为了解广西地区猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)的变异情况及分子遗传特征,采用RT-PCR分段扩增2010年PRRSV广西地方分离株GX1001株和GX1002株基因片段,经克隆、测序、拼接,获得2个分离株的全基因序列。结果显示,不包括Poly(A)尾,GX1001株、GX1002株基因组全长分别为15329和15318 bp。同源性分析结果表明,2个分离株间全基因组核苷酸序列同源性为99.3%,与国内外北美洲型代表毒株间的全基因组核苷酸序列同源性为84.9%~99.5%,与欧洲型代表毒株间的同源性为61.5%~61.9%。序列分析结果表明,2个分离株的NSP2编码区均存在第481和533-561位,共30个氨基酸的不连续缺失,具有PRRSV高致病性变异毒株(HP-PRRSV)的遗传特征,但分别在不同区域出现新的突变、缺失及插入等变异现象。遗传进化分析结果表明,所有美洲型毒株可分为4个亚群,GX1001株和GX1002株均属于以高致病性JXA1株为代表的第4亚群。上述结果表明,本研究获得的PRRSV广西地方分离株GX1001株和GX1002株均属于HP-PRRSV,但其基因组在不同区域发生了新的遗传变异现象。

本试验旨在探讨牛磺胆酸(taurocholate acid,TCA)对小鼠腹腔巨噬细胞刺激性G蛋白α(Gsα)基因表达的影响,为阐明TCA对小鼠腹腔巨噬细胞的作用机制提供线索。采用荧光定量PCR技术检测TCA对小鼠腹腔巨噬细胞Gsα mRNA表达的影响。试验结果显示,高(15 μg/mL)、中(1.5 μg/mL)和低剂量(0.15 μg/mL)的TCA作用组小鼠腹腔巨噬细胞Gsα mRNA的表达均显著高于对照组和LPS刺激组(P＜0.05)。结果表明,TCA能显著促进小鼠腹腔巨噬细胞Gsα mRNA的表达。

为研究弓形虫棒状体蛋白17(ROP17)基因的遗传变异,本研究以弓形虫RH株、PRU株和TgC7株为研究对象,首次PCR扩增了其ROP17基因部分序列,将PCR产物纯化后克隆到pMD18-T并测序。将测定的序列与网上下载的弓形虫VEG株、GT1株和ME49株相应序列进行比对,然后用Mega 5.0程序的NJ法和Puzzle 5.2程序的ML法构建系统发育树。结果表明,3株弓形虫分离株的ROP17基因部分序列长度均为1375 bp,A+T含量在49.53%~50.04%之间,3个虫株相应序列的变异碱基数皆小于20个,其变异率为2.3%,氨基酸序列变异率在0~6.11%之间。系统发育结果显示, ROP17基因部分序列能区分弓形虫基因Ⅰ型和Ⅱ型的虫株。本研究结果为进一步研究弓形虫ROP17基因的变异及研制弓形虫ROP17基因的亚单位疫苗提供了理论依据。

本试验旨在利用大肠杆菌BL21(DE3)表达MxA融合蛋白pET32a(+)-MxA,制备兔抗人MxA抗血清。采用PCR技术获得MxA基因,然后将MxA基因重组到pET32a(+)载体中,筛选阳性克隆,转化大肠杆菌,IPTG诱导表达,用超声波裂解重组菌BL21(DE3)培养物,纯化蛋白质后免疫新西兰兔制备抗血清。SDS-PAGE分析结果显示,pET32a(+)-MxA融合蛋白在大肠杆菌BL21(DE3)菌株中以包涵体形式高效表达;获得的抗血清经间接ELISA法检测效价为1∶6400;Western blotting检测结果显示,抗血清可与真核表达的MxA蛋白进行特异性结合。试验结果表明,在大肠杆菌中成功表达了pET32a(+)-MxA融合蛋白,制备了具有高度特异性的兔抗人MxA抗血清,这样为采用酶标法测定病毒患者全血细胞或由干扰素诱导的细胞产生的MxA蛋白质含量及临床诊断试剂盒的开发和应用打下了基础。

为制备针对犬瘟热病毒(canine distemper virus,CDV)P1蛋白的单克隆抗体(McAb),本研究利用重组犬瘟热病毒P1蛋白免疫BALB/c小鼠,并将其脾淋巴细胞与SP2/0进行融合,用CDV包被ELISA板,通过间接ELISA法筛选出两株稳定分泌抗CDV-P1的杂交瘤细胞株(E9E4C10、E9F8D9)。间接ELISA检测腹水效价均为1∶10⁶,亚类鉴定结果均为IgG2b。Western blotting和间接免疫荧光(IFA)分析结果表明,两株单克隆抗体均能与重组P1蛋白和CDV发生反应;ELISA叠加试验增殖结果表明,两株单克隆抗体识别的抗原表位不同。本研究制备的特异性抗CDV-P1的单克隆抗体为建立CDV免疫学检测方法和P蛋白的功能研究奠定了基础。

根据鸭副黏病毒(DPMV)和鸭圆环病毒(DuCV)保守基因序列,设计了2对针对鸭副黏病毒和鸭圆环病毒的特异性引物和2条不同荧光基团标记的TaqMan探针,建立了鸭副黏病毒和鸭圆环病毒的二重荧光定量PCR检测方法。该方法敏感性好,对鸭副黏病毒和鸭圆环病毒的检测敏感性分别达到160和140个拷贝数;该方法特异性强,对鸭肝炎病毒、番鸭细小病毒、鸭瘟病毒和H9型禽流感病毒等病原体的检测全为阴性;应用该方法对118份临床病料进行检测,结果检出鸭副黏病毒和鸭圆环病毒阳性感染率分别为0.85%和8.47%,无混合感染。本试验建立的二重荧光定量PCR具有快速、特异、敏感和重复性好等优点,适用于鸭副黏病毒和鸭圆环病毒的快速诊断和监测。

