猪巨细胞病毒(PCMV)四川株gB基因的克隆与序列分析

›› 2013, Vol. 40 ›› Issue (3): 80-83.

猪巨细胞病毒(PCMV)四川株gB基因的克隆与序列分析

何万平¹, 赵玲¹, 刘艳¹, 刘燕¹, 吴玉梅¹, 徐凯²

1. 洪雅县畜牧兽医局,四川洪雅 620360;
2. 内江市畜牧局,四川内江 641000

收稿日期:2012-08-06 出版日期:2013-03-20 发布日期:2013-03-19
通讯作者: 赵玲(1985-),女,四川人,硕士,主要从事传染病病原分子生物学方向的研究。E-mail:zhaoling196@126.com E-mail:zhaoling196@126.com
作者简介:何万平(1965-),男,四川人,大专,研究方向:传染病病原分子生物学。

Cloning and Sequence Analysis of Porcine Cytomegalovirus (PCMV) gB Gene from Sichuan

HE Wan-ping¹, ZHAO Ling¹, LIU Yan¹, LIU Yan¹, WU Yu-mei¹, XU Kai²

1. Hongya Animal Husbandry and Veterinary Bureau, Hongya 620360, China;
2. Neijiang Animal Husbandry Bureau, Neijiang 641000, China

Received:2012-08-06 Online:2013-03-20 Published:2013-03-19

摘要/Abstract

摘要： 根据GenBank中猪巨细胞病毒(porcine cytomegalovirus,PCMV)gB基因的核苷酸序列(GenBank登录号:FJ870563.1)设计1对引物,采用PCR方法从确诊为猪巨细胞病毒的阳性样品中扩增gB基因,将其克隆到pMD19-T载体上,转化DH5α感受态细胞,提取重组质粒T-PCMV-gB,经PCR和酶切鉴定后测序,并与GenBank上gB相应序列进行同源性分析。结果表明,该基因片段长度为2580 bp,与其他参考株gB基因的核苷酸同源性达98.0%～99.6%;其推导的氨基酸序列与人疱疹病毒6型和7型比较分析结果显示,其同源性分别为42.9%～43.6%和40.5%～40.6%。这些氨基酸差异对病毒生物学特性的影响有待于进一步研究。

关键词: 猪巨细胞病毒; gB基因; 克隆; 序列分析

Abstract: A pair of specific primers was designed according to the sequence of porcine cytomegalovirus (PCMV) gB gene(FJ870563.1) in GenBank. The gB gene was amplified from the final diagnosed PCMV samples by PCR,the amplified fragments was cloned into the pMD19-T vectors,and the positive recombinant T-PCMV-gB was sequenced. The results showed that the complete gene was consisted of 2580 bp.The results of homology analysis showed that gB gene shared 98.0% to 99.6% homology with reference gB sequence, and 42.9% to 43.6%,40.5% to 40.6% of amino acid homology with HHV-6 and HHV-7 respectively. The effects of isolates owing to these amino acid substitutions on biological characterization were unknown.

Key words: porcine cytomegalovirus; gB gene; cloning; sequence analysis

中图分类号:

何万平, 赵玲, 刘艳, 刘燕, 吴玉梅, 徐凯. 猪巨细胞病毒(PCMV)四川株gB基因的克隆与序列分析[J]. , 2013, 40(3): 80-83.

HE Wan-ping, ZHAO Ling, LIU Yan, LIU Yan, WU Yu-mei, XU Kai. Cloning and Sequence Analysis of Porcine Cytomegalovirus (PCMV) gB Gene from Sichuan[J]. , 2013, 40(3): 80-83.

参考文献

1 马超,陈勇,巩莉,等.人巨细胞病毒糖蛋白gB基因重组腺病毒载体的构建及包装[J].中国生物制品学杂志,2008(7):575～578.
2 罗满林.猪细胞巨化病毒感染研究[J].中国兽医杂志,2004,40(8):34～37.
3 熊毅,王常伟,陈磊,等.猪巨细胞病毒GX株gB基因的克隆与序列分析[J].动物医学进展,2008,29(5):21～24.
4 吴春涛,李艳梅.牛疱疹病毒Ⅰ型gB、gE基因的克隆及其杆状病毒表达载体的构建[J].中国畜牧兽医,2012,39(10):73～75.
5 斯特劳B E, 阿莱尔S D, 蒙加林W L,等.猪病学[M].第8版.北京:中国农业大学出版社,2000.
6 Andre L H,Lin L H.PCR assay for detecting porcine cytomegalovirus[J].Journal of Clinical Microbiology,1999,37(11):3767～3768.
7 Assaf R,Bouillant A M,Franco E D,et al.Enzyme linked immunosorbent assay (ELISA) for the detection of antibodies to porcine cytomegalovirus[J].Can J Comp Med,1982,46(2):183～185.
8 Booth J C,Goodwin R E,Whittlestone P.Inclusion-body rhinitis of pigs:Attempts to grow the causal agent in tissue cultures[J].Res Vet Sci,1967(8):338～345.
9 Britt W J,Mach M.Human cytomegalovirus glyeoproteins[J].Intervirology,1996,39(5～6):401～412.
10 Cameronstephen I D.Inclusion-body rhinitis of swine[J].Aust Vet J,1961,37:87～91.
11 Done J T.An"inclusion body"rhinitis of pigs[J].Vet Rec,1955,67:525～527.
12 Fryer J F, Griffiths P D, Fishman J A,et al.Quantitation of porcine cytomegalovirus in pig tissues by PCR[J].Journal of Clinical Microbiology,2001,3:1155～1156.
13 Mark R S,David I B,Murray P,et al. Lack of induction of autoantibody responses following immunization with cytomegalovirus (CMV) glycoprotein B (gB) in healthy CMV-seronegative subjects[J].Vaccine,2004,23:687～692.
14 Mitchell D K,Holmes S J,Burke R L,et al.Immunogenicity of a recombinant human cytomegalovirus gB vacdne in seronegative todders[J].Pediatr Infect Dis J,2002(21):133～138.
15 Plummer G.Cytomegalovirus of man and animal[J].Prog Med Virol,1973,15:92～125.
16 Shirai J,Narita M,Iijima Y.A cytomegalovirus isolation from swine testicle culture[J].Jpn J Vet Sci,1985,47:697～703.
17 Vasantha R,Tomoko T,Ken M,et al.Analysis of porcine cytomegalovirus DNA polymerase by consensus primer PCR[J].J Vet Med Sci,1999,61(11):1253～1255.
18 Watt R G,Plowright W,Sabo A,et al.A sensitive cell culure system for the virus of porcine inclusion body rhinitis (cytomegalic inclusion disease)[J].Res Vet Sci,1973,14:119～121.

