发展方向决定兴衰存亡。我国奶业经历了30年的快速发展,取得了巨大成就,但是也正在面临发展新方向的抉择。这个新方向就是发展优质乳,需要明确提出"一杯优质牛奶振兴一个民族"的理念。我国有关奶业科研团队,经过近20年的艰苦探索和协同创新,已经形成了适合国情的"优质乳生产的奶牛营养调控与规范化饲养技术"成果并示范应用,示范结果表明,在奶牛生产中使蛋白质饲料利用效率提高8%~15%,乳脂率和乳蛋白率分别达到3.5%和3.1%,牛奶体细胞数低于40万个,细菌总数低于10万CFU/mL,完全达到国际上优质乳的营养品质和卫生安全水平。如何从国家政策的战略设计上进一步明确优质乳的发展方向,积极组织推广优质乳科技成果,大力发展和弘扬优质、健康、向上的奶业文化,应该引起重视。

牛奶中污染物如重金属等对人体健康存在很大隐患,因而受到广泛关注。作者对不同国家、国际组织牛奶中污染物限量数量、限量值和种类及检测方法进行比较,针对各地区的牛奶中污染物风险监测事例与模式进行分析,以期对中国牛奶质量安全风险监测提供参考依据。

试验旨在了解角蛋白5(keratin 5, K5)可能的调控序列。本研究根据UCSC公布的牛K5基因5'侧翼区设计PCR引物,扩增了内蒙古绒山羊K5基因部分启动子序列。通过产物纯化、连接、转化,并对测序结果进行了生物信息学分析。结果扩增得到内蒙古绒山羊K5基因启动子序列长度为1452 bp(GenBank登录号为:JQ277735),与牛和人相应序列的相似性分别为91.5%和74%。转录起始位点位于翻译起始密码子ATG上游－101 bp位置;含有两个TATA 盒,分别位于翻译起始位点上游－129—－124 bp(ATAAAA)和－178—－174 bp(TTAAT)位置;通过在线分析软件预测发现(按5'→3')SRY,MZF1,v-Myb,SRY,AP-1,CDP CR,HNF-4,AML-1a,HSF2,AP-4,AP2,AP2,Sp1,Nkx-2,Sp1和GATA-1转录因子结合位点。其中,转录因子SRY(TGTGTTT),和CDP CR(GATTGATGGC)是绒山羊特有的;转录因子HNF-4,AML-1a,HSF2,AP-4,AP2,Sp1,Nkx-2和GATA-1(AGCCATCATG)在绒山羊、牛和人K5启动子上的结合位点高度保守。两个最小增强子分别位于翻译起始位点ATG上游－140—－91 bp和－114—－67 bp位置,含有24 bp(GCGGCTCCCAGGTAACAGAGCCGC)重叠区,预测其与绒山羊K5基因的转录调控有关。试验确定了内蒙古绒山羊K5基因启动子的转录起始位置、转录因子结合位点及最小增强子序列,为进一步研究绒山羊K5基因的表达调控机制奠定了理论基础。

本研究应用噬菌体抗体库技术筛选禽流感亚型病毒Fab抗体,并建立相应ELISA检测方法。用禽流感亚型混合疫苗免疫小鼠,取其脾脏提取总RNA用于扩增免疫球蛋白轻链和重链基因,克隆至噬菌粒pComb3,然后转化入感受态细胞XL1-Blue中,以10¹² CFU辅助噬菌体VCSM13进行感染后,获得Fab抗体库容量为8×10⁷ CFU。以H5N1病毒为抗原进行4轮亲和筛选,获得特异性结合的克隆,利用获得的特异性克隆进行ELISA检测方法的建立。

为了建立以GAPDH基因为参照的半定量RT-PCR检测方法,根据PRRSV VR2332株病毒基因组和GAPDH序列设计4对特异性引物,分别扩增GP5、M、N和GAPDH基因序列,将shRNA表达质粒和GP5、M、N真核表达质粒共转染HEK293A细胞,应用该法检测了转染孔中GP5、M、N的相对表达量。同管和分管扩增法均建立了以GAPDH基因为参照的半定量RT-PCR检测方法。靶向GP5、M和N蛋白基因的shRNA表达质粒对其各自蛋白的抑制率为36%~69%,其中pSi-N3和pSi-G1抑制效果最为显著。结果表明,建立的半定量RT-PCR可以用于PRRSV主要结构蛋白基因表达水平的检测分析中。

本试验对伪狂犬病病毒SL株(四川分离株)TK基因进行克隆,并对TK基因的同源性、遗传进化树、密码子偏嗜性、氨基酸结构及亲疏水性、跨膜区、信号肽进行了分析。结果显示,本研究成功克隆了PRV SL株TK全基因,其编码区长963 bp,编码320个氨基酸残基,与其他PRV分离株核苷酸序列同源性超过99.3%,编码的多肽链中疏水区域大于亲水区域,不含跨膜区及信号肽,不存在于病毒囊膜。

采用超细型和细型细毛羊皮肤组织为试验材料,以18S rRNA、β-actin、GAPDH等基因为内参,角蛋白26(keratin 26,KRT26)为目的基因,建立了基于SYBR Green Ⅰ染料技术的Real-time PCR检测体系,并分析KRT26基因在不同细度绵羊皮肤组织中的表达差异。结果表明,以cDNA为模板建立的标准曲线循环阈值(Ct)与标准cDNA模板在一定浓度范围内呈良好的线性关系,当以18S rRNA、β-actin、GAPDH作为内参基因时,KRT26基因在超细型细毛羊皮肤组织中的表达水平是细型细毛羊皮肤组织中的1.5倍。初步确定KRT26基因与毛细度具有相关性,这将为进一步研究分子育种和绵羊毛纤维细度性状的改良提供依据。

