研究旨在探讨组蛋白去乙酰化酶抑制剂Scriptaid对水牛胎儿成纤维细胞（BFF）生长特性、细胞毒性及其组蛋白H3K18乙酰化修饰的影响，为今后研究供体细胞的重编程及提高水牛核移植效率提供一定的理论依据。试验采用不同浓度（0、250、500、750 nmol/L）的Scriptaid分别处理BFF后观察细胞的生长形态，然后利用台盼蓝染色法检测细胞的存活率，同时通过细胞免疫组化技术分析细胞组蛋白H3K18乙酰化的表达情况。结果发现，BFF经不同浓度的Scriptaid处理后，细胞形态没有显著变化，为长梭形、立体感较强，生长曲线与对照组相似，均呈“S”型分布，且各处理组细胞的存活率与对照组之间差异不显著（P＞0.05）；此外，Scriptaid处理组的细胞组蛋白H3K18乙酰化的相对荧光强度显著高于对照组（P＜0.05），其中500和750 nmol/L 2个处理组细胞组蛋白乙酰化水平显著高于250 nmol/L处理组（P＜0.05），而500和750 nmol/L 2个处理组之间差异不显著（P＞0.05）。可见，适合浓度的Scriptaid对BFF细胞形态和存活率影响不大，且能显著提高BFF的组蛋白乙酰化水平。

据GenBank上公布的金黄色葡萄球菌纤连蛋白结合蛋白A（fibronection-binding protein A，FnbpA）基因序列，设计1对引物特异性扩增FnbpA基因A区（FnbpA-A），然后对其进行克隆、测序、蛋白二级结构分析及抗原表位预测。结果表明，FnbpA-A基因全长1645 bp，编码548个氨基酸，与金黄色葡萄球菌CIG1835株同源性达100%；该蛋白含α螺旋13.69%、β折叠30.84%、β转角11.86%和无规则卷曲43.61%；B细胞表位可能位于N端31—46、54—69、142—157、303—318、324—339、450—465、491—506和533—548区段；T细胞表位可能位于N端353—361和245—253区段。综上所述，FnbpA-A可作为后续金黄色葡萄球菌基因工程亚单位疫苗候选基因筛选区域。

本试验利用PCR技术，扩增得到猪瘟病毒（CSFV）C株E2基因的主要抗原片段A/D区549 bp，将其酶切纯化后，与已酶切纯化的pET-32a进行16 ℃过夜连接，转化大肠杆菌BL21。从转化成功的氨苄培养板挑取合适菌落进行PCR，挑取目的条带正确的菌落加至LB培养基进行过夜培养后送测序。将测序正确的菌液划板，挑菌培养并用IPTG进行诱导表达。得到的蛋白进行SDS-PAGE，在约39 ku位置有蛋白条带。将蛋白纯化后，分别利用自制兔抗CSFV阳性血清及临床检测阳性的猪抗CSFV阳性血清进行Western blotting检测，可见在39 ku处有单一条带，表明表达的蛋白具有免疫原性。本试验结果为下一步ELSIA试剂盒的组装奠定基础，方便对猪场免疫猪群猪瘟抗体水平进行监控。

试验旨在构建胆汁酸膜受体TGR5真核表达载体，转染293T细胞并在其中表达。用RT-PCR技术从胎盘组织中得到TGR5基因，克隆至真核表达载体pCMV-EGFP中。双酶切和测序鉴定正确后，将pCMV-EGFP-TGR5瞬时转染293T细胞，并采用实时荧光定量PCR和Western blotting技术检测TGR5的表达。结果显示，本试验构建了TGR5真核表达载体pCMV-EGFP-TGR5；转染293T细胞后，荧光显微镜观察到绿色荧光表达；实时荧光定量PCR检测TGR5表达量显著增加；Western blotting结果显示有目的蛋白表达。结果表明，真核表达载体pCMV-EGFP-TGR5构建成功，转染293T细胞后在基因、蛋白水平上均表达TGR5受体。

本试验通过在大肠杆菌中表达衣壳蛋白，确定最优表达条件并对其进行纯化。用PCR法扩增猪细环病毒2型（TTV2）ORF1抗原基因，定向克隆至质粒pGEX-4T-1中，获得重组质粒pGEX-4T-1-ORF1。经双酶切鉴定及测序正确后转化到BL21(DE3)工程菌中，获得衣壳蛋白大肠杆菌表达株。IPTG诱导表达，表达的重组融合蛋白经SDS-PAGE及Western blotting鉴定，并对影响重组蛋白表达的3个因素，即诱导时间、诱导温度和IPTG浓度进行优化，确定最优表达条件。重组表达质粒PCR及双酶切鉴定结果显示衣壳蛋白原核表达载体构建正确。重组融合蛋白分子质量约80 ku，主要以包涵体形式存在。37 ℃诱导5 h表达量最多，IPTG浓度对表达量无明显影响。蛋白质串联肽谱分析检测氨基酸序列与GenBank中公布的TTV2 ORF1基因序列翻译的氨基酸序列相对应，且可被鼠抗GST单克隆抗体特异性识别。该融合蛋白首次用KCl染色切胶回收法对表达的融合蛋白进行纯化，纯化效果较好，性价比高。结果表明，成功构建了pGEX-4T-1-ORF1重组质粒，衣壳蛋白得到了高效表达及纯化，为间接ELISA的建立及单克隆抗体的研制提供了抗原。

主要组织相容性复合体(major histocompatibility complex，MHC)广泛存在于脊椎动物中，由于其高度多态性，使其在遗传育种和抗病性方面成为人们关注的热点。作者通过对国内外研究者近几十年在MHC基因多态性及该基因与疾病之间的关系等方面的研究做一回顾性总结，并将其中的一些内容作为参考进行下一步的相关性试验。

