通过运用细胞的分离培养技术、MTT法、ELISA检测和实时荧光定量PCR技术,比较不同剂量黄芪杂多糖(AHPS)注射组与空白对照组的仔猪血液内的T淋巴细胞和单核细胞的增殖活性、IL-6含量;骨髓中抗菌肽PR-39基因的表达水平,研究AHPS对仔猪内源性抗菌肽PR-39的表达调控作用。试验结果表明,AHPS对仔猪血液中的单核细胞和T淋巴细胞有促进作用;IL-6含量在同一时间内呈剂量依赖性增加,随着注射时间的延长逐渐增多;AHPS对PR-39的表达呈显著地上调作用且呈剂量依赖性。根据相关文献和本试验结果推测,黄芪杂多糖可能通过调控IL-6和PR-39的表达提高仔猪的免疫力。

将猪β-防御素-2基因(pBD-2)片段正确连接到pET32a载体上,从而得到稳定表达pBD-2的大肠杆菌表达株。根据已报道的pBD-2基因序列,按大肠杆菌密码子优化原则合成了5条pBD-2基因片段,通过重叠延伸PCR(SOE PCR)方法将这5段延伸成完整的pBD-2基因序列,将该基因定向插入原核表达质粒pET32a的多克隆位点上,成功地在大肠杆菌BL21(DE3)中表达出TrxA-pBD2融合蛋白。结果显示,表达的融合蛋白用肠激酶切掉TrxA后做琼脂孔穴扩散法检测,pBD-2对金黄色葡萄球菌有较好的抑菌活性,表明试验获得表达pBD-2的大肠杆菌菌株。

采用RT-PCR方法对2009—2011年山西省疑似猪繁殖与呼吸综合征(PRRS)阳性病料进行克隆和测序,获得5个ORF5基因片段,并对其基因序列和推导的氨基酸序列与国内外毒株进行了同源性分析。序列分析结果表明,5个ORF5基因序列之间核苷酸同源性为97.7%～98.5%,与欧洲型代表株LV、美洲型代表株VR-2332、2006—2007年国内分离的PRRSV变异株(JXA1、HuN、HUN4、HUB1)、2006年以前中国分离毒株(CH-1a、HB-1(sh)、HB-2(sh))和2个疫苗株(Resp PRRS MLV、MLV RespPRRS/Repro)核苷酸同源性分别为63.5%～64.0%、88.7%～89.2%、97.7%～99.3%、88.1%～96.7%和88.6%～89.1%;氨基酸同源性分别为56.1%～56.6%、87.8%～88.8%、96.6%～98.5%、85.9%～93.2%、86.8%～87.9%。结果表明山西地区的PRRSV流行毒株均属于美洲型,且毒株同源性很高,亲缘关系紧密。

为了研究B亚群禽白血病病毒(ALV-B)的半数细胞培养物感染量(TCID₅₀)与p27抗原的酶联免疫吸附试验(ELISA)的S/P值之间的相关性,本试验将ALV-B SDAU09C2 株接种鸡胚成纤维细胞(CEF细胞),换维持液后连续10 d取样,检测10 d的TCID₅₀值与p27抗原的S/P值之间的相关性;同时,将该毒株在DF-1细胞系上传代至20代,取其中的第1、5、10、15和20代分别进行TCID₅₀滴度的测定和p27抗原检测。结果表明,在CEF细胞上接种的ALV-B SDAU09C2株连续10 d的TCID₅₀值与p27抗原之间存在显著的正相关(r=0.94002;P<0.0001);在DF-1细胞系上传的不同代数之间也呈显著正相关(r=0.96449;P=0.0080)。由此可推测ALV-B的TCID₅₀与p27抗原呈显著正相关,可以用ELISA法测得的p27抗原的S/P值来估测病毒的TCID₅₀值。

构建新城疫病毒(Newcastle disease virus, NDV)核衣壳蛋白(nucleocapsid protein, NP)基因的原核表达载体,并将其在宿主菌E.coli BL21(DE3)感受态细胞中表达。以NDV La Sota株NP基因序列为模板,设计特异性引物,通过PCR扩增获得NP蛋白全长基因片段,定向插入原核表达载体pET-30a,构建重组质粒pET-NDV NP;将构建的重组质粒转化宿主菌E.coli BL21(DE3)感受态细胞,经IPTG诱导,表达出目的蛋白,并采用亲和层析的方法纯化表达蛋白;表达蛋白采用Western blotting方法检测其反应原性。结果显示,成功克隆了新城疫病毒NP基因全长,片段序列1470 bp;构建的pET-NDV NP载体经PCR、双酶切、测序鉴定均无误;转化表达宿主菌后经SDS-PAGE检测结果显示目的基因得到成功表达,且表达蛋白经Ni-NTA镍离子亲和层析法被成功纯化,蛋白质浓度为3 mg/mL;Western blotting检测结果显示表达蛋白具有良好的反应原性。试验结果表明,成功构建了含有新城疫病毒核衣壳蛋白基因的原核表达载体,成功表达、纯化得到了NDV NP蛋白。

本研究对367份猪内脏样本进行PCV2检测,对阳性样本进行2a/2b鉴别诊断,并采用ORF2测序方法对部分阳性样本进行测序。在发病猪群中PCV2b阳性率远高于健康猪群,而健康猪群中PCV2a的阳性率高于发病猪群,从而在临床表型方面论证了PCV2b毒力强于PCV2a。通过比较12株PCV2 ORF2推导氨基酸序列的关键氨基酸位点,9株PCV2b毒株在ORF2氨基酸76位为I,131位为T;而3株PCV2a毒株在ORF2氨基酸76位为L,131位为P,据比对结果可知,PCV2b毒株为强毒株,PCV2a毒株为弱毒株。研究结果表明,PCV2的2种亚型2a/2b无论是临床表型还是ORF2基因型,毒力表现都是有差异的,且PCV2b毒力要强于PCV2a。

