Vero E6细胞酵母双杂交cDNA文库的构建及鉴定

中国畜牧兽医

Vero E6细胞酵母双杂交cDNA文库的构建及鉴定

迟延彬¹^，2，石达^{1，朱庆贺¹，陈建飞¹，时洪艳¹，张鑫¹，李长龙¹，韩斅¹，刘宁¹，赵鑫¹，冯力¹^,2}

（1. 中国农业科学院哈尔滨兽医研究所，兽医生物技术国家重点实验室/猪传染病研究室，黑龙江哈尔滨 150001；2. 东北农业大学生命科学学院，黑龙江哈尔滨 150030)

收稿日期:2013-08-19 出版日期:2014-03-20 发布日期:2014-05-15
通讯作者: 冯力，男，辽宁人，博士生导师，研究员，研究方向：兽医微生物学及分子生物学。E-mail：fengli_h@163.com
作者简介:迟延彬(1989—)，男，黑龙江人，硕士生，研究方向：兽医微生物学及分子生物学。
基金资助:
中央级公益性科研院所基本科研业务费专项（0302013002）：猪流行性腹泻病毒纤突蛋白与宿主蛋白相互作用机制研究。

Construction and Characterization of the Yeast Two-hybrid cDNA Library of Vero E6 Cells

CHI Yan-bin¹^，2，SHI Da¹，ZHU Qing-he¹，CHEN Jian-fei¹，SHI Hong-yan¹， ZHANG Xin¹，LI Chang-long¹，HAN Xiao¹，LIU Ning¹，ZHAO Xin¹，FENG Li¹^,2

（1. Division of Swine Infectious Diseases，State Key Laboratory of Veterinary Biotechnology，Harbin Veterinary Research Institute，Chinese Academy of Agricultural Sciences，Harbin 150001，China；2. College of Life Science，Northeast Agricultural University，Harbin 150030，China)

Received:2013-08-19 Online:2014-03-20 Published:2014-05-15

摘要/Abstract

摘要： 为寻找与猪流行性腹泻病毒（porcine epidemic diarrhea virus, PEDV）相互作用的Vero E6细胞蛋白，深入研究病毒感染机制，本试验建立了一个Vero E6 细胞酵母杂交cDNA文库。采用Trizol试剂从培养的Vero E6细胞中提取细胞总RNA，通过SMART技术合成双链cDNA，并利用同源重组的方法构建Vero E6 细胞的酵母cDNA文库。结果显示，文库滴度为9.7×10⁸CFU/mL，插入的双链cDNA片段大小为0.5～3 kb，平均长度约为1.6 kb，文库重组率为87%，此文库可以用来筛选与病毒相互作用的Vero E6蛋白。该文库的构建为发现和研究与PEDV结构蛋白相互作用的宿主细胞蛋白奠定基础。

关键词: 猪流行性腹泻病毒; Vero E6细胞; cDNA文库; SMART 技术; 酵母双杂交

Abstract: To seek out proteins which interact with structural proteins of porcine epidemic diarrhea virus （PEDV） in Vero E6 cells and study the mechanisms of viral infection.We created a Vero E6 cDNA yeast hybrid library. The total RNA of Vero E6 was extracted using Trizol method, and double strands cDNA was synthesized by SMART technique. We created a Vero E6 cDNA library by using homologous recombination in yeast. The results showed that the titer of cDNA library was 9.7×10⁸ CFU with the average of inserted fragments about 1.6 kb, and the recombination rate was 87%. These data indicated that the yeast two-hybrid cDNA library of Vero E6 was successfully constructed and might be useful for screening the host proteins interacting with structure protein of PEDV.

Key words: porcine epidemic diarrhea virus （PEDV）; Vero E6 cell; cDNA library; SMART technique; yeast two-hybrid

迟延彬，石达，朱庆贺，陈建飞，时洪艳，张鑫，李长龙，韩斅，刘宁，赵鑫，冯力. Vero E6细胞酵母双杂交cDNA文库的构建及鉴定[J]. 中国畜牧兽医.

CHI Yan-bin，SHI Da，ZHU Qing-he，CHEN Jian-fei，SHI Hong-yan，ZHANG Xin，LI Chang-long，HAN Xiao，LIU Ning，ZHAO Xin，FENG Li. Construction and Characterization of the Yeast Two-hybrid cDNA Library of Vero E6 Cells[J]. .

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