本研究为了建立一套检测非洲猪瘟病毒(African swine fever virus,ASFV)的实时荧光定量PCR检测方法,根据GenBank公布的23株编码ASFV结构蛋白p72的基因序列,设计引物和探针,优化退火温度、Mg^2＋浓度和引物、探针浓度,生成标准曲线,进行重复性、敏感性、特异性试验,并检测样品。结果显示,优化的退火温度为60 ℃,Mg^2＋终浓度为4 mmol/L,引物、探针终浓度分别为0.8、0.3 μmol/L。重复性试验变异系数均小于1.3%,敏感性试验最低能够检测到10拷贝/μL的质粒,以其他5种猪病病毒和ASFV质粒为模板进行特异性试验,只有ASFV质粒出现扩增曲线。结果表明,建立的实时荧光定量PCR方法是快速、灵敏、特异的检测ASFV的方法。

本研究以猪圆环病毒2型(PCV2)核衣壳蛋白ORF2基因为目的基因,设计合成特异性引物和探针。PCR扩增得到目的基因,并克隆到pMD18-T载体,筛选得到标准阳性质粒。通过对荧光定量PCR反应条件的优化,建立了PCV2的TaqMan实时荧光定量PCR检测方法。试验结果表明,该方法特异性强,对猪伪狂犬病病毒(PRV)、猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)、猪瘟病毒(CSFV)等猪常见病原的检测结果均为阴性;与普通PCR方法相比,其敏感性高出100倍,可达100拷贝/μL;对临床样品的检测证明,该方法可有效检测出淋巴结、肺脏等组织中的PCV2。

经生物学软件DNAStar分析,参照已发表的禽流感病毒(avian influenza virus,AIV)(H5N1)基因组序列,设计合成1对特异性引物,RT-PCR扩增了长约750 bp的M1基因片段,将目的片段定向克隆至pET30a表达载体,经酶切及测序鉴定正确后转化BL21表达菌,经IPTG诱导获得以包涵体形式表达的重组蛋白。将重组蛋白变性、纯化和复性后,BCA法测定纯化蛋白的浓度为0.656 mg/mL,免疫印迹检测结果表明,纯化的重组蛋白具有良好的反应活性。将纯化蛋白免疫BALB/c小鼠,间接ELISA检测结果表明,重组蛋白可产生抗M1蛋白特异性抗体,具有良好的免疫原性。本研究成功表达了流感病毒H5N1的基质蛋白M1,且重组蛋白具有良好的免疫原性,为进一步研制H5N1亚型流感病毒诊断试剂及基因工程疫苗奠定基础。

试验旨在构建微小隐孢子虫表面抗原CP15基因原核表达载体并获得重组CP15蛋白。试验以已知重组质粒pMD-CP15为模板,PCR方法扩增出CP15基因片段,并亚克隆到pGEX4T-3,构建了在E.coli BL21中GST融合表达载体pGEX-CP15;经1 mmol/L IPTG进行诱导表达获得目的蛋白,其大小采用SDS-PAGE电泳和Western blotting进行鉴定。结果表明,扩增出约390 bp的微小隐孢子虫表面抗原CP15基因片段并成功构建pGEX-CP15质粒,表达出分子质量为42 ku的融合蛋白,与推导的理论值相符。Western blotting显示该蛋白能被GST血清识别。牛微小隐孢子虫表面抗原CP15基因在大肠杆菌中得到了高效表达。

根据GenBank中发表的犬瘟热病毒Onderstepoort株融合蛋白基因(F)序列设计两对特异性引物,采用RT-PCR扩增犬瘟热病毒贵州分离株(CDV-GZ1)的F基因,并进行克隆与序列分析。结果显示,CDV-GZ1株F基因的ORF全长1989 bp,氨基酸序列中具有5个潜在N-糖基化位点,氨基酸同源性与美国00-2601株和国内HL株较高,分别为91.6%和91.1%,表明该分离株与00-2601株和HL株具有较近的亲缘关系。

为了研究EP0蛋白在伪狂犬病毒粒子中的定位及其功能,试验利用PCR从伪狂犬病毒基因组中扩增PRV EP0基因的编码区,克隆至pMD18-T载体,构建重组质粒pMD-EP0。经测序鉴定正确后,用EcoRⅠ和Hind Ⅲ双酶切pMD-EP0,回收EP0基因与经同样双酶切处理的pET-32a(+)进行连接,构建重组质粒pET-EP0。将pET-EP0转化大肠杆菌BL21(DE3),经IPTG诱导后,通过SDS-PAGE和Western blotting检测融合蛋白的表达情况及反应原性。结果表明,成功扩增得到EP0基因编码区序列,大小为1227 bp;重组表达质粒 pET-EP0经诱导后,EP0融合蛋白获得了表达,大小约为75 ku,主要以包涵体形式存在,且能与伪狂犬病毒阳性血清反应。

从广东地区疑似患有新城疫的病死雏番鸭群中分离到1株新城疫病毒,命名为GD1002株。毒力测定结果表明,致死鸡胚平均死亡时间(MDT)、1日龄雏鸡脑内接种致病指数(ICPI)、6周龄鸡静脉接种致病指数(IVPI)分别为56.0 h、1.64、2.29,符合强毒株的毒力判断标准。利用RT-PCR扩增了该分离株F基因的主要功能区片段,并进行了克隆与序列分析。该分离株F蛋白裂解位点的组成为¹¹²R-R-Q-R-R-F¹¹⁷,具有典型新城疫强毒株的分子特征。F基因第47-420 nt片段基因分型分析表明,该流行株属于基因Ⅸ型。相似性及遗传进化分析结果表明,该分离株与基因Ⅸ型毒株F₄₈E₉、JS/1/97/Ch和FJ/1/85/Ch株有较高同源性和较近的亲缘关系。

