本研究克隆了水牛转录抑制因子CTCF基因序列,并运用生物信息学方法对其核苷酸序列的保守性和氨基酸的理化性质、蛋白质结构进行了系统分析,此外还对CTCF基因在水牛不同组织中的表达差异进行了检测。结果表明,应用RT-PCR技术克隆获得了长2239 bp水牛CTCF基因序列,其中编码区全长2184 bp,编码727个氨基酸,理论蛋白质分子质量82.7 ku,等电点为6.57。多重序列比较分析显示,水牛CTCF核苷酸序列与牛、猪、马、人和小鼠相应序列的相似性分别为99%、96%、96%、94%和92%,结合系统进化树分析结果推测,CTCF基因在不同物种及进化的过程中具有高度的保守性。对水牛CTCF蛋白的二级和三级结构分析结果发现,其存在连续11个锌指C2H2结构,预测其为重要的DNA结合蛋白。定量表达分析结果显示,CTCF在水牛肝脏组织中相对表达量最高,大脑、肌肉和肾脏次之,卵巢和皮肤表达量较低。

原核表达猪链球菌2型分解代谢控制蛋白A(catabolite control protein A,ccpA)并进行纯化,通过免疫印迹反应初步鉴定重组蛋白的抗原性和特异性。采用PCR方法,扩增ccpA基因序列,克隆至原核表达载体pET-28a中,转入大肠杆菌BL21中进行诱导、表达和亲和层析纯化;经Western blotting初步评价ccpA的抗原性。重组原核表达质粒pET-28a-ccpA经双酶切及测序证明构建正确;表达的重组蛋白相对分子质量约38000,能被相关抗体所识别。因此,能成功在大肠杆菌中表达猪链球菌2型ccpA,为猪链球菌2型相关调节蛋白的免疫学研究奠定基础。

采用超高效液相色谱串联四级杆/飞行时间质谱仪(UPLC-Q-TOF MS)识别和鉴定了喹赛多在鸡体内的代谢产物,并讨论了喹赛多在鸡体内可能的代谢途径。按800 mg/kg体重的剂量给鸡单次灌服喹赛多,采集试验前后鸡的粪便,经简单前处理后,运用UPLC-Q-TOF MS进行分析,采集的数据经Metabolynx^xs软件处理后,共鉴定出15种喹赛多的代谢产物。试验结果表明,喹赛多在鸡体内发生广泛的代谢。

本试验从猪种布鲁氏菌S2疫苗株免疫雄性小尾寒羊构建的白细胞层SSH cDNA文库中筛选1段cDNA序列,经测序和BLAST同源性搜索比对发现其为溶菌酶重组片段,该片段大小为770 bp,编码148个氨基酸残基,编码的蛋白质是一种天然抗感染物质,已提交GenBank,登录号为JX263305。经荧光定量PCR分析,与正常组羊相比,在S2免疫14和30 d的羊白细胞层中该溶菌酶基因表达轻微上调,但差异不显著(P>0.05);在免疫40 d时恢复到正常水平。这也进一步说明溶菌酶是一种存在机体内必不可少的天然免疫因子,为布鲁氏菌病有效防控方面的研究奠定了基础。

信号转导分子AKT-1、mTOR对于乳腺上皮细胞中乳蛋白的转录和翻译至关重要,胰岛素、地塞米松和催乳素组成的催乳复合物(DIP)是包括AKT-1/mTOR在内的多种泌乳信号途径激活的必要条件。采用qRT-RCR和Western blotting分别检测不同培养时间点奶牛乳腺上皮细胞AKT-1、mTOR的mRNA和蛋白质水平表达情况,结果显示,在DIP培养条件下,AKT-1和mTOR表达量均上升。添加胰岛素样生长因子-Ⅰ(IGF-Ⅰ)后进一步促进了AKT-1 mRNA和蛋白质的表达;同时,mTOR mRNA和蛋白质水平的表达也增加,且均有显著差异(P<0.05),结果表明DIP存在时,IGF-Ⅰ上调AKT-1和mTOR的表达,增强了AKT/mTOR途径。

本研究采用生物信息学的方法比较不同物种BPI基因编码区CDS序列,分析人、小家鼠、褐家鼠、牛、白颊长臂猿、原鸡、家兔、野猪、猕猴、家马、非洲爪蟾、毛猩猩、犬 13个物种BPI基因编码区的遗传多样性,且对BPI氨基酸序列组成、信号肽、疏水性/亲水性、跨膜结构、二级结构及保守结构域进行预测分析。结果表明,在13个物种的29条BPI基因CDS序列中,共检测到532个多态位点,生成了15种单倍型,BPI基因在种群间及种群内均存在较大的遗传变异,BPI基因具有较强的密码子偏爱性。BPI蛋白理论等电点均大于7,呈碱性,N端大都有信号肽,肽链表现为亲水性,基本属于跨膜蛋白和分泌蛋白。BPI蛋白主要二级结构元件为α螺旋、β折叠和无规则卷曲,有2个保守结构域BPI1和BPI2。

从牦牛(Yak)体内分离出牛病毒性腹泻/黏膜病病毒(BVDV/MDV),参考GenBank中已收录的BVDV-Ⅰ型的全基因组序列,设计了19对引物,通过RT-PCR方法,对牛病毒性腹泻病毒牦牛株进行克隆及测序,得到其全基因组序列(GenBank登录号:JQ799141),序列全长12214 nt,其中5'-UTR长288 nt,3'-UTR长232 nt。将牦牛株BVDV全基因序列与GenBank中登录的其他8株BVDV病毒全基因序列进行同源性比对及系统进化分析,结果表明,牦牛株BVDV与BVDV-Ⅰ型毒株出于同一分支,但与其他8株BVDV毒株全基因序列同源性均不高,有可能属于新的独立基因型或基因亚型,仍需进一步研究证实。

