禽流感免疫噬菌体抗体库构建及ELISA检测方法的建立

›› 2012, Vol. 39 ›› Issue (6): 17-21.

禽流感免疫噬菌体抗体库构建及ELISA检测方法的建立

邢佑尚^1,2, 汪琳², 张灿³, 赵胤泽^1,2, 栢亚铎², 吴亚琼², 李玉欣⁴

1. 沈阳农业大学,辽宁沈阳 110886;
2. 北京出入境检验检疫局,北京 100026;
3. 军事医学科学院卫生学环境医学研究所,天津 300050;
4. 西南大学,重庆 400716

收稿日期:2012-02-27 出版日期:2012-06-20 发布日期:2012-07-02
通讯作者: 汪琳。E-mail:wangling@bjciq.gov.cn E-mail:wangling@bjciq.gov.cn
作者简介:邢佑尚(1987-),男,山东人,硕士生,研究方向:动物分子生物学。
基金资助:
国家质检总局科技计划项目(2011IK02)。

Construction of Avian Influenza Immune Phage Antibody Library and Establishment of an ELISA Detection Method

XING You-shang^1,2, WANG Lin², ZHANG Can³, ZHAO Yin-ze^1,2, BAI Ya-duo², WU Ya-qiong², LI Yu-xin⁴

1. Shenyang Agricultural University,Shenyang 110886,China;
2. Beijing Entry-Exit Inspection and Quarantine Bureau, Beijing 100026,China;
3. Institute of Hygiene and Environmental Medicine, Academy of Military Medical Sciences, Tianjin 300050, China;
4. Southwest University,Chongqing 400716,China

Received:2012-02-27 Online:2012-06-20 Published:2012-07-02

摘要/Abstract

摘要： 本研究应用噬菌体抗体库技术筛选禽流感亚型病毒Fab抗体,并建立相应ELISA检测方法。用禽流感亚型混合疫苗免疫小鼠,取其脾脏提取总RNA用于扩增免疫球蛋白轻链和重链基因,克隆至噬菌粒pComb3,然后转化入感受态细胞XL1-Blue中,以10¹² CFU辅助噬菌体VCSM13进行感染后,获得Fab抗体库容量为8×10⁷ CFU。以H5N1病毒为抗原进行4轮亲和筛选,获得特异性结合的克隆,利用获得的特异性克隆进行ELISA检测方法的建立。

关键词: 禽流感病毒; 噬菌体抗体库; 检测方法建立

Abstract: Fab antibody of avian influenza virus subtypes was screened by phage antibody library,and an ELISA detection method was established. Mice were immunized with vaccine mixed of subtypes of AIV, the total RNA was extracted from harvested spleens, immunoglobulin light-chain and heavy-chain gene was amplificated with the template of total RNA, and cloned into phagemid pComb3, the recombinant phagemid pComb3 was transformed into XL1-Blue competent cells, after infected with helper phage VCSM13, Fab antibody library of 8?10⁷ CFU was obtained. Specific clones anti-H5N1 virus was obtained after 4 rounds of screening,ELISA detection method was established with specific clones.

Key words: avian influenza virus; phage antibody library; establishment of detection method

中图分类号:

Q782

邢佑尚, 汪琳, 张灿, 赵胤泽, 栢亚铎, 吴亚琼, 李玉欣. 禽流感免疫噬菌体抗体库构建及ELISA检测方法的建立[J]. , 2012, 39(6): 17-21.

XING You-shang, WANG Lin, ZHANG Can, ZHAO Yin-ze, BAI Ya-duo, WU Ya-qiong, LI Yu-xin. Construction of Avian Influenza Immune Phage Antibody Library and Establishment of an ELISA Detection Method[J]. , 2012, 39(6): 17-21.

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