猪流行性腹泻病毒S蛋白的截短表达、活性检测及多克隆抗体制备

中国畜牧兽医

猪流行性腹泻病毒S蛋白的截短表达、活性检测及多克隆抗体制备

王领兄¹，张婕²

（1.青海省大通县城关镇畜牧兽医站，青海大通 810102；2.青海省大通县桥头镇新城畜牧兽医站，青海大通 810199）

收稿日期:2013-08-12 出版日期:2014-05-20 发布日期:2014-06-25
作者简介:王领兄(1982—)，女，青海人，学士，助理兽医师，研究方向：畜牧兽医。

Truncated Expression and Activity Detection of Porcine Epidemic Diarrhea Virus S Protein，and Preparation of its Polyclonal Antibody

WANG Ling-xiong¹，ZHANG Jie²

（1.Chengguan Animal Husbandry and Veterinary Station， Datong County，Qinghai Province，Datong 810102，China;2.Qiaotou Animal Husbandry and Veterinary Station， Datong County，Qinghai Province， Datong 810199，China）

Received:2013-08-12 Online:2014-05-20 Published:2014-06-25

摘要/Abstract

摘要： 为高效表达猪流行性腹泻病毒（porcine epidemic diarrhea virus，PEDV）S蛋白并制备特异性的多克隆抗体，本研究利用RT-PCR方法扩增PEDV S基因主要抗原区域，将其亚克隆至pET30a(+)原核表达载体，转化BL21（DE3）表达菌，IPTG诱导表达重组蛋白，亲和层析法纯化重组蛋白，免疫印迹检测重组蛋白的活性，将重组蛋白免疫新西兰大白兔制备多克隆抗体，间接ELISA测定其抗体效价。经BamHⅠ/Hind Ⅲ双酶切鉴定获得了pET30a-S原核表达重组质粒，用终浓度为1 mmol/L IPTG诱导表达4 h后，获得了以包涵体形式表达的重组S蛋白，重组S蛋白纯化后免疫印迹检测结果显示具有良好的活性和特异性，间接ELISA测定制备的兔抗S蛋白多克隆抗体的效价为1∶25600。本研究截短表达了PEDV S蛋白并制备了多克隆抗体，为进一步开发猪流行性腹泻（porcine epidemic diarrhea，PED）免疫学快速检测试剂奠定了基础，为S蛋白的结构与功能的研究及抗原表位的鉴定提供了条件。

关键词: 猪流行性腹泻病毒; S蛋白; 截短表达; 活性检测; 多克隆抗体

Abstract: In order to highly express S protein of porcine epidemic diarrhea virus (PEDV) and prepare its specific polyclonal antibody，the main antigen region of S gene was amplified by PCR method，subcloned into pET30a(+) prokaryotic expression vector，transformed into BL21(DE3) expression bacteria，and induced by IPTG.The recombinant S protein was purified by affinity chromatography，its activity was detected by Western blotting，New Zealand White rabbits were immuned using the recombinant S protein to prepare polyclonal antibody，and detection of the antibody titer by indirect ELISA was conducted. After BamHⅠ/HindⅢ double enzyme digestion, we obtained pET30a-S recombinant plasmid，with induction of 1 mmol/L IPTG for 4 h，the recombinant S protein were expressed in inclusion body form，after purification and Western blotting，the protein showed good activity and specificity，antibody titer of polyclonal antibody against S protein was 1∶25600 detected by indirect ELISA. In this study PEDV S protein was successfully truncated expressed and its polyclonal antibody was also prepared，which layed a foundation for further development of rapid immunology detection kit of porcine epidemic diarrhea，and provided a condition for the study of structure and function of S protein and identification of the antigenic epitopes.

Key words:

porcine epidemic diarrhea virus; S protein; truncated expression; activity detection; polyclonal antibody

王领兄，张婕. 猪流行性腹泻病毒S蛋白的截短表达、活性检测及多克隆抗体制备[J]. 中国畜牧兽医.

WANG Ling-xiong，ZHANG Jie. Truncated Expression and Activity Detection of Porcine Epidemic Diarrhea Virus S Protein，and Preparation of its Polyclonal Antibody[J]. China Animal Husbandry & Veterinary Medicine.

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