试验旨在对Ⅰa型牛源无乳链球菌BibA基因及其编码的蛋白进行分子特征分析，为进一步研究BibA蛋白的表达及免疫原性提供理论依据。采用PCR技术扩增牛源无乳链球菌LZQ07006分离株BibA基因片段，并将其克隆入pMD20-T载体后测序，采用生物学软件对BibA基因及其推导的蛋白进行生物信息学分析。结果显示，LZQ07006菌株BibA基因片段长度为1185 bp，未出现基因缺失，编码395个氨基酸，与GenBank中已发表的不同血清型的无乳链球菌核苷酸同源性和推导的氨基酸同源性分别为45.0%～99.8%和12.3%～99.5%；BibA基因片段是一个稳定的分泌性外膜蛋白，亲水性较好，存在1—32位氨基酸的信号肽，剪切位点在第32—33位氨基酸之间的蛋白片段上。因此，牛源无乳链球菌BibA蛋白可作为奶牛乳房炎诊断和预防的应用性候选蛋白，但需深入研究。

采用PCR方法克隆了猪圆环病毒2型 (porcine circovirus 2，PCV2) 衣壳蛋白（capsid protein，CAP）基因，构建了重组质粒p-18T-CAP，并将其作为标准阳性模板。参照GenBank收录的PCV2 ORF2基因设计合成1对特异性的引物和与该引物相匹配的特异探针，通过对反应条件进行优化，以定量的10倍系列稀释的质粒p-18T-CAP为标准品进行TaqMan荧光定量PCR扩增，建立了一种检测PCV2的TaqMan荧光定量PCR方法。试验结果显示，该方法与猪圆环病毒 1 型、猪流感病毒、猪繁殖与呼吸综合征病毒、猪伪狂犬病病毒、猪瘟病毒等均无交叉反应；该方法最低可检测到4.53×10²拷贝/μL，比PCR检测方法高100倍；其标准曲线线性范围是10²～10⁹拷贝/μL，且具有良好的重复性。

湖北省某鸡场疑似巴氏杆菌(Pasteurella)感染，从送检病鸡的肺脏和肝脏中分离到1株细菌，通过菌落形态、培养特性、生化试验、16S rRNA序列比对鉴定为禽多杀性巴氏杆菌，并命名为Pm-HB株。动物回归试验表明，10 CFU细菌即可100%致死30日龄SPF鸡，可确诊为巴氏杆菌病。

试验旨在筛选水泡性口炎病毒的受体，构建犊牛口腔黏膜上皮细胞T7噬菌体展示文库。通过用Trizol试剂提取犊牛口腔黏膜上皮细胞总RNA，然后分离和纯化mRNA，经反转录合成双链cDNA。在双链cDNA末端加上定向EcoRⅠ/HindⅢ接头，然后用EcoRⅠ和Hind Ⅲ酶消化双链cDNA末端接头，使双链cDNA 2端含有EcoRⅠ和Hind Ⅲ黏性末端。所有处理后的双链cDNA，经Mini Column 纯化，收集400 bp以上的双链cDNA片段，将其连接带有EcoRⅠ和Hind Ⅲ末端的T7 Select 10-3b载体，经体外包装后，以BLT5403为受体菌构建T7噬菌体展示文库。经测定未扩增文库的滴度为1.3×10⁷ PFU/mL，重组率为95.8%，扩增后文库滴度为2.6×10¹⁰ PFU/mL。随机挑取100个噬菌斑进行PCR鉴定，95%的插入片段大于400 bp。结果表明成功构建了犊牛口腔黏膜上皮细胞T7噬菌体展示文库。

本试验旨在原核表达猪去乙酰化酶SIRT3，并初步鉴定重组蛋白的抗原性和特异性。采用RT-PCR扩增包含SIRT3的完整编码序列；通过Ω-PCR，将SIRT3完整编码序列克隆至原核表达载体pET-28a(+)中，转入大肠杆菌Rosetta（DE3）中进行诱导表达和亲和层析纯化；经免疫印迹分析初步评价SIRT3的抗原性和特异性。重组原核表达质粒pET28a-SIRT3经双酶切及测序鉴定证明构建正确，表达的重组蛋白相对分子质量约39 ku，能被相关抗体识别。结果表明，本试验成功在大肠杆菌中表达猪去乙酰化酶SIRT3，为对其进行进一步研究奠定了基础。

为了解江西省猪群猪传染性胸膜肺炎放线杆菌（APP）感染现状，本试验利用APP江西分离株研制了抗体间接血凝检测法（IHA）。试验将纯化的APP江西分离株培养菌液反复冻融，经超声波裂解处理后提取菌体抗原，致敏经戊二醛固定鞣酸化的兔红细胞，成功建立了APP抗体的IHA法。应用该法对猪瘟病毒、猪繁殖与呼吸综合征病毒、猪伪狂犬病病毒等病毒的阳性血清进行检测试验，结果均为阴性；对大肠杆菌、沙门氏菌、副猪嗜血杆菌阳性血清检测均为阴性。不同批次APP抗原经IHA检测，结果显示重复性好。本试验结果表明所建立的APP抗体IHA检测法有较好的特异性和重复性，为下一步血清学调查奠定基础。

参照已发表的扩增伪狂犬病毒（pseudorabies virus, PRV）gB和gD表位基因的PCR扩增引物合成2对引物，以福建分离株（LY株）提取的DNA为模板，得到目的片段gB、gD基因的长度分别为578和653 bp，并进行了克隆和测序，然后与国内外其他分离株进行了核苷酸序列及推导的氨基酸序列的同源性分析，并构建了遗传进化关系图。结果表明，LY株与GenBank中收录的国内外有代表性的标准参考分离株相比，gB、gD基因核苷酸序列的同源性分别为74.9%～98.8%、97.2%～98.1%；氨基酸序列的同源性分别为62.9%～96.4%、94.5%～96.8%。进化分析结果表明，LY株与目前国内流行的毒株在同一个进化分支内，和Ea株（湖北）、LA株（山东）亲缘关系最近，与国外分离株有一定差异。

奶牛白细胞黏附缺陷症（bovine leukocyte adhesion deficiency，BLAD）是一种常染色体隐性、致死性、遗传性疾病，严重影响奶牛生产性能和奶牛场的经济效益。为建立快速可靠的BLAD检测方法，本试验根据GenBank中BLAD CD18序列设计引物，PCR扩增后纯化产物，构建A/A、A/G和G/G 3种基因型标准质粒。用标准质粒建立焦磷酸测序检测方法。用建立的方法检测奶牛血液样品，其结果与Sanger测序结果进行比较，分析和验证检测结果的准确性。用建立的方法对300份奶牛血液样品进行检测，结果显示样品中A/A基因型检出294例，占总体比例的98%；A/G基因型检出6例，占总体比例的2%。随机抽取30份已检测样品进行Sanger测序,结果显示与焦磷酸测序法结果一致。本试验结果表明焦磷酸测序法检测BLAD，具有特异、灵敏、快速的特点，其检测结果准确可靠，适合于试剂盒的研发及应用于BLAD的临床诊断。