选取80只7周龄雄性BALB/c小鼠,随机分为Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ组,每组20只,使Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ组基础日粮中硒含量达到0.045、0.1、0.4和0.8 mg/kg。结果表明:①Ⅰ组能显著降低小鼠肝脏中硒的沉积量(P<0.05);②Ⅰ组谷胱甘肽过氧化物酶1(glutathione peroxidase 1,GPx1)的mRNA相对表达量明显低于Ⅱ、Ⅲ组(P<0.05),且Ⅱ、Ⅲ组在肝脏中差异显著(P<0.05),在睾丸中差异不显著(P>0.05);③Ⅰ、Ⅲ组肝脏中谷胱甘肽过氧化物酶4(glutathione peroxidase 4,GPx4)的mRNA相对表达量差异不显著(P>0.05),但均显著低于Ⅱ组(P<0.05),而各试验组间在睾丸中差异均不显著(P>0.05);④随着日粮中硒添加量的增加,肝脏和睾丸中硫氧还蛋白还原酶2(thioredoxin reductase 2,TrxR2)的mRNA相对表达量显著提高(P<0.05)。因此,在肝脏和睾丸组织中,饲喂低硒饲料能显著降低硒的沉积量和GPx1、GPx4、TrxR2的mRNA相对表达量(P<0.05);而饲喂高硒饲料能显著降低GPx1的mRNA相对表达量(P<0.05),同时显著增加TrxR2的mRNA相对表达量(P<0.05)。提示,硒对GPx1、GPx4和TrxR2 mRNA相对表达量的调节存在组织差异性。

本试验旨在分析猪瘟病毒E2蛋白的免疫反应,应用RT-PCR方法扩增了编码猪瘟病毒兔化弱毒疫苗株C株囊膜糖蛋白E2基因主要编码区,并定向克隆到表达载体pET-30a-c(+)中,获得重组表达载体pET30a-E2,将其转化大肠杆菌Rosetta(DE3)感受态细胞,经IPTG诱导表达。SDS-PAGE和Western blottin分析结果表明,E2基因获得高效融合表达,且具有免疫反应活性。本试验为建立E2抗原的检测试剂盒奠定基础。

本试验旨在了解新型鸭黄病毒(duck flavivrus,DFV)广西流行毒株的生物学特性,从发病樱桃谷种鸭群分离到1株新型DFV LG/01/11,并利用设计的引物扩增获得病毒包膜蛋白E基因。结果显示,LG/01/11株E基因全长1503 bp,编码500个氨基酸,与国内2010年以来分离的鸭黄病毒核苷酸序列同源性达99.3%～99.6%,没有碱基缺失和插入现象,只有散在的碱基突变。本试验结果为病毒生物学特性分析和遗传变异研究及相关疫病的防控奠定了基础。

本试验旨在扩增牛Myf5基因,并对其蛋白质生物学特性进行分析。根据GenBank中已公布的牛Myf5基因序列设计1对引物,利用RT-PCR方法从牛背腰最长肌组织扩增牛Myf5基因,连接PUCm-T载体,进行酶切和测序鉴定,同时利用在线工具对牛Myf5蛋白的基本性质、二级结构和磷酸化位点进行预测。获得的牛Myf5基因编码区序列长度为768 bp,编码255个氨基酸。蛋白质生物学特性分析结果表明,Myf5具有该家族基因典型的碱性螺旋—环—螺旋结构域,氨基酸组成上丝氨酸(Ser)含量最高,其磷酸化位点分别位于丝氨酸(Ser)、苏氨酸(Thr)和酪氨酸(Tyr)残基上。

试验参考鲤鱼γ-2β干扰素(interferon γ-2β,IFNγ-2β)全长cDNA序列,在其两侧非翻译区和外显子设计2对引物,以提取的鲤鱼脾脏基因组DNA为模板进行PCR扩增,获得了IFNγ-2β的全长基因DNA序列。结果表明,获得的基因组DNA全长2084 bp,GenBank登录号为JX181981,序列分析结果显示该基因进化较保守,和其他物种一样都含有4个外显子和3个内含子,各外显子碱基数与哺乳动物中相对应的外显子碱基数基本相同,且外显子、内含子剪接位点均遵守GT-AG规则。

根据NCBI上输血传播性病毒(Torque-Teno virus,TTV)犬基因组序列(Cf-TTV10,GenBank登录号:AB076002)设计嵌套引物,从犬血清与粪便中鉴定出TTV。199份犬血清样品中检出阳性率为14.6%(29/199),158份犬粪便样品的检出率为12.7%(20/158),通过基因分析与鉴定确定为同一型,验证了从粪便样品和血液样品的提取检测的犬TTV阳性率基本保持一致(P>0.05),为下一步进行TTV的传染特性和分子流行病学的研究提供了基础。

酵母CUP1编码的蛋白质属于金属硫蛋白,该蛋白质富含半胱氨酸,大小为61个氨基酸,分子质量约为6165 u。CUP1蛋白能够鳌合金属铜离子,使得酵母对铜离子产生耐受力。在铜等金属离子的诱导下,酵母CUP1基因的启动子与转录因子ACE1等结合力增强,从而在转录水平上的表达量大大提高。作者对酵母CUP1基因的研究进行了综述,主要包括CUP1基因的结构、其蛋白质鳌合金属离子的作用、启动子相关的分析及CUP1基因特别是其启动子在转基因中的应用,为深入研究CUP1基因的生理机制奠定基础,同时也为其在转基因中的应用,特别是在转CUP1基因动、植物生产中的应用提供理论依据。