本研究为证明荷斯坦奶牛乳腺β-防御素的表达,扩增出6种β-防御素序列进行氨基酸分析,结果发现,扩增的6个保守的半胱氨酸,其核酸序列与NCBI数据库序列进行BLAST比对,结果LAP、BNBD4同源性100%,BNBD5为99.6%,EBD为99.5%, BNBD7、TAP为98.5%;实时荧光定量PCR检测6种防御素的mRNA水平的表达,它们之间的表达量都有显著性差异(BNBD4与BNBD5除外),其中LAP表达量最多,BNBD7,EBD,BNBD5,BNBD4次之,TAP的表达量最低。

为研制鹿慢性消耗性疾病(chronic wasting disease,CWD)单克隆抗体,本研究以原核表达后经纯化的麋鹿重组成熟朊蛋白(PrP^c)为免疫原免疫PrP^c基因敲除小鼠(PrP^c-null mice)。两次加强免疫后,利用淋巴细胞杂交瘤技术,取脾细胞与SP2/0骨髓瘤细胞进行细胞融合,间接ELISA方法筛选阳性杂交瘤细胞,采用3次有限稀释法实现杂交瘤细胞的亚克隆,筛选出5株能稳定分泌针对麋鹿重组成熟朊蛋白特异性单克隆杭体(McAbs)的杂交瘤细胞株5A5、3B2、6D12、5E3、1F5,其腹水ELISA效价均达到1∶10000以上。经鉴定,5株单抗均为IgG抗体,5A5、6D12、5E3株为IgG1亚类,3B2、1F5株为IgG2a亚类。Western blotting鉴定结果表明,获得的McAbs均能特异性识别麋鹿重组成熟朊蛋白和健康麋鹿脑组织匀浆中的PrP^c。本研究制备了CWD腹水McAbs,同时也为CWD的研究及其诊断方法的建立奠定了基础。

为建立羊痘病毒(CaPV)的环介导等温扩增(LAMP)检测方法,本研究根据GenBank中羊痘病毒的保守基因序列,设计出针对羊痘病毒的LAMP引物,利用LAMP Real Time Turbidimeter LA-320仪优化得到病毒核酸等温扩增最佳条件是62 ℃恒温反应60 min。在此条件下,病毒核酸的最低检测含量为3.1×10^-2 pg/μL,灵敏度比OIE推荐的PCR方法高10⁴倍。添加钙黄绿素(calcein)建立的目测法,还可实现对上述病原体检测结果肉眼观察。本研究获得的CaPV LAMP仪器法和目测法可特异性地扩增羊痘病毒属的山羊痘病毒、绵羊痘病毒及牛疙瘩皮肤病病毒核酸,具有反应快速、特异性强、灵敏度高、操作简便、设备要求低等特点。

犬瘟热是由犬瘟热病毒引起的犬科烈性传染病,给患病动物带来重大危害。本研究基于犬瘟热病毒的NP蛋白基因设计特异性引物,利用RT-PCR获得287 bp目的片段,经TA克隆并测序。结果表明,该片段与NCBI上公布的犬瘟热病毒NP序列(登录号:EU716322)同源性达到98%。利用该特异性的RT-PCR方法,检测杭州市及周边部分地区犬瘟热的流行情况,结果表明,整个杭州及周边地区犬瘟热病毒总阳性检出率为6.7%,杭州城区阳性个体数最多,阳性率最高达到18.8%,其他地方(临安、台州、舟山)阳性率较低。该研究为犬瘟热的综合防制提供基础数据。

根据GenBank已公布的狂犬病病毒(rabies virus,RV)核蛋白(N)基因序列设计并合成一对特异性的引物和探针,建立基于TaqMan探针的荧光RT-PCR检测狂犬病病毒方法。对狂犬病疫苗提取核酸后进行RT-PCR扩增,将目的条带切胶回收,克隆测序,重组质粒作为标准阳性对照。对建立的TaqMan探针荧光RT-PCR方法做灵敏度、特异性、重复性及稳定性试验。结果显示,该方法可以达到10拷贝/μL的灵敏度,可以将狂犬病病毒与犬瘟热病毒、犬细小病毒、犬腺病毒、犬冠状病毒和犬副流感病毒分开,方法重复性好,稳定可靠。

DNA甲基化是一种主要的表观遗传修饰,是调节基因表达的重要手段。作者在介绍了DNA甲基化机制、DNA甲基化的模式、DNA甲基化特点的基础上,重点论述了DNA甲基化发育分化、X染色体失活、基因组印记和杂种优势等方面的作用。

本试验旨在表达猪源戊型肝炎病毒(sHEV)ORF2部分基因片段,纯化表达产物并进行抗原性分析。以sHEV的cDNA为模板,PCR扩增ORF2基因片段,构建重组质粒pET32a-dORF2,转化表达菌BL21,IPTG诱导,SDS-PAGE凝胶电泳和Western blotting进行检测。试验结果表明,获得60 ku的目的蛋白,该蛋白具有良好的抗原性,主要以可溶性形式存在。

以日本进境的冻太平洋鳕鱼体内分离出的异尖科线虫为研究对象,采用寄生虫通用引物NC5和NC2扩增其核糖体DNA(rDNA)的内转录间隔区(ITS)序列,进行克隆、转化、测序和序列分析,并对样品进行分子鉴定。结果表明,扩增的异尖科线虫样品的ITS序列片段大小为906 bp,包含部分的18S、28S及全部的ITS1(353 bp)、5.8S(157 bp)和ITS2(299 bp)序列,ITS1和ITS2序列与GenBank登录的伪新地蛔线虫(Pseudoterranova decipiens)同源性均为在99.7%以上,与其他线虫的相似性较低。由ITS1和ITS2序列构建的系统进化树可知,从鳕鱼中分离到的线虫ITS1和ITS2均与伪新地蛔线虫处于同一分支。本研究结果为异尖科线虫种属的确定及进一步的分子生物学研究奠定基础。