为建立快速、敏感、特异的评价猪繁殖与呼吸综合征（PRRS）活疫苗中病毒含量的方法，根据GenBank中登录的猪繁殖与呼吸综合征病毒（PRRSV）基因序列设计合成了标准品引物和定量引物，RT-PCR扩增PRRSV基因片段并连接到pMD19-T载体上，构建标准品质粒pMD19-T-PRRSV。采用SYBR GreenⅠ染料法进行荧光定量PCR检测，分析标准曲线并进行特异性、稳定性、重复性试验。结果显示，该方法检测病毒含量为7.43×10⁰～7.43×10⁸拷贝/μL，标准品各稀释度质粒拷贝数与Ct值之间相关系数高(R²=0.9989)，引物特异性强。应用该方法对6个厂家PRRS活疫苗中的病毒含量进行测定，发现不同厂家生产的疫苗中病毒含量差异较大，最高差异可达47.9倍。本试验建立的检测PRRS活疫苗病毒含量的荧光定量PCR方法可用于疫苗生产过程中及免疫动物前疫苗质量的评价。

试验旨在研究不同品种绵羊皮肤毛囊中角蛋白关联蛋白8-1（keratin associated protein 8-1，KAP8-1）基因相对表达量，从而明确KAP8-1基因对绵羊皮肤毛囊发育的调控作用。采用Real-time PCR SYBR GreenⅠ染料法，测定KAP8-1基因荧光定量Ct值，所得结果采用2-△△Ct法计算相对表达量。结果表明，南非肉用美利奴羊（♂）×东北细毛羊（♀）组、南非肉用美利奴羊（♂）×小尾寒羊（♀）组、杜泊羊（♂）×小尾寒羊（♀）组3个品种羊皮肤毛囊内KAP8-1基因均有表达，且三者相对表达量的比值为7.56∶2.19∶1。说明KAP8-1基因对皮肤毛囊发育、羊毛品质差异均具有一定的调控作用，且品种之间存在一定的差异。

本试验旨在构建贝氏柯克斯体外膜蛋白H（outer membrance protein H，OmpH）的重组表达载体并分析该蛋白的免疫原性，以贝氏柯克斯体九里株为模板，通过PCR方法扩增出含798 bp的贝氏柯克斯体的OmpH基因片段，并将其克隆至原核表达载体pQE-30，得到重组表达质粒pQE-30/OmpH。经IPTG诱导后，SDS-PAGE结果发现，该重组蛋白大小约为25 ku。Western blotting试验结果显示，该方法所诱导产生的重组蛋白具有良好反应原性。

本研究旨在建立一种检测牛病毒性腹泻病毒（BVDV）抗体的间接ELISA方法。将BVDV的非结构蛋白NS3基因克隆到原核表达载体pET-32a中进行表达，将纯化后的蛋白作为包被抗原，优化ELISA条件，建立了BVDV抗体间接NS3-ELISA检测方法，并对该方法的特异性、敏感性和重复性进行检测，结果均较好。用所建立的NS3-ELISA方法检测从广西各牛场采集的475份牛血清样品，检出率为24.8%，与商品化试剂盒比较，符合率为97%。结果表明，本研究建立的NS3-ELISA方法简便、快捷，可大批量检测，适用于BVDV的诊断、抗体水平监测及流行病学调查。

本试验通过采集乌鲁木齐燕儿窝种牛场2003年5月份所有泌乳奶牛的牛奶样品，使用不同超声波功率（0、100、120、140、160 W）处理后，采用十六烷基三甲基溴化铵（CTAB）、十二烷基磺酸钠（SDS）法提取牛奶中细菌DNA，并通过DNA浓度、纯度和细菌通用引物扩增16S rDNA的V6-V8区判定DNA的质量，筛选出提取牛奶中细菌DNA的最佳方法。结果表明，未使用超声波处理样品，直接采用CTAB、SDS法提取出的DNA无法扩增出细菌16S rDNA V6-V8区，而使用不同超声波功率（100、120、140、160 W）处理后能扩增出细菌16S rDNA V6-V8区，其中超声波功率140 W处理样品10 min并结合CTAB法提取牛奶中细菌DNA的浓度最高，为203.35 μg/mL。因此，超声波功率140 W处理样品并结合CTAB法提取牛奶中细菌DNA的方法最优，能满足从分子水平上进一步研究乳房炎相关细菌的要求。

本试验根据GenBank公布的原鸡（Gallus gallus）促性腺激素释放激素1(gonadotropin releasing hormone 1，GnRH1)基因mRNA序列设计1对引物，采用RT-PCR方法，从京海黄鸡下丘脑组织克隆GnRH1基因编码区序列，对其进行生物信息学分析，并构建原核表达载体pET32a-GnRH1，在大肠杆菌BL21感受态细胞中表达。最终获得了包括编码区、大部分启动子区和部分3′区域在内的长度为352 bp京海黄鸡GnRH1基因序列，该核酸序列与火鸡、鸽子、人、牛、野猪、山羊、绵羊、藏羚羊、马和大鼠的GnRH1基因序列同源性分别为93%、81%、54%、58%、61%、76%、76%、59%、76%和66%。酶切测序鉴定结果显示，成功构建了原核表达载体pET32a-GnRH1；SDS-PAGE检测结果显示，构建的重组质粒在大肠杆菌BL21感受态细胞中成功表达，分子质量为25～28 ku，且上清表达量高于沉淀；Western blotting检测结果显示，在大肠杆菌BL21感受态细胞中表达的蛋白为目的蛋白，且主要为可溶性表达。结果表明，成功克隆了京海黄鸡GnRH1基因，构建了GnRH1原核表达体系，并成功表达目的蛋白，为后续相关研究打下了基础。