以东北细毛羊、小尾寒羊、杜泊和道赛特4个群体为研究对象,采用PCR-SSCP方法对心脏型脂肪酸结合蛋白(heart fatty acid binding protein,H-FABP)基因第2外显子单核苷酸多态性进行检测。结果发现,H-FABP基因第2外显子存在939(A/G)、980(G/A)、1013(A/C)和1018(T/C)4个SNP位点,表现出AA、AB、BB 3种基因型;在东北细毛羊、小尾寒羊和杜泊群体中,BB型为优势基因型,在道赛特群体中,AB型为优势基因型;经χ²检验后,4个绵羊品种群体的基因频率和基因型频率均处于Hardy-Weinberg平衡状态;群体遗传多态性分析结果表明,东北细毛羊、杜泊和道赛特3个群体中的多态信息含量(PIC)均处于0.25和0.50之间,为中度多态,小尾寒羊为低度多态(PIC＜0.25);进一步分析结果表明,各个群体存在不同程度的遗传变异。

本研究旨在获得抗狂犬病病毒M蛋白的多克隆抗体,为进一步研究M蛋白功能提供材料。本试验以狂犬病病毒BD06毒株为模板克隆M基因序列,将其克隆至原核表达载体pET28a;经酶切和测序鉴定,M蛋白基因序列已正确插入表达载体pET28a;以表达载体pET28a-M转化E.coli Rosetta株,并以0.5 mmol/L IPTG诱导,结果表达出27 ku左右的M蛋白;将诱导表达的蛋白质回收纯化,以纯化的M蛋白多次免疫兔子制备多克隆抗体;Western blotting分析和间接免疫荧光分析结果表明,制得的抗体与病毒能够反应,运用制得的多克隆抗体定位了基质蛋白在感染狂犬病病毒的BHK-21细胞中的位置。结果表明成功制得了抗狂犬病病毒M蛋白的多克隆抗体,为研究狂犬病病毒M蛋白功能奠定了基础。

本研究旨在对犬瘟热病毒(CDV)疫苗株H基因进行克隆及原核表达,并对产物的免疫原性做初步鉴定。根据犬瘟热病毒参考株Ondetstepoort的H基因序列,去除信号肽序列并选取其主要抗原表位设计引物,用反转录—聚合酶链式反应(RT-PCR)扩增目的片段;产物克隆至表达载体pET28b并转化宿主菌Rosetta^TM,优化诱导表达条件,纯化目的蛋白,并进行SDS-PAGE鉴定、Western blotting分析及间接酶联免疫吸附试验(ELISA);并将纯化的H蛋白免疫小鼠,进行中和试验检测抗体效价。结果显示,PCR扩增得到1113 bp DNA片段;在37 ℃、1.0 mmol/L IPTG诱导条件下可获得较高水平的表达;经SDS-PAGE鉴定,表达的H蛋白分子质量为42.38 ku,与预期值相符;Western blotting显示,在42.38 ku出现特异性目的条带;ELISA结果显示,表达的H蛋白能被抗CDV抗体识别,但与正常血清未发生非特异性反应;中和试验结果表明,血清中和抗体效价约为2^－3.3。结果提示,H蛋白获得了正确表达,对CDV抗血清具有特异反应性,可作为实时检测动物机体免疫状况检测的候选抗原,为进一步研制犬瘟热抗体检测ELISA试剂盒和新型疫苗奠定基础。

为了弄清大河乌猪群体遗传分化水平和遗传结构,以曲靖市5个地理种群的46个大河乌猪样品为试验材料,采用分子生物学方法测定和分析所有个体的线粒体细胞色素b(Cyt b)基因DNA序列。分子变异分析结果表明,大河乌猪群体遗传变异主要来自种群内(62.63％),说明该物种群体遗传结构不明显。中性检验结果进一步证实,大河乌猪群体曾发生过种群数量扩张。这种不显著的种群结构主要来自于大规模的引种和扩大繁育,致使各地理种群间的遗传趋同和遗传一致性。研究结果有望为大河乌猪分子遗传选育工作提供重要的基础数据,并为其遗传种质资源的保护提供重要参考。

为了探讨松果菊苷对体外培养大鼠成骨细胞骨桥素(OPN)mRNA和蛋白质表达的影响,选取出生24 h内的SD大鼠颅盖骨,依次用胰酶和胶原酶消化分离培养成骨细胞,用不同浓度的松果菊苷作用于第3代细胞,选取雌二醇为阳性对照,分别在药物作用24、48和72 h后提取细胞总RNA的表达量,用荧光定量PCR(FQ-PCR)法检测细胞中OPN mRNA的表达量;用Western blotting检测细胞中OPN蛋白的表达量。结果显示,各浓度松果菊苷在各个时间段均增加OPN基因的表达,尤其是5×10^-5和5×10^-6 mg/mL松果菊苷在各时间段均具有显著或极显著地促进作用(P＜0.05或P＜0.01);各浓度组在作用48 h时蛋白质的表达量均高于对照组。结果表明,松果菊苷对成骨细胞OPN基因表达有显著的促进作用,同时对OPN蛋白的分泌有促进的趋势。

本试验根据GenBank中登录的禽传染性贫血病毒(CAV)基因序列,设计合成2对引物,外引物的扩增片段大小为485 bp,内引物的扩增片段大小为297 bp,建立了适合CAV快速检测的套式PCR方法(nested PCR),并采用该方法对CAV阳性毒株及临床病料进行了检测。结果显示,该方法能扩增到297 bp的条带,禽流感病毒(H9亚型)、新城疫病毒、传染性法氏囊病病毒、禽网状内皮增生病病毒、减蛋综合征病毒、禽呼肠孤病毒、马立克氏病病毒的扩增结果均为阴性。该方法第1步扩增的敏感性是100 pg,第2步PCR扩增的敏感性是1 fg,敏感性提高了10⁵倍。本研究建立的CAV套式PCR方法具有敏感性高、重复性好、特异性强等优点,可用于CAV的临床诊断和分子流行病学调查等。

