内蒙古绒山羊角蛋白辅助蛋白1.1基因真核表达载体构建及基因转染

中国畜牧兽医

内蒙古绒山羊角蛋白辅助蛋白1.1基因真核表达载体构建及基因转染

包阿东，苏志芳，梅步俊，汪长寿

（河套学院农学系，内蒙古巴彦淖尔 015000）

修回日期:2013-12-12 出版日期:2014-03-20 发布日期:2014-05-15
通讯作者: 汪长寿，女，博士，副教授，研究方向：动物组织胚胎与发育生物学。E-mail：changshouwang2008@163.com
作者简介:包阿东(1979—)，男，内蒙古人，硕士，讲师，研究方向：细胞生物学。
基金资助:
内蒙古自治区教育厅高校科研项目自然科学重点项目(NJZZ11277)；内蒙古自然科学基金项目（2013MS0416）。

Construction of Eukaryotic Expression Vector of Inner Mongolia Cashmere Goats KAP 1.1 Gene and its Gene Transfected

BAO A-dong，SU Zhi-fang，MEI Bu-jun，WANG Chang-shou

（Department of Agronomy, Hetao College，Bayannur 015000，China）

Revised:2013-12-12 Online:2014-03-20 Published:2014-05-15

摘要/Abstract

摘要： 试验通过提取绒山羊皮肤总RNA，克隆角蛋白辅助蛋白1.1（keratin-associated protein 1.1，KAP1.1）基因，构建重组真核表达载体pEGFP-N3-KAP1.1，利用脂质体介导法将重组质粒转入内蒙古绒山羊体外培养的成纤维细胞中，研究该基因在真核细胞中的时空表达、亚细胞定位及表达规律。结果显示，2.0 μg重组质粒和6.0 μL脂质体的比例为适合本试验的最优化方案，KAP1.1基因能在内蒙古绒山羊成纤维细胞中成功表达，并在转染后48 h转染率达到峰值，该基因在真核体外培养细胞中细胞核、细胞质和细胞膜上均有表达，但以细胞核表达量最强。

关键词: 内蒙古绒山羊; 角蛋白辅助蛋白1.1基因; 载体构建

Abstract: In this study, Cashmere goat skin by extracting total RNA, cloning keratin-associated protein 1.1 (KAP1.1) gene eukaryotic expression vector pEGFP-N3-KAP1.1, using liposome-mediated recombinant plasmids were transformed into Inner Mongolia Cashmere goats cultured fibroblasts, temporal and spatial expression of the genes in eukaryotic cells, subcellular localization and expression pattern. The results showed that 2.0 μg plasmid and 6.0 μL ratio liposomes suitable for the optimization of the experimental protocol, KAP1.1 gene could be successfully expressed in fibroblasts in Inner Mongolia Cashmere goat, and 48 h after transfection, the transfection efficiency reaches a peak, the gene in eukaryotic cells in vitro on the nucleus, cytoplasm and cell membrane are expressed, but the strongest expression of the nucleus.

Key words: Inner Mongolia Cashmere goats; KAP1.1 gene; vector construction

包阿东，苏志芳，梅步俊，汪长寿. 内蒙古绒山羊角蛋白辅助蛋白1.1基因真核表达载体构建及基因转染[J]. 中国畜牧兽医.

BAO A-dong，SU Zhi-fang，MEI Bu-jun，WANG Chang-shou. Construction of Eukaryotic Expression Vector of Inner Mongolia Cashmere Goats KAP 1.1 Gene and its Gene Transfected[J]. .

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