本研究旨在了解新疆巴氏拜羊类泛素蛋白ISG15基因的序列特征。采集巴什拜羊外周血液,从中分离得到淋巴细胞并提取RNA,设计特异性引物进行RT-PCR,克隆出巴什拜羊ISG15基因序列,回收PCR产物与pMD18-T载体连接后转化DH5α,检测阳性克隆、测序并进行序列分析。结果表明,克隆的巴什拜羊ISG15基因编码区全长为522 bp,编码172个氨基酸。BLAST结果表明,巴什拜羊ISG15基因与绵羊、山羊、小尾寒羊、水牛、牛和野猪的ISG15基因序列同源性分别为99%、98%、95%、94%、94%和82%。构建基因进化树分析结果显示,巴什拜羊与绵羊先聚为一类,再与小尾寒羊聚为一类,然后和牛聚为一类。该聚类结果与生物学上的分类一致。

试验旨在筛选出最优的包膜丁酸钠组方及最佳添加剂量,采用单因素完全随机分组试验设计,将48头断奶小香猪随机分为3组,每组16头。试验分对照组、试验1组(基础日粮+300 mg/kg包膜丁酸钠)、试验2组(基础日粮+500 mg/kg包膜丁酸钠),研究了包膜丁酸钠对断奶香猪抗腹泻促生长及血液生化指标的影响。结果表明,与对照组相比,包膜丁酸钠可显著提高断奶香猪的料重比(P<0.05),降低断奶仔猪的腹泻率(P<0.05)。白蛋白/球蛋白、IgG和碱性磷酸酶都随日粮中包膜丁酸钠添加量的增加呈现增高的趋势;且日粮中300 mg/kg的添加量饲喂效果优于500 mg/kg的添加量。

研究添加不同比例山梨酸对王草青贮发酵品质及营养成分的影响,以确定其适宜的添加量。试验设对照组和5个不同添加比例处理组,添加量分别为0.05%、0.1%、0.15%、0.2%、0.25%。结果表明,添加山梨酸能显著降低青贮饲料pH (P<0.05),提高乙酸、丙酸和总酸含量(P<0.05),添加高于0.1%的山梨酸能显著提高乳酸含量(P<0.05);添加山梨酸能显著提高粗蛋白质(CP)含量(P<0.05),但对干物质(DM)、中性洗涤纤维(NDF)、酸性洗涤纤维(ADF)和可溶性碳水化合物(WSC)含量无显著影响(P>0.05)。因此,从改善王草青贮发酵品质和营养价值综合考虑,王草青贮时添加高于0.15%的山梨酸效果较好。

本试验选用硫酸锌和蛋氨酸螯合锌两种锌源,在日粮添加60 mg/kg硫酸锌、蛋氨酸螯合锌为0、15、30、45、60、75 mg/kg 水平下,对比研究了不同锌水平对育成期雄性水貂营养物质消化率、氮代谢和血清生化指标的影响。结果表明,育成期雄性水貂日粮中添加15 mg/kg的蛋氨酸螯合锌时,水貂采食量和蛋白质消化率较高(P<0.05)。日粮中添加锌水平对水貂干物质消化率、脂肪消化率、氮代谢、生长性能和血清尿素氮、血清乳酸脱氢酶活性没有显著性影响(P>0.05)。

研究在28日龄断奶仔猪日粮中添加芽孢杆菌、低聚果糖制剂对其生长性能及血清IgA、IgG、CD4、CD8、猪瘟抗体水平等指标的影响。选择28日龄断奶仔猪(杜×长×大)80 头,分4组,每组4个重复,每重复5头猪,进行为期28 d的饲养试验;处理组分别饲喂基础日粮、基础日粮+0.1%芽孢杆菌制剂、基础日粮+0.4%低聚果糖和基础日粮+0.1%芽孢杆菌制剂+0.4%低聚果糖制剂。结果表明,低聚果糖、芽孢杆菌制剂均能显著提高断奶仔猪日增重、饲料转化率和降低腹泻率(P<0.05);低聚果糖、芽孢杆菌制剂能显著提高断奶仔猪猪瘟抗体水平、血清IgA、IgG水平(P<0.05),但对CD4、CD8指标影响不大。

本试验旨在探讨玉米加工利用的适宜方法,以提高玉米的利用效率。选用120头利木赞杂交阉牛(590 kg±10 kg),随机分为4组,分别饲喂蒸汽压片(A)、粉碎后过七目筛(B)、十目筛(C)和十四目筛(D)的玉米型日粮,研究日粮玉米不同加工方法对阉牛育肥性能的影响。结果表明,玉米不同加工方式对肉牛的生产性能和大多数胴体指标都没有显著影响(P＞0.05)。蒸汽压片玉米组的胴体产肉率高于十目筛组,骨重低于十目筛组(P<0.05)。十四目筛组的高档肉块比例和上脑重显著高于其它3个处理组,牛柳重显著低于其它处理组,七目筛组西冷重高于十目筛组(P<0.05)。养殖效益则以十目筛组阉牛最高。