根据牛特异性线粒体DNA片段，设计合成1对引物，以生、熟牛肉为材料，建立了肉制品中牛源性成分的PCR检测方法，并用该法对市售的67份牛肉制品进行检测。结果显示，所检牛源性成分在271 bp处出现预期的条带，扩增片段经Sau3AⅠ酶切分析确认，获得的214和57 bp片段与预期一致；运用该引物均可扩增出水牛肉、牦牛肉、奶牛肉、黄牛肉单一的相同大小的DNA条带，而对羊、马、狗、驴、兔和鸭等14种动物肉的DNA扩增则呈阴性，其检测灵敏度达到53.2 fg/μL DNA；利用该法对67份牛肉制品进行检测，检出率为100％。结果表明，该法快速简便，且具有较高的特异性和敏感性，可用于市售牛肉制品中牛源性成分的鉴定。

为高效表达猪流行性腹泻病毒（porcine epidemic diarrhea virus，PEDV）S蛋白并制备特异性的多克隆抗体，本研究利用RT-PCR方法扩增PEDV S基因主要抗原区域，将其亚克隆至pET30a(+)原核表达载体，转化BL21（DE3）表达菌，IPTG诱导表达重组蛋白，亲和层析法纯化重组蛋白，免疫印迹检测重组蛋白的活性，将重组蛋白免疫新西兰大白兔制备多克隆抗体，间接ELISA测定其抗体效价。经BamHⅠ/Hind Ⅲ双酶切鉴定获得了pET30a-S原核表达重组质粒，用终浓度为1 mmol/L IPTG诱导表达4 h后，获得了以包涵体形式表达的重组S蛋白，重组S蛋白纯化后免疫印迹检测结果显示具有良好的活性和特异性，间接ELISA测定制备的兔抗S蛋白多克隆抗体的效价为1∶25600。本研究截短表达了PEDV S蛋白并制备了多克隆抗体，为进一步开发猪流行性腹泻（porcine epidemic diarrhea，PED）免疫学快速检测试剂奠定了基础，为S蛋白的结构与功能的研究及抗原表位的鉴定提供了条件。

本试验旨在评定棉粕与豆粕的干物质（DM）、有机物（OM）、粗蛋白质（CP）在绵羊瘤胃内的降解动力学参数变化及瘤胃降解前后有效赖氨酸的含量变化。选用3只安装有永久性瘤胃瘘管的体重为（28.0±2.97）kg的育肥哈萨克公羊，代谢笼内单笼饲喂，每天饲喂棉籽壳200 g、精料500 g、小麦秸500 g，余料不超过10%。采用尼龙袋技术评定棉粕与豆粕DM、OM及CP的降解动力学参数，计算有效降解率（ED）及瘤胃停留时间（RRT），染料结合法（DBL）测定有效赖氨酸的含量。结果表明，在瘤胃固相食糜的平均外流速度为1.84%/h条件下，豆粕DM、OM及CP的瘤胃降解率及有效降解率均高于棉粕，而瘤胃停留时间均短于棉粕。豆粕经瘤胃内培养16 h后有效赖氨酸含量略有升高，而棉粕无明显变化。该试验结果为进一步评定棉粕及豆粕养分的小肠消化率提供参考。

试验旨在研究不同饲养条件对青年新疆褐牛生长过程中不同时期日增重与血清生化指标水平变化的影响。选用16月龄左右的青年新疆褐牛68头，分为散栏组和栓系组。分别于2012年10、11、12月及2013年1和2月测定青年牛体重，并采集血样进行白蛋白（albumin，ALB）、球蛋白（globulin，GLB）、总蛋白（total protein，TP）、尿素氮（blood urea nitrogen，BUN）、谷草转氨酶（glutamic-oxaloacetic transaminase，GOT）、谷丙转氨酶（glutamic-pyruvic transaminase，GPT）含量的检测。结果表明，散栏组日增重在2012年12月及2013年1和2月极显著高于栓系组（P＜0.01），血清白蛋白含量在2013年1月极显著高于栓系组（P＜0.01），球蛋白含量在2012年10、11、12月显著高于栓系组（P<0.01,P＜0.05），总蛋白含量在2012年12月及2013年1和2月显著高于栓系组（P<0.01,P＜0.05），尿素氮含量在2012年10、11月极显著高于栓系组(P＜0.01)，谷草转氨酶含量在2012年11、12月及2013年1月显著高于栓系组(P<0.01,P＜0.05)，谷丙转氨酶含量在2013年1和2月显著高于栓系组(P＜0.05)。综上所述，自由采食散栏饲养方式较栓系饲养能显著提高青年新疆褐牛日增重，同时还能加快其消化代谢，且饲草料提供的各种营养素能有效地被机体吸收合成自身蛋白。

蛋白质是生命的物质基础，氨基酸是其基本构成单位，蛋白质的功能主要通过氨基酸来体现。作者就近年来反刍动物氨基酸营养研究所取得的巨大突破和发展，分别从氨基酸的来源多样性、限制性及平衡性几个方面进行简要综述。

叶黄素是在自然界中含量非常丰富的类胡萝卜素，其免疫调节功能及抗氧化特性日益受到人们关注。人们进行了大量用于增强动物体色的研究，并逐步尝试在饲料中添加应用。作者对叶黄素的生物学功能及其在饲料中应用的研究进展进行了简要概述。

卵黄抗体（immunoglobulin of yolk，IgY）具有性质稳定、制备简单、产量高、成本低等优点，已广泛用于动物的疾病防制，随着抗生素的禁用，卵黄抗体逐渐成为一种新型饲料添加剂在饲料中添加应用。作者就卵黄抗体的特征及其在动物疾病防制与饲料中的应用进行了简要概述。