采用PCR方法对编码金黄色葡萄球菌黏附素纤连结合蛋白A(FnbpA)的A区基因片段进行了特异性扩增,构建了真核表达载体pVAX-SFn,转染BHK-21细胞后经ELISA可检测出分泌表达的FnbpA蛋白。将真核重组表达质粒肌肉注射C57BL/6小鼠,免疫后检测小鼠血清抗体效价、淋巴细胞增殖及对试验小鼠攻毒试验。结果表明,该重组表达载体诱导细胞和体液免疫应答的强度均明显超过对照组。对小鼠的攻毒试验结果提示该重组DNA经肌肉注射途径接种可对小鼠产生免疫保护。本试验的结果对该DNA疫苗今后在实际中的应用奠定了良好的试验基础。

转座子(transposon)是存在于生物体基因组中的可移动的DNA片段,能够影响基因的结构和功能,广泛存在于生物演化过程中。转座子通过切离和粘贴机制介导外源基因的插入,是研究基因功能,制备转基因动物及基因治疗的优良载体。目前在哺乳动物中转座活性较高且研究最多的是"睡美人"转座子和piggyBac(PB)转座子。前者是目前临床前基因治疗研究中使用最为广泛的转座子,但存在剂量抑制效应和转座效率低等缺陷。而PB转座子可克服剂量抑制效应,且转座高效,转基因载量大,因此在哺乳动物中的应用越来越广泛。作者就PB转座子的作用机制、影响因素及在哺乳动物中的应用现状等进行报道。

哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(mammalian target of rapamycin,mTOR) 是进化上十分保守的丝氨酸/苏氨酸蛋白激酶,mTOR信号通路异常与肿瘤及神经退行性疾病密切相关,成为相关疾病治疗的靶点。除雷帕霉素及同系物外,姜黄素等抑制mTOR信号通路的中药单体物质不断被发现。作者对mTOR蛋白的结构、功能和mTOR信号通路及其抑制剂进行了综述。

为了建立快速检测鸭出血症病毒(DHDV)的血清学方法,本试验利用浓缩纯化的DHDV作为包被抗原,建立了检测DHDV血清抗体的间接ELISA方法,并对各种检测条件进行了优化。试验结果表明,抗原最佳稀释浓度为7.06 μg/孔;最佳包被条件为37 ℃ 1 h后,4 ℃包被过夜;待检血清的最佳稀释倍数为1:25。在优化条件下,阴阳性临界值判定标准为0.44。建立的ELISA方法对鸭瘟病毒、鸭病毒性肝炎病毒、雏番鸭细小病毒和番鸭呼肠孤病毒阳性血清均无交叉反应,结果表明该方法具有良好的特异性。批内和批间重复性试验的最大变异系数分别为0.0221、0.0032,显示该方法具有很好的稳定性,与血清中和试验的符合率为100%。该方法快速、简单、特异性好、重复性好,可用于大批量监测鸭群DHDV血清抗体感染情况。

microRNAs小分子在真核基因表达调控中有着广泛的作用,对信号传导通路、细胞凋亡和代谢、肌细胞生成、癌症、病毒感染等方面影响显著,受到了越来越多的关注。作者主要概述了microRNA的功能及近年来人们对microRNA在自然界生物中功能的研究新进展,以期为今后microRNAs的研究提供理论依据。

鹿茸是唯一可以周期性完全再生的哺乳动物器官,这种再生起源于骨膜干细胞。鹿茸再生伴随着皮肤、血管和神经的快速生成,而且多种多肽和生长因子参与其中,组成了一系列复杂而精密的信号调控通路。作者综述了鹿茸再生过程的组织学及分子信号通路研究现状,以信号转导通路为研究重点揭示鹿茸再生之谜,为更好地了解哺乳动物器官再生机制提供参考。

根椐GenBank中禽呼肠孤病毒(ARV)、禽白血病病毒(ALV)基因序列,设计2对引物,在建立鉴别各病毒单项RT-PCR技术的基础上,优化双重RT-PCR反应条件,建立2种病毒的双重RT-PCR。对同一样品中的ARV、ALV核酸模板进行双重RT-PCR扩增,结果可同时扩增ARV 485 bp、ALV 673 bp的特异性片段,而对其他5种禽病病原的PCR扩增结果均为阴性。敏感性试验结果表明,该双重RT-PCR技术能检出10 pg的ALV和10 pg的ARV模板。用31份临床病料对本研究双重RT-PCR技术和单项RT-PCR技术进行对比验证,结果显示,两者的总符合率为100%。结果表明建立的双重RT-PCR检测方法,具有特异、快速、准确的特点,可用于对这2种病毒的同时检测和鉴别诊断。

利用大型动物开放式呼吸测热装置等设备,研究活性干酵母和纤维素酶对草原红牛瘤胃挥发性脂肪酸浓度及甲烷排放的影响。试验选用8月龄、体况相近的草原红牛公牛4头,采用4×4拉丁方试验设计分为4组:Ⅰ组为对照组,饲喂基础日粮,Ⅱ组在基础日粮中添加200 mg/kg活性干酵母,Ⅲ组在基础日粮中添加190 mg/kg纤维素酶,Ⅳ组在基础日粮中添加200 mg/kg活性干酵母和190 mg/kg纤维素酶,试验分4期,每期37 d。结果表明,日粮中添加活性干酵母后,对瘤胃内丙酸浓度和总挥发性脂肪酸浓度影响显著(P<0.05),Ⅱ、Ⅳ组总挥发性脂肪酸浓度和丙酸浓度显著高于Ⅰ、Ⅲ组(P<0.05);活性干酵母显著抑制了草原红牛甲烷的产生(P<0.05),Ⅱ组甲烷排放量比Ⅰ组降低9.84%;纤维素酶对草原红牛瘤胃挥发性脂肪酸及甲烷排放的影响均不显著(P>0.05)。因此,日粮中添加活性干酵母能促进草原红牛瘤胃发酵,增加丙酸浓度,并显著降低甲烷排放,减少能量损失。

