郑仲华,李东升,姚俊庸,常艳,勾红潮,刘文俊,赵明秋,毛晶丹,陈金顶
(华南农业大学兽医学院,广东广州 510642)
ZHENG Zhong-hua,LI Dong-sheng,YAO Jun-yong,CHANG Yan,GOU Hong-chao,LIU Wen-jun,ZHAO Ming-qiu,MAO Jing-dan,CHEN Jin-ding
(College of Veterinary Medicine, South China Agricultural University, Guangzhou 510642, China)
摘要: 本试验利用PCR技术,扩增得到猪瘟病毒(CSFV)C株E2基因的主要抗原片段A/D区549 bp,将其酶切纯化后,与已酶切纯化的pET-32a进行16 ℃过夜连接,转化大肠杆菌BL21。从转化成功的氨苄培养板挑取合适菌落进行PCR,挑取目的条带正确的菌落加至LB培养基进行过夜培养后送测序。将测序正确的菌液划板,挑菌培养并用IPTG进行诱导表达。得到的蛋白进行SDS-PAGE,在约39 ku位置有蛋白条带。将蛋白纯化后,分别利用自制兔抗CSFV阳性血清及临床检测阳性的猪抗CSFV阳性血清进行Western blotting检测,可见在39 ku处有单一条带,表明表达的蛋白具有免疫原性。本试验结果为下一步ELSIA试剂盒的组装奠定基础,方便对猪场免疫猪群猪瘟抗体水平进行监控。