本研究以育肥的小尾寒羊和寒泊羊的羔羊为试验动物，采集背最长肌、臂三头肌、股二头肌和臀中肌样品，测定了肌纤维横截面积、直径、粗脂肪含量和氨基酸种类及含量。结果表明，寒泊羊背最长肌肌纤维直径和横截面积均小于小尾寒羊(P＜0.01)，股二头肌肌纤维直径和横截面积大于小尾寒羊 (P＜0.05)。寒泊羊背最长肌和股二头肌粗脂肪含量高于小尾寒羊(P＜0.01，P＜0.05)，臂三头肌和臀中肌粗脂肪含量略高于小尾寒羊(P＞0.05)。小尾寒羊肉中牛磺酸含量高于寒泊羊(P＜0.01)，其余17种氨基酸含量两品种羊肉间差异不显著(P＞0.05)。与肉鲜味有关的5种氨基酸，寒泊羊肌肉的含量高于小尾寒羊。除赖氨酸和色氨酸外，其余6种人体必需氨基酸寒泊羊肌肉的含量高于小尾寒羊。

为获得高纯度的鸡鲍氏3型志贺菌脂多糖（lipopolysaccharide，LPS）及其亚单位O抗原多糖(O-polysaccharide，O-PS)，采用改良热酚水法提取鸡鲍氏3型志贺菌的LPS，并联合使用葡聚糖凝胶层析得到高纯度的LPS；采用酸水解法联合葡聚糖凝胶层析获得高纯度的O-PS。生化方法检测结果显示所提纯LPS和O-PS纯度高，兔回肠襻试验结果显示所提纯的LPS活性好。本试验结果表明提取的LPS和O-PS可进行特异性研究及制备有效的候选疫苗。

为确定外源添加长链脂肪酸油酸和硬脂酸对奶牛乳腺上皮细胞中脂肪酸结合蛋白3（FABP3）表达的影响，本试验采用荧光定量RT-PCR检测乳脂合成相关基因的表达情况，确定油酸和硬脂酸的最佳浓度和培养时间分别为75 μmol/L 12 h和100 μmol/L 36 h。采用Western blotting和免疫荧光法检测添加油酸和硬脂酸后FABP3表达和脂滴分泌的情况，为进一步揭示FABP3在乳脂合成信号转导通路中的作用提供理论依据。

试验从蒙古绵羊瘤胃中分离出3株厌氧细菌，通过细菌纤维降解性试验发现3株菌皆具有纤维降解能力；通过革兰氏染色试验发现3株菌均为革兰氏阳性菌；通过生理生化试验和16S rDNA基因序列测定及同源性分析，最终确定分离的3株菌分别为牛链球菌（Streptococcus bovis）、婴儿链球菌（Streptococcus infantarius）和粪肠球菌（Enterococcus faecium），编号为E1、E2和E3。

为了解陕西青脚麻肉鸡肠道定殖菌的生活状态及分布，试验采用梯度稀释和组织培养方法对青脚麻肉鸡肠道定殖菌进行培养并计数。结果表明，芽孢菌在青脚麻肉鸡小肠中后段达到最大值，菌体总数达6.5×10⁵ CFU/mL；酵母菌在盲肠中的菌体总数仅为6.8×10⁴ CFU/mL；乳酸菌在十二指肠后段的菌体总数仅为8.6×10⁴ CFU/mL。综上所述，陕西青脚麻肉鸡肠道中定殖有芽孢菌的分布，酵母菌和乳酸菌定殖甚少。

巴尔通体（Bartonella）是一类革兰氏阴性、营养需求苛刻的兼性胞内需氧菌，感染导致人类罹患猫抓病及杆菌样血管瘤。组织病理学研究结果发现淋巴结内存在大量巴尔通体，提示巴尔通体具有能逃避宿主先天免疫吞噬的功能。然而目前关于巴尔通体与巨噬细胞间相互作用的研究尚未深入开展。本研究利用鼠源巴尔通体（Bartonella tribocorum）体外感染J774A、RAW264.7及C57小鼠腹腔巨噬细胞，探索巴尔通体在巨噬细胞内存活特性。免疫荧光试验结果显示巨噬细胞能有效吞噬巴尔通体，细胞形态未发生显著变化。庆大霉素保护试验结果证实被吞噬的巴尔通体在不同巨噬细胞内均能增殖及存活至48 h，且能在LPS诱导活化的巨噬细胞中存活。

MCF-7细胞是caspase 3功能缺失的乳腺癌细胞，本研究结果发现土槿皮乙酸(PAB)可激活caspase 3 的上游蛋白caspase 8 和caspase 9来诱导细胞凋亡，同时PAB通过P53蛋白诱导人乳腺癌细胞MCF-7凋亡。本试验结果为进一步阐明PAB抗乳腺癌奠定了基础。

乳蛋白是乳汁的主要成分之一，具有极高的营养价值，含有人体所需的必需氨基酸。作者主要介绍了乳蛋白合成的相关通路：氨基酸转运系统（amino acid transport system）、蛋白酪氨酸激酶-2信号转导子和转录激活子-5（Janus tyrosine kinase 2-signal transducer and activator of transcription 5, Jak2-Stat5）信号转导途径和雷帕霉素靶蛋白（mammalian target of rapamycin，mTOR）信号通路的调控。氨基酸转运系统为乳蛋白形成提供前体原料，信号转导子和转录激活因子（signal transducer and activator of transcription，Stat）家族是调控乳蛋白表达的信号传导因子，特别是Stat5对于乳蛋白的合成有重要作用，而mTOR信号通路整合了催乳素、胰岛素等激素及EIF4E、AKT等细胞因子来调控蛋白相关基因的表达，此外还涉及乳蛋白合成，对于提高乳汁营养价值具有重要意义。

抗菌肽是生物体在抵抗外来微生物入侵时产生的一类防御性小肽，在自然界分布广泛，是机体先天免疫系统的重要组成部分。与传统的抗生素相比，抗菌肽分子质量小、水溶性好、热稳定性好、抗菌机理独特、具有广谱的抗细菌、抗病毒、抗真菌、抗肿瘤等活性，且不易诱发细菌产生耐药性等特点。随着细菌耐药问题不断出现及新型抗菌肽的陆续发现，抗菌肽的抗菌活性、溶血性及细胞毒性的机制已成为研究的热点。笔者主要对抗菌肽的分子改造及活性机制的最近研究进展进行阐述，以期为抗菌肽的分子设计改造和应用提供科学的参考依据。