本试验以准备配种期日粮蛋白质水平对水貂营养物质消化率及氮代谢的影响为研究目的,选择经产适龄母貂180只,随机分成6组,每组30个重复,每个重复1只水貂。6组水貂分别饲喂蛋白质水平为28.59%(Ⅰ组)、32.31%(Ⅱ组)、36.21%(Ⅲ组)、40.35%(Ⅳ组)的鲜料试验日粮和32.66%(Ⅴ组)、40.47%(Ⅵ组)的配合干粉料试验日粮。预试期7 d,正试期44 d。结果表明,配合干粉料饲喂组采食量普遍低于鲜料饲喂组,部分组间出现显著性差异(P＜0.05)。在干物质、蛋白质和脂肪消化率方面,部分组间出现差异显著性(P＜0.05)。随着日粮蛋白质水平的提高,食入氮、粪氮、尿氮、氮沉积增加,净蛋白质利用率及蛋白质生物学价值的差异不显著(P＞0.05),但蛋白质水平达到一定程度时,氮沉积、净蛋白质利用率及蛋白质生物学价值有下降的趋势。干料组在多数指标中均显著或极显著低于鲜料组(P＜0.05或P＜0.01)。由此得出,日粮蛋白质水平达到32.31%、36.21%鲜料时, 各种营养物质消化率较为理想,但考虑到饲料成本和准备配种期以调节体况为主的特殊性,建议在准备配种期使用蛋白质水平为32.31%鲜料日粮,不推荐使用配合干粉料饲喂准备配种期雌性水貂。

试验旨在探讨不同酸性洗涤纤维(acid detergent fibre,ADF)水平对2岁新西兰种公兔精液品质、血清生化指标和生殖激素的影响。选用2岁龄种公兔80只,按体重随机分成4组,每组20个重复,每个重复1只,分别饲喂ADF水平为13%、16%、19%、22%的日粮。结果表明, ADF水平对试验兔射精量和精液品质影响差异显著(P<0.05), 试验3组射精量显著高于试验1、2组(P<0.05),试验3、4组精液密度显著高于试验1、2组(P<0.05),试验3组精子活力显著高于其它3组(P<0.05);ADF水平对试验兔血清总蛋白和总胆固醇影响差异显著(P<0.05),试验2、3组总蛋白显著高于试验1组(P<0.05),试验1组胆固醇显著高于其它组(P<0.05);ADF水平对试验兔生殖激素含量影响显著(P<0.05),试验2组促黄体素、睾酮和雌二醇显著高于其它3组(P<0.05),试验2组促卵泡素显著高于试验1、4组(P<0.05)。因此,2岁新西兰种公兔适宜的ADF 水平应为16%~19%,甚至可以提高到22%。

作者从牛磺酸的分布、合成途径、生物学功能及其在鱼类营养上的应用与研究进展作了系统的概述,为进一步研究牛磺酸作为鱼类饲料添加剂提供帮助。

信号通路JAK-STAT参与机体多种调节反应,在细胞因子等与其相应受体结合后激活JAK激酶,进一步活化其下游信号蛋白分子STAT,导致STAT同源或异源二聚体化,随后二聚体蛋白移位核内,与相应的靶基因启动子结合,控制目的蛋白的表达,对机体的调控起着重要作用。

为探讨原代Wistar大鼠海马神经细胞的体外培养方法,本研究取新生24 h内的Wistar大鼠海马组织,无菌剪碎后采用胰酶消化法分离细胞,用含20%胎牛血清的DMEM/F12培养基培养,逐日在倒置相差显微镜下观察。结果发现,从海马组织中分离出的神经细胞具有增殖能力,细胞对数生长期为2~8 d,最长培养30 d;细胞经免疫荧光鉴定Nestin表达呈阳性;免疫组织化学结果显示,在传代培养细胞的胞体和突起均有NF阳性标记物,GFAP抗体和CD68抗体显色均为阴性。由此可见,分离培养的细胞是具有自我更新增殖和多分化潜能的神经元细胞。

长链脂酰CoA合成酶(long-chain acyl-CoA synthetase,ACSL)属于多基因家族编码的酶,在体内催化合成脂酰CoA是哺乳动物利用脂肪酸的第一步反应,因此ACSL在脂肪代谢中起着重要作用。作者从ACSL家族的命名和分类、ACSL基因表达对脂肪代谢的影响、不同ACSL对底物的选择性、转录调控因子对ACSL的调控及当前家畜ACSL的相关研究进展等方面进行了综述,并对今后ACSL研究的重点及意义进行了展望。

半乳糖凝集素1(Galectin-1)是一种分子质量约为14 ku的β-糖结合蛋白,是动物凝集素家族的成员之一。作为多种癌症的诊断指标,治疗癌症的新突破口,对Galectin-1的研究备受关注。此外,Galectin-1分布广泛,与多种正常生物功能相关,如细胞生长、神经修复、血管再生、软骨形成等。现阶段,关于Galectin-1在鹿茸再生中的研究很少,但鹿茸再生中许多过程与Galectin-1的功能高度相关。与肿瘤同样高速生长且高表达Galectin-1的鹿茸组织并不发生癌变,这可能对癌症的研究有所启发。为了寻找治疗癌症的新方法,解释鹿茸再生机制,了解Galectin-1蛋白在肿瘤和鹿茸中的功能研究进展至关重要,文章就其进行了综述。

为了探讨犬卵巢组织结构和生殖周期阶段的相关性,试验对犬不同生殖周期阶段卵巢的外观形态和组织结构进行观察。结果表明,犬卵泡期、黄体期和乏情期卵巢体积分别为812.63、1081.80和446.03 mm³,黄体期高于卵泡期和乏情期(P＜0.05),卵泡期高于乏情期(P＜0.05);卵泡期、黄体期和乏情期卵巢质量分别为0.89、1.14和0.71 g,卵泡期低于黄体期且高于乏情期,但3者之间不存在显著性差异(P＞0.05);卵泡期卵巢中可见较多次级卵泡和少量成熟卵泡,黄体期卵巢中可见部分次级卵泡和闭锁卵泡,并有大量黄体存在,乏情期卵巢中卵泡类型主要以原始卵泡为主。可见,犬卵巢形态及组织结构与所处生殖周期阶段有关。

