猪链球菌2型分解代谢控制蛋白A的克隆和原核表达

›› 2013, Vol. 40 ›› Issue (3): 7-10.

猪链球菌2型分解代谢控制蛋白A的克隆和原核表达

冉会玲^1,2, 郎需龙^2,3, 王兴龙^2,3, 张瑞², 钱晶¹, 陈思², 王秀然¹

1. 吉林农业大学动物科技学院,吉林长春 130118;
2. 军事医学科学院军事兽医研究所,吉林长春 130122;
3. 吉林省人兽共患病预防与控制重点实验室,吉林长春 130122

收稿日期:2012-09-27 出版日期:2013-03-20 发布日期:2013-03-19
通讯作者: 王兴龙(1959-),男,内蒙古人,博士生导师,研究员,从事兽医微生物学及免疫学研究。E-mail:wangxl-2006@163.com E-mail:wangxl-2006@163.com
作者简介:冉会玲(1986-),女,内蒙古人,硕士,研究方向:兽医微生物学及免疫学。
基金资助:
国家自然科学基金项目(31101790/C1803)。

Cloning and Prokaryotic Expression of ccpA gene of Streptococcus suis Type 2

RAN Hui-ling^1,2, LANG Xu-long^2,3, WANG Xing-long^2,3, ZHANG Rui², QIAN Jing¹, CHEN Si², WANG Xiu-ran¹

1. College of Animal Science and Technology, Jilin Agricultural University, Changchun 130118, China;
2. Institute of Military Veterinary, Academy of Military Medical Sciences, Changchun 130122, China;
3. Key Laboratory of Jilin Province for Zoonosis Prevention and Control, Changchun 130122, China

Received:2012-09-27 Online:2013-03-20 Published:2013-03-19

摘要/Abstract

摘要： 原核表达猪链球菌2型分解代谢控制蛋白A(catabolite control protein A,ccpA)并进行纯化,通过免疫印迹反应初步鉴定重组蛋白的抗原性和特异性。采用PCR方法,扩增ccpA基因序列,克隆至原核表达载体pET-28a中,转入大肠杆菌BL21中进行诱导、表达和亲和层析纯化;经Western blotting初步评价ccpA的抗原性。重组原核表达质粒pET-28a-ccpA经双酶切及测序证明构建正确;表达的重组蛋白相对分子质量约38000,能被相关抗体所识别。因此,能成功在大肠杆菌中表达猪链球菌2型ccpA,为猪链球菌2型相关调节蛋白的免疫学研究奠定基础。

关键词: 猪链球菌2型; ccpA基因; 原核表达

Abstract: To obtain recombinant ccpA of Streptococcus suis type 2 expressed in prokaryotic system and preliminaryly evaluate its antigenicity and specificity by Western blotting.ccpA gene was obtained by PCR and cloned into pET-28a vector,then transformed into Escherichia coli BL21 to induce,express and purify,the antigenicity of recombinant ccpA was identified by Western blotting. The double enzyme analysis and sequencing proved that recombinant plasmid pET-28a-ccpA was constructed correctly.The expressed recombinant protein,with a relative molecular mass of about 38000,was recognized by positive serum antibody.The ccpA of Streptococcus suis type 2 was successfully expressed in E.coli,which provided a material for development of serological diagnostic method for Streptococcus suis type 2.

Key words: Streptococcus suis type 2; ccpA gene; prokaryotic expression

中图分类号:

Q786

冉会玲, 郎需龙, 王兴龙, 张瑞, 钱晶, 陈思, 王秀然. 猪链球菌2型分解代谢控制蛋白A的克隆和原核表达[J]. , 2013, 40(3): 7-10.

RAN Hui-ling, LANG Xu-long, WANG Xing-long, ZHANG Rui, QIAN Jing, CHEN Si, WANG Xiu-ran. Cloning and Prokaryotic Expression of ccpA gene of Streptococcus suis Type 2[J]. , 2013, 40(3): 7-10.