试验旨在研究不同营养水平日粮对海南黑山羊肥育羔羊生长性能和器官指数的影响。采用2×3析因设计,将24只3月龄、体重为(10.56±1.28)kg海南黑山羊随机分成6个处理组,每个处理组4只羊(公、母各半),每只羊为1个重复。6个不同营养水平精饲料处理组分别为:试验1组粗蛋白质(CP)水平为15%、消化能(DE)水平为11.72 MJ/kg,试验2组CP 15%、DE 12.55 MJ/kg,试验3组CP 15%、DE 13.39 MJ/kg,试验4组CP 17%、DE 11.72 MJ/kg,试验5组CP 17%、DE 12.55 MJ/kg,试验6组CP 17%、DE 13.39 MJ/kg,试验期90 d。结果表明,精饲料粗蛋白质水平对试验羊平均日增重影响显著(P<0.05),17% CP日粮组试验羊有较高的平均日增重(P<0.05)和较低的料重比(P<0.05);日粮精饲料蛋白质和能量水平对心脏、肝脏、脾脏、肺脏、肾脏、胃的脏器指数影响均不显著(P>0.05),随着精饲料消化能水平的增加,肠道的脏器指数逐渐减小(P<0.05)。结果提示,补饲不同营养水平精饲料对3月龄海南黑山羊育肥期羔羊平均日增重和料重比均有显著影响(P<0.05),对黑山羊肠道重量及肠道器官指数影响显著(P<0.05),而对其他内脏器官指数无显著影响(P>0.05)。

试验旨在研究不同性别和蛋白质水平对1～100日龄西农萨能羊羔羊生长发育的影响。选取同质性较好的新生公、母羔羊各80只,分别随机分到4个组中,每组40只羊,其中试验1、2组为母羊,试验3、4组为公羊,试验1、3组饲喂低蛋白质水平(17%)的颗粒料,试验2、4组饲喂高蛋白质水平(21%)的颗粒料。定期测量羔羊的体重和体尺指标并统计腹泻率,在试验结束当天采集血液进行生化指标分析,以确定适合西农萨能羊羔羊生长发育的颗粒饲料蛋白质水平。结果表明,在试验前中期,蛋白质水平对羔羊生长发育影响不显著(P>0.05),在此阶段可饲喂低蛋白质水平颗粒料以降低饲喂成本;而在试验中后期,高蛋白质水平可显著促进羔羊生长发育(P<0.05),在此阶段可饲喂高蛋白质水平颗粒料以保证羔羊良好的生长状况;体尺指标受日粮蛋白质水平影响较小,而高蛋白质水平日粮易引发羔羊腹泻,且在试验期内公羔羊较母羔羊表现出更快的生长发育趋势。因此,在羔羊培育中应控制高蛋白质水平饲料的饲喂量。

本试验研究葡糖糖氧化酶对快大黄羽肉鸡生产性能和养分代谢的影响,选择600只0日龄雏鸡分为A、B、C、D 4个处理,每个处理5个重复,每个重复30只,分别在基础日粮中添加0、250、350、380 g/t葡萄糖氧化酶制剂,测定35、70日龄的生产性能和45日龄的养分代谢率。结果表明,35日龄时,黄羽肉鸡的生产性能不受葡萄糖氧化酶制剂添加的影响;葡萄糖氧化酶制剂对36～70日龄黄羽肉鸡的日增重和料重比有显著影响(P<0.05),D组与B、C组在日增重和料重比上有显著影响(P<0.05);添加葡萄糖氧化酶制剂对45日龄黄羽肉鸡的干物质、有机物质、粗蛋白质、粗脂肪的消化代谢有显著影响(P<0.05)。因此,葡萄糖氧化酶对36～70日龄黄羽肉鸡的日增重、料重比和养分代谢率有显著影响,且在本试验条件下,添加380 g/t葡萄糖氧化酶制剂最适宜。

试验旨在研究槲皮素对蛋鸡蛋壳品质的影响。选择体重和产蛋率相近的240只29周龄蛋鸡,随机分4组,每组6个重复,每个重复10只。对照组饲喂基础日粮,试验1、2、3组分别在基础日粮中添加0.02%、0.04%、0.06%槲皮素。结果表明:①与对照组相比,产蛋高峰期试验2组的蛋壳相对重极显著提高(P<0.01);在产蛋后期各试验组的蛋壳厚度均显著提高(P<0.05),试验2、3组的蛋壳相对重分别提高0.27%(P<0.05)和0.48%(P<0.01),试验1、2组的鸡蛋破软壳率极显著降低(P<0.01)。②产蛋高峰期各试验组的蛋壳钙含量均显著升高(P<0.05);产蛋后期试验2、3组的蛋壳钙含量显著提高(P<0.05),试验3组蛋壳磷含量显著降低(P<0.05)。③产蛋高峰期和后期各试验组的血清钙含量均极显著提高(P<0.01);在产蛋高峰期试验2组的血清碱性磷酸酶(ALP)含量极显著提高(P<0.01);在产蛋后期试验1组的血清ALP含量极显著降低(P<0.01),试验2、3组的血清羟脯氨酸(Hyp)含量均显著降低(P<0.05)。因此,0.04%槲皮素可有效改善产蛋后期蛋壳品质。