鸭病毒性肝炎(duck virus hepatitis,DVH)是造成养鸭业严重经济损失的传染病之一。作者对松原市某鸭场送检的病死鸭进行病毒分离试验、雏鸭回归试验、DHV分离株ELD₅₀测定、雏鸭保护试验、鸡胚中和试验、鸭胚接种试验和电镜观察等,确诊该病为Ⅰ型鸭病毒性肝炎。试验所分离得到的Ⅰ型鸭肝炎病毒与标准毒株的回归试验病理特征存在一定差异,其基因序列的测定及分析还有待于进一步研究。

瘤胃厌氧真菌这一特殊的菌群除在瘤胃中发挥重要作用外,其分泌的高活性纤维素酶的应用价值也备受关注,因传统培养的局限性,因此,利用分子生物技术开展的研究逐渐深入。作者主要从瘤胃厌氧真菌的特点和多样性出发,厌氧真菌对结构性碳水化合物、淀粉和蛋白质的降解及在瘤胃生态环境中的作用进行了分析,并对研究瘤胃厌氧真菌的分子生物学方法如内转录间隔区(ITS)、变性梯度凝胶电泳(DGGE)、限制性片段长度多态性(RFLP)、实时荧光定量PCR(Real-time PCR,RT-PCR)和宏基因组学(metagenomics)等进行了阐述,以期为瘤胃厌氧真菌的研究提供参考。

参照IBRV基因组序列,设计合成1对特异性引物,扩增了长约846 bp的gD基因片段。将目的片段定向克隆到pET-30a原核表达载体,酶切及测序鉴定均正确后,转化BL21(DE3)表达菌,经IPTG诱导得到了以可溶性形式表达的重组蛋白。重组蛋白纯化后,经免疫印迹检测证明具有良好的抗原性和特异性。本研究利用原核表达系统成功表达具有良好抗原性的gD蛋白,为IBRV的深入研究及诊断试剂的研制奠定了物质基础。

根据GenBank中猪巨细胞病毒(porcine cytomegalovirus,PCMV)gB基因的核苷酸序列(GenBank登录号:FJ870563.1)设计1对引物,采用PCR方法从确诊为猪巨细胞病毒的阳性样品中扩增gB基因,将其克隆到pMD19-T载体上,转化DH5α感受态细胞,提取重组质粒T-PCMV-gB,经PCR和酶切鉴定后测序,并与GenBank上gB相应序列进行同源性分析。结果表明,该基因片段长度为2580 bp,与其他参考株gB基因的核苷酸同源性达98.0%～99.6%;其推导的氨基酸序列与人疱疹病毒6型和7型比较分析结果显示,其同源性分别为42.9%～43.6%和40.5%～40.6%。这些氨基酸差异对病毒生物学特性的影响有待于进一步研究。

本试验旨在研究添加不同比例益生菌发酵棉粕对黄羽肉鸡小肠黏膜形态、血清T淋巴细胞亚群及肠道菌群的影响。选用14日龄健康黄羽肉鸡320只,随机分成4组,每组4个重复,每个重复20只鸡,Ⅰ组为空白对照组,Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ组分别添加3%、6%和9%发酵棉粕,研究不同添加量对肉鸡生长前期(14～28日龄)、中期(29～45日龄)、后期(46～65日龄)各阶段小肠黏膜形态,中、后期血清T淋巴细胞亚群及后期肠道菌群的影响。研究结果显示:①与Ⅰ组相比,Ⅲ组黄羽肉鸡前、中、后期的十二指肠绒毛高度极显著提高31.90%、25.17%、49.41%(P<0.01),隐窝深度极显著降低9.42%、11.31%、10.83%(P<0.01),V/C极显著提高45.65%、41.19%、67.84%(P<0.01);空肠绒毛高度极显著提高28.72%、28.38%、27.61%(P<0.01),隐窝深度显著或极显著下降6.65%(P<0.05)、6.18%(P<0.01)、7.37%(P<0.01),V/C极显著提高37.84%、36.69%、37.82%(P<0.01);回肠绒毛高度极显著提高76.64%、40.36%、67.20%(P<0.01) ,隐窝深度显著降低4.09%、6.07%、6.02%(P<0.05),V/C极显著提高83.79%、49.27%、78.26% (P<0.01)。②中、后期Ⅳ组黄羽肉鸡CD4⁺/CD8⁺显著提高42.86%、34.95%(P<0.05)。③随着发酵棉粕添加量的增多,黄羽肉鸡的十二指肠、空肠、回肠中乳酸菌的数量逐渐增多,且差异越来越明显,除Ⅱ组十二指肠和空肠段外,其余各组的各肠段差异均显著或极显著(P<0.05;P<0.01)。大肠杆菌和沙门氏菌的数量逐渐减少,且差异越来越明显,除Ⅱ组十二指肠段外,其余各组各肠段差异均显著或极显著(P<0.05;P<0.01)。综上所述,6%发酵棉粕组在提高十二指肠、空肠、回肠绒毛高度、V/C,降低其隐窝深度方面都优于3%、9%发酵棉粕组,而9%发酵棉粕组在提高CD4⁺/CD8⁺、肠道乳酸菌数量和降低大肠杆菌和沙门氏菌数量方面优于3%、6%发酵棉粕组。

为了探讨2种营养调控剂对荷斯坦奶公牛育肥性能和屠宰性能的影响,按体重和月龄相近原则选择60头荷斯坦奶公牛,并随机分成3组,对照组饲喂基础日粮,试验1、2组分别在基础日粮中添加100 g/d调控剂Ⅰ和Ⅱ,预试期14 d,正试期31 d。结果表明,试验1、2组每头牛的日增重分别比对照组提高0.32和0.37 kg(P<0.05);与对照组相比,试验2组能显著提高胴体产肉率、肉骨比和十三块分割肉重(P<0.05),试验1、2组的屠宰率、净肉率和十三块分割肉占净肉重比例分别提高了2.96%、3.05%、1.47%和1.89%、2.82%、2.39%,但差异均不显著(P>0.05);在试验期内,试验1、2组比对照组分别多增加利润1233.80和1370.20元。结果提示,2种营养调控剂均对荷斯坦奶公牛的育肥效果较好,可以产生较好的经济效益。

