猪TIGAR mRNA SYBR GreenⅠ荧光定量RT-PCR方法的建立

中国畜牧兽医

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猪TIGAR mRNA SYBR GreenⅠ荧光定量RT-PCR方法的建立

康大成¹，汤晓艳¹，李朋颖¹，颜成英²，范成明³

（1.中国农业科学院农业质量标准与检测技术研究所，北京 100081；2.南京农业大学教育部肉品加工与质量控制重点实验室，江苏南京 210095；3.中国农业科学院作物科学研究所，北京 100081）

收稿日期:2013-10-08 出版日期:2014-03-20 发布日期:2014-05-15
通讯作者: 汤晓艳（1976—），女，博士，副研究员，研究方向：畜产品质量与安全。E-mail：txycaas@126.com
作者简介:康大成（1987—），男，山东人，硕士，研究方向：食品质量与安全。
基金资助:
国家自然基金（31000799）。

Development of SYBR GreenⅠ-based RT-PCR Assay for Detection of TIGAR mRNA in Swine

KANG Da-cheng¹, TANG Xiao-yan¹, LI Peng-ying¹, YAN Cheng-ying², FAN Cheng-ming³

（1.Institute of Quality Standards & Testing Technology for Agri-Products, Chinese Academy of Agricultural Sciences, Beijing 100081, China；2.Key Laboratory of Meat Processing and Quality Control, Ministry of Education, Nanjing Agricultural University, Nanjing 210095, China；3.Institute of Crop Science, Chinese Academy of Agricultural Sciences, Beijing 100081, China）

Received:2013-10-08 Online:2014-03-20 Published:2014-05-15

摘要/Abstract

摘要： 根据GenBank中猪TP53诱导的糖酵解和凋亡调节因子（TP53-induced glycolysis and apoptosis regulator，TIGAR）mRNA序列（登录号：XM_001926543），设计合成了1对特异性引物，通过对反应条件的优化，建立了荧光定量RT-PCR技术检测猪TIGAR基因转录水平的方法，同时对长白猪宰后不同时间TIGAR mRNA转录水平进行了测定。结果表明，所建立的TIGAR基因标准曲线的R²为0.9995，内参基因β-actin标准曲线的R²为0.9996，2基因的扩增效率分别为103.7%和104.1%，扩增效率接近一致，可对TIGAR mRNA转录水平进行相对定量。该方法特异性强、灵敏度高，具有一定应用价值。

关键词: 猪; TIGAR mRNA; SYBR Green Ⅰ; RT-PCR

Abstract: According to swine TIGAR mRNA sequences available in GenBank （No：XM_001926543）, a pair of primers was designed, with experimental condition optimizing, the method of a Real-time fluorescent quantitative reverse transcription-polymerase chain reaction （RT-PCR） was established to detect swine TIGAR gene, and the level of TIGAR mRNA of Landrace in different slaughter time was compared with the method established.The results showed that the R² of standard curves of TIGAR and the housekeeper gene β-actin were 0.9995 and 0.9996, respectively, and the amplification efficiency of TIGAR （103.7%） was consistent with β-actin （104.1%）.The methods established can be used for the determination of TIGAR mRNA in swine with high specificity and sensitivity. The research result was valuable to application.

Key words: swine; TIGAR mRNA; SYBR GreenⅠ; RT-PCR

康大成，汤晓艳，李朋颖，颜成英，范成明. 猪TIGAR mRNA SYBR GreenⅠ荧光定量RT-PCR方法的建立[J]. 中国畜牧兽医.

KANG Da-cheng, TANG Xiao-yan, LI Peng-ying, YAN Cheng-ying, FAN Cheng-ming. Development of SYBR GreenⅠ-based RT-PCR Assay for Detection of TIGAR mRNA in Swine[J]. .

