猪β2m四聚体前体链重组表达载体的构建和表达

›› 2013, Vol. 40 ›› Issue (4): 77-81.

猪β2m四聚体前体链重组表达载体的构建和表达

刘昌华, 刘筏, 张晶, 乔震, 高凤山

大连大学生命科学与技术学院,辽宁大连 116622

收稿日期:2012-10-08 出版日期:2013-04-20 发布日期:2013-04-19
通讯作者: 高凤山(1971-),男,河北人,硕士生导师,副教授,研究方向:分子免疫学和分子生物学。E-mail: gfsh0626@126.com;Tel: 0411-87402310 E-mail:gfsh0626@126.com
作者简介:刘昌华(1990-),男,辽宁人,学士,研究方向:生物工程。
基金资助:
国家自然科学基金项目(31172304);大连大学本科生创新教育基金项目(2011042)。

Construction and Expression of the Recombinant Expressing Plasmids for the Tetrameric Leader Chain of Swine β2m

LIU Chang-hua, LIU Fa, ZHANG Jing, QIAO Zhen, GAO Feng-shan 

College of Life Science and Technology, Dalian University, Dalian 116622, China

Received:2012-10-08 Online:2013-04-20 Published:2013-04-19

摘要/Abstract

摘要： 为构建猪β2m轻链四聚体前体链,通过PCR定点突变技术,将猪主要组织相容性复合体Ⅰ类分子轻链β2m羧基端69位苯丙氨酸(Phe)突变为半胱氨酸(Cys),然后将突变体基因插入到pET-28a载体,转化BL21细胞,经诱导后SDS-PAGE检测蛋白质表达情况。结果显示,β2m突变体基因全长297 bp,编码98个氨基酸,其中羧基端69位Phe突变为Cys。突变体基因经诱导表达后进行SDS-PAGE检测,结果显示蛋白质表达大小为10.6 ku。本研究构建了猪β2m轻链突变体基因重组表达载体,并成功表达了目的蛋白,为今后构建四聚体链奠定基础。

关键词: β2m基因; 四聚体; 定点突变; 表达

Abstract: In order to construct the tetrameric leader chain of swine β2m, the light chain of swine β2m was mutated at site of 69 from phenylalanine (Phe) to cysteine (Cys) by using PCR site-directed mutagenesis technique. Then the mutant β2m gene was inserted into pET-28a and transformed into Escherichia coli BL21. After induction, the expression of target protein was detected by SDS-PAGE. The results demonstrated that the mutant β2m was about 297 bp, with coding for 98 amino acids. It was shown that the phenylalanine at site of 69 was mutated to cysteine. After induction, the mutant β2m was expressed successfully as a protein of 10.6 ku detected by SDS-PAGE. It was concluded that the recombinant expression plasmids of the mutant β2m was constructed and target protein was expressed successfully. This study would lay the foundation for construction of tetramer later.

Key words: Beta2 microglobulin; tetramer; site-directed mutagenesis; expression

中图分类号:

刘昌华, 刘筏, 张晶, 乔震, 高凤山. 猪β2m四聚体前体链重组表达载体的构建和表达[J]. , 2013, 40(4): 77-81.

LIU Chang-hua, LIU Fa, ZHANG Jing, QIAO Zhen, GAO Feng-shan . Construction and Expression of the Recombinant Expressing Plasmids for the Tetrameric Leader Chain of Swine β2m[J]. , 2013, 40(4): 77-81.

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