试验以川西北高原的乳用麦洼牦牛为研究对象,应用实时荧光定量PCR技术对麦洼牦牛乳腺组织中的氨酰-CoA合成酶长链家族成员1(acyl-CoA synthetase long-chain family member 1,ACSL1)、氨酰-CoA合成酶短链家族成员1、2(acyl-CoA synthetase short-chain family member 1、2,ACSS1、ACSS2)和脂肪酸结合蛋白家族成员3(fatty acid binding protein 3,FABP3)等乳脂代谢相关基因全泌乳期转录水平进行了分析。结果表明,4个基因在整个泌乳期均持续表达;分娩后30 d(30 d )ACSL1、ACSS1、ACSS2和FABP3基因的转录水平均比分娩前15 d(-15 d)显著增加(P<0.05),且达到最大值后逐步下降。产乳量测定结果表明,麦洼牦牛产乳量在120 d达到峰值,比乳脂代谢相关基因峰值表达水平晚90 d,其后产乳量逐步下降。结果表明,牦牛脂肪合成关键酶基因在全泌乳期的表达规律可能与牦牛对青藏高原生存环境的适应有关。

为获得鲤鱼白细胞介素10(interleukin 10,IL-10)全长基因组序列,本研究利用鲤鱼IL-10全长cDNA序列(GenBank登录号:JX524550),通过在两端非编码区设计引物,以提取的鲤鱼脾脏基因组为模板,使用PCR方法成功获得鲤鱼IL-10全长基因组序列。鲤鱼IL-10基因组全长2176 bp,GenBank登录号为JX524551。将所获得的序列与其他物种IL-10基因组序列相比,结果发现都含有5个外显子,4个内含子,外显子在进化上相对保守,剪切位点都符合"gt......ag"规则;序列包含540 bp的开放阅读框,编码179个氨基酸,有2段典型的IL-10氨基酸信号基序。

根据GenBank登录的猪传染性胸膜肺炎放线杆菌(Actinobacillus pleuropneumoniae,APP)血清1~14型的表面抗原蛋白D15和16S rRNA基因序列,设计2对特异性引物,分别扩增出637、431 bp两条核苷酸片段,建立了APP的多重PCR检测方法。特异性结果表明,血清1、3、5a、8、10型能扩增出两条与预期大小的片段,而扩增的大肠杆菌、巴氏杆菌、沙门氏菌、链球菌、葡萄球菌均成阴性。敏感性试验结果表明,最低检出浓度为50/μL。对临床分离的5株疑似APP菌株进行PCR,结果表明,其中4株为阳性,1株为阴性。提示,该方法的特异性和敏感性均良好。

溶藻弧菌是引起海产鱼类、虾、贝等细菌性疾病的主要病原之一,严重危害水产养殖业的发展,建立快速、准确的检测方法对防控溶藻弧菌及保障水产养殖安全具有重要意义。本研究引入环介导等温扩增(loop-mediated isothermal amplification, LAMP)技术,以溶藻弧菌胶原酶基因为靶基因,建立了溶藻弧菌LAMP快速检测方法,45~60 min内即可完成检测。试验结果显示,该LAMP方法可特异性检测溶藻弧菌,且灵敏度高,对纯培养溶藻弧菌的检测灵敏度约10 CFU/mL,对污染水产品中溶藻弧菌的检测灵敏度为19 CFU/mL。本研究建立的溶藻弧菌LAMP检测方法操作简便、检测快速,具有良好的实用性。

为构建猪β2m轻链四聚体前体链,通过PCR定点突变技术,将猪主要组织相容性复合体Ⅰ类分子轻链β2m羧基端69位苯丙氨酸(Phe)突变为半胱氨酸(Cys),然后将突变体基因插入到pET-28a载体,转化BL21细胞,经诱导后SDS-PAGE检测蛋白质表达情况。结果显示,β2m突变体基因全长297 bp,编码98个氨基酸,其中羧基端69位Phe突变为Cys。突变体基因经诱导表达后进行SDS-PAGE检测,结果显示蛋白质表达大小为10.6 ku。本研究构建了猪β2m轻链突变体基因重组表达载体,并成功表达了目的蛋白,为今后构建四聚体链奠定基础。

本研究旨在阐明中国羊毛尾线虫(Trichuris ovis)广东分离株线粒体NADH脱氢酶亚单位4(nad4)基因部分序列(pnad4)的遗传变异情况, 并用pnad4序列构建其与其他鞭虫的进化关系。应用PCR扩增羊鞭虫虫株的pnad4,将所获得的序列应用ClustalX 1.81程序进行比对,然后用Mega 5.0程序NJ法绘制种系发育树。本试验扩增所获得的pnad4序列长度一致,均为827 bp,种内变异在0~1.5%之间。种系发育分析结果表明,12个羊鞭虫分离株位于同一分支。由于羊鞭虫nad4序列种内相对保守,种间差异较大(37.8%~45.6%), 故可作为种间鉴定检测研究的遗传标记, 本研究结果为进一步研究羊鞭虫的群体遗传结构奠定了基础。

枯草芽孢杆菌属于革兰氏阳性菌,非致病菌,其芽孢是其一种休眠体,能抵御外界恶劣的环境条件。该菌细胞壁不含内毒素,具有单层细胞外膜,动物肠道中枯草芽孢能直接分泌蛋白质到胞外。枯草芽孢杆菌是一种存在于动物的肠道中的有益菌,参与维持肠道内环境的平衡与稳定,且可刺激机体释放分泌型免疫球蛋白,有利于肠道黏膜的局部免疫,进而增强机体免疫力。因其对体液免疫和细胞免疫的特性,其菌体成为当今制备黏膜免疫疫苗的一种理想的疫苗载体。枯草芽孢杆菌具有独特的优势,使其能作为便于推广的疫苗载体进行研究。文章主要对枯草芽孢杆菌的黏膜免疫机制及其作为疫苗载体研究和应用前景进行阐述。

根据GenBank中已登录的美洲型猪繁殖与呼吸综合征病毒(porcine reproductive and respiratory syndrome virus,PRRSV)在Nsp7基因中的保守区域设计合成了1对特异性引物,通过反应条件的优化,建立了检测美洲型PRRSV的SYBR Green Ⅰ实时定量PCR检测方法,同时与商品化荧光定量PCR试剂盒进行比对分析。结果表明,该方法特异性强,灵敏度高,能很好的区分美洲型猪繁殖与呼吸道综合征病毒和其他病毒。使用该方法对14份临床样品进行检测,阳性率85.7%,与商品化试剂盒符合率100%。

