏损伤，延长小鼠的生存期。将小鼠分为对照组和运动组，相同条件下饲养，对照组不进行踏轮试验，运动组小鼠进行踏轮试验（8～9 m/min，30 min/次，5次/周），第14天，经鼻腔接种致死量的鼠源性H1N1型流感病毒FM1，感染后第3天，对照组和试验组各处死5只小鼠，取其肺脏组织，各组分别取2个肺脏组织用于制作组织切片；余下的肺脏组织研磨后制备组织悬液用于检测病毒滴度和IL-6、TNF-α、MCP-1的含量。在感染病毒后3 d，运动组小鼠的肺脏炎症细胞浸润明显低于对照组，肺脏组织的IL-6、TNF-α、MCP-1的含量均显著低于对照组（P＜0.05），肺脏组织的病毒滴度含量略低于对照组。此外，适度运动组的小鼠感染病毒后，生存期明显延长。结果表明，适度运动可显著降低流感病毒在小鼠肺脏引起的炎性损伤，明显延长小鼠的生存期。

鲍曼不动杆菌(Acinetobacter baumannii)是一种广泛分布于人类生活环境中的重要的条件致病菌，由于具有较强的抗药性，一直是生物医学领域中的研究热点。相对于抗药性的研究，对于毒力因子的了解就知之甚少。鲍曼不动杆菌入侵宿主后，可以在宿主体内长期存活，同时引起宿主细胞的严重损害，因此其毒力因子可能在入侵、增殖、杀伤过程中发挥重要作用。作者综述了近几年国内外关于鲍曼不动杆菌主要毒力因子的研究进展，以便于研究人员进一步了解鲍曼不动杆菌的致病机制，同时为治疗疾病和筛选药物提供新思路。

近年来猪流行性腹泻病毒（porcine epidemic diarrhea virus, PEDV）的发生率呈上升趋势，给养猪业造成的损失加大。作者综述了各地学者针对该病毒的分离鉴定、毒株变异分群及分子生物学等各方面的研究进展，结合当前疫苗免疫的效果，产品开发的方向，为开发更好的疫苗产品提供资料和前景展望。

本试验旨在研究日粮中添加不同剂量中草药对蛋鸡新城疫油乳剂灭活疫苗免疫效果的影响。选用240只100日龄海兰褐蛋鸡，随机分为4组，每组5个重复，每个重复12只。对照组饲喂基础日粮,不添加任何添加剂；试验Ⅰ、Ⅱ和Ⅲ组分别在基础日粮中添加0.5%、1.0%和1.5%中草药添加剂。结果表明，试验Ⅱ和Ⅲ组蛋鸡血清中新城疫抗体效价、雏鸡血清中新城疫母源抗体效价均显著高于对照组和试验Ⅰ组（P＜0.05），且试验Ⅱ和Ⅲ组、对照组和试验Ⅰ组之间均无显著差异（P>0.05）。提示，在免疫注射疫苗的同时日粮中添加1.0%或1.5%中草药添加剂，可提高蛋鸡新城疫抗体效价，增强机体的免疫力。

采用微量稀释法和中西药联合传代法，比较鬼针草不同溶媒提取液对产超广谱β-内酰胺酶（ESBLs）大肠杆菌的抑菌效果，结果表明，鬼针草水煮液、乙酸乙酯提取液、丙酮提取液、三氯甲烷提取液与西药联合使用时均具有良好的抑菌效用，且抑菌效果乙酸乙酯提取液＞水煮液＞丙酮提取液＞三氯甲烷提取液，但水煮液与抗生素联合效果更好，能降低更多不同类抗生素最小抑菌浓度（MIC）。

头孢维星是新型的第3代头孢菌素类动物专用抗生素，因其吸收快、达峰时间短、生物利用度高、消除半衰期长、药效持久，单次皮下注射即可达到14 d的有效血药浓度，在兽医临床具有广阔前景。作者对头孢维星研发现况、作用机制、体内外抗菌活性及临床应用作一综述，以期为其在兽药临床应用提供参考。

桃金娘（Rhodomyrtus tomentosa）是一种野生药用植物资源，具有新兽药开发潜在利用价值。作者主要介绍了桃金娘资源分布情况，综述了国内外桃金娘化学成分及其生物活性研究进展和临床应用概况，旨在为今后桃金娘在兽药学的研发提供理论基础。

采用新城疫灭活抗原分别与新型国产白油佐剂和进口Marcol-52白油佐剂制成油乳剂灭活疫苗，按一系列检测指标，对2种佐剂油苗进行比较，结果表明，该新型国产白油佐剂除吸收性略差于进口Marcol-52白油佐剂外，其余指标均优于进口Marcol-52白油佐剂。

本研究旨在了解川西北牦牛病毒性腹泻病的流行情况，为防制这类疫病提供一定科学依据。采用酶联免疫吸附试验(ELISA)对来源于川西北阿坝州8县的1070份牦牛血清中牛病毒性腹泻病毒(bovine viral diarrhea virus，BVDV)、牛冠状病毒(bovine coronavirus，BCV)和牛轮状病毒(bovine rotavirus，BRV)进行了抗体检测。结果显示，BVDV、BCV和BRV抗体平均阳性率分别为44.3%、84.1%和94.4%。结果表明，BVDV、BCV和BRV感染在川西北牦牛中普遍存在，需进一步加强该地区牦牛病毒性腹泻疾病的综合防制。

向日葵作为一种高产优质经济作物，在内蒙古河套地区有着广泛种植，其加工油脂过程中产生的葵花粕、葵花盘、葵花秆等用于动物养殖，不仅可解决因堆放和焚烧造成的环境污染，也可弥补饲料资源的不足。作者对内蒙古河套地区向日葵生产基本情况及其副产品作为饲料资源加工利用现状进行分析，并提出了开发利用中存在的问题及对策。

为了优选复方淫羊藿的最佳提取工艺条件，本试验采用正交试验法，以药材加水量、提取次数和提取时间为自变量，以君药淫羊藿的指标成分淫羊藿苷的提取率为评价指标，进行数理统计选取最佳提取工艺。结果显示最佳提取工艺为加10倍药材质量的水，提取3次，每次提取1.5 h。结果表明，该工艺为提高淫羊藿苷的提取率提供了试验基础，并为进一步的工业化生产提供科学理论依据。

布鲁氏菌病是由布鲁氏菌引起的一种人畜共患传染病，该病不仅严重影响畜牧业的健康发展，对人类健康和社会公共卫生安全也存在着很大的威胁。现阶段对动物的主要防制措施为接种疫苗，国内外现已存在多个弱毒活疫苗，每种疫苗均各有利弊，目前尚无适合人类使用的疫苗，各个实验室也通过基因工程等技术手段来积极研制重组弱毒疫苗、分子标记疫苗、DNA疫苗等新型疫苗，作者现就新型疫苗的研究现状作一综述。

尿素作为最常用的非蛋白质含氮化合物在奶牛生产中广泛应用，如何能更有效地代替蛋白质饲料对于实际生产中降低饲养成本、提高生产效率等具有重要意义。作者就尿素在奶牛实际生产中的相关应用研究进行综述，并对其应用前景进行探讨，以期为生产者提供帮助。