试验采用分段式补料批次发酵技术对1株畜禽用凝结芽孢杆菌的发酵水平进行了研究,对数期补料促使菌体量大量积累,稳定期补料促进芽孢大量形成,从而达到高菌体量和高芽孢率的目的。试验结果表明,对数期补加淀粉量为总淀粉量的10%,豆粉和鱼粉(质量比为2:1)补加量为总豆粉和鱼粉量(质量比为2:1)的5%,补加方式为2次等量补加(间歇10～12 h),发酵水平由分批发酵6.80×10⁹ CFU/mL提高到8.30×10⁹ CFU/mL;稳定期最佳补料浓度为0.10 g/L碳酸钙、0.156 g/L磷酸二氢钠、0.30 g/L蛋氨酸,最佳补料方式为1次性补加,经稳定期补料优化,芽孢率由分批发酵的75.78%提高到85.63%。因此,采用分段式补料批次发酵技术能够进一步提升发酵液的菌体数和芽孢率。

本试验研究芽孢杆菌、乳酸杆菌对断奶仔猪肠道微生物区系、肠道pH和挥发性盐基氮(VBN)的影响。试验选取28日龄左右的"杜×长×大三元"杂交仔猪24头,随机分为3组,每组4个重复,每个重复2头,进行为期30 d的饲养试验,试验结束后收集盲肠和结肠内容物用于微生物、pH和VBN的测定。结果表明,芽孢杆菌和乳酸杆菌均使得盲肠与结肠中乳酸杆菌相对数量都升高,降低盲肠内容物pH,结肠内容物pH升高,并降低了肠道内VBN含量。因此,芽孢杆菌和乳酸杆菌均能改善肠道微生物区系,降低肠道蛋白质的腐败变质。

中草药添加剂由于具有无毒、副作用小等优点,其开发与应用逐渐受到广大畜牧业生产者的重视。作者就中草药添加剂对奶牛生产性能和免疫机能的影响进行综述,以期引起人们在生产过程中对中草药使用的重视。

试验旨在研究肉鸡日粮中添加枯草芽孢杆菌B7对其生长性能及免疫功能的影响。将200只1日龄健康爱拔益加肉雏鸡随机分成5组,每组4个重复,每个重复10只。对照组饲喂基础日粮,试验Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ组分别在基础日粮中添加2×10⁵、5×10⁵、8×10⁵和1×10⁶ CFU/g枯草芽孢杆菌B7。试验期42 d。结果表明:①在整个试验阶段,除29～35日龄外,试验Ⅱ组肉鸡的日增重均高于对照组,料重比均低于对照组;36～42日龄时,与对照组相比,试验Ⅱ组肉鸡的日增重显著提高了10.25%(P<0.05),料重比显著降低了14.83%(P<0.05)。②28日龄时,试验Ⅱ组脾脏指数高于对照组31.96%,差异显著(P<0.05);除14和28日龄外,试验Ⅱ组法氏囊指数均显著高于对照组(P<0.05);试验Ⅱ组新城疫抗体效价处于较高水平,28和35日龄时,试验Ⅱ组新城疫抗体效价分别高于对照组16.04%和18.09%,差异显著(P<0.05);21、35和42日龄时,试验Ⅱ组血清中IgG含量分别高于对照组81.94%、46.67%和15.63%,差异显著(P<0.05)。由此可知,添加5×10⁵ CFU/g枯草芽孢杆菌B7能够提高肉鸡的生长性能,增强肉鸡的免疫功能,综合比较,试验Ⅱ组的5×10⁵ CFU/g为枯草芽孢杆菌B7的最佳添加量。

在养殖过程中,热应激会影响猪的生理机能,改变猪肉的生化特性,使猪肉品质下降。因此,研究热应激影响猪肉品质变化的规律,对于指导实际生产具有十分重要的意义。作者综述了热应激对猪肉品质的影响,并从机体代谢改变的角度分析了肉质变化的机制,为进一步研究热应激与肉品质的关系提供新的思路。

本试验旨在研究转植酸酶基因玉米对蛋种鸡产蛋性能及血清生化指标的影响。试验采用单因子完全随机设计,将144只27周龄健康、产蛋率相近的海兰(灰)蛋用种鸡分成2个处理组,每个处理组8个重复,每个重复9只鸡。对照组饲喂含非转植酸酶基因亲本玉米的玉米—豆粕型日粮,试验组饲喂含转植酸酶基因玉米的玉米—豆粕型日粮,2个处理组蛋种鸡日粮中可利用磷及其他养分含量均相等或相近。试验共进行19周,预试期2周,正试期17周。结果表明,试验组与对照组产蛋性能各项指标均没有显著差异(P>0.05);在血清生化指标中,除试验组血清碱性磷酸酶含量极显著高于对照组外(P<0.01),其他各项指标均没有显著差异(P>0.05)。因此,在本试验期内,转植酸酶基因玉米对蛋种鸡产蛋性能和血清生化指标均未产生不良影响。

防御素是广泛分布于动植物界的一类富含半胱氨酸的内源性阳离子抗菌肽,它在先天性免疫系统宿主防御机制中起着重要的作用。笔者从哺乳动物β-防御素的组成分布入手,对β-防御素的分子结构与染色体定位、基因表达调控、生物学作用及应用前景等最新研究作一全面综述。

为探讨日粮蛋白质水平对乌金猪肝脏组织脂类代谢相关基因表达的影响,试验选取体重约15 kg的乌金猪54头,随机分为3组,每组18头,为低、中和高蛋白质组,其在15～30、30～60及60～100 kg生长阶段的蛋白质水平分别为14%、12%、10%,16%、14%、12%和18%、16%、14%。猪在体重为30、60和100 kg时屠宰,取其肝脏组织,Real-time PCR定量检测脂类代谢相关基因的表达水平。结果显示,在30、60和100 kg时,乌金猪肝脏组织中ACC、FAS、SREBP-1C基因的表达水平均随着蛋白质水平的升高而降低;CPT-Ⅰ和PPARα基因的表达水平则随着蛋白质水平的升高而升高。由此表明,日粮高蛋白质水平显著降低肝脏脂肪酸合成代谢基因(ACC、FAS和SREBP-1C)的表达(P<0.05),提高脂肪酸分解代谢基因(CPT-Ⅰ和PPARα)的表达水平(P<0.05);脂肪酸合成减少,且被氧化的量增加,两者共同作用导致用于合成甘油三酯(TG)的脂肪酸含量降低,从而减少了从肝脏组织被运输到各个组织的TG含量,使机体沉积TG的能力降低。

