猪繁殖与呼吸综合征病毒SYBR Green Ⅰ荧光定量PCR检测方法的建立

›› 2013, Vol. 40 ›› Issue (4): 89-92.

猪繁殖与呼吸综合征病毒SYBR Green Ⅰ荧光定量PCR检测方法的建立

黄震, 魏春娅, 闫明菲, 田悦茹, 张民泽, 谢杰雄, 孙龙, 张桂红

华南农业大学兽医学院,广东广州 510642

收稿日期:2012-09-16 出版日期:2013-04-20 发布日期:2013-04-19
通讯作者: 张桂红,教授,博士生导师。E-mail:guihongzh@126.com E-mail:guihongzh@126.com
作者简介:黄震(1986-),男,河南人,硕士生,研究方向:畜禽疾病诊断及相关分子生物学。
基金资助:
国家生猪现代农业产业体系(nycytx009)。

Establishment of SYBR Green Ⅰ Fluorescent Quantitative PCR Method for Detection of Porcine Reproductive and Respiratory Syndrome Virus

HUANG Zhen, WEI Chun-ya, YAN Ming-fei, TIAN Yue-ru, ZHANG Min-ze, XIE Jie-xiong, SUN Long, ZHANG Gui-hong

College of Veterinary Medicine,South China Agricultural University,Guangzhou 510642,China

Received:2012-09-16 Online:2013-04-20 Published:2013-04-19

摘要/Abstract

摘要： 根据GenBank中已登录的美洲型猪繁殖与呼吸综合征病毒(porcine reproductive and respiratory syndrome virus,PRRSV)在Nsp7基因中的保守区域设计合成了1对特异性引物,通过反应条件的优化,建立了检测美洲型PRRSV的SYBR Green Ⅰ实时定量PCR检测方法,同时与商品化荧光定量PCR试剂盒进行比对分析。结果表明,该方法特异性强,灵敏度高,能很好的区分美洲型猪繁殖与呼吸道综合征病毒和其他病毒。使用该方法对14份临床样品进行检测,阳性率85.7%,与商品化试剂盒符合率100%。

关键词: 猪繁殖与呼吸综合征病毒; 实时荧光定量PCR; Nsp7

Abstract: A pair of specific primers conserved in the the Nsp7 genes of American porcine reproductive and respiratory syndrome virus (PRRSV) were synthesized. Optimization of reaction conditions, the detection of SYBR Green Ⅰ Real-time quantitative PCR method was compared and analyzed at the same time with the commercialization of fluorescent quantitative PCR kit. The results showed that the specificity of the method, high sensitivity, a good distinction between the American swine reproductive and respiratory syndrome virus and other viruses. 14 clinical samples were detected using this method, the positive rate was 85.7%, coincidence was 100% with commercial kits.

Key words: porcine reproductive and respiratory syndrome virus; Real-time quantitative PCR; Nsp7

中图分类号:

S854.4⁺3

黄震, 魏春娅, 闫明菲, 田悦茹, 张民泽, 谢杰雄, 孙龙, 张桂红. 猪繁殖与呼吸综合征病毒SYBR Green Ⅰ荧光定量PCR检测方法的建立[J]. , 2013, 40(4): 89-92.

HUANG Zhen, WEI Chun-ya, YAN Ming-fei, TIAN Yue-ru, ZHANG Min-ze, XIE Jie-xiong, SUN Long, ZHANG Gui-hong. Establishment of SYBR Green Ⅰ Fluorescent Quantitative PCR Method for Detection of Porcine Reproductive and Respiratory Syndrome Virus[J]. , 2013, 40(4): 89-92.