本试验旨在探讨日粮中分别添加山楂叶总黄酮、何首乌二苯乙烯苷及二者同时添加对肉鸡生产性能、营养物质消化利用率、肠道消化酶活性和肠道菌群的影响,为二者在肉鸡体内的应用提供理论依据。选用1日龄AA肉鸡128只(公),随机分为4组,即空白对照组(饲喂玉米－豆粕型基础日粮)、试验Ⅰ组(在基础日粮中添加300 mg/kg山楂叶总黄酮)、试验Ⅱ组(在基础日粮中添加150 mg/kg何首乌二苯乙烯苷)和试验Ⅲ组(在基础日粮中添加300 mg/kg山楂叶总黄酮和150 mg/kg何首乌二苯乙烯苷),每组4个重复,每个重复8只。结果表明:①在整个试验期,试验Ⅲ组的平均日增重显著高于对照组(P＜0.05),料重比显著低于对照组(P＜0.05);②试验Ⅲ组的粗蛋白质、钙、总磷的消化利用率显著高于对照组和试验Ⅰ、Ⅱ组(P＜0.05),粗脂肪的消化利用率极显著低于对照组和试验Ⅰ、Ⅱ组(P＜0.01);③试验Ⅲ组的胰蛋白酶活性极显著高于对照组和试验Ⅱ组(P＜0.01),脂肪酶活性极显著低于对照组(P＜0.01),淀粉酶活性极显著高于对照组和试验Ⅰ组(P＜0.01);④试验Ⅲ组的回肠和盲肠大肠杆菌数显著低于对照组和试验Ⅰ、Ⅱ组(P＜0.05);回肠乳酸杆菌数显著高于对照组(P＜0.05);盲肠乳酸杆菌数显著高于对照组和试验Ⅰ、Ⅱ组(P＜0.05)。因此,日粮中单独或同时添加山楂叶总黄酮和何首乌二苯乙烯苷具有提高肉仔鸡生产性能和营养物质的消化利用率,增强肠道胰蛋白酶、淀粉酶活性,降低脂肪酶活性,刺激肠道有益菌生长,降低有害菌增殖等作用,但以二者同时添加效果最好。

比较研究不同奶牛场、不同季节牛奶中氨基酸组成及含量的差异,探讨牛奶中氨基酸含量受其影响的变化规律,为改善乳品质提供一定的理论依据。采集北京、滁州、哈尔滨、呼和浩特、乌鲁木齐和西安6个地区奶牛场春季和夏季的奶样,经盐酸水解后采用日立L-8900型氨基酸自动分析仪测定其中17种氨基酸,试验数据通过SAS 8.0统计分析。结果显示,不同季节牛奶中的缬氨酸、酪氨酸、苯丙氨酸和半胱氨酸含量差异极显著(P＜0.01),而其他13种氨基酸含量差异不显著(P＞0.05);不同奶牛场牛奶氨基酸含量差异极显著(P＜0.01),不同奶牛场春季和夏季互作效应对牛奶中氨基酸各组分含量均有极显著的影响(P＜0.01)。因此,不同奶牛场牛奶氨基酸组分及含量差异显著(P＜0.05),而季节因素对牛奶中缬氨酸、酪氨酸、苯丙氨酸和半胱氨酸含量影响较大。

酸枣仁提取物是镇静安神的传统中药,其发挥生物学功能的主要成分是其中的皂苷和黄酮类。该提取物逐步受到中兽医的关注,在畜牧生产中有着广泛的开发利用前景。作者主要综述酸枣仁提取物对中枢神经系统、免疫系统及其在畜牧生产中应用的影响,为其在畜牧生产中的开发应用提供依据。

选用3只安装有永久性瘤胃瘘管的绵羊,采用尼龙袋法对不同配比的番茄酱渣与苜蓿、棉壳制成的草颗粒在瘤胃2、6、12、24、36和72 h的降解率进行研究,从而确定了番茄酱渣与苜蓿、棉壳合适的制草颗粒配比和混合草颗粒中各营养成分的动态降解率。结果表明,番茄酱渣∶苜蓿∶棉壳为60∶35∶5时正组合效应最高,该组降解率:dp(DM)=27+40.9×(1-e^-0.0139t)(n=6,R²=0.978);dp(CP)=31.9+32.6×(1-e^-0.071t)(n=6,R²=0.986);dp(NDF)=14.3+56.1×(1-e^-0.023t)(n=6,R²=0.994)。

试验旨在研究微生物发酵饲料对肉牛免疫机能的影响。选择90头月龄相近、体型结构相似、体重(373.4~425.3) kg的健康西杂牛,采用随机区组试验设计,将90头牛分为3组,每组5个重复,每个重复6头牛。对照组饲喂基础精料日粮,试验Ⅰ、Ⅱ组分别用25%和40%微生物发酵饲料替代基础精料,各组每头牛每天饲喂相同重量的精料(4 kg)和玉米秸秆颗粒(2.7 kg),酒糟自由采食,拴系饲喂,自由饮水;预试期10 d,正试期48 d。结果显示,与对照组相比,2个试验组中血清总蛋白、白蛋白、免疫球蛋白A、G、M浓度显著(P＜0.05)或极显著(P＜0.01)提高,谷草转氨酶、谷丙转氨酶活性及丙二醛浓度均显著(P＜0.05)或极显著(P＜0.01)下降;且总抗氧化能力和总超氧化物歧化酶的活性极显著增强(P＜0.01)。提示,利用微生物发酵饲料能提高肉牛免疫力。

