牛环形泰勒虫裂殖子/梨浆虫表面抗原基因非疏水区的克隆及GST-P27重组蛋白的高效表达

中国畜牧兽医

牛环形泰勒虫裂殖子/梨浆虫表面抗原基因非疏水区的克隆及GST-P27重组蛋白的高效表达

CAO Wen-li¹, WANG Zhen¹, Shataer Kahaer¹^，2, WANG Bing-jie¹, Bayinchahan¹

（1.新疆农业大学动物医学学院，新疆乌鲁木齐 830052；2.吐鲁番市畜牧兽医站，新疆吐鲁番 838000）

收稿日期:2013-08-07 出版日期:2014-03-20 发布日期:2014-05-15
通讯作者: 巴音查汗（1964—），女，新疆人，教授，博士生导师，研究方向：预防兽医学。E-mail：bynch@hotmail.com
作者简介:曹雯丽（1989—）,女，江苏人，硕士生，研究方向：预防兽医学。
基金资助:
自治区国际科技合作计划项目（20126008）；国家自然科学基金（U1170301）。

Clone of Tams1 Gene Non-hydrophobic Region of Theileria annulata and High Level Expression of Recombinant Protein GST-P27

曹雯丽¹，王真¹，沙它尔·卡哈尔¹^，2，王冰洁^{1，巴音查汗¹}

(1.College of Veterinary Medicine, Xinjiang Agricultural University, Urumqi 830052, China；2.Animal Husbandry and Veterinary Station of Turpan City, Turpan 838000, China)

Received:2013-08-07 Online:2014-03-20 Published:2014-05-15

摘要/Abstract

摘要： 试验据GenBank登载的牛环形泰勒虫裂殖子/梨浆虫表面抗原（the merozoite/piroplasm surface antigen，Tams1）基因序列（登录号：AF214842），设计1对特异性引物，经PCR扩增出696 bp的Tams1基因片段，将其插入pGEX-4T-2表达载体，提取质粒进行双酶切鉴定并测序，同源性达98%；将插入阳性质粒的BL21（DE3）菌种诱导表达重组蛋白，经优化后在37 ℃、0.5 mmol/L IPTG诱导4 h的表达条件下获得了表达量达1.39 mg/mL的可溶性融合蛋白，大小为53 ku；表达产物在Glutathione Sepharose 4B柱上纯化后，免疫印迹检测结果表明重组蛋白GST-P27具有良好的反应原性。

关键词: 牛环形泰勒虫; Tams1基因; 克隆; GST-P27; 高效表达

Abstract: A fragment about 696 bp was amplified by PCR technique with specific primers based on Tams1 gene sequence（AF214842） of Theileria annulata reported in GenBank. Then the target fragment was directionally cloned into pGEX-4T-2 expression vector, the recombinant plasmid DNA was cut by enzymes, and then sequenced.The result showed that the homology of the cloned Tams1 gene was 98%. The positive plasmid was transformed into BL21（DE3）, and then induced by IPTG. Soluble fusion protein whose expression level reached 1.39 mg/mL was obtained when it was induced with 0.5 mmol/L IPTG for 4 h at 37 ℃, and it was 53 ku. Western blotting showed that recombinant protein GST-P27 which was purified by Glutathione Sepharose 4B had the favorable reactionogenicity.

Key words: Theileria annulata; Tams1 gene; clone; GST-P27; high level expression

曹雯丽，王真，沙它尔?卡哈尔，王冰洁，巴音查汗. 牛环形泰勒虫裂殖子/梨浆虫表面抗原基因非疏水区的克隆及GST-P27重组蛋白的高效表达[J]. 中国畜牧兽医.

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