通过对育成荷斯坦奶公牛与西门塔尔牛、新疆褐牛及新疆土种牛肉品质部分指标的比较分析研究,旨在探讨荷斯坦奶公牛的肉品质。选择在相同营养模式下18月龄左右4个品种牛各3头进行屠宰,取右半边胴体的背最长肌作为肉品质试验样品,分别对牛肉的肉品质、常规营养成分及氨基酸含量进行测定和分析。结果表明,荷斯坦奶公牛肉色、失水率、系水力、熟肉率、大理石花纹等指标均优于新疆褐牛、新疆土种牛,次于西门塔尔牛;荷斯坦奶公牛嫩度优于新疆土种牛;粗蛋白质、粗灰分含量分别为20.14%、1.11%,且各品种间差异均不显著(P>0.05),干物质含量为26.30%,显著高于新疆褐牛和新疆土种牛(P<0.05),低于西门塔尔牛(P>0.05),粗脂肪含量为10.04%,显著高于其他品种牛(P<0.05);荷斯坦奶公牛含有人体需要的各种氨基酸,其中蛋氨酸、谷氨酸、甘氨酸、组氨酸、牛磺酸等含量丰富,氨基酸组成比例良好。

为了研究酸制剂在肉仔鸡日粮中的添加效果,试验选用126只1日龄健康AA肉仔鸡,随机分为对照组(不添加酸制剂组)和试验组(添加酸制剂),对照组饲喂基础日粮,试验组在基础日粮中添加酸制剂,试验期为49 d,分为前、中、后期(1～21、22～42和43～49日龄)。结果表明,在肉仔鸡的生产前期1～21日龄添加酸制剂有降低平均日采食量,增加平均日增重,提高21日龄末体重,降低料重比的趋势,但对22～49日龄肉仔鸡生长性能没有显著影响。添加酸制剂有提高49日龄回肠食糜中有益挥发性脂肪酸(乙酸)含量,降低有害挥发性盐基氮的趋势。因此,酸制剂能够改善肉仔鸡的肠道健康,且在肉仔鸡前期日粮中添加酸制剂对肉仔鸡生长性能的效果要优于在后期日粮中的添加效果。

随机选取相同条件下放牧饲养的120日龄思州鸡10只,公、母各半,进行肌肉品质测定。结果显示,思州鸡肌肉嫩度好,干物质含量高,钙含量丰富,硒和铁含量较低,锌含量适中;胸肌11种脂肪酸中以油酸、棕榈酸、亚油酸和硬脂酸为主,占脂肪酸总量的92.20%,不饱和脂肪酸含量占69.35%,必需脂肪酸占15.31%;17种氨基酸中以谷氨酸、天冬氨酸、赖氨酸和亮氨酸为主,占氨基酸总量的44.22%,必需氨基酸、鲜味氨基酸、甜味氨基酸、芳香族氨基酸、支链氨基酸和抗氧化氨基酸含量分别为39.40%、26.18%、20.09%、7.06%、18.08%和11.61%。因此,思州鸡肌肉品质优良,肉质风味好。

三聚体自转运黏附素(trimeric autotransporter adhesin,TAA)是近年来发现的参与猪胸膜肺炎放线杆菌(Actinobacillus pleuropneumoniae,APP)黏附宿主细胞的重要毒力因子。本研究比较了5b adh基因缺失株(△adh)与5b野生株的生物学特性及其对仔猪的致病性。结果表明,在BHI液体培养基中,△adh生长速度明显高于5b野生株;△adh在液体培养基中细菌集聚性明显减弱;仔猪感染后临床症状典型,猪肺脏病理组织切片结果表明,△adh致病性弱于野生株。本研究结果证实adh在APP黏附宿主过程中发挥重要作用,为下一步探究APP致病机制奠定基础。

为了解猪圆环病毒2型(porcine circovirus type 2,PCV2)感染对仔猪的肺泡巨噬细胞(PAM)免疫功能造成的影响,试验对PCV2感染40日龄左右健康仔猪PAM模式识别受体TLR2、TLR4、CD16、CD18 mRNA的动态变化进行了研究。结果发现,在病毒感染后TLR2、TLR4、CD16 mRNA的转录水平动态变化基本相似,3、7 d高于对照组,14 d低于对照组,28 d接近对照组,且3 d时TLR4、CD16差异极显著(P<0.01),14 d仅TLR2差异显著(P<0.05);CD18 mRNA的转录水平,3 d时显著低于对照组(P<0.05),而7 d时显著高于对照组(P<0.05),28 d接近正常。以上结果表明,PCV2感染PAM后可引起PAM对异物识别吞噬功能与吞噬后信号转导功能出现紊乱,影响了PAM吞噬和清除病原微生物的能力。