为了研究游离棉酚对育雏期海赛克斯蛋仔鸡免疫功能的影响,本试验选用360只1日龄海赛克斯蛋雏鸡,随机分为4组,每组3个重复,每个重复30羽。Ⅰ组饲喂基础日粮,Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ组为试验组,分别饲喂含游离棉酚70、105、140 mg/kg的日粮,进行为期42 d的饲养试验,分别在14、28、42日龄进行取样,测定免疫器官指数和血清中IL-2、IFN-γ的含量,并每周测定血清中新城疫HI抗体效价。结果显示,①日粮中不同水平的游离棉酚对雏鸡的胸腺、法氏囊、脾脏指数无明显影响;②日粮中不同水平的游离棉酚对新城疫抗体的产生无显著抑制作用(P＞0.05);③日粮中不同水平的游离棉酚能明显降低鸡血清中IL-2、IFN-γ的含量。结果表明,当游离棉酚含量高达140 mg/kg时,对雏鸡的免疫器官指数及抗体的产生没有显著影响(P＞0.05),但在第42日龄时能显著或极显著降低鸡血清中细胞因子的含量(P＜0.05或P＜0.01))。

为确定王不留行对奶牛乳蛋白合成信号转导通路的影响,本试验通过水浸提方法制备王不留行提取液,采用Western blotting方法分别检测经王不留行水浸提液、雌激素及催乳素处理的泌乳期奶牛乳腺上皮细胞中乳蛋白合成信号分子的表达变化。结果显示,王不留行水浸提液、雌激素及催乳素都可以促进p-STAT5、p100、GAS、S6K1及p-mTOR的表达,进而促进乳蛋白合成,且添加蛋氨酸可以促进这一作用。提示,王不留行具有和雌激素、催乳素相似的作用,并在转录和翻译水平调节泌乳基因表达。

试验旨在建立薄层层析－紫外分光光度法测定预混剂中恩拉霉素的方法。使用硅胶GF254薄层板为固定相,正丁醇∶冰醋酸∶水(2∶1∶1)为展开剂,在紫外光灯(254 nm)下定位,样品中的恩拉霉素得到较好分离。在271 nm波长处对不同含量的恩拉霉素标品进行紫外检测,结果表明,恩拉霉素点样量在20~166 μg范围内与吸光度呈现良好的线性关系(r=0.9989),平均回收率为99.85%,RSD值为3.1%(n=9)。此法所测定的结果与高效液相色谱(HPLC)法所测定的结果基本一致。该方法简单、快捷、准确、分析量大,适用于预混剂中恩拉霉素的定量分析。

为评价芪参口服液临床用药的安全性,根据毒理学评价程序和方法对其进行了急性毒性试验和长期毒性试验。在急性毒性试验中,将40只昆明小鼠按体重随机分为2组,采用最大给药量法测定小鼠口服芪参口服液的最大耐受剂量;在长期毒性试验中,将80只Wistar大鼠按体重随机分为4组,3个剂量组分别按3.75、7.5、15 g/kg体重给大鼠灌胃,对照组给予同体积生理盐水,1次/d,连续4周。记录每日饮水量、饲料采食量及每周体重,检测给药4周及停药2周血液生化指标、血常规、脏器系数和组织病理学变化。试验结果显示,小鼠口服芪参口服液的最大耐受剂量为生药量40 g/kg,此剂量相当于临床日用量的40倍。部分给药组采食量和饮水量与对照组相比出现显著(P＜0.05)或极显著(P＜0.01)变化,但对平均周增重无显著性影响(P＞0.05);血常规的部分指标出现显著(P＜0.05)或极显著变化(P＜0.01),但停药2周后,所有指标与相应的对照组相比无显著性差异(P＞0.05);给药组血液生化和脏器系数的各项指标与对照组相比,无显著性变化(P＞0.05)。病理组织学检查无明显差异。试验结果表明,在本次试验条件下,该口服液安全无毒。

为建立和完善奶牛子宫内膜上皮细胞的体外培养技术,采用组织培养和胶原酶消化相结合的方法,对中国荷斯坦奶牛的子宫内膜上皮细胞进行了原代分离培养,经胰酶差时消化进行纯化,并以免疫组化法检测角蛋白表达。结果显示,所采用的方法可高效获得呈铺路石样的上皮细胞,角蛋白表达呈阳性,第2~8代的传代细胞在形态特征和增殖状态上保持着与原代细胞相近的生物学特征。

半胱氨酸天冬氨酸特异性蛋白酶(cysteinyl aspartate specific proteinase, Caspase)是直接导致凋亡细胞解体的蛋白酶家族,在细胞凋亡机制网络中处于中心地位。在精子发生发育过程中,机体通过生殖细胞凋亡与细胞增殖平衡机制来确保正常数量和质量的精子分化与成熟。精子冷冻保存会对精子造成不可逆的冷冻损伤,冷冻－解冻后,一些标志性凋亡现象会显著增多。作者对Caspase介导的细胞凋亡对精子发生发育及冷冻保存的影响机制进行了综述,表明精子发生发育和冷冻损伤与精子细胞凋亡存在密切的联系。

肉质性状与肌内脂肪含量紧密相关。心脏型脂肪酸结合蛋白(heart fatty acid-binding protein,H-FABP)基因作为影响肌内脂肪含量的候选基因之一,成为布莱凯特黑牛分子育种改善肉质性状的研究重点。作者就H-FABP对脂肪酸转运的调控机理、H-FABP基因定位和结构等方面进行阐述,并结合在不同畜禽上的研究进展进行比较分析,为利用现代分子生物技术培育布莱凯特黑牛新品种提供理论参考。

本试验旨在探讨黄酮(flavonoids)和维生素E(VE)对己烯雌酚(diethylstilboestrol, DES)所致昆明雄性小鼠肝脏氧化损伤的保护作用。将80只小鼠随机分为正常对照组、DES模型组(0.035、0.35、3.5 mg/(kg·d))、黄酮干预组(26、58、112 mg/(kg·d))和VE干预组(56.2、112.4、224.8 mg/(kg·d));干预组先灌服3.5 mg/(kg·d)DES处理,再灌服不同剂量黄酮和VE;正常对照组灌服等体积生理盐水。灌胃给药,连续7 d,试验结束后禁食24 h,脱颈处死,剖检肝脏和睾丸。计算肝脏和睾丸脏器系数,测定肝脏组织中的丙二醛(MDA)含量、总抗氧化能力(T-AOC)、超氧化物歧化酶(SOD)和谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)活性。结果表明,不同剂量的DES组小鼠肝脏系数和睾丸系数均下降;112.0 mg/(kg·d)黄酮剂量组与高剂量DES组相比,SOD活性上升,MDA极显著下降(P<0.01);与高剂量DES组相比,112.4、224.8 mg/(kg·d) VE剂量组T-AOC极显著上升(P<0.01),MDA极显著下降(P<0.01),224.8 mg/(kg·d) VE剂量组GSH-PX极显著上升(P<0.01)。不同浓度的DES均导致肝脏不同程度氧化损伤,黄酮和VE均能提高机体的抗氧化能力,降低DES对机体造成的氧化损伤。

