鸭坦布苏病毒和鸭瘟病毒二重荧光定量RT-PCR方法的建立

中国畜牧兽医

鸭坦布苏病毒和鸭瘟病毒二重荧光定量RT-PCR方法的建立

张艳芳，谢芝勋，谢丽基，刘加波，范晴，庞耀珊，罗思思，邓显文，谢志勤

（广西壮族自治区兽医研究所，广西畜禽疫苗新技术重点试验室，广西南宁 530001）

收稿日期:2013-09-17 出版日期:2014-03-20 发布日期:2014-05-15
通讯作者: 谢芝勋，研究员。E-mail: xiezhixun@126.com；Tel: 0771-3105702
作者简介:张艳芳(1987—），女，广西人，硕士，研究方向：动物传染病与病原分子生物学。
基金资助:
广西特聘专家专项（2011B020）；广西科技项目(1222003-2-4、10100014-5）；广西畜禽疫苗新技术重点实验室经费（12-071-28-A-3、12-071-28-A-4）。

Development of Duplex Real-time RT-PCR Assay for Detection of Duck Tembusu Virus and Duck Plague Virus

ZHANG Yan-fang, XIE Zhi-xun, XIE Li-ji, LIU Jia-bo, FAN Qing, PANG Yao-shan, LUO Si-si, DENG Xian-wen, XIE Zhi-qin

(Guangxi Key Laboratory of Animal Vaccines and Diagnostics, Guangxi Veterinary Research Institute, Nanning 530001, China)

Received:2013-09-17 Online:2014-03-20 Published:2014-05-15

摘要/Abstract

摘要： 本试验旨在建立同时检测鸭坦布苏病毒(DTMUV)和鸭瘟病毒(DPV)的二重荧光定量RT-PCR方法。针对GenBank中DTMUV E基因和DPV UL6基因的保守序列，设计合成了2对引物和2条TaqMan探针。通过优化反应体系、条件及评价其特异性、敏感性，建立了检测DTMUV和DPV的二重荧光定量RT-PCR方法。该方法对DTMUV和DPV的检测灵敏度均达100个模板拷贝数，同时该方法对鸭源新城疫病毒、鸭肝炎病毒、番鸭细小病毒、H9亚型禽流感病毒和减蛋综合征病毒的检测结果均为阴性。本研究建立的DTMUV和DPV二重荧光定量RT-PCR具有敏感、快速、特异、定量、重复性好等优点，可用于DTMUV和DPV感染的快速鉴别诊断。

关键词: 鸭坦布苏病毒; 鸭瘟病毒; 二重荧光定量RT-PCR

Abstract: The study was conducted to establish the duplex Real-time PCR assay for detecting both duck tembusu virus (DTMUV) and duck plague virus (DPV). According to the sequences of DTMUV E gene and DPV UL6 gene in GenBank, two sets of specific oligonucleotide primers for DTMUV and DPV along with two TaqMan probes were designed. The duplex Real-time PCR assay was developed through optimization of reaction conditions and validation of specificity, sensitivity and repetitiveness of the method. The sensitivity of the assay were both 100 template copies for DTMUV and DPV. There was no specific bands of the same sizes were amplified from other duck pathogens, such as duck Newcastle disease virus, duck hepatitis virus, muscovy duck parvovirus, duck circovirus, H9 subtype avian influenza virus, egg drop syndrome virus. This duplex Real-time RT-PCR assay is a sensitive, quick, specific and quantitative test for detection of DTMUV and DPV, and will be useful for the control of these viruses in ducks.

Key words: duck tembusu virus; duck plague virus; duplex Real-time RT-PCR

张艳芳，谢芝勋，谢丽基，刘加波，范晴，庞耀珊，罗思思，邓显文，谢志勤. 鸭坦布苏病毒和鸭瘟病毒二重荧光定量RT-PCR方法的建立[J]. 中国畜牧兽医.

ZHANG Yan-fang, XIE Zhi-xun, XIE Li-ji, LIU Jia-bo, FAN Qing, PANG Yao-shan, LUO Si-si, DENG Xian-wen, XIE Zhi-qin. Development of Duplex Real-time RT-PCR Assay for Detection of Duck Tembusu Virus and Duck Plague Virus[J]. .

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