在欧洲马品种中,黑色素皮质激素受体1(melanocortin receptor 1,MC1R)基因第248位碱基有C/T多态性,纯合的T248位点决定欧洲马的栗毛色。针对MC1R基因的248位点设计了2对特异性引物,采用等位基因特异性PCR技术,研究3个中国马品种MC1R基因型与栗色毛之间的关系。经扩增获得两种DNA片段,克隆测序后证明,扩增片段确为MC1R基因,两种DNA片段序列在基因的248位点的确呈现C/T多态性,但检测126份贵州矮马、西南马和新疆伊犁马血液样本,全部为杂合基因型(Ee),其中包括栗毛、黑毛、骝毛3种单毛色及3种复毛色。这些研究结果提示,MC1R基因中248位点的多态性与国内3个马品种的栗色毛之间没有直接的相关性。

对鲁西斗鸡的体尺、体重和屠宰3组14个性状进行测定,并对这些变量进行了典型性相关分析。结果表明,体尺指标(胸深、胸宽、胫长、体斜长、龙骨长)间的相关系数为0.682~0.767;体重性状(初生重、180日龄重、日增重)间的相关系数为0.306~0.935,屠宰性能(胴体重、屠宰率、半净膛重、半净膛率、全净膛重,全净膛率)各项指标间高度相关,相关系数为0.945~0.986。体重性状和体尺性状间、体重性状与屠宰性状间及体尺性状与屠宰性状间的第一个典型相关系数差异极显著,其典型相关系数分别为0.705、0.560和0.878,贡献率分别为0.979、0.984和0.820。

本试验对多拉菌素浇泼剂在犬血浆中的药代动力学进行了研究。犬背部皮肤一次浇注多拉菌素浇泼剂(0.1 mg/kg体重),给药后,不同时间点从犬前肢静脉采血。以高效液相色谱法对血浆中药物浓度进行测定,血浆药物浓度—时间数据用WinNonlin 5.2.1的非房室模型药动软件处理。给药后的主要药物动力学参数为:t1/2β为(2.14±0.56)d,T_max为(1.00±0.00) d,C_max为(24.38±4.82) ng/mL,AUC为(89.79±16.90)ng/(d·mL)。提示多拉菌素浇泼剂在犬体内血药浓度维持的时间较长,消除缓慢。

Ⅲ型分泌系统(Typr Ⅲ secretion system,T3SS)是一种将细菌蛋白通过膜屏障注入宿主细胞的装置,Ⅲ型分泌系统(T3SS)是肠出血性大肠杆菌定植反刍动物储存宿主所必需的,也是引起人致病的重要原因之一。E. coli 注射蛋白质进入上皮细胞使得细菌可以黏附并且促使其长时间定植在动物体内。在此,对关于EHEC Ⅲ型分泌系统调控的研究近况、效应蛋白表达的共调控进行了综述。

本试验旨在鉴定一株从肉鸡体内分离的广谱耐药菌,并从分子生物学角度对该株细菌的耐药机理进行探讨。根据《常见细菌系统鉴定手册》标准对该菌进行培养特性、生化试验鉴定,设计1对16S rDNA通用引物扩增其16S rDNA并测序鉴定;根据该菌的药物敏感性试验结果设计了12对引物扩增其基因组上耐药基因。细菌培养特性和生化试验结果显示该菌为一株肠球菌,PCR扩增出大小为1465 bp的目的片段,药敏试验显示该株细菌耐受多种抗生素,PCR扩增其耐药基因发现存在ant(6)-iv、OXA-10、tetM、CTX-M-1、TEM基因。最终鉴定该株细菌为一株肠球菌,耐药基因的存在是其产生耐药性的原因之一。

猪链球菌是一种重要的人畜共患病病原,对猪链球菌进行快速而特异性地检测,具有重要的流行病学意义和临床应用价值。文章分别对猪链球菌免疫学检测方法与分子生物学检测方法进行了阐述,并对未来的研究方向进行了展望。

本研究旨在制备猪传染性胃肠炎病毒和猪流行性腹泻病毒高免卵黄抗体,研究其治疗效果。以猪传染性胃肠炎和猪流行性腹泻二联灭活苗免疫产蛋鸡,琼脂扩散方法检测抗体效价达到1∶64时,收集卵黄,采用氯仿抽提和硫酸铵盐析法纯化卵黄抗体,进行微生物学检测、安全性试验,通过人工感染治疗试验和临床应用,观察其治疗效果。结果人工感染治愈率为100%,临床应用治愈率为88.0%,表明制备的卵黄抗体对猪传染性胃肠炎和流行性腹泻具有显著的治疗效果。

本研究从福建省某养殖场病兔分离到3株革兰氏阳性球菌,并对其进行了16S rRNA扩增、生化反应、药敏试验等检测,结果显示该病原菌为金黄色葡萄球菌。

绵羊痘是由绵羊痘病毒引起绵羊的疾病,其特征为发热、全身皮肤痘疹,内脏(特别是肺脏)黏膜结节,是危害养羊业最为严重的传染病之一。该病经常引起绵羊的大批感染或死亡,病死率可达50%以上,羔羊可达100%,不仅给养羊业带来巨大的经济损失,还严重阻碍了养羊业的发展。文章针对2011年1月份新疆某地区部分养羊户饲养的卡拉库尔羊发生的羊痘疫情进行了流行病学调查、临床症状、病理变化观察和实验室诊断,结果确诊为绵羊痘。