IsCT最初是从蝎子中分离出的一种非细胞选择性线性抗菌肽,为了将其应用于动物饲料,需研究其对常见致病菌的抑制和杀灭作用。本试验采用微量稀释法和琼脂扩散法对ISCT衍生物[L⁶,K¹¹]-IsCT的抗菌活性及其稳定性进行探索。结果显示,相对于金黄色葡萄球菌,[L⁶,K¹¹]-IsCT对大肠杆菌具有更好的抑制作用,其对大肠杆菌的最小抑菌浓度为50 μg/mL。另外,该衍生物对高温表现出很好的稳定性,同时具有很好的酸碱耐受性和人工胃液耐受性。经121 ℃、0.12 MPa处理30 min,以及2.0≤pH≤11.0处理30 min或人工胃液2 h孵育处理后,依然能保持很好的抑菌活性。

为了研究构树叶提取物的抑菌作用及其机理,以金黄色葡萄球菌为供试菌,采用牛津杯法测定构树叶提取物的抑菌效果,通过测定供试菌生长曲线、细胞膜渗透性和蛋白质合成来研究构树叶提取物的抑菌机理。结果表明,构树叶水提取物和75%乙醇提取物抑菌圈直径分别为17.5和18.0 mm,最小抑菌浓度均为6.8 mg/mL,最小杀菌浓度均为12.50 mg/mL。构树提取物能显著抑制金黄色葡萄球菌蛋白质合成,从而抑制其生长,但对其细胞膜的通透性影响不大。因此,构树叶提取物通过抑制金黄色葡萄球菌蛋白质合成发挥其抑菌效果。

超高效液相色谱技术是近年来迅速发展的基于小颗粒填料的液相色谱技术,具有快速、灵敏、准确、高效等众多优点,已成为药物检测和分析领域的研究热点之一。随着该技术的不断发展,其已在兽药研究开发和兽药残留检测等领域得到了较为广泛的应用。文章就超高液相色谱的技术特点及其实际应用进行综述,并对该项技术在未来兽药分析领域广阔的应用前景进行了展望。

试验应用PCR-RFLP技术对云南培育品种大河乌猪4代(F4)、5代(F5)和6代(F6))共334头个体的血浆胆固醇脂转移蛋白(cholesteryl ester transfer protein,CETP)基因内含子1436 bp进行扩增,用限制性内切酶AvaⅡ对其酶切可得到3种基因型:BB、Bb和bb,F4、F5、F6都以b等位基因为优势等位基因,其等位基因频率分别为0.5821、0.6042和0.6885。取不同基因型纯合子样品进行测序,共发现7个单核苷酸多态位点(SNPs),其有3个为转换,4个突变为颠换,多态位点分别位于19、69、132、175、203、224、234 bp处。应用最小二乘分析不同基因型和不同性别的基因型对生长性状(初生重、45日龄重、4月龄体重、6月龄体重、体高、体长、管围、背膘厚)的影响。结果显示,F4代Bb和bb基因型个体体长显著高于BB基因型(P＜0.05);bb基因型6月龄管围显著高于BB基因型(P＜0.05),与Bb基因型个体间差异不显著(P＞0.05);F5代Bb和bb基因型个体初生重显著高于BB基因型(P＜0.05),两者之间差异不显著(P＞0.05);F6代bb基因型个体初生重、45日龄重显著高于BB基因型(P＜0.05),与Bb基因型个体间差异不显著(P＞0.05);其余性状不同基因型间无显著差异(P＞0.05)。另外,bb基因型雄性和雌性个体在初生重都存在显著差异(P＜0.05)。研究结果提示,CETP基因对猪生长性状(特别是初生重)存在一定影响;选择带有b等位基因的个体有望提高猪体质量相关的生长性状,该SNP可能是改良猪生长速度性状的重要分子标记位点。

试验旨在探讨陆川猪和大白猪胰岛素样生长因子2(insulin-like growth factor-2,IGF2)基因多态性与生长性状的关系,以期为猪生产性状标记辅助选择侯选基因的选择提供理论依据。采用PCR-SSCP技术,在陆川猪和大白猪群体中检测到了1个SNP位点,并将这个SNP位点与生长性状进行关联分析。结果表明,IGF2基因对陆川猪和大白猪初生重、平均日增重影响均显著(P<0.05),对断奶重的影响在大白猪上显著(P<0.05),在陆川猪上不显著(P>0.05),可作为用于育种实践的分子遗传标记。

为探讨褪黑素(melatonin,MLT)在牛精液保存中的抗氧化作用,本研究利用目测法、低渗膨胀法和考马斯亮兰染色法分析了不同MLT浓度(0、10^-3、10^-4和10^-5 mol/L)和不同孵育时间(1、4和8 h)对精子活力、质膜和顶体完整性的影响。结果发现,与对照组相比,在稀释液中分别添加10^-3和10^-4 mol/L MLT均可显著提高精子活力、质膜完整率和顶体完整率(P＜0.05),且10^-3 mol/L MLT添加效果最佳;MLT(10^-3 mol/L)组在27 ℃孵育1、4 h后,其精子的活力、质膜完整率和顶体完整率均显著高于对照组(P＜0.05)。因此,添加10^-3 mol/L MLT可明显改善牛精液品质,提高牛精液的保存时间和保存质量。

