猪圆环病毒2型TaqMan荧光定量PCR检测方法的建立

中国畜牧兽医

猪圆环病毒2型TaqMan荧光定量PCR检测方法的建立

郭慧娟¹^，2，李秀丽^{2，张国伟²，鄢明华²，李海花²，李富强²}

（1.天津农学院，天津 300384；2.天津市畜牧兽医研究所，天津 300112）

修回日期:2014-03-18 出版日期:2014-05-20 发布日期:2014-06-25
通讯作者: 李秀丽。张国伟。
作者简介:郭慧娟（1987—），女，山西人，硕士生，研究方向：动物疾病诊断与控制。
基金资助:
天津市应用基础与前沿研究计划重点项目（11JCZDJC17700）。

Establishment of TaqMan Real-time PCR for Detection of Porcine Circovirus Type 2

GUO Hui-juan¹^，2,LI Xiu-li²,ZHANG Guo-wei²,YAN Ming-hua²,LI Hai-hua²,LI Fu-qiang²

(1.Tianjin Agricultural University, Tianjin 300384, China；2.Tianjin Institute of Animal Husbandry and Veterinary Science, Tianjin 300112, China)

Revised:2014-03-18 Online:2014-05-20 Published:2014-06-25

摘要/Abstract

摘要： 采用PCR方法克隆了猪圆环病毒2型 (porcine circovirus 2，PCV2) 衣壳蛋白（capsid protein，CAP）基因，构建了重组质粒p-18T-CAP，并将其作为标准阳性模板。参照GenBank收录的PCV2 ORF2基因设计合成1对特异性的引物和与该引物相匹配的特异探针，通过对反应条件进行优化，以定量的10倍系列稀释的质粒p-18T-CAP为标准品进行TaqMan荧光定量PCR扩增，建立了一种检测PCV2的TaqMan荧光定量PCR方法。试验结果显示，该方法与猪圆环病毒 1 型、猪流感病毒、猪繁殖与呼吸综合征病毒、猪伪狂犬病病毒、猪瘟病毒等均无交叉反应；该方法最低可检测到4.53×10²拷贝/μL，比PCR检测方法高100倍；其标准曲线线性范围是10²～10⁹拷贝/μL，且具有良好的重复性。

关键词: 猪圆环病毒2型; 荧光定量PCR; TaqMan探针

Abstract: The specific primers and probe were designed according to the nucleotide sequence of porcine circovirus type 2 (PCV2) available in GenBank，CAP gene was amplified by PCR, cloned into the pMD18-T vector and screened positive plasmid standards.By optimization of reaction conditions，we established a TaqMan Real-time PCR method for detection of PCV2. The results indicated that the method was specific， and swine influenza virus (SIV), porcine reproductive and respiratory syndrome virus (PRRSV), pig pseudorabies virus (PRV) and classical swine fever virus detection results were negative. The detection limit of the assay was 4.53×10² copies/μL of plasmid DNA，100 times higher than that of the routine PCR. The standard curve displayed a linear range from 10² to 10⁹ copies/μL and it had a good reproducibility.

Key words: porcine circovirus type 2; Real-time PCR; TaqMan probe

郭慧娟，李秀丽，张国伟，鄢明华，李海花，李富强. 猪圆环病毒2型TaqMan荧光定量PCR检测方法的建立[J]. 中国畜牧兽医.

GUO Hui-juan1，2,LI Xiu-li2,ZHANG Guo-wei2,YAN Ming-hua2,LI Hai-hua2,LI Fu-qiang2. Establishment of TaqMan Real-time PCR for Detection of Porcine Circovirus Type 2[J]. .

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