一些选择性益生菌株具有抑制肠道疾病炎性因子产生、稳定菌群、改善肠道黏膜免疫系统的功能。结合炎症性肠炎(inflammatory bowel disease,IBD),介绍某些选择性益生菌(probiotics)通过调节炎性细胞因子1β-白介素、γ-干扰素的表达,改善肠道黏膜炎症,控制疾病的进一步恶化。作者将从肠道黏膜的重要性,益生菌与Toll样受体、核转录因子(NF-κB)的关系,以及益生菌对肠道黏膜免疫影响等方面进行论述,进而探讨其作用机制,为进一步研究益生菌调节宿主肠道黏膜免疫提供新的思路。

叉头框转录因子O亚族1(forkhead box transcription factor O1,FoxO1)在细胞增殖、分化过程中发挥着重要的作用。采用实时荧光定量PCR技术,对不同月龄民猪和长白猪肾周脂肪中FoxO1、过氧化物酶体增殖物激活受体(peroxisome proliferator-activated receptorγ,PPARγ)和CAAT区/增强子结合蛋白α(CAAT/enhancer binding protein α,C/EBPα)基因mRNA表达量进行检测,探讨FoxO1在猪肾周脂肪代谢过程中的作用。结果显示,2品种猪肾周脂肪2.5月龄FoxO1基因mRNA表达量极显著高于1、6、8月龄(P<0.01);分析FoxO1与PPARγ、C/EBPα基因的表达关系,结果发现在2.5月龄后,FoxO1 mRNA的表达与PPARγ、C/EBPα相反,说明FoxO1可能通过抑制这2个基因的表达来减少脂肪沉积。

本试验以贵州省3大地方山羊品种贵州白山羊、贵州黑山羊、黔北麻羊和2个省外地方品种关中奶山羊和内蒙古绒山羊为研究对象,采用DNA池结合PCR直接测序法对山羊前列腺素内过氧化物合酶2(prostaglandin-endoperoxide synthase 2,PTGS2)基因进行单核苷酸多态性检测。结果表明,在5个山羊品种中共检测到6个SNPs位点:A96G、C20T、A239G、T192C、T164A和G91C,其中,A96G和T164A分别位于外显子7和外显子8中,且均为同义突变,其余4个变异位点位于内含子中。生物信息学分析显示,外显子7和8中的2个SNPs位点均导致了mRNA二级结构的改变。

本试验根据已知相近物种动物基因序列设计引物,PCR扩增获得中国地鼠线粒体D-loop基因序列。采用DNAStar软件计算序列碱基组成,分析遗传变异情况。用MEGA 4.1软件计算物种间遗传距离,采用邻接法(NJ)、最小进化法(ME)构建系统进化树。结果表明,中国地鼠线粒体D-loop区序列全长为867 bp,碱基A、T、C、G的含量分别为29.53%、31.49%、26.07%、12.92%,中国地鼠与啮齿类动物有相似的碱基组成。系统进化树结果显示,中国地鼠与金黄地鼠亲缘关系较近,与大鼠的关系最远,与传统的分类相一致。所获得的中国地鼠D-loop基因可作为种间遗传变异研究的标记,研究结果为进一步研究中国地鼠的群体遗传结构奠定了基础。

本研究采用PCR-RFLP技术检测边鸡类胰岛素生长因子结合蛋白-3(insulin-like growth factor binding proteins-3,IGFBP-3)基因外显子2 MspⅠ位点的单核苷酸多态性,并与边鸡的繁殖性状进行相关分析。结果表明,在边鸡IGFBP-3基因的1087 bp处检测到1个C→T的突变,显示3种基因型(CC、CT和TT),C等位基因为优势等位基因。最小二乘分析结果表明,CT基因型的开产体重显著高于CC基因型(P<0.05)。不同基因型对其余4个繁殖性状(开产日龄、开产蛋重、300日龄产蛋数及300日龄蛋重)均无显著影响(P>0.05)。

马精液中存在相对稳定的氧自由基(ROS)产生和清除系统,当精液经离心去除精清后,稳定的系统遭到破坏。马精液冷冻和解冻过程不能有效的清除ROS,将导致解冻后精子各项生理功能的下降,直接影响冻精的质量,而添加外源性的抗氧化剂则可以重新使精液的ROS产生和清除达到平衡。作者综述了马精液中精子细胞、白细胞ROS的产生系统和精液GSH-PX、CAT、SOD、VA、VE等对ROS的清除系统,旨在对人们研究马精液冷冻保存时精子中ROS的损伤机理研究提供一定的帮助。

为研究Myf6基因对鸭肌肉发育的影响,本试验利用实时荧光定量PCR绝对定量技术检测Myf6基因在高邮鸭和金定鸭胚胎期第13、17、21、25、27天及出生后7日龄胸肌、腿肌发育过程中的表达量。结果显示,Myf6基因在2个品种的胸肌和腿肌中均有表达,在不同品种同一肌肉组织中的表达变化规律一致,而在不同肌肉组织中的表达模式不同,其中在胸肌组织中21胚龄时表达量最高,随后表达量下降,维持相对较高表达水平;在腿肌组织中13胚龄时表达量较高,17胚龄时达到最高,随后表达量有所降低,并在21胚龄后急速下降至极低水平,但其表达在胚胎期后期(27胚龄)及初生期(7日龄)又有缓慢上升趋势。上述结果表明,Myf6基因参与了胸、腿肌组织的发育,在胸、腿肌中表达模式不同,推测Myf6基因在胸、腿肌中的调控存在差异,可能与其胸、腿肌不同肌纤维的发育与分化有关。

