猪繁殖与呼吸综合征病毒核衣壳蛋白与糖蛋白的表达纯化及鉴定

中国畜牧兽医

猪繁殖与呼吸综合征病毒核衣壳蛋白与糖蛋白的表达纯化及鉴定

张辉，崔焕忠,兰海楠，杨艳红，付志玲，郑鑫

（吉林农业大学动物科学技术学院，吉林长春 130118）

收稿日期:2013-08-22 出版日期:2014-03-20 发布日期:2014-05-15
通讯作者: 郑鑫（1965—），女，博士，教授。E-mail：zhengxin_3@yahoo.com.cn
作者简介:张辉（1973—），女，吉林人，博士后，高级实验师，研究方向：动物疫病检测。
基金资助:
吉林省世行贷款农产品质量安全项目（2011-Y28）；科技部农业科技成果转化资金（2012GB2B100106）；吉林农业大学启动基金（201221）；吉林省科技发展计划项目（20100230）；吉林省科技发展计划项目（20110230）。

Expression，Purification and Identification of Nucleocapsid Protein and Glycoprotein of Porcine Reproductive and Respiratory Syndrome Virus

ZHANG Hui, CUI Huan-zhong, LAN Hai-nan, YANG Yan-hong, FU Zhi-ling, ZHENG Xin

(College of Animal Science and Technology, Jilin Agricultural University, Changchun 130118, China)

Received:2013-08-22 Online:2014-03-20 Published:2014-05-15

摘要/Abstract

摘要： 为获得猪繁殖与呼吸综合征病毒（porcine reproductive and respiratory syndrome virus，PRRSV）核衣壳蛋白（N）和糖蛋白（E），试验通过RT-PCR反应获得ORF7和ORF5基因片段，分别克隆至原核表达载体 pET-28a(+)，转化至大肠杆菌 BL21（DE3）中诱导表达，SDS-PAGE分析目的蛋白表达情况，Western blotting 检测表达蛋白的免疫活性，采用亲和层析对表达蛋白进行纯化。结果表明，成功表达N和E融合蛋白，Western blotting结果表明表达蛋白具有良好的反应原性，纯化蛋白的纯度分别为89%和90%。融化蛋白的表达为PRRSV的分子生物学功能研究和测定抗体检测方法的建立奠定了基础。

关键词: 猪繁殖与呼吸综合征病毒; 核衣壳蛋白; 糖蛋白; 表达

Abstract: In order to gain nucleocapsid protein （N） and glycoprotein （E） of porcine reproductive and respiratory syndrome virus （PRRSV）， the total RNA was extracted，ORF7 and ORF5 genes were obtained by RT-PCR， inserted into pET-28a(+) vector， and then transformed into Escherichia coli BL21（DE3），respectively. The expressed products were identified by SDS-PAGE and Western blotting， and purified by affinity chromatography. The results showed that N and E fusion protein were successfully expressed and the proteins had good reactionogenicities by Western blotting analysis. The purities of the purified proteins were 89% and 90%, respectively. This study could lay foundations for molecular biological function research and establishment of test methods for detection antibodies of PRRSV.

Key words: porcine reproductive and respiratory syndrome virus; nucleocapsid protein; glycoprotein; expression

张辉，崔焕忠,兰海楠，杨艳红，付志玲，郑鑫. 猪繁殖与呼吸综合征病毒核衣壳蛋白与糖蛋白的表达纯化及鉴定[J]. 中国畜牧兽医.

ZHANG Hui, CUI Huan-zhong, LAN Hai-nan, YANG Yan-hong, FU Zhi-ling, ZHENG Xin. Expression，Purification and Identification of Nucleocapsid Protein and Glycoprotein of Porcine Reproductive and Respiratory Syndrome Virus[J]. .

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