本研究选取猪流感病毒(swine influenza virus,SIV)的NP基因序列设计引物和探针,建立了检测SIV的TaqMan实时荧光定量PCR方法。以梯度稀释的含有SIV目的扩增片段的质粒作为标准品,进行定量PCR反应以确定检测灵敏度。2.0×10⁸至2.0×10²拷贝/μL 7个数量级的范围内定量PCR有"S"型扩增曲线,检测灵敏度为20个拷贝/μL。根据病毒拷贝数与Ct值的关系绘制了标准曲线。该方法具有特异性,对猪瘟病毒、伪狂犬病病毒、口蹄疫病毒和猪繁殖与呼吸综合征病毒核酸都没有扩增反应。本研究建立的实时定量PCR方法,灵敏度高、特异性好,可以进行定量分析,在猪流感的快速检测上具有重要意义。

简单异尖线虫广泛存在于海洋动物并呈全球性分布,人因食用含有该线虫幼虫的生鱼或未煮熟的鱼产品而发生感染,其所引起的临床症状与虫体在消化道所处位置相关,主要引起肠黏膜水肿等过敏性症状。文章综述了该症流行病学、病理变化、症状、诊断、抗原、过敏原和预防措施等方面内容。

试验从健康AA肉鸡肠道分离出一株芽孢杆菌,对该菌株进行了培养特性观察、生化鉴定、16S rRNA序列分析,并研究了该菌株的安全性及其对鸡免疫器官的影响。结果表明,该菌株为地衣芽孢杆菌,命名为BL-C;该菌株对AA肉鸡不具有致病性,可显著加快雏鸡的生长、促进免疫器官的发育,为其进一步应用于畜禽养殖提供理论依据。

设计不同的免疫程序,用鸡新城疫、传染性支气管炎、禽流感(H9亚型)三联灭活疫苗(La Sota株+M41株+SS/94株)免疫黄羽肉鸡,通过对ND、IB、H9抗体滴度监测,探讨ND、IB、H9抗体消长规律及鸡新城疫、传染性支气管炎、禽流感(H9亚型)三联灭活疫苗(La Sota株+M41株+SS/94株)的免疫程序。试验结果表明,用鸡新城疫、传染性支气管炎、禽流感(H9亚型)三联灭活疫苗(La Sota株+M41株+SS/94株)免疫黄羽肉鸡后,其诱导产生的ND、IB、H9抗体的消长规律基本同步;仅于10日龄免疫一次三联灭活苗,其抗体水平较低,于20、40日龄二免、三免或10日龄先用鸡新城疫病毒(La Sota株)、禽流感病毒(H9亚型,SS/94株)二联灭活疫苗作基础免疫,20或40日龄再用三联灭活苗作加强免疫,则上述3种抗体均快速上升,且维持时间长。根据试验结果,建议按照正常免疫程序作基础免疫的健康肉鸡,饲养期较短的可于20日龄左右用鸡新城疫、传染性支气管炎、禽流感(H9亚型)三联灭活疫苗(La Sota株+M41株+SS/94株)作加强免疫,0.3 mL/只;饲养期较长的则于40日龄左右用鸡新城疫、传染性支气管炎、禽流感(H9亚型)三联灭活疫苗(La Sota株+M41株+SS/94株)作加强免疫,0.5 mL/只。

利用透射电镜对山西省PRRSV变异株感染猪的肺脏、脾脏、肝脏、肾脏、淋巴结等组织进行超微病理变化的观察。试验结果发现,肺脏、脾脏、肝脏、肾脏、淋巴结各组织细胞均被不同程度地感染,各种细胞器遭受普遍的膜结构损伤,而以线粒体和细胞核变化较为严重。本研究为阐明PRRSV变异株感染猪的致病机理提供了理论依据。

为了观察10种中药抗猪流感病毒的效果,本试验通过先加中药再加病毒、先加病毒再加中药以及中药和病毒混合后一起加3种加药方式,采用鸡胚培养法和红细胞凝集(HA)试验研究了桂枝等10种中药在体外抗猪流感病毒的效果。然后,将有显著效果的中药筛选出来,测定其治疗指数(TI)和半数有效量(ED₅₀)。试验结果表明,在3种加药方式中,桂枝和麻黄抗猪流感病毒的效果最为显著。

本试验采用多重PCR方法,对来检于贵州省清镇市某猪场送检病料进行猪病毒性疫病的病原快速检测,诊断结果表明该例患病猪为猪细小病毒(PPV)、猪圆环病毒2型(PCV2)、猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV) 3种病毒的混合感染。

从天津地区免疫失败的鸡群中分离一株IBDV(命名TJ-hg),应用血清学AGP试验结果可见明显的白色沉淀线;应用逆转录酶—聚合酶链式反应(RT-PCR)扩增的 IBDV VP2 基因高变区(vVP2)及其序列分析的结果表明,TJ-hg株与超强毒株的核苷酸同源性均在90%以上,氨基酸同源性达98.8%~99.3%,且高变区中特征性氨基酸的变化与超强毒株完全一致,TJ-hg株在第一亲水区氨基酸Q219P发生突变。研究结果表明,TJ-hg株属于超强毒株,但又与标准毒株存在差异。

北京地区某猪场猪群疑似感染猪捷申病毒(porcine teschovirus,PTV),为了分离与鉴定该病毒,从采集的脑组织样品中分离出病毒,并从病毒中提取总RNA,根据已报道的引物序列,经RT-PCR扩增得到部分编码主要结构蛋白的VP1基因和高度保守的5'-UTR区基因序列,将这些基因克隆到pEASY-Blunt载体中,经序列测定,与GenBank上的毒株序列进行比对。试验结果表明,分离的毒株与猪捷申病毒同源性为95%~100%。本试验成功分离获得一株猪捷申病毒北京地方流行毒株,命名为 10BJ02株。

本研究对两例确诊为化脓性子宫内膜炎的犬进行了病原的研究。用阴道采样法采集子宫分泌物进行细菌培养和生化鉴定,结果第1例因连续使用抗生素,而分离不到细菌;第2例分离到葡萄球菌和链球菌;药敏试验结果表明,犬子宫内膜炎的主要病原菌对临床使用较多的青霉素和链霉素有很大的耐药性,而对头孢唑啉、环丙沙星、恩诺沙星等药物较为敏感,为临床首选药物。