副猪嗜血杆菌(Haemophilus parasuis,Hps)的血清型及基因型具有复杂多样性。本研究用间接血凝试验对某一猪场分离的Hps进行血清分型鉴定,并对部分菌株的外膜蛋白P5基因进行克隆测序和进化发育分析。试验结果显示,在21头病死猪不同部位共分离了42株Hps,其中 Hps血清5型17株(40.7%)、血清14型12株(28.5%)、血清4型1株(2.3%)和未定型12株(28.5%)。本试验中有5头猪同时感染2种不同血清型的Hps。21株Hps临床分离株分属5个不同基因序列型(STA～STE),其中STA有12株(12/21)为优势基因型;相同血清型的Hps分离株具有不同的STs型,来自同一头猪的Hps血清型和STs型也不相同。以上结果表明,同一猪群感染的Hps血清型和基因型存在明显的多样性,同一头猪感染Hps的血清型和基因型也存在多样性。本研究为进一步揭示猪群感染Hps的复杂性,研究该病的感染与流行机制提供了有价值的参考。

本研究以不同发育阶段的雄性雏鸵鸟(Struthio camelus)为试验动物,在其饮水中添加不同剂量的硼,采用放射免疫分析法(radioimmunoassay,RIA)检测不同硼水平和不同发育阶段雏鸵鸟血清中卵泡刺激素(follicle stimulating hormone,FSH)、黄体生成素(luteinizing hormone,LH)、睾酮(testosterone,T)、雌二醇(estradiol,E₂)的含量,旨在探明硼对雏鸵鸟血清性激素水平的影响。研究结果表明,雄性雏鸵鸟血清FSH和E₂含量均随硼添加量的增加而增加;LH和T的含量随硼添加量的变化表现出一定的相关性,且均表现为低硼水平其含量升高,中硼和高硼水平其含量降低;LH和T的含量随年龄增大而增加,E₂逐渐减小,而FSH则先升高后下降。该结果提示,硼对鸵鸟内分泌与生殖具有一定的调节作用,且年龄对雏鸵鸟血清性激素水平有一定影响。

本研究选取4头青海牦牛作为研究对象,用2对引物扩增青海牦牛的线粒体细胞色素c氧化酶第1亚基(cox1)基因部分序列(pcox1)和烟酰胺腺嘌呤二核苷酸(NADH)脱氢酶亚单位1基因(nad1)部分序列(pnad1),并用pcox1和pnad1序列重构青海牦牛与其他牛的进化关系。对测定获得序列应用ClustalX 1.81程序进行比对,然后用Phylip 3.67程序MP法,并用Puzzle 5.2程序构建最大似然树。结果表明,所获得的4头牦牛样品pcox1和pnad1基因序列分别为823和837 bp,种系发育分析表明,青海牦牛样品与GenBank已知的牦牛位于同一分支,与其他牛所属分支相隔较远。

从珠三角某鸽场病死鸽中无菌操作采取心血、肝脏、脑、脾脏,接种于麦氏培养基和木糖—赖氨酸—脱氧胆酸琼脂培养基,经细菌纯化、镜检、生化试验、PCR检测和药敏试验,结果显示30只病鸽有8只分离到沙门氏菌,阳性率为26.7%;10只分离到大肠杆菌,阳性率为33.3%;其中6只同时分离到沙门氏菌和大肠杆菌,混合感染率为20.0%。经病毒分离培养、PCR检测,结果显示从6个混合样品中分离到5株副黏病毒,分离率为83.3%。结果表明,该鸽场鸽群发生了副黏病毒、沙门氏菌、大肠杆菌混合感染。本试验对珠三角鸽场近年较常发生的、以乳鸽较严重发病死亡的典型疫情作了较明确的诊断。

从4个动物园的非人灵长类动物中采集了214份粪便样品,经过细菌分离培养、染色镜检和生化试验等分离鉴定出88株克雷伯氏菌,分离率为41.12%。按照美国临床实验室标准化委员会(CLSI)的判定标准,对分离到的88株克雷伯氏菌进行了22种抗生素药物的药敏试验,结果表明,88株均表现出不同的程度的耐药性,其中,耐药程度最高的是羧苄青霉素(耐药率为95.45%);敏感度最高的是阿米卡星(敏感率为77.27%)。88株克雷伯氏菌分离株均有较为严重的多重耐药性,耐8～15种抗菌药物的菌株最多,有64株,占分离菌株的72.73%;耐10种以上抗菌药物的菌株有63株,占分离菌株的71.59%。从不同动物园分离的克雷伯氏菌对22种抗生素的耐药情况来看,在所调查的4个动物园中,重庆某动物园(CQ)和北京某动物园(BJ)的克雷伯氏菌分离株间耐药率无差异(P>0.05);上海某野生动物园(SHW)和上海某动物园(SHZ)的克雷伯氏菌分离株间耐药率无差异(P>0.05);而北京某动物园(BJ)与上海某野生动物园(SHW)和上海某动物园(SHZ)的克雷伯氏菌分离株相比,其耐药率差异均极显著(P<0.01);重庆某动物园(CQ)与上海某野生动物园(SHW)和上海某动物园(SHZ)的克雷伯氏菌分离株相比,其耐药率差异均极显著(P<0.01)。

病理性腹泻是人和动物常见疾病症状之一,长期以来控制腹泻是医学上一个重点。基于肠病原菌及其产物诱导肠道分泌的机理,许多学者开展了相应的调控研究。肠细胞仍是直接研究和开发新药的主要焦点,随着新靶位ENS和促分泌素等发现,为人们在腹泻药物开发方面提供了更广阔的空间