本研究旨在探索肝片吸虫感染小鼠急性期肝脏单核细胞悬液中细胞因子表达模式及其原因。试验将小鼠分为4组,分别对感染抗体处置组、感染非抗体处置组、抗体处置非感染组和非抗体处置非感染组的肝脏单核细胞培养上清液中IL-4、IL-5、IL-13及IFN-γ进行测定;同时也对肝脏中IL-4及IL-12P40 mRNA水平进行荧光定量PCR检测。结果显示,IL-4和IL-5的表达模式相似。在非感染状态下,无论是否进行抗体处置,两者都处于较低表达水平。在感染状态下,两者在非抗体处置小鼠中的表达显著高于抗体处置组(P<0.05)。IL-13与IL-4及IL-5的表达差异在于感染并用抗体处置后,小鼠肝脏单核细胞中的IL-13仍有较高水平表达。IFN-γ的表达量在感染后有所增加,但在有无抗体处理间无显著差异(P>0.05)。mRNA检测结果显示,在非感染状态下,抗体处置后的IL-4 mRNA水平显著低于非抗体处置组(P<0.05)。感染后非抗体处置组小鼠中IL-4 mRNA水平极显著高于抗体处置组(P<0.01),同时也极显著高于非感染非抗体处置组(P<0.01)。IL-12P40 mRNA的水平在感染状态下,抗体处置组的IL-12P40 mRNA虽较非抗体处置组低,但无显著差异(P>0.05)。但感染后非抗体处置组的IL-12P40 mRNA水平均极显著高于感染组抗体处置和非抗体处置组(P<0.01)。本试验结果表明,IL-4Rα对肝片吸虫感染急性期IL-5和IL-4的表达极其重要,但对IL-13及IFN-γ的影响较小。

本研究采用PCR-RFLP方法检测生长分化因子9(growth differentiation factor 9, GDF9)基因FecTT突变在济宁青山羊、贵州白山羊、大足黑山羊、陕南白山羊、古蔺马羊、马头山羊、波尔山羊、成都麻羊、萨能奶山羊、文登奶山羊、板角山羊、金堂黑山羊、关中奶山羊、川东白山羊、安哥拉山羊、辽宁绒山羊、内蒙古绒山羊等17个山羊品种中的分布。结果表明,在17个山羊品种中都未检测到FecTT突变,提示,GDF9基因影响Thoka绵羊高繁殖力的FecTT突变对以上17个山羊品种的繁殖力均没有显著影响。

为从形态学角度理解内分泌调节过程,揭示促黄体生成素(luteotropic hormone,LH)对雌性哺乳动物卵巢调节作用机制,试验采用免疫组织化学SP方法研究促黄体生成素受体(luteotropic hormone receptors,LHR)在多浪羊和卡拉库尔羊卵巢组织中的分布与表达,分别选取相邻的5张连续切片,光镜观察、图像分析。结果显示,多浪羊与卡拉库尔羊的LHR阳性物质主要见于膜细胞、卵母细胞、颗粒细胞和血管周围间质,尤其在膜细胞和卵泡颗粒细胞的胞质中分布最多。原始卵泡卵母细胞中便有LHR受体阳性物质分布,在各级卵泡中LHR阳性细胞数量和染色强度随卵泡发育呈正向增加趋势。

为了揭示雌激素(estrogen,E₂)对奶牛输卵管上皮细胞中前列腺素E₂合成酶(PGES)和前列腺素F_2α合成酶(PGFS)mRNA表达的影响,探讨E₂对奶牛输卵管生殖生理的调节作用,本试验采用了体外培养荷斯坦奶牛输卵管上皮细胞技术,分不同时间(0、2、4、8、16、24和48 h)和不同浓度(10^-12、10^-11、10^-10、10^-9 mol/L)添加雌激素E₂(以不加雌激素作空白对照),采用荧光定量PCR 技术检测PGES和PGFS mRNA表达。不同浓度的E₂或同一浓度不同刺激时间的E₂均能增加PGES的表达,但4 h浓度为10^-10 mol/L时与空白对照相比差异极显著(P<0.01),而PGFS在24 h添加浓度为10^-12 mol/L E₂时与空白对照相比差异极显著(P<0.01)。试验结果表明,E₂对培养的奶牛输卵管上皮细胞PGES和PGFS mRNA的表达有促进作用,说明雌激素E₂对前列腺素酶PGES和PGFS mRNA的表达具有调控作用。

对猪乙型脑炎病毒(Japanese encephalitis virus,JEV)LS株的理化特性及其在BHK-21细胞上的增殖特性进行研究,结果表明,该病毒对温度(56 ℃)、酸(pH 5.0以下)、乙醚、胰蛋白酶敏感,反复冻融(-65～20 ℃)3次几乎不影响病毒效价;该毒株在BHK-21细胞上连续传20代,仍能维持较高的病毒滴度(TCID₅₀=10^7.75/mL)和血凝效价(2⁸),且根据其在BHK-21细胞上的增殖规律,得到最佳收毒时间为接毒后28～40 h。本试验为进一步研究JEV LS株的生物学特性奠定基础。

生殖细胞来源于原始生殖细胞,其在体内的分化机制已基本清楚。随着生殖细胞研究的不断深入,通过体外诱导途径获得生殖细胞已成为现实。将胚胎干细胞体外分化为上胚层样细胞,进而分化为原始生殖样或原始生殖细胞。将它们迁移入胎儿生殖腺,具有减数分裂及产生精子能力,与卵子结合移入缺生精管的生殖腺的新生鼠可以产生健康后代。为此,体外诱导生殖细胞的成功,进一步阐明了胚胎干细胞向生殖细胞分化的机制,为更有效利用干细胞造福人类奠定了基础。

骨代谢包括骨形成和骨吸收两个过程。甲状旁腺激素是骨形成和骨重建过程中一个重要的调节因子,甲状旁腺激素通过G蛋白偶联受体、甲状旁腺激素/甲状旁腺激素相关肽受体的活动调节骨代谢。近年来甲状旁腺激素显著的临床效果,为骨骼合成代谢药物在骨质疏松症的治疗上开辟了一个新时代。作者主要综述了甲状旁腺激素在骨代谢中的作用机制及相关调控基因的作用。