随着集约化养殖的发展,环境应激对动物生长发育和繁殖的影响愈来愈严重,尤其是妊娠期母体应激,将诱发母体情绪紧张,影响胎儿发育,甚至导致流产。其作用机制可能是通过激活神经－内分泌－免疫网络,导致母体全身免疫和子宫局部淋巴细胞、NK细胞数量和活性失调,引起妊娠期母体免疫微环境紊乱,引发胚胎免疫排斥,影响胎儿发育、异常,甚至死亡。作者就应激对妊娠的影响及其作用通路,尤其是应激对妊娠期母体免疫的研究进展进行了综述。

为了弄清河川型水牛与沼泽型水牛杂交后代的核型,以及与其育性和亲本核型的关系,用外周血液淋巴细胞培养法对尼里拉菲水牛、德宏水牛及尼里拉菲水牛×德宏水牛F1代公牛进行淋巴细胞培养,制作染色体标本,并进行G-带染色;利用BEION染色体核型分析系统对染色体标本分别进行染色体核型分析,确定其染色体核型。根据染色体核型分析结果,并结合其育性,分析染色体核型与其育性的关系。结果显示,尼里拉菲水牛核型为2n=50,XY;德宏水牛核型为2n=48,-4,-4,-9,-9,+t(4;9),+t(4;9),XY;尼里拉菲水牛×德宏水牛F1代公牛核型为:2n=49,-4,-9,+t(4;9),XY。

鸭黄病毒病为近年来新发的鸭病,给养鸭业带来了极大的经济损失。为了深入研究本病的防制,本试验对鸭黄病毒(duck flavivirus,DFV)进行了分离鉴定。取疑似感染DFV的病鸭病料,经细菌分离初步排除细菌感染后,应用RT-PCR检测呈现DFV阳性,处理后将其接种到鸭胚成纤维细胞(DEF)和健康鸭胚上进行病毒分离传代。结果显示,在DEF细胞上第1代48 h就开始出现CPE,随着时间的延长CPE更加明显,通常在72~96 h产生典型CPE;接种鸭胚每一代均出现死亡,且死亡时间多集中于接种后60~72 h,死亡鸭胚胚体水肿、出血、发育不良、胚肝严重出血、肿胀或斑驳样坏死等病变。将病毒DEF细胞和鸭胚分离物应用血凝试验、毒价测定、病毒中和试验、RT-PCR及人工感染试验进行检测鉴定,证明所分离到的病毒为DFV,并将其命名为DFV SDbz株。

为了确诊山西某鸡场疑似鸡包涵体肝炎的的病例,本研究进行了鸡包涵体肝炎病毒的分离鉴定。将病死鸡肝脏研磨,经卵黄囊途径接种6日龄SPF鸡胚,成功获得1株病毒;并经过鸡胚病变特征、RT-PCR、基因测序、BLAST分析及动物回归试验等,成功分离出1株鸡包涵体肝炎病毒。进一步证明该病例是鸡包涵体肝炎病毒感染所致。

为了调查山东省水貂犬瘟热的流行病学情况,对2010年8月－2012年8月期间由诸城、文登等地养貂场送诊的996份水貂病例进行了临床诊断和病原学检查。结果显示,共检出犬瘟热病毒阳性病料223份,阳性率为22.39%。其中,犬瘟热病毒与其他病原混合感染136例,占阳性病例的60.99%;阳性样本中未免疫病例116个;诸城检出阳性病例数最多,为147例;3月龄水貂发病率最高,占阳性病例的43.0%;水貂感染犬瘟热病毒主要症状为眼、鼻黏液性分泌物增多、脚垫增厚、呼吸困难;主要病理变化为肠、脑部出血。结果表明,犬瘟热依然是危害水貂养殖的重要疫病,且犬瘟热病毒易与其他病原混合感染;免疫接种能有效预防水貂犬瘟热,且宜在3月龄以前进行。

应用离心沉淀法、卢戈氏碘液染色法、饱和蔗糖溶液漂浮法对采自河南省6个地市及吉林双辽、辽宁朝阳和山东东营共1109份绵羊粪便样品进行检查,结果发现9种(类)寄生虫,寄生虫总感染率为97.2%,以球虫感染率最高,达93.5%,卵囊数(OPG)最高值达652000;圆线虫和阿米巴感染率较高,分别为51.2%和71.3%,圆线虫卵数(EPG)最高值达69400;隐孢子虫、贾第虫、鞭虫、细颈线虫、莫尼茨绦虫和矛形双腔吸虫感染率分别为1.6%、5.7%、9.7%、0.3%、5.1%和2.6%;80.7%的绵羊阳性样品呈混合感染,最多可达5种。1岁以下和1岁以上绵羊寄生虫感染率分别为98.5%和87.5%;舍饲和放牧绵羊寄生虫感染率分别为97.5%和96.8%;寄生虫季节流行动态调查显示夏秋季节寄生虫感染率高于冬春季节。调查结果表明绵羊肠道寄生虫感染较为普遍,应加强其综合防控措施。

巴贝斯虫病广泛存在于热带和亚热带国家,给畜牧业造成严重的经济损失,目前对于巴贝斯虫病的治疗尚无特效药, 作者就近年来治疗巴贝斯虫病的药物研究现状进行综述。常用的较为有效的药物咪唑苯脲对肝功能具有损伤作用,阿托伐醌和阿奇霉素联用可造成寄生虫细胞色素b基因突变,且复发感染和寄生虫对药物产生耐药性较为严重。对于抗巴贝斯虫的化合物开发主要集中在噻唑和咪唑等杂环化合物及其衍生物等。利用分子生物学的方法寻找寄生虫中适当的靶基因并进行其颉颃剂的研究取得了一定的效果,另外还有一些试验结果显示部分传统药物对于抗巴贝斯虫有效。

猪繁殖与呼吸综合征是目前危害养猪业的一种严重的病毒性疾病,给养猪业造成了巨大的经济损失。文章对最近国内外猪繁殖与呼吸综合征病毒分子生物学及分子免疫学两方面的成果进行了概述,旨在为猪繁殖与呼吸综合征的防制提供新的思路和方法。