鹅肥肝具有极高的营养价值和特殊的保健作用,鹅肥肝产业具有广阔的发展前景。因此,正确认识影响肥肝质量的因素是高效生产优质鹅肥肝的重要前提。作者主要从遗传、营养、填饲管理及屠宰等方面对影响鹅肥肝生产性能及品质的因素进行阐述。

以BMPR-IB基因为策勒黑羊多羔性状的候选基因,采用PCR-RFLP方法对策勒黑羊BMPR-IB基因的多态性进行分析,研究其与产羔数的关系。在随机选取的100只策勒黑羊中BB、B+和++基因型对应的每胎产羔数分别为3.00、2.66和1.98只,BB基因型与B+基因型产羔数极显著高于++基因型(P<0.01),BB基因型与B+基因型之间产羔数差异不显著(P>0.05)。因此,在策勒黑羊中B等位基因对产羔数有显著影响,可以作为分子遗传标记之一用于对策勒黑羊产羔数的选择。

对促性腺激素释放激素(GnRH)作用机制的研究是一个重要领域。文章综述了国内外GnRH的研究进展,认为GnRH与受体(Rs)结合后,要通过一系列的信号转导,调节和控制促卵泡激素(FSH)和黄体生成素(LH)的合成和分泌。GnRH受体后信号转导途径主要是通过3大信号转导系统完成的:环磷酸腺苷(cAMP)信号转导系统、蛋白激酶C(PKC)信号转导系统和丝裂原活化蛋白激酶(MAPK)信号转导系统。cAMP信号转导通路和PKC信号转导通路都属于G蛋白偶联的信号通路,二者最后都要通过激活MAPK信号转导系统来完成调控。这为进一步研究GnRH作用机制提供了依据,同时讨论了存在的问题,并对下一步的研究方向做出展望。

为探讨巴马小型猪在达芬奇机器人微创手术中的麻醉管理策略,以丙泊酚麻醉作诱导,异氟醚维持麻醉的复合麻醉方法对巴马小型猪进行全身麻醉,同时用达芬奇机器人对其分别进行心脏、肺脏、肝脏和胃的微创手术,于术前、术中及术后监测巴马小型猪动脉血气和血流动力学变化。结果各组试验猪均顺利完成手术,手术平均时间(166±34)min,麻醉时间(181±38)min,气胸(气腹)时间(122±33)min,在整个麻醉过程及苏醒过程中,各组试验猪安全平稳,未出现体动表现。由此可见,该麻醉方法可用于达芬奇机器人手术系统,且为人医临床应用中的麻醉管理奠定基础。

为检测牛病毒性腹泻病毒(BVDV)弱毒活疫苗在免疫牛体内抗体产生及其消长规律,评价弱毒疫苗的保护效力,并确定免疫持续期,本试验对免疫试验牛每头颈部肌肉接种BVDV SM株弱毒疫苗10^4.5TCID₅₀/头,监测血清抗体效价,进行免疫持续期的确定。在疫苗免疫后的6、9和12个月分别抽取5头免疫组和5头对照组牛采用BVDV-JL强毒株进行攻毒试验,每头牛攻毒剂量为6×10^7.0 TCID₅₀/mL。结果显示疫苗免疫后12个月时血清中和抗体效价仍维持在1∶1048以上,攻毒结果显示3个时间点强毒攻击后,免疫组所有动物白细胞数量都没有下降也没有分离到病毒,而对照组动物白细胞数下降均超过30%,6和9个月动物均分离到病毒,而12个月对照组动物由于年龄大,没有分离到病毒,因此暂定此疫苗的免疫持续期为9个月。

热应激成为全球奶牛养殖业面临的重大挑战,各国积极调动科研技术力量,致力于攻关这一全球性难题,并取得了一定的进展,同时奶牛场也在反复实践中摸索出许多成功经验。物理性降温措施目前被认为是缓解奶牛热应激的最有效措施。作者从奶牛健康福利角度入手,就奶牛热应激和各种物理性降温措施的原理作一讨论,以供牛场根据实际情况加以选用。

微量元素锰是维持动物新陈代谢和正常生长发育必需的物质,锰对维持畜禽的繁殖性能发挥着重要作用。作者就锰对畜禽繁殖性能影响的研究进展情况进行综述,以总结分析前人的研究成果,为进一步开展研究奠定基础。

为了解2011年盘锦地区免疫猪群中高致病性猪繁殖与呼吸综合征的免疫效果和感染状况,采用ELISA和荧光定量RT-PCR方法分别检测了本年度1-12月采集到的2160份猪血清和120份猪组织样品。结果表明,受检的猪组织样品中均无高致病性猪繁殖与呼吸综合征抗原;大洼县、盘山县、兴隆台区、双台子区猪繁殖与呼吸综合征抗体阳性率分别为82.2%、81.1%、78.8%、81.1%;种猪场、商品代猪场、散养户的猪繁殖与呼吸综合征抗体阳性率分别为90%、81.3%、75%。从总体来看,2011年盘锦地区的猪繁殖与呼吸综合征免疫状况良好,无猪繁殖与呼吸综合征疫情发生。

遗传因素是造成动物个体对病原微生物易感性与抗性差异的根本原因。了解和认识动物抗病原微生物感染的天然机制,需要克隆与鉴定宿主抗性相关基因,从基因水平揭示动物易感性和抗性机制,最终从本质上防止和控制疾病的发生与流行。现就动物抗性相关基因研究的意义与方法、种类与分布、抗性基因产生的基础及应用前景等方面进行了综述。