土槿皮乙酸B(PAB)通过活性氧诱导肿瘤细胞MCF-7凋亡,同时也通过调控有丝分裂原蛋白激酶(MAPK)家族蛋白来调控凋亡,但活性氧和MAPK的关系还不清楚,本研究探讨活性氧和MAPK家族蛋白的关系。4 μmol/L PAB在36 h诱导细胞死亡,活性氧清除剂抑制PAB的作用,并降低PAB的抑制率;同时,PAB促进JNK磷酸化,抑制ERK的磷酸化,此作用被活性氧清除剂抑制。

α-半乳糖苷酶催化α-半乳糖苷键的水解,可将饲料及豆制食品中的抗营养因子α-半乳糖苷类转化分解,改善其营养成分。α-半乳糖苷酶在底物浓度富集的情况下还具有转半乳糖基作用,这一特点可用于低聚糖的合成及环糊精的改造。此外,该酶在制药、增稠剂处理和造纸工业也有一定应用。现作者对α-半乳糖苷酶的研究和应用现状,以及α-半乳糖苷酶的研究方向和应用前景进行了总结和评价。

动物的胃肠道是机体和外部环境之间最大的屏障,由物理屏障、化学屏障、免疫屏障和微生物屏障组成。胃肠道屏障的完整性对动物的健康起着至关重要的作用,许多类型的应激都会影响胃肠道屏障的完整性。作者主要介绍了长时间运动、束缚应激和热应激对胃肠道屏障功能的影响及其应对措施。

抗菌肽可抵御细菌、病毒和真菌的入侵,在人类和家畜的先天性防御系统中具有重要的作用,是有望用于预防和治疗的药物,因此,抗菌肽被称为"新一代的抗生素"。抗菌肽是一个阳离子肽,其中的一个大家族就是防御素。防御素的结构中普通带有一个β-片状结构,其中包含3个分子内二硫键,可分为α-防御素、β-防御素和θ-防御素,其中β-防御素是最大的一个家族,在人类和家畜的组织内均有表达。结合已有的研究成果,作者主要对家畜体内防御素的表达、多态性及其作为健康和生产性能的遗传标记的潜在应用作一综述。

水貂胚胎滞育是影响水貂养殖经济效益的一个重要因素,国内外学者对此进行了大量研究。作者对水貂胚胎着床的影响因素、调控机制及克服胚胎滞育、缩短妊娠期的方法进行了综述,并提出了水貂胚胎滞育研究存在的问题及进一步研究方向,为今后研究水貂胚胎着床机理及克服胚胎滞育方法提供科研思路。

活性氧(reactive oxygen species, ROS)与胚胎发育缺陷密切相关,胚胎或其培养的环境都有可能产生ROS,一些外源因子能够使胚胎的ROS产量增加,引起胚胎发育阻滞,这严重地限制了与胚胎相关的研究。胚胎存在着多种抗氧化机制,在实际操作中应结合胚胎发育各时期内部ROS的来源及其抗氧化机制,提高细胞内部抗氧化效率;控制培养条件,完善培养体系,降低外在因素对ROS的诱发作用,更高效地生产体外发育胚胎。

本研究采用改良Thiaucourt's培养基培养绵羊肺炎支原体(Mycoplasma ovipleuneniae, MO)临床分离株SC01,收集不同时间的培养物,分别用颜色变化单位(CCU)法、浊度法及实时荧光定量PCR(Real-time PCR)法进行定量,并绘制MO生长动态曲线。CCU检测结果显示,接种后0～4 h为SC01的迟缓期,4～16 h为对数生长期,lg CCU/mL 最高达到10.7000±0.4700,16～20 h为稳定期,20 h以后进入衰亡期;浊度法定量检测结果显示,SC01培养物经过5倍浓缩后的D_{420 nm}随着培养时间延长逐渐上升,2 h时为0.0028±0.0002,4～12 h D_{420 nm}增加较缓慢,而12～24 h增加最快,24 h最高达到0.8609±0.0045,以后则趋于稳定;Real-time PCR法检测结果显示,SC01的拷贝数随着培养时间延长平稳上升,2 h时lg 拷贝/mL为4.5889±0.0048,在30 h时lg 拷贝/mL达到7.6165±0.1089。相关性分析结果表明,在迟缓期和对数生长期,CCU法与Real-time PCR法、CCU法与浊度法、Real-time PCR法与浊度法对MO的定量检测结果高度相关,相关系数分别为0.967、0.720和0.849,而Real-time PCR法和浊度法对MO的定量检测结果则在2～30 h内均高度相关,相关系数为0.912。经对检测所需时间及精确度等方面综合比较,本研究认为Real-time PCR法具有快速、准确及易标准化等特点,可以取代CCU法和浊度法用于MO的定量。

本研究旨在了解甘肃地区奶牛乳房炎金黄色葡萄球菌的耐药性和耐甲氧西林金黄色葡萄球菌的感染情况,为奶牛乳房炎的防制提供理论依据。采用KB纸片扩散法,检测17株金黄色葡萄球菌对8种不同抗菌药物的敏感性;再用琼脂稀释法检测了苯唑西林、万古霉素对金黄色葡萄球菌的最小抑菌浓度(MICs);头孢西丁纸片扩散法和PCR扩增特异性mecA耐药基因对所有受试菌株进行全面的耐甲氧西林金黄色葡萄球菌检测。结果表明,菌株对青霉素、磺胺异恶唑具有较强抗性,而对环丙沙星、头孢唑啉、万古霉素和苯唑西林全敏感;头孢西丁纸片扩散法未能检测出表型为MRSA的阳性菌株,而PCR方法却检测出8株mecA基因阳性菌株,且这些菌株的苯唑西林MIC均小于2 μg/mL。菌株的耐药情况较严重,对甲氧西林敏感而携带mecA基因的菌株高频存在于被调查地区的奶牛场中。