本研究利用Weigert’s-Van Giesson染色法和Masson氏三色染色法分别对正常梅花鹿和颈背部皮肤异常松弛的梅花鹿皮肤中的弹性纤维和胶原纤维进行观察研究，探讨梅花鹿松弛皮肤组织学致病特点。结果表明，正常梅花鹿真皮网状层中有较多的弹性纤维有规律地平行排列，呈波浪状，染色均匀；真皮乳头层有少量弹性纤维垂直于表皮分布。皮肤松弛梅花鹿或是真皮乳头层中缺乏弹性纤维（大0号和79号鹿），或是网状真皮层中弹性纤维严重发育不全，出现集聚、断裂现象（33号和79号），且排列紊乱、呈不规则状（大0号）；正常梅花鹿皮肤胶原纤维在真皮层中呈多层规律性分布。皮肤松弛梅花鹿胶原纤维束比正常胶原束粗大、胶原纤维束减少、堆积、排列杂乱无序，胶原纤维间表现为严重的稀疏。这些现象与人类皮肤松弛症的皮肤组织学症状非常相似。

自然界中很多低等无脊椎动物及有尾目两栖动物都存在组织或附属器官再生现象，而哺乳动物中这种能力却是少见的。近年来随着具有器官再生能力的MRL试验小鼠的发现，越来越多的试验证实哺乳动物也具有器官再生能力，这为临床上的损伤修复和肢体再生带来了新希望。组织、器官的再生离不开细胞增殖，细胞增殖离不开细胞周期，p21蛋白作为细胞周期的重要调控因子，在最新研究中发现，普通试验小鼠敲除P21基因后具有了同MRL试验小鼠一样的器官再生能力，确定了p21蛋白与再生有着密切联系。文章对P21基因与哺乳动物再生的关系作一综述。

本试验旨在研究β-伴大豆球蛋白在仔猪胃肠组织中的分布规律。选用母本品种、胎次相同及体重相近的28日龄健康的杜*长*大断奶仔公猪20头，随机分为2组，每组2个重复，每个重复5头仔猪。对照组饲喂不含大豆抗原蛋白的基础日粮，试验组饲喂含4% β-伴大豆球蛋白的日粮。试验期5 d。结果表明，在仔猪消化道内，仔猪空肠后段中β-伴大豆球蛋白含量最高，而胃和小肠前半段的含量较低，且胃、十二指肠黏膜中β-伴大豆球蛋白含量显著高于胃肠组织（P＜0.05）。

为探讨组蛋白去乙酰化酶抑制剂丙戊酸（valproic acid, VPA)对猪手工克隆(HMC)胚胎发育潜能的影响，本研究比较了不同浓度（0、25、50、75和100 nmol/L）VPA处理猪HMC重构胚对后期胚胎发育率、内细胞团数和组蛋白乙酰化程度的影响。结果表明，50、75 nmol/L VPA处理组HMC重构胚的卵裂率和囊胚发育率均显著高于0、25和100 nmol/L VPA处理组（P<0.05）；与0、25、75和100 nmol/L相比，50 nmol/L VPA处理组能显著提高囊胚内细胞团细胞数（P<0.05），囊胚阶段VPA处理组的组蛋白H3K14乙酰化（AcH3K14）水平高于空白组和孤雌激活囊胚。因此，应用VPA处理可提高猪HMC重构胚胎分裂率、囊胚率及增加内细胞团细胞数，提高了猪HMC胚胎的体外发育潜能。

产奶性状是奶牛生产中的重要经济性状，由微效多基因决定。影响奶牛产奶性状的基因较多，胰岛素样生长因子-1（insulin-like growth factor-1，IGF-1）基因作为影响奶牛产奶性状的一个候选基因，它的突变可导致其结构和功能发生改变，以及由此引起的产奶性状发生变化。作者就IGF-1的结构与功能及其基因单核苷酸多态性（single nucleotide polymorphisms，SNPs）与产奶性状的相关研究进展进行了综述，旨在为进行奶牛产奶性状的相关研究提供理论参考。

为分析牦牛与其他家牛属动物SRY基因多态性及其父系进化关系，从5个麦洼牦牛个体基因组DNA扩增克隆SRY基因，同时从GenBank检索家牛属物种及野牛的SRY基因序列，分析家牛属物种在SRY基因的多态性及其SRY蛋白中HMG-box区域基因序列的变异特征，并基于SRY基因序列构建家牛属物种间的父系系统进化树及其网络中介图，分析进化关系。家牛属物种编码SRY蛋白N、C两端氨基酸(HMG-box侧翼)基因序列的错义突变率(0.57)显著低于编码HMG-box区域基因序列的错义突变率(0.69)，推测家牛属物种间在SRY基因进化过程中的正选择同时作用于编码HMG-box及其侧翼区的基因序列；相对水牛和牦牛，欧洲野牛与黄牛的亲缘关系更近，此结果从父系侧面支持现存的黄牛牛种由已经灭绝的野牛或原牛驯化而来的观点；牦牛可能有2个或多个父系祖先；非洲水牛和江河水牛与其他牛种之间在SRY基因存在较多变异导致明显的分歧进化，也支持可划分为沼泽型和江河型2个亚种的论断。所以，家牛属物种间在SRY基因具有特殊的变异特征，物种间的父系进化关系分析结果支持前人论断。

绵羊业是中国畜牧业的重要组成部分，其主要产品羊肉以丰富的营养价值受到人们的青睐。因此，了解现今中国绵羊品种的产肉性能及肉质、遗传特性等，是了解绵羊种质特性和绵羊选育研究的基础。作者综述了中国绵羊产肉性能及其遗传研究概况，以期为优质绵羊育种工作提供理论基础。

利用屠宰场采集的绵羊卵巢作为试验材料，研究了不同卵母细胞采集方法(卵泡冲洗法、剖切法、注射器抽吸法和真空泵抽吸法)、成熟液中添加不同来源激素(BIONICHE或宁波激素厂生产 FSH/LH)和血清(发情绵羊血清或胎牛血清)，以及mSOF和mCR胚胎培养体系对绵羊体外受精各环节效率的影响。结果表明，卵泡冲洗法获得A、B两级卵母细胞比例为77.1%，显著高于其他3种方法(P＜0.05)，添加BIONICHE FSH/LH+ESS成熟液中，卵母细胞成熟率显著高于其他添加方式(P＜0.05)，mSOF和mCR胚胎培养体系在卵裂率上无显著差异(P＞0.05)，但mSOF组中囊胚率和孵化率均显著高于mCR组(P＜0.05)。综上所述，本研究中卵泡冲洗法更适合绵羊卵母细胞采集，成熟液中添加BIONICHE FSH/LH和ESS可显著促进绵羊卵母细胞成熟；与mCR培养体系相比，mSOF培养体系更适合绵羊体外受精胚胎的发育。