参考文献

1 李龙, 尹靖东, 李凤娜, 等. 利用荧光实时定量PCR法测定猪肌肉中解偶联蛋白3 mRNA丰度［J］. 中国畜牧杂志, 2007, 43（11）: 49～51.
2 黄震, 魏春娅, 闰明菲, 等. 猪繁殖与呼吸综合征病毒SYBR GreenⅠ荧光定量PCR检测方法的建立［J］. 中国畜牧兽医, 2013, 40（4）: 89～92.
3 Lawrie R A, Ledward D A. 周光宏等译. Lawrie’s 肉品科学［M］. 第7版. 北京: 中国农业大学出版社, 2008.
4 Bensaad K, Tsuruta A, Selak M A, et al. TIGAR, a p53-inducible regulator of glycolysis and apoptosis［J］. Cell, 2006, 126（1）: 107～120.
5 Bowker B C, Grant A L, Forrest J C, et al. Muscle metabolism and PSE pork［J］. J Anim Sci, 2000, 79: 1～8.
6 Cadefau J A, Parra J, Tauler A, et al. Contractile activity modifies Fru-2, 6-P2 metabolism in rabbit fast twitch skeletal muscle［J］. Journal of Biological Chemistry, 1999, 274（45）: 31961～31966.
7 Dai Q, Yin Y, Liu W, et al. Two p53-related metabolic regulators, TIGAR and SCO2, contribute to oroxylin A-mediated glucose metabolism in human hepatoma HepG2 cells［J］. The International Journal of Biochemistry & Cell Biology, 2013, 45（7）: 1468～1478.
8 Derveaux S, Vandesompele J, Hellemans J. How to do successful gene expression analysis using Real-time PCR［J］. Methods, 2010, 50（4）: 227～230.
9 Ginzinger D G. Gene quantification using Real-time quantitative PCR: An emerging technology hits the mainstream［J］. Experimental Hematology, 2002, 30（6）: 503～512.
10 Giulietti A, Overbergh L, Valckx D, et al. An overview of Real-time quantitative PCR: Applications to quantify cytokine gene expression［J］. Methods, 2001, 25（4）: 386～401.
11 Li H, Jogl G. Structural and biochemical studies of TIGAR （TP53-induced glycolysis and apoptosis regulator）［J］. Journal of Biological Chemistry, 2009, 284（3）: 1748～1754.
12 Mohamad N A, Sheikha E, Farag A, et al. Comparison of gene nature used in Real-time PCR for porcine identification and quantification: A review［J］. Food Research International, 2012, 50（1）: 330～338.
13 Pea-Rico M A, Calvo-Vidal M N, Villalonga-Planells R, et al. TP53 induced glycolysis and apoptosis regulator （TIGAR） knockdown results in radiosensitization of glioma cells［J］. Radiotherapy and Oncology, 2011, 101（1）: 132～139.
14 Pfaffl M W. A new mathematical model for relative quantification in Real-time RT-PCR［J］. Nucleic Acids Research, 2001, 29（9）: 45.
15 Sablina A A, Budanov A V, Ilyinskaya G V, et al. The antioxidant function of the p53 tumor suppressor［J］. Nature Medicine, 2005, 11（12）: 1306～1313.
16 Sieczkowska H, Kocwin-Podsiadla M, Zybert A, et al. The association between polymorphism of PKM2 gene and glycolytic potential and pork meat quality［J］. Meat Science, 2010, 84（1）: 180～185.
17 Won K Y, Lim S J, Kim G Y, et al. Regulatory role of p53 in cancer metabolism via SCO2 and TIGAR in human breast cancer［J］. Human pathology, 2012, 43（2）: 221～228.