本研究对河北省冀东地区农贸市场和超市采集的生猪肉、生鸡蛋和生羊肉等分离得到的20株大肠杆菌进行大肠杆菌血清型鉴定;并检测不同血清型大肠杆菌的K88菌毛基因。采用常规方法进行大肠杆菌的O血清型鉴定,用PCR方法检测K88菌毛基因。分离鉴定的20株大肠杆菌有7种血清型,包括O38、O78、O88、O11、O107、O91、O9,其中O38、O78为优势血清型菌,均占分离菌株的25%(5/20)。在分离的动物性食品源大肠杆菌中有30%(6/20)的菌株K88菌毛基因扩增呈阳性。结果表明,O78、O38为冀东地区动物性食品源大肠杆菌常见血清型,30%(6/20)的菌株K88菌毛基因扩增阳性。

为深入了解猪源新型甲型流感病毒的流行情况,本研究对山东省9个地市40个猪场进行了猪源新型甲型流感病毒的感染情况调查。在养猪场采集有流感症状猪的血液样品(263份)和鼻咽拭子(235份),分别用HI试验来检测血清抗体滴度和荧光定量PCR技术检测鼻咽拭子中的流感病毒的含量。结果表明,血清阳性率为23.07%～63.33%,总阳性率为41.6%;荧光定量PCR检测鼻咽拭子阳性率为10.0%～64.28%,总阳性率为30.63%。这为了解山东省猪源新型甲型流感病毒的发生和分布,并采取相应的公共卫生措施提供了依据。

从山东某兔场病死兔中分离到一株致病菌,经厌氧培养、菌落形态学观察、培养特性、生化反应、小白鼠毒力试验、动物回归试验、分子生物学试验,结果表明,该病原菌为厌氧菌,对小白鼠和家兔具有强致病力,为A型产气荚膜梭菌,并命名为SD12株。

本试验旨在了解北京地区鱼源病原菌对氟喹诺酮类药物的耐药现状,提供氟喹诺酮类药物在防制鱼类疾病上合理规范使用的依据。从北京地区具有典型症状的病鱼脏器或病灶分离出16株病原菌,采用纸片扩散法检测病原菌对7种氟喹诺酮类药物的耐药表型,运用PCR法分析病原菌的喹诺酮类耐药基因gyrA、qnrA和qnrS的携带情况。结果表明,鱼源病原菌对氟喹诺酮的耐药基因阳性率显著高于耐药表型检出率,可能耐药基因检测比耐药表型检测更能推测病原菌的耐药现状。50%的病原菌至少耐受1种氟喹诺酮类药物,87.5%的病原菌至少携带1种喹诺酮耐药基因,显示北京地区鱼源病原菌对氟喹诺酮类药物已在基因水平呈现出严重的耐药,有必要严格控制此类药物在鱼类养殖上的应用。

犬细小病毒感染是由犬细小病毒引起的一种急性、热性、传染性疾病,临床上以出血性肠炎或心肌炎为主要特征。本研究对泰州某宠物门诊2010年1月－2011年3月期间接诊的260例犬细小病例进行了分析研究,旨在了解泰州地区犬细小病毒病发病率、死亡率与犬年龄、品种、免疫接种、季节等因素之间的关系,并总结防控犬细小病毒病最有效的方法。结果表明,犬细小病毒病发病率及死亡率与犬的年龄、品种、免疫接种、季节有很大的相关性,依此提出了防制对策,以期为防制犬细小病毒病提供参考。

为了筛选出高效的抗新城疫病毒中药,采用鸡胚接种试验,对8种经典清热解毒复方中药的抗新城疫病毒效果进行了测定。结果表明,荆防败毒散、银翘散、白头翁汤、双黄连口服液在体外对新城疫病毒具有较好的抑制作用。

本研究旨在比较3种检测猪瘟病毒方法的优缺点。应用反转录—复合套式聚合酶链式反应(RT-nPCR)、荧光抗体法、胶体金免疫层析试纸条3种方法,分别对 30份疑似猪瘟病料中的猪瘟病毒进行检测。试验结果显示,RT-nPCR方法检出阳性样品数为11份,荧光抗体法为13份,胶体金免疫层析试纸条为8份;3种方法检测全为阳性8份,全为阴性17份。试验结果表明,荧光抗体检测法所需时间较短,但需要经验比较丰富人员来判定结果,且存在假阳性结果, 敏感性比较差;胶体金免疫层析试纸条诊断方法最大的优点就是简便快速,且适合基层的应用,该方法的不足之处就是敏感性较低;RT-nPCR检测法具有快速、敏感等优点,但需一定仪器设备及成熟的技术方法。RT-nPCR还能区分待检样品为疫苗毒株(弱毒)还是野毒株感染(强毒),这是其他2种方法所不可比拟的。

传染性造血器官坏死病(infectious hematopoietic necrosis,IHN)是一种严重危害冷水鱼养殖的病毒病,被列为国家二类动物疫病。作者就国内外对传染性造血器官坏死病病毒(IHNV)的生物学特征、感染的临床症状及流行特点、病毒基因组及其结构蛋白特征、检测诊断技术及防控等方面的研究进行探讨与综述, 旨在为该病的预防与控制提供资料。

为了调查新疆某规模化养猪场不同生长期的猪源大肠杆菌对临床常用抗生素的耐药情况,从该猪场分别采集育肥猪、妊娠猪、保育猪和哺乳猪的粪样。试验采用微量肉汤稀释法,对从粪样中分离出的大肠杆菌进行最小抑菌浓度测定。结果显示,育肥猪、妊娠猪、保育猪和哺乳猪源大肠杆菌分离率分别为85.2%、83.0%、81.0%和83.0%。不同生长期的猪源大肠杆菌均对氨苄西林和阿莫西林/克拉维酸2种抗生素高度耐药,对头孢噻呋都较为敏感。哺乳猪和保育猪源大肠杆菌耐药情况严重,对多种抗生素高度耐药,以5耐为主;妊娠猪源大肠杆菌轻度耐药,以0耐为主;育肥猪源大肠杆菌以3耐为主。不同生长期的猪源大肠杆菌对临床常用抗菌药物的耐药程度不同。