禽大肠杆菌病是由不同血清型禽致病性大肠杆菌(avian pathogenic Escherichia.coli,APEC)引起的严重危害世界养禽业健康发展的重要细菌性传染病之一。作者对禽致病性大肠杆菌的最新亚群分类、病型、生境、毒力因子和致病机理作了综述,同时为有效防控禽大肠杆菌病的未来趋势进行了展望。

牛病毒性腹泻病毒(bovine viral diarrhea virus,BVDV)和猪瘟病毒(classical swine fever virus,CSFV)同属黄病毒科瘟病毒属,猪瘟疫苗中污染BVDV可引起免疫失败。但由于两者在病毒粒子结构、基因组结构和抗原特性等方面均很接近,在血清学上存在交叉反应,因此难以检测猪瘟疫苗中污染的BVDV。文章对BVDV在猪瘟疫苗中的污染情况和检测方法进行了论述,旨在为猪瘟疫苗污染BVDV的检测提供理论基础。

为探索2011年年底在广东阳江地区某肉鸭场出现的病鸭和死鸭的发病原因,对其中2个发病鸭场的病死鸭进行了解剖,对病变组织的样品应用RT-PCR的方法进行了病原鉴定。经剖检,发现鸭心脏表面形成小结节,伴有少量心包积液;肝脏和胆囊肿大;脾脏有花斑;胰腺和直肠有出血点。利用病料研磨上清和病料接种后的鸡胚尿囊液进行RT-PCR检测,结果显示鸭黄病毒阳性。序列分析显示,该病毒的核苷酸序列与坦布苏病毒Fengxian株的相似性为99%。试验结果表明,该病毒为黄病毒,是引起此次鸭场发病的病原。

某猪群暴发类似猪链球菌病,为确诊和防制该病,通过将病料接种到血液营养琼脂培养基和TSA培养基分离细菌,对分离菌株进行生化鉴定和PCR鉴定,并接种小白鼠进行动物试验和药敏试验。结果表明,分离的细菌为猪链球菌7型,对小白鼠具有致病性,且对恩诺沙星和头孢唑啉高度敏感。该结果对临床防制猪链球菌病具有参考意义。

鸭病毒性肝炎是一种传播迅速的病毒性、高度致死性疾病,是危害养鸭业最为严重的疾病之一。该病主要发生在3周龄以内的雏鸭,致死率高达100%。文章对鸭病毒性肝炎诊断技术研究进展情况进行了综述,并对鸭病毒性肝炎诊断技术的研究前景进行了展望。

2011年11月,山东某肉鸡场发生以肉鸡眼睑及眶下窦周围明显肿胀为主要特征的传染性疾病。从采集的发病鸡眶下窦中分离到1株细菌,根据发病鸡群的临床症状、细菌的分离培养、形态观察、过氧化氢酶试验、革兰氏染色、动物回归试验、免疫攻毒试验和PCR等方法初步鉴定为副鸡嗜血杆菌(Hpg)。此外通过分离菌株的水平传播试验结果表明,造成该鸡场Hpg的水平传播和鸡传染性鼻炎的反复发作与饲养密度有很大的关系。最后将分离菌株送匈牙利诗华研发中心进行分型鉴定,确定为A型副鸡嗜血杆菌。根据分离地点将分离菌株命名为A型副鸡嗜血杆菌(山东株)。另外通过与GenBank已发表的Hpg基因序列进行同源性比对分析,结果显示,该基因序列与参考株的基因核苷酸序列同源性达99.0%。

猪繁殖与呼吸综合征(porcine reproductive and respiratory syndrome,PRRS)是由猪繁殖与呼吸综合征病毒(porcine reproductive and respiratory syndrome virus,PRRSV)引起的一种急性、高度接触性传染病,临床症状主要表现为母猪发热、厌食、流产或死胎、木乃伊胎,仔猪常出现呼吸系统症状和高死亡率。文章从猪繁殖与呼吸综合征中医发病机理、中药抗病毒的机制、单味中药和复方制剂对猪繁殖与呼吸综合征的防制作一总结。

为了给兽医临床诊断兔瘟病提供病理学快速诊断依据,对一起非典型兔瘟(慢性兔瘟)病例的发病情况和解剖病理变化进行了详细观察和拍照,并通过对流行病学调查、临床症状、剖检病理变化、实验室微生物学检查和血清学检测等综合分析,确诊为兔瘟。观察到兔瘟病主要病理变化表现为心脏充血、心耳充血明显,心包积液,心内外膜有散在针尖大小出血点;喉头和气管黏膜充血和出血,气管内有泡沫状液体;肺脏水肿、出血;胸腺严重水肿、出血,有的肿大3～5倍,外观大理石样;肝脏稍肿大、土黄色、质地脆弱;脾脏肿大,呈紫黑色,边缘有锯齿状坏死;胃壁变薄,黏膜易脱落;结肠充气鼓胀,浆膜有出血点或出血斑;肠系膜淋巴结肿大、点状出血;肾脏水肿、土黄色、有出血点或出血斑;膀胱积尿、有出血点;母兔子宫水肿、出血等。本试验为兽医临床快速诊断兔瘟病提供参考资料。

为了解广东地区犬流感(CI)流行情况,以期为犬流感的预防提供参考依据,本研究采用ELSIA方法及血凝抑制试验(HI),对广东省内6地市的1440份犬血清样品进行抗体检测。结果显示,1440份犬血清中犬流感抗体平均阳性率为7.92%(ELISA)和6.25%(HI)。其中广州、深圳和惠州地区的犬流感抗体阳性率较高。1～3岁犬的犬流感抗体阳性率高于其他年龄段犬,雄性犬犬流感抗体阳性率高于雌性。结果表明,H3N2亚型犬流感病毒在广东局部地区流行。鉴于当前在部分地区CIV阳性率较高,结合CIV在犬群中迅速传播的流行特点,要避免CIV暴发流行及对人类的健康造成威胁,对于CIV的防制应结合当地实际情况,制定切实有效的防制措施。