[1]	康溥, 任照文, 蔡汝健, 吕宗吉, 黄育浩, 王晓虎. 广东及周边省份猪繁殖与呼吸综合征病毒2型谱系8毒株变异规律和传播研究[J]. 中国畜牧兽医, 2023, 50(5): 2001-2011.
[2]	陈天宝, 王娅妮, 刘宝玲, 王刚, 王晓虎, 柳旭辉, 蔡汝健, 贺东生. 中药抗猪繁殖与呼吸综合征病毒的作用机制研究进展[J]. 中国畜牧兽医, 2023, 50(5): 2114-2129.
[3]	李华玮, 郭科威, 王旭英, 张小雨, 路紫微, 李新锋, 马辉, 侯文静. 猪繁殖与呼吸综合征病毒非结构蛋白7真核表达及亚细胞定位[J]. 中国畜牧兽医, 2023, 50(3): 1160-1168.
[4]	麻宝艺, 盛陈艳, 刘宏莹, 马青霞, 汪婷婷, 李健明, 时坤, 杜锐, 冷雪. BVDV 1型和2型TaqMan双重实时荧光定量PCR检测方法的建立[J]. 中国畜牧兽医, 2022, 49(6): 2326-2335.
[5]	刘庆庆, 吴鹏, 李培东, 张江伟, 陈创夫, 肖陈诚. 表达猪繁殖与呼吸综合征病毒N蛋白的重组腺病毒的构建及其免疫原性分析[J]. 中国畜牧兽医, 2022, 49(3): 1024-1031.
[6]	吕晓楠, 徐立蒲, 张文, 王娜, 曹欢, 王小亮, 王姝, 王静波. 感染鲤浮肿病毒镜鲤的组织病理变化及病毒分布规律研究[J]. 中国畜牧兽医, 2022, 49(3): 1077-1084.
[7]	王兆丽, 杨思宇, 吴艳梅, 宋晓晓, 穆祥, 张涛. 猪繁殖与呼吸综合征病毒-脂多糖刺激对中性粒细胞黏附猪肺微血管内皮细胞的影响[J]. 中国畜牧兽医, 2022, 49(2): 471-479.
[8]	孙璐, 张静, 尹苗, 程耀蝶, 代锟, 吴倩, 赵洪, 陈希文. 4种清热解毒复方中草药体外抑菌及抗PRRSV活性研究[J]. 中国畜牧兽医, 2022, 49(2): 746-754.
[9]	楚品品, 蒋智勇, 李春玲, 勾红潮, 李艳, 蔡汝健. 纳米银体外抗猪繁殖与呼吸综合征病毒的作用研究[J]. 中国畜牧兽医, 2022, 49(11): 4356-4363.
[10]	张军芳, 孙建富, 孙斌, 唐琳, 王英, 王恩泽, 崔岩, 李强, 严昌国, 李香子. 延边牛PPARγ基因的克隆及生物信息学分析[J]. 中国畜牧兽医, 2021, 48(8): 2695-2704.
[11]	苗曼宁, 郭益文, 胡德宝, 曾雨晗, 李新, 张林林, 丁向彬, 郭宏. MSTN基因编辑牛肌肉转录组测序及生物信息学分析[J]. 中国畜牧兽医, 2021, 48(7): 2271-2281.
[12]	李恒, 字向东. 牦牛跨膜附睾蛋白1基因的克隆及其在卵丘卵母细胞复合体中的表达分析[J]. 中国畜牧兽医, 2021, 48(4): 1284-1293.
[13]	李建梅, 季正剑, 刘梅, 沈欣悦, 程旭, 俞燕, 戴亚斌. 藏鸡和隐性白羽鸡感染柔嫩艾美耳球虫后免疫相关基因的表达变化分析[J]. 中国畜牧兽医, 2021, 48(4): 1440-1448.
[14]	陈磊, 袁枫, 贺三刚, 玛依拉, 李文蓉. 绵羊FGF10基因克隆、序列分析及其在毛囊发育中的表达分析[J]. 中国畜牧兽医, 2021, 48(2): 425-432.
[15]	戴政列, 朱静静, 陈振宇, 周晓龙, 汪涵, 李向臣, 赵阿勇, 杨松柏. 猪SENP1基因克隆、生物信息学分析与表达研究[J]. 中国畜牧兽医, 2021, 48(12): 4382-4390.