[1]	陈楷文, 赵云娇, 王磊, 张剑搏, 马玉红, 吴国芳. 不同氧浓度下猪睾丸间质细胞转录组分析[J]. 中国畜牧兽医, 2023, 50(6): 2185-2195.
[2]	韦明邦, 边巴琼达, 肖青青, 段梦琪, 强巴央宗, 商鹏. 藏猪CDKN1B基因克隆、生物信息学及表达分析[J]. 中国畜牧兽医, 2023, 50(6): 2196-2206.
[3]	张方玮, 张琪, 雷亮亮, 孙武胜, 张迪, 张云鹏, 张净搏, 王修权, 张晶, 张树敏. 松辽黑猪HBEGF基因多态性及其与繁殖性状的关联分析[J]. 中国畜牧兽医, 2023, 50(6): 2370-2379.
[4]	孙守湖, 陈志飞, 郭智轩, 俞婷, 王修武, 李松倍, 魏文康, 贺东生. 3种猪冠状病毒N基因密码子偏好性及宿主适应机制研究[J]. 中国畜牧兽医, 2023, 50(6): 2403-2413.
[5]	曹琪, 金清, 袁意, 冯逸雪, 孔丹妮, 陈翔鸿, 吴斌, 宋文博, 汤细彪. 规模化猪场常见呼吸道细菌性病原的流行病学调查[J]. 中国畜牧兽医, 2023, 50(6): 2439-2449.
[6]	史秋颖, 段宝敏, 李颖, 牛登云, 耿晨阳, 周佳伟, 王蕊, 冯敬敬. 2020—2021年中国部分地区猪流行性腹泻病毒S1基因遗传变异分析[J]. 中国畜牧兽医, 2023, 50(6): 2468-2478.
[7]	欧云文, 潘琴, 汪洋, 代军飞, 任绍科, 张洋, 张杰. 猪细小病毒6型ORF2基因的截短表达及多克隆抗体制备[J]. 中国畜牧兽医, 2023, 50(6): 2487-2495.
[8]	潘鹏丞, 雷宗全, 李显, 胡湘云, 秦谦涛, 覃兆鲜, 关志惠, 陈宝剑, 谢炳坤. 陆川猪MYL2基因生物信息学分析、真核表达载体构建及组织表达研究[J]. 中国畜牧兽医, 2023, 50(5): 1796-1806.
[9]	欧阳坤, 魏立民, 孙瑞萍, 解娅立, 齐琪, 李想, 刘圈炜, 晁哲, 张永亮, 陈婷. 姜黄素对海南屯昌猪生长性能、饲料养分表观消化率和血清生化指标的影响[J]. 中国畜牧兽医, 2023, 50(5): 1867-1875.
[10]	吴静璇, 孙征, 马雪莲, 张丽阳, 廖秀冬, 罗绪刚, 李素芬, 吕林. 中国畜禽饲料资源中镁含量的调查研究[J]. 中国畜牧兽医, 2023, 50(5): 1888-1898.
[11]	黎明国, 李清春, 陈鑫, 卢世豪, 何凡, 祁梦凡, 张化鹏, 任玉军, 张庆泽, 符彬彬, 徐梦思, 艾子凯, 闫坤, 冯赟, 华再东, 黄涛, 毕延震. TET去甲基化酶对猪卵母细胞发育的影响[J]. 中国畜牧兽医, 2023, 50(5): 1907-1917.
[12]	王泽平, 王飞飞, 张芮铭, 付言峰, 赵为民, 戴超辉, 程金花, 廖超, 李辉. 苏紫猪SLA-1基因多态性及其抗病潜能分析[J]. 中国畜牧兽医, 2023, 50(5): 1918-1927.
[13]	宋承磊, 张哲, 韦怡林, 杨松柏, 豆雅晴, 李晨雷, 刘蓥珂, 李新建, 杨峰, 李秀领, 王克君, 乔瑞敏, 韩雪蕾. 不同品种、季节和月龄对公猪精液品质的影响[J]. 中国畜牧兽医, 2023, 50(5): 1938-1946.
[14]	卓娜, 朱忠武, 李静, 胡世享, 王建昌, 林华, 陈朝林, 韩佃刚, 艾军, 陈培富. 猪源戊型肝炎病毒ORF2蛋白生物信息学分析及真核表达研究[J]. 中国畜牧兽医, 2023, 50(5): 1959-1970.
[15]	康溥, 任照文, 蔡汝健, 吕宗吉, 黄育浩, 王晓虎. 广东及周边省份猪繁殖与呼吸综合征病毒2型谱系8毒株变异规律和传播研究[J]. 中国畜牧兽医, 2023, 50(5): 2001-2011.

猪TIGAR mRNA SYBR GreenⅠ荧光定量RT-PCR方法的建立

Development of SYBR GreenⅠ-based RT-PCR Assay for Detection of TIGAR mRNA in Swine

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