[1]	焦琳琳, 成玉婷, 吴庆国, 吴双, 吴植, 朱善元, 钱莺娟. 鸭坦布苏病毒Capsid蛋白原核表达及多克隆抗体制备[J]. 中国畜牧兽医, 2023, 50(6): 2395-2402.
[2]	欧云文, 潘琴, 汪洋, 代军飞, 任绍科, 张洋, 张杰. 猪细小病毒6型ORF2基因的截短表达及多克隆抗体制备[J]. 中国畜牧兽医, 2023, 50(6): 2487-2495.
[3]	刘佳隆, 张译文, 张悦然, 孙奇娟, 陈建, 何雷, 贾艳艳, 丁轲, 余祖华. 鸡ELAVL1基因克隆、原核表达及生物信息学分析[J]. 中国畜牧兽医, 2023, 50(5): 1807-1817.
[4]	王雪平, 张孝俊, 李晓月, 王国栋, 张福良, 宋玉伟, 张明亮, 马磊. 高致病性禽腺病毒血清4型Hexon蛋白的原核表达及多克隆抗体的制备[J]. 中国畜牧兽医, 2023, 50(5): 2053-2060.
[5]	范冰峰, 李文, 刘理想, 赵向远, 邵静, 林乐丰, 孙慧敏, 张旭林, 许保增. 水貂AANAT基因克隆及生物信息学分析[J]. 中国畜牧兽医, 2023, 50(4): 1307-1318.
[6]	刘红润, 朱思燃, 奉玲丽, 张坤, 颜港, 王钰滨, 张帅, 江山, 许迪, 兰干球, 梁晶. 大白猪CDO1基因克隆、生物信息学分析及组织表达定位[J]. 中国畜牧兽医, 2023, 50(4): 1352-1363.
[7]	胡乐玉, 胡欣瑶, 李颖, 赵盛淼, 沈凤臻, 王长法, 李亮亮, 王彤彤, 任慧英. 德州驴HO-1基因生物信息学分析及多克隆抗体制备[J]. 中国畜牧兽医, 2023, 50(4): 1499-1510.
[8]	王文婕, 茹鹏辉, 郁川, 杜付熙, 陈松彪, 尚珂, 张春杰, 程相朝. 猫细小病毒洛阳分离株VP2蛋白原核表达及多克隆抗体制备[J]. 中国畜牧兽医, 2023, 50(4): 1511-1521.
[9]	张永杰, 隋志远, 张志帅, 王晨光, 李孝君, 邢凤. 多浪羊NPTX1基因克隆、生物信息学分析及在初情期的表达研究[J]. 中国畜牧兽医, 2023, 50(3): 1048-1058.
[10]	牛小杰, 徐明国, 肖莉, 刘文豪, 陈创夫, 王勇. 鸡白痢沙门氏菌IPAJ蛋白的表达纯化、多克隆抗体制备及ELISA方法的建立[J]. 中国畜牧兽医, 2023, 50(3): 1218-1228.
[11]	侯浩宇, 郑南南, 吴宏举, 陈寅龙, 李潮, 张昂克, 姬鹏超, 万博, 杜永坤, 张改平. 非洲猪瘟病毒p30蛋白单克隆抗体制备和鉴定[J]. 中国畜牧兽医, 2023, 50(3): 1241-1249.
[12]	韦义荣, 郑自华, 张叁保, 宋颖, 蒋海玉, 孙雯玥, 程鹏飞, 刘雨帆, 邹剑伟, 黄艳娜, 潘艳, 蒋钦杨. 努比亚山羊UCP1基因克隆、生物信息学分析及组织表达研究[J]. 中国畜牧兽医, 2023, 50(2): 440-450.
[13]	吕双飞, 马勋, 王静, 孔翠莲, 寇丽君, 刘彩霞, 史唯地, 康立超, 任慧杰. 炭疽芽孢杆菌PA-LF1融合蛋白的原核表达及其反应原性研究[J]. 中国畜牧兽医, 2023, 50(2): 674-683.
[14]	张梦杨, 何健, 刘阳坤, 姚伦广. 非洲猪瘟病毒p37蛋白生物信息学分析及其多克隆抗体制备[J]. 中国畜牧兽医, 2023, 50(1): 300-309.
[15]	朱丽霖, 王后坤, 陈雪阳, 刘晶, 梁雄燕, 方春, 杨玉莹. 鸡IFIT5对J亚群禽白血病病毒在DF-1细胞内复制的影响[J]. 中国畜牧兽医, 2023, 50(1): 310-316.