犬瘟热—犬冠状病毒双重PCR诊断方法的建立及初步应用

中国畜牧兽医

犬瘟热—犬冠状病毒双重PCR诊断方法的建立及初步应用

孙园园，赵鹏，刘骏，王云，钱科

（镇江出入境检验检疫局，江苏镇江 212008）

收稿日期:2013-07-29 出版日期:2014-03-20 发布日期:2014-05-15
通讯作者: 赵鹏（1980—），男，山东人。E-mail:zhaop1@jsciq.gov.cn
作者简介:孙园园（1979—），女，山东人，硕士，研究方向：动物传染病学。
基金资助:
江苏出入境检验检局科研立项（2012KJ03）。

Development and Application of Duplex PCR for Canine Distemper Virus and Canine Coronavirus Detection

SUN Yuan-yuan, ZHAO Peng, LIU Jun, WANG Yun, QIAN Ke

(Zhenjiang Entry-exit Inspection and Quarantine Bureau, Zhenjiang 212008, China)

Received:2013-07-29 Online:2014-03-20 Published:2014-05-15

摘要/Abstract

摘要： 为更好的开展犬腹泻病的诊断与疫情监控，根据犬瘟热病毒（canine distemper virus，CDV）和犬冠状病毒（canine coronavirus，CCV）的基因特征，建立了可快速鉴别诊断CDV和CCV的双重PCR方法。对GenBank中登录的21株CDV和17株CCV的野毒株、疫苗株基因组全序列进行比对分析，分别针对H蛋白和S蛋白编码区各设计了1对特异引物，分别扩增出大小为550和225 bp的目的片段。回收目的片段插入到pMD18-T载体中进行测序鉴定，分别提取阳性质粒制备阳性标准DNA。通过优化试验条件，建立了检测CDV和CCV的双重PCR方法并对其进行灵敏度、特异性和临床验证。该双重PCR方法能特异的扩增CDV和CCV，且敏感性均达到0.1 ng/μL总核酸量。与胶体金试纸条方法对比检测67份临床样品，符合率较高，CDV达到92.5%，CCV达到94%。

关键词: 犬瘟热病毒; 犬冠状病毒; 双重PCR

Abstract: Two pairs of PCR primers were designed according to sequence of canine distemper virus （CDV） and canine coronavirus （CCV） from GenBank, respectively, which could amplify 550 bp fragment for CDV and 225 bp fragment for CCV. The products of PCR were cloned to pMD18-T for sequencing, which proved to be specific. Positive plasma were developed for standard DNA, and the sensitivity result of duplex PCR showed that the method could amplify 0.1 ng/μL nucleic acid for both of viruses. The result of rudimentary application showed that the method was specific, sensitive, efficient, and was a new detecting method for the mixed infection of CDV and CCV.

Key words: canine distemper virus; canine coronavirus; duplex PCR

孙园园，赵鹏，刘骏，王云，钱科. 犬瘟热—犬冠状病毒双重PCR诊断方法的建立及初步应用[J]. 中国畜牧兽医.

SUN Yuan-yuan, ZHAO Peng, LIU Jun, WANG Yun, QIAN Ke. Development and Application of Duplex PCR for Canine Distemper Virus and Canine Coronavirus Detection[J]. .

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