头孢喹肟(cefquinome)是第4代头孢菌素类动物专用抗生素,是一种治疗动物严重感染的新药,具有独特的抗菌机制和良好的抗菌活性,其抗菌谱广、抗菌活性强,药动学优良,血药浓度达峰时间短、浓度高,无致癌性、致突变性、致畸性、无繁殖毒性。对其作用机理、理化性质、药理学性质及合成路线等方面进行综述,并分析头孢喹肟在合成中存在收率低、处理困难等问题,以便医药科技工作者全面了解,进而用以指导临床应用。

为筛选满足猪圆环病毒2型灭活疫苗制苗要求的毒株,选择河南省8个地区的8株猪圆环病毒2型分离株进行抗原性分析,将各分离株培养后用不同滴度的病毒原液和其分别稀释至同一滴度(4.233×10⁴拷贝/μL)的病毒液分别制成油佐剂灭活疫苗,免疫小鼠后采血测定其抗体动态水平,以进行免疫效力评价。结果显示,8株圆环病毒2型分离株中8#和12#分离株原液制备的疫苗免疫后诱导产生的抗体水平较高,二免后1周抗体水平即高于1∶800,达到猪圆环病毒2型灭活疫苗的国家质量标准要求,3周时达到高峰,比对照商品疫苗诱导产生的抗体水平更高;其分别稀释130倍和463倍后制备的疫苗诱导产生的抗体水平在二免后3周也能达到1∶800。提示,猪圆环病毒2型8#和12#分离株毒价高,免疫效力良好,是理想的疫苗候选株。本研究丰富了猪圆环病毒2型灭活疫苗毒株的种毒资源,为研制高质量的猪圆环病毒2型疫苗奠定了基础。

氯氟苄腺嘌呤属于核苷酸类化合物,是一种新型抗球虫药,具有广谱的抗球虫活性,目前在中国尚未有相关的产品上市。作者主要阐述了氯氟苄腺嘌呤的作用机理、国内外研究进展,并分析了其在鸡球虫病防制方面的应用前景,为氯氟苄腺嘌呤在中国的研究、推广和应用提供参考依据。

本研究通过回顾分析临床上使用外固定支架治疗11例昆明犬胫腓骨骨折病例,探讨使用外固定支架治疗昆明犬胫腓骨骨折的临床效果。手术后100 d回访,骨折全部愈合,骨折愈合最短时间为30 d,最长为90 d,除少数有针孔感染和固定针松动外,无其他重大并发症。结果表明,外固定支架是治疗昆明犬胫腓骨骨折的理想方法。

小反刍兽疫是一种传染性极强的病毒性疾病,主要影响家养及野生的小反刍动物。该病的主要特征是发热、口腔炎、结膜炎、肠胃炎和肺炎,是世界动物卫生组织(World Organization for Animal Health,OIE)规定必须上报的疾病之一。文章对该病的流行与传播、诊断方法及防控措施进行了综述。

宝克为公驼发情时由枕腺分泌的一种液体,其主要成分为甾体激素和酸类物质,对治疗肿瘤、肾阳虚和免疫低下等疾病有积极地作用。作者主要对国内外有关宝克的化学成分及药理作用方面的最新研究进展进行了系统的综述,以期为更好地开发和利用宝克提供依据。

为探讨丙泊酚静脉麻醉与安氟醚吸入麻醉在巴马小型猪体外循环(CPB)中的麻醉效果,本研究选用巴马小型猪10头,平均分成2组,分别进行丙泊酚静脉麻醉和安氟醚吸入麻醉;开胸后进行全血肝素化处理,分别于升主动脉、上腔静脉和下腔静脉插管,连接体外循环机进行CPB;观察并记录麻醉诱导前(T0)、麻醉诱导后(T1)、CPB前即刻(T2)、降温至30 ℃(T3)、阻断主动脉前即刻(T4)、阻断主动脉后4 min(T5)、开始复温即刻(T6)、停CPB即刻(T7)、关胸后即刻(T8)及手术结束拔管后10 min(T9)10个时间点各组试验猪的生命体征、鼻温(NT)、心率(HR)、平均动脉压(MAP)、pH及血氧饱和度(SPO₂)指标。结果2组试验猪于CPB实施前后的基本情况如体重、手术时间和麻醉时间等指标均无显著性差异(P＞0.05);安氟醚组恢复自主呼吸的时间显著短于丙泊酚组(P＜0.05);与T0和T1相比,各组试验猪在CPB进行时其NT、HR和MAP值均显著降低(P＜0.05);但各组间及组内SPO₂和pH差异不显著(P＞0.05)。由此可见,丙泊酚静脉麻醉与安氟醚吸入麻醉均可用于巴马小型猪CPB中的麻醉。选用丙泊酚时,应根据手术过程中试验动物的反应情况适当调整用量;而安氟醚麻醉过程相对平稳,麻醉效果好,术后苏醒快,适合情况复杂且时间较长的手术。

菊粉通常是从植物中提取的一种特殊的天然果聚糖类碳水化合物,具有益生作用,可选择性地促进肠道中有益菌增殖,抑制有害菌生长,提高动物生长性能和免疫功能。作者主要从菊粉作为一种新型饲料添加剂,对猪肠道菌群、生长性能、免疫功能、矿物质吸收利用和肉品质影响等方面进行综述。

本试验旨在研究日粮中添加不同剂量葡萄籽粉替代玉米对成年母羊体重和经济效益的影响。试验选取年龄相近(15~16月龄)、健康状况良好的成年母羊32只,根据体重相近原则随机分为4组,对照组饲喂基础日粮,试验Ⅰ、Ⅱ和Ⅲ组分别用葡萄籽粉替代基础日粮中7%、14%和21%玉米。结果表明,试验各组间羊增重差异不显著(P＞0.05),但试验Ⅰ组平均日增重比对照组提高了14.50%,且经济效益比对照组平均提高了37.74%。提示,本试验中在基础日粮中使用葡萄籽粉替代7%玉米对成年母羊的增重效果和经济效益最佳。

期刊数字化出版为期刊提供了一个良好的扩展平台,发展数字化已成为中国出版业发展的战略选择。作者综述了当前期刊数字化发展的现状,探讨了2种科技期刊网络化发展模式的优势和弊端,分析了5种科技期刊的出版模式的特点,为推进科技期刊数字化发展提供参考。