试验旨在通过动物试验观察止咳平喘颗粒的祛痰、镇咳及平喘药理作用。采用毛细玻管法观察其祛痰作用；采用浓氨水引咳法观察其止咳作用；采用喷雾致喘法观察其平喘作用。结果显示，止咳平喘颗粒低剂量组增加的痰液分泌量与空白对照组相比差异显著（P＜0.05）,中、高剂量组增加的痰液分泌量与空白对照组相比均差异极显著（P＜0.01）；止咳平喘颗粒高、中、低剂量组对于延长咳嗽潜伏期和减少咳嗽次数与空白对照组相比均差异极显著（P＜0.01）；止咳平喘颗粒低剂量组延长4%氯化乙酰胆碱引喘豚鼠的潜伏期与空白对照组相比差异不显著（P＞0.05），高、中剂量组延长4%氯化乙酰胆碱引喘豚鼠的潜伏期与空白对照组相比均差异极显著（P＜0.01）。结果表明止咳平喘颗粒具有祛痰、镇咳及平喘作用。

本试验从2013年北京地区疑似副猪嗜血杆菌病病料中分离到19株革兰氏阴性短小杆菌，对分离株进行培养特性、荚膜染色、生化特性、血清型分型及PCR鉴定，结果显示分离的19株细菌均为副猪嗜血杆菌（Haemophilus parasuis，Hps），分别属于血清4、5、7、12及13型。对分离株进行药敏试验及致病性试验，结果表明各分离株均有多重耐药性，且各分离株除GS-3外均有较强毒力。

为了探究二郎山山地鸡育种过程中鸡白痢的净化效果，本研究采用全血玻板凝集方法检测SD02和SD03品系3个世代鸡群体中鸡白痢患病情况，并同时对每个世代中生产性能数据进行统计分析。结果显示，经过3个世代的鸡白痢净化淘汰，SD02和SD03品系各世代间的患病率差异极显著（P<0.01）。SD02品系中患病率与健雏率、育成阶段成活率、产蛋阶段成活率均呈显著负相关（P<0.05）；SD03品系中患病率与育雏阶段成活率呈显著负相关（P<0.05）。以上结果表明，SD02和SD03中鸡白痢净化效果极显著,提高了鸡群的生产性能，为后续育种过程中清除鸡白痢奠定了理论基础。

为了解青海省部分牛群中牛病毒性腹泻病毒（bovine viral diarrhea virus，BVDV）、牛轮状病毒（bovine rotavirus，BRV）和牛冠状病毒（bovine coronavirus，BCV）3种牛病毒性腹泻病原的感染现状，本研究采用RT-PCR方法首次对2012～2013年青海省部分地区的32份具有腹泻症状的临床病料及152份健康牛粪便样品进行了BVDV、BRV、BCV的核酸检测与分析。结果显示，32份腹泻牛病料样品中BVDV、BRV、BCV的阳性率分别为65.63%（21/32）、18.75%（6/32）、34.38%（11/32），且存在2种或3种病原的混合感染；152份健康牛粪便样品中BVDV、BRV、BCV的阳性率分别为3.95%（6/152）、1.97%（3/152）、0（0/152）。该结果表明青海省部分牛群中普遍存在BVDV、BRV、BCV的感染，且混合感染现象严重，需进一步加强青海省地区牛病毒性腹泻病原的综合防控。

为探讨中药复方宫炎净注射液对小鼠急性炎症的抗炎作用，试验通过二甲苯致小鼠耳廓肿胀、蛋清致小鼠足趾肿胀、冰醋酸致小鼠腹腔毛细血管通透性及棉球致肉芽肿4个急性炎症模型来研究其抗炎作用。结果表明，中药复方宫炎净注射液能显著减少小鼠的耳廓肿胀率和降低小鼠腹腔毛细血管通透性（P＜0.05）；显著抑制棉球肉芽组织的生长和足趾肿胀率（P＜0.05）；其中以中药复方宫炎净注射液高剂量组效果最为显著，且与西药对照组相比无显著差异（P＞0.05）。因此，中药复方宫炎净注射液抗炎作用显著。

牦牛主产于中国，主要生活在青藏高原地区，因其能适应高寒的生态条件及耐粗、耐劳等特性，被誉为“高原之舟”。寄生虫病是牦牛常见的疾病，严重危害着牦牛的健康。作者从中国牦牛主要寄生虫病的流行现状及防控策略进行了综述，以期为牦牛寄生虫病防制提供参考。

据调查和相关文献显示，猪圆环病毒病（PCVD）在中国感染情况严重，对养猪业造成巨大损失，为有效地控制本病，本试验选用了几种新上市的PCVD国产灭活苗对育肥猪群进行免疫试验，使用ELISA方法对试验猪群进行了抗体消长的跟踪，使用SPSS生物统计软件对抗体变化情况进行了分析，结果表明育肥猪在2周龄前后免疫1次，10周龄前后进行加强免疫，可保证整个育肥期猪群不受猪圆环病毒2型（PCV2）的感染。

高致病性猪繁殖与呼吸综合征是影响养猪业的重大疫病，自2006年发生以来，已蔓延全国，给养猪业带来巨大经济损失。尽管采取了许多防控措施，但效果不甚理想，协同感染的存在要求必须采取综合控制措施。作者就高致病性猪繁殖与呼吸综合征的协同感染、疫苗预防、中药防制、生物安全及解除免疫抑制等研究进展作一综述。

本试验从1例病死洼地绵羊组织内分离到1株致病性细菌，经培养特性观察、生化鉴定、血清型试验、药敏试验和动物致病性试验，结果表明该病原菌为羊致病性大肠杆菌，其血清型为O78，16S rDNA基因测序结果表明，该菌与大肠杆菌同源性为100%。