为了解近年来中国猪病毒性腹泻的发生现状,于2011年4月至2012年4月利用多重RT-PCR方法对采集于13个省市的猪腹泻样品和临床健康的样品进行了检测,结果显示,腹泻猪群样品中TGEV阳性率为2.65%,PEDV阳性率为24.49%,ARV阳性率为3.20%;在肠道组织样品中,TGEV的阳性率为3.11%,PEDV为14.83%,ARV为1.67%;粪便样品中,TGEV的阳性率为2.80%,PEDV为28.42%,ARV为4.86%;母猪(所产仔猪腹泻)乳汁中,TGEV阳性率为1.08%,PEDV为31.89%,ARV为0.54%。健康猪群样品中,保育与育肥阶段猪中PEDV阳性率为2.13%,ARV阳性率为1.42%;哺乳仔猪中ARV阳性率为12.86%。由此可知,目前中国猪病毒性腹泻以PED为主要病因,PEDV和TGEV在幼龄猪群中存在隐性感染现象,且3种病毒性腹泻均可通过母乳传播病毒。

应用B超诊断法对黑龙江省几个奶牛场的繁殖障碍奶牛进行卵巢和子宫检查,获得了奶牛卵巢和子宫疾病的超声影像图,并分析了引起奶牛不孕的卵巢和子宫疾病的超声影像图特点,以期为B超诊断奶牛繁殖障碍疾病提供参考。

新城疫(Newcastle disease,ND)是危害禽类的一种接触性致死性传染病,OIE将其列为A类疫病。各养殖户对该病高度重视,主要采用全程免疫接种的方式加以预防,使急性新城疫得到有效控制,但随之而来的是,非典型新城疫发病率有所提高。吉林市某公园观赏动物丹顶鹤发生疫情,经临床剖检及实验室诊断确诊为非典型新城疫(CND)与大肠杆菌(E.col)混合感染,经高免卵黄抗体特异性疗法配合抗菌治疗及有效的消毒防疫措施,使疫情得到控制。

试验旨在研究日粮中添加复合菌培养物对奶牛产奶量、乳品质和体细胞数的影响。选择30头荷斯坦奶牛,分为对照组和试验组,对照组饲喂基础日粮,试验组在基础日粮中添加复合菌培养物400 g/(头·d),试验期为37 d。测定指标包括产奶量、乳脂率、乳蛋白率及体细胞数。结果表明,试验组奶牛产奶量比对照组增加6.84%(P>0.05);乳汁体细胞数下降率比对照组提高29.78%(P<0.05);两组奶牛乳脂、乳蛋白之间无明显差异(P>0.05)。本试验结果表明,复合菌培养物在降低体细胞数和改善奶牛产奶性能方面具有良好的效果。

本试验对盐酸克伦特罗在休药期肉羊眼睛、心脏、肾脏、肺脏、脾脏等组织中的残留规律进行了研究。选择24头体重为(30±5)kg健康肉羊进行试验,在饲料中添加50 μg/kg盐酸克伦特罗,连续饲喂35 d后休药,通过液相色谱—质谱联用/质谱检测休药期肉羊组织中克伦特罗含量,研究其残留量消除规律。试验结果表明,肉羊眼睛中有高浓度的盐酸克伦特罗残留且其在肝脏中消除较慢;停药第14天眼睛中盐酸克伦特罗的浓度仍为42.42～63.48 μg/kg,脾脏中盐酸克伦特罗消除速度是最快的;停药3 d时,检测不到盐酸克伦特罗的残留量(低于检出限0.07 μg/kg),故眼睛可用作检测盐酸克伦特罗在肉羊生产上非法使用的靶标。

乳酸菌作为人和动物肠道的正常菌群,具有诸多的益生功能,广泛应用于食品、医药和饲料等行业,是一类重要的微生物。它能维持动物肠道菌群平衡,促进动物对营养物质的吸收,提高动物机体的免疫力等。作者主要对乳酸菌的分类、培养及其保存、乳酸菌主要生理功能及其在动物生产中的应用等方面进行了综述。

反刍动物瘤胃和粪便中产生的甲烷是造成大气温室效应的主要气体之一。但是,粪便中甲烷排放持续期很长,排放数量难以检测,故受到研究者的忽视。作者介绍了反刍动物粪便中甲烷排放量的测定技术,探讨了其排放量的影响因素,指出有必要同时研究瘤胃和粪便中甲烷生成的调控措施。

为了探索犬前列腺摘除术的不同通路及其关键技术,选择3～5月龄、3～5 kg体重的4只杂交犬,分成1、2组,分别采用翻开耻骨片和经腹底部正中切口牵拉膀胱以暴露前列腺的手术通路,对前列腺进行完整摘除后作尿道断端吻合,术后观察犬的精神、食欲、饮欲、排便、排尿等情况,并于术后第3周进行剖检,观察膀胱及尿道断端的愈合情况。结果显示,采用上述2种手术通路进行前列腺摘除后,试验犬的精神、食欲、饮欲、排便、排尿等一切正常,膀胱有少量出血点,尿道吻合处愈合良好。试验结果表明,采用6-0单丝尼龙线和结节缝合法是吻合尿道断端的可靠方法,而使用盆腔脂肪组织覆盖尿道吻合处能够有效地预防吻合处漏尿且与周围组织黏连,是保证吻合处良好愈合的有利因素。

生猪产业是中国畜牧业的主导产业,是城乡居民"菜篮子"产品的重要组成部分。随着生猪产业的持续发展,养殖所产生的粪便污染对环境的影响也日益突出,逐渐成为重要的农业面源污染之一。作者简要论述了生猪养殖对环境的影响,分析了当前生猪养殖的几种重要清粪工艺,对规模化猪场清粪工艺进行了比选分析,并提出了规模化猪场清粪工艺选择的建议。