[1]	焦琳琳, 成玉婷, 吴庆国, 吴双, 吴植, 朱善元, 钱莺娟. 鸭坦布苏病毒Capsid蛋白原核表达及多克隆抗体制备[J]. 中国畜牧兽医, 2023, 50(6): 2395-2402.
[2]	李灿, 李楚楚, 曾维, 张宁, 纪春晓, 陈韬. 猪RegⅢγ蛋白的重组表达及功能研究[J]. 中国畜牧兽医, 2023, 50(6): 2414-2426.
[3]	宋越, 苏胜杰, 张帆, 白帆, 戴伶俐, 王娜, 王大伟, 杨茜雯, 赵世华, 张月梅. 溶血性曼氏杆菌截短型白细胞毒素的原核表达及多克隆抗体制备[J]. 中国畜牧兽医, 2023, 50(6): 2479-2486.
[4]	张芳源, 蔺雅婷, 杨大为, 陈虎, 李桂梅, 单虎. 非洲猪瘟病毒P30蛋白原核表达及间接ELISA检测方法建立[J]. 中国畜牧兽医, 2023, 50(5): 2012-2022.
[5]	王雪平, 张孝俊, 李晓月, 王国栋, 张福良, 宋玉伟, 张明亮, 马磊. 高致病性禽腺病毒血清4型Hexon蛋白的原核表达及多克隆抗体的制备[J]. 中国畜牧兽医, 2023, 50(5): 2053-2060.
[6]	胡乐玉, 胡欣瑶, 李颖, 赵盛淼, 沈凤臻, 王长法, 李亮亮, 王彤彤, 任慧英. 德州驴HO-1基因生物信息学分析及多克隆抗体制备[J]. 中国畜牧兽医, 2023, 50(4): 1499-1510.
[7]	王文婕, 茹鹏辉, 郁川, 杜付熙, 陈松彪, 尚珂, 张春杰, 程相朝. 猫细小病毒洛阳分离株VP2蛋白原核表达及多克隆抗体制备[J]. 中国畜牧兽医, 2023, 50(4): 1511-1521.
[8]	刘家兴, 韩雪英, 张鑫茹, 邓嘉昕, 姚伦广, 刘阳坤. 携带猪流行性腹泻病毒抗原表位的铁蛋白纳米颗粒制备与免疫原性分析[J]. 中国畜牧兽医, 2023, 50(4): 1567-1574.
[9]	贾新月, 马静, 张艳艳, 马勋, 王正荣, 薄新文. 细粒棘球绦虫EGR-07243和EGR-07244基因生物信息学分析及原核表达[J]. 中国畜牧兽医, 2023, 50(3): 847-858.
[10]	章志涛, 李祥龙, 孔令丽, 罗雨昕, 王冬英. 大片形吸虫丝氨酸/苏氨酸蛋白磷酸酶2A的原核表达及不同时期表达水平分析[J]. 中国畜牧兽医, 2023, 50(3): 1107-1117.
[11]	甘露, 郑会珍, 诺明达来, 刘燕, 金敏, 何文文, 温丽翠, 李永畅, 巴音查汗·盖力克. 伊氏锥虫伊犁株扩繁及其PFR基因克隆表达和生物信息学分析[J]. 中国畜牧兽医, 2023, 50(2): 469-478.
[12]	吕双飞, 马勋, 王静, 孔翠莲, 寇丽君, 刘彩霞, 史唯地, 康立超, 任慧杰. 炭疽芽孢杆菌PA-LF1融合蛋白的原核表达及其反应原性研究[J]. 中国畜牧兽医, 2023, 50(2): 674-683.
[13]	张凯, 张春平, 戈胜强, 孙春喜, 程杰, 伏春雨, 王刚, 牛星, 彭军. 非洲猪瘟病毒p22蛋白表达、多克隆抗体制备及间接ELISA方法的建立[J]. 中国畜牧兽医, 2023, 50(1): 270-279.
[14]	朱丽霖, 王后坤, 陈雪阳, 刘晶, 梁雄燕, 方春, 杨玉莹. 鸡IFIT5对J亚群禽白血病病毒在DF-1细胞内复制的影响[J]. 中国畜牧兽医, 2023, 50(1): 310-316.
[15]	王宇琛, 田广原, 周雅坪, 郭婷, 赵红梅, 孙雅婕, 赵逢淼, 卞宇晨, 于佳梁, 郝永清. BPIV3 NP蛋白的原核表达及其对BPIV3灭活疫苗免疫增强作用的研究[J]. 中国畜牧兽医, 2022, 49(8): 3122-3130.