胃瘤线虫病是一种由寄生于鱼类、鸟类体内的线虫引起的疾病，对野生动物保护、养殖业均构成较大威胁。试验于2012年4月—2013年4月用蠕虫学剖检方法检查了58839副黄鳝内脏胃瘤线虫的感染情况，并对其感染平均丰度、虫体长度、体长与存活时间关系进行观察与分析，同时测定了黄鳝血液pH。结果显示，胃瘤线虫的平均丰度为5.45%，其中春夏季平均丰度（7.85%）大于秋冬季平均丰度（4.08%），野生黄鳝平均丰度（4.08%）明显高于养殖黄鳝平均丰度（1.10%），表明胃瘤线虫平均丰度受季节及养殖方式的影响；测量300条胃瘤线虫平均长度为49.69 mm(体长范围为26.80～70.50 mm)，春夏季及秋冬季虫体平均长度分别为47.10、54.86 mm，表明胃瘤线虫秋冬季长度整体长于春夏季；虫体长度在＜30、30～39.9、40～49.9、50～59.9、＞60 mm的平均存活时间分别为2.5、3.6、4.4、5.4、9.0 d，表明虫体存活时间与虫体长度呈一定的正相关；黄鳝血液pH无明显季节性变化。本试验结果可为湖南省胃瘤线虫病防制提供依据。

奶牛肢蹄病是规模化奶牛场最常见的疾病之一，普遍认为奶牛肢蹄病对奶牛业的经济损失仅包括降低产奶量、增加药物治疗费用和奶牛的淘汰率等，近几年国内外学者报道奶牛肢蹄病对繁殖性能有着不同程度的负面影响。作者就奶牛肢蹄病对卵巢囊肿发病率、卵泡发育、发情行为、首次配种天数、空怀期天数和淘汰率影响的研究情况进行了简要综述。

本试验以布鲁氏菌外膜蛋白22（omp22）基因作为研究对象，通过基因序列克隆、表达载体构建、大肠杆菌原核表达与亲和纯化，对蛋白的表达与纯化进行了研究。结果显示，omp22基因的核苷酸序列含有639 bp，编码212个氨基酸残基，预测分子质量为22 ku，电泳结果显示重组omp22蛋白的分子质量为47 ku，与理论值相符。本试验结果为进一步研究重组omp22蛋白的免疫刺激与免疫保护作用奠定了基础。

试验旨在探讨蜂王浆冻干粉(lyophilized royal jelly，LRZ)对D-半乳糖致衰老模型小鼠的抗氧化作用。以昆明种小鼠为研究对象，按体重随机分为正常对照组、模型对照组和低、中、高剂量（170、340、510 mg/kg）蜂王浆冻干粉组。除正常对照组外，其余各组小鼠每天颈背部皮下注射160 mg/kg D-半乳糖0.2 mL，正常对照组注射等量的生理盐水。试验组小鼠每天灌胃0.3 mL LRZ水溶液，对照组小鼠灌胃等量的蒸馏水，试验期49 d。测定血清、脑和肝脏组织匀浆中超氧化物岐化酶（SOD）、过氧化氢酶（CAT）的活力及丙二醛（MDA）的含量。结果表明，D-半乳糖致衰小鼠SOD活力和CAT活力均明显下降，MDA含量明显上升，与正常小鼠比较差异显著(P＜0.05)；340、510 mg/kg LRZ可以提高小鼠血清、脑、肝脏组织中的SOD和CAT活性，降低MDA含量，与衰老模型组相比有显著性差异(P＜0.05)。说明LRZ能显著提高亚急性衰老小鼠的抗氧化能力，具有量效关系。

为了准确估计各固定效应及遗传效应对木乃伊发生的影响,本研究通过对数据筛选并利用广义线性模型对品种、配种月份、产仔月份、胎次进行了分析，并进一步估计了木乃伊发生的遗传力。结果显示、品种对木乃伊发生的影响差异不显著（P=0.375）。配种月份在8、10月时对产木乃伊的影响最大，其固定效应值分别为1.592和1.658。产仔月份在5、7月时对木乃伊的产生有着较大影响，其固定效应值分别为1.399和0.906。第1胎次对木乃伊的影响在前4胎中较大，固定效应值为－0.507，而第5胎次影响为最大，固定效应值为0.073，之后随着胎次的增加对木乃伊的发生影响降低。木乃伊发生的遗传力为0.38。通过此项研究发现除疾病因素外，综合环境因素对木乃伊的发生影响最大(P＜0.01)；其次为胎次(P＜0.05)；而品种对木乃伊的发生无显著影响（P＞0.05）。

动物性产品中存在多种氟喹诺酮类药物残留，不仅危害动物健康，且影响人类的动物性食品安全。作者就氟喹诺酮类药物残留问题及其检测方法（如微生物法、理化检测法、免疫分析法等）进行了简要综述，并进行了合理的展望，以期为今后研究和开发氟喹诺酮类药物残留检测方法提供参考。

黄藤素是中国自行研制的纯天然植物药，主要用于治疗妇科炎症、外科感染、菌痢、肠炎、呼吸道及泌尿道感染、眼结膜炎等。作者就近年来黄藤素的提取及人工合成研究、检测方法、药理作用进行综述，以期为黄藤素作为新兽药的开发利用提供参考。

为了建立一种通过吸光度测定能够快速准确检测奶牛乳房炎疫苗中无乳链球菌抗原浓度的方法,本试验将血平板培养的无乳链球菌用生理盐水将菌苔洗下，稀释成不同浓度的细菌悬浮液，然后用平板计数法测定不同浓度菌液的活菌数，同时测定其相应的吸光度，进而研究二者之间的相关性，建立标准曲线。结果表明，无乳链球菌的活菌数与其吸光度呈直线线性相关，无乳链球菌菌液浓度与吸光度之间的回归方程为y＝7.5861x－0.0805，R²＝0.9735，通过测定细菌悬浮液的吸光度，可以快速计算出该菌的菌液浓度。笔者对发酵罐培养的5批无乳链球菌菌液进行了吸光度测定和传统平板计数方法的比较及验证，证明了吸光度测定法优于平板计数法，具有简单、快速、准确的特点。