不同种类的佐剂对同种抗原的免疫辅佐效力不同。为筛选绵羊肺炎支原体(Mycoplasma ovipneumoniae,MO)灭活疫苗的理想佐剂,本研究制备了4种不同佐剂的MO灭活疫苗,分别免疫成年家兔,用MO间接血凝试剂盒测定免疫后1～9周血清抗体效价。检测结果显示,4种疫苗在免疫后都能迅速产生抗体,其中用MO Buonavoglial's和ISA-760佐剂疫苗免疫家兔,产生抗体均于免疫后第3周达到高峰((5.67±0.70) log2,6.00 log2),到第9周时维持抗体高峰(6.00 log2,(6.00±1.00) log2);MO ISA-206和白油佐剂疫苗免疫抗体均于免疫后第4周达到高峰((4.33±0.57) log2,5.00 log2),至第9周下降约1个滴度。统计学分析结果显示,ISA-760、Buonavoglial's佐剂对MO的免疫增强效力显著优于ISA-206和白油佐剂(P<0.05),是MO灭活疫苗的理想候选佐剂,为高效MO灭活疫苗的研发提供了科学依据。

本研究旨在建立高效液相色谱法测定不同粒径淫羊藿中淫羊藿苷的溶出量。采用Shimadzu VP-ODS(150 mm×4.6 mm,5 μm)为色谱柱,以乙腈:水(25:75,V/V)为流动相,流速为1 mL/min,在270 nm波长下进样10 μL进行检测,结果显示淫羊藿苷在0.08～0.40 mg/mL范围内与峰面积呈良好的线性关系(r=0.9999),相对标准偏差(RSD)为1.62%,平均回收率为97.11%～101.08%,该含量测定方法简单、快速,所测定的淫羊藿苷溶出量随着淫羊藿粒径的变小而增加,但粉碎到100目以上时,淫羊藿苷的溶出量不再随粒径的减小而增加。

四环素类抗生素具有广谱抗菌能力,因而在畜牧养殖业中被大量使用,但如果不规范用药,就会在动物性食品中残留。传统检测方法检测程序繁琐,检测耗时耗力,设备昂贵,难以实现在线、实时、大批量的检验需求,免疫学检测方法则可弥补这些缺点。作者主要对四环素的残留、危害及免疫检测方法进行了综述。

本试验旨在应用庆大霉素(GM)诱导建立小鼠亚急性肾损伤的模型,初探维吾尔药刺糖对庆大霉素肾损伤的保护作用。将健康昆明系小鼠28只随机分为7组,分别为A组(125 mg/kg GM)、B组(100 mg/kg GM)、C组(80 mg/kg GM)、D组(125 mg/kg GM+刺糖)、E组(100 mg/kg GM+刺糖)、F组(80 mg/kg GM+刺糖)及G组(对照组),连续用药7 d,于第8天采血后处死,分别测定血液中非蛋白氮(NPN)含量及肾脏、肝脏、脾脏的重量。试验结果显示,D组和F组血液中非蛋白氮(NPN)含量和肾脏系数分别与A组及C组相比差异显著(P<0.05);E组血液中NPN含量与B组相比差异不显著(P>0.05),而E组与B组肾脏系数相比差异显著(P<0.05)。A、B、C 3组对小鼠的肾脏都有不同程度的损伤。试验结果表明,刺糖对125和80 mg/kg GM所致的肾损伤起到了明显的保护作用,但对100 mg/kg GM所致的肾损伤未起到明显的保护作用。

包衣技术在饲料添加剂中的应用前景广泛,在提高产品稳定性,掩盖不良气味,控制产品在消化道中的释放和提高生物利用度等方面发挥着重要作用。文章对薄膜包衣技术在畜牧业中的应用作一综述,并对其发展前景进行了展望。

刺五加多糖(Acathopanas senticosus polysaccharides,ASPS)是一种具有生物活性的多糖,不但具有较强的抗肿瘤作用及抗氧化活性,同时也是一种理想的免疫增强剂,并且有助于调节肠道微生态平衡,因此,ASPS作为一种新型的绿色饲料添加剂将在动物生产中具有良好的发展前景。作者着重对ASPS的生理功能及在动物生产上的作用等进行了综述。

本研究依据直接竞争ELISA原理建立了齐帕特罗一步法ELISA试剂盒。以齐帕特罗与载体蛋白偶联物作为免疫原免疫新西兰大白兔制得齐帕特罗多克隆抗体,棋盘包被法确定其最佳抗体包被浓度、酶标抗原工作浓度、包被条件、反应时间、底物显色时间等,并对试剂盒的各项技术指标进行确认。结果表明,成功组装了齐帕特罗一步法ELISA试剂盒,并建立了尿液、饲料、奶粉和奶汁,以及组织等样品的前处理方法,检测限均远低于1 μg/kg。该试剂盒线性检测范围为0.15～10 ng/mL,IC₅₀浮动范围0.43～0.79 ng/mL,样品板内、批内、批间的变异系数均小于15%,平均回收率在70%～110%之间,与其同类药物的交叉反应率均小于0.1%。提示,本试验研制的试剂盒重复性、特异性、稳定性等各项指标均符合技术要求,可用于动物源性食品中齐帕特罗药物残留的检测。

沙棘是一种新型的具有很高研究价值的多营养性植物类添加剂,含有的多种活性化学成分,对禽类的生产性能、免疫机能、抗氧化性能等方面都有很好的效果。作者主要综述了沙棘含有的化学成分、生物学活性及其对家禽生产性能的影响和发展前景。