猪繁殖与呼吸综合征病毒主要结构蛋白基因半定量 RT-PCR方法的建立及其在RNA干扰研究中的应用

›› 2012, Vol. 39 ›› Issue (6): 22-26.

猪繁殖与呼吸综合征病毒主要结构蛋白基因半定量 RT-PCR方法的建立及其在RNA干扰研究中的应用

黄娟, 单虎

青岛农业大学动物科技学院,山东青岛 266109

修回日期:2011-11-18 出版日期:2012-06-20 发布日期:2012-07-02
作者简介:黄娟(1977－),女,河南人,博士,副教授,研究方向:动物传染病防制。
基金资助:
青岛农业大学高层次人才启动基金(6630719);国家科技支撑计划子课题(2009BADB4B04-1)。

Development and Application of Semi-quantitive RT-PCR for the Main Structural Protein Genes of Porcine Reproductive and Respiratory Syndrome Virus

HUANG Juan, SHAN Hu

College of Veterinary Medicine and Animal Science, Qingdao Agricultural University, Qingdao 266109, China

Revised:2011-11-18 Online:2012-06-20 Published:2012-07-02

摘要/Abstract

摘要： 为了建立以GAPDH基因为参照的半定量RT-PCR检测方法,根据PRRSV VR2332株病毒基因组和GAPDH序列设计4对特异性引物,分别扩增GP5、M、N和GAPDH基因序列,将shRNA表达质粒和GP5、M、N真核表达质粒共转染HEK293A细胞,应用该法检测了转染孔中GP5、M、N的相对表达量。同管和分管扩增法均建立了以GAPDH基因为参照的半定量RT-PCR检测方法。靶向GP5、M和N蛋白基因的shRNA表达质粒对其各自蛋白的抑制率为36%~69%,其中pSi-N3和pSi-G1抑制效果最为显著。结果表明,建立的半定量RT-PCR可以用于PRRSV主要结构蛋白基因表达水平的检测分析中。

关键词: PRRSV; 结构蛋白; 半定量RT-PCR; RNA干扰

Abstract: Three pairs of primers were designed according to the sequence of PRRSV VR2332 strain to amplify GP5、M and N protein gene respectively, a semi-quantitative RT-PCR method was developed. Different shRNA expressing vectors were cotransfected into HEK293A cells with vectors expressing structural proteins of PRRSV, and the mRNA levels of target gene were assayed by semi-quantitative RT-PCR. The results showed that the mRNA levels of structural proteins were inhibited from 36% to 69%, and pSi-N3 and pSi-G1 showed the strongest inhibition effect. It indicated that the method was suitable for relative quantitation of the main structural proteins of PRRSV.

Key words: PRRSV; structural protein; semi-quantitative RT-PCR; RNA interference

中图分类号:

S854.4⁺3

黄娟, 单虎. 猪繁殖与呼吸综合征病毒主要结构蛋白基因半定量 RT-PCR方法的建立及其在RNA干扰研究中的应用[J]. , 2012, 39(6): 22-26.

HUANG Juan, SHAN Hu. Development and Application of Semi-quantitive RT-PCR for the Main Structural Protein Genes of Porcine Reproductive and Respiratory Syndrome Virus[J]. China Animal Husbandry & Veterinary Medicine, 2012, 39(6): 22-26.

[1]	李松倍, 谢永生, 龙晓琴, 张晓晓, 陈永杰, 张春红, 焦茂兴, 郭春和. 2023年华南地区猪繁殖与呼吸综合征病毒的遗传变异分析[J]. 中国畜牧兽医, 2025, 52(1): 331-340.
[2]	于晶雪, 韦珊珊, 覃绍敏, 吴健敏, 杨丽华, 陈凤莲, 许力士, 秦树英, 华俊, 韦珏, 方芳, 刘金凤. 基于CRISPR/Cas12a-RT-RAA的猪繁殖与呼吸综合征病毒快速检测方法的建立[J]. 中国畜牧兽医, 2024, 51(8): 3237-3246.
[3]	乔常宏, 陈晶, 罗琴, 刘宝玲, 何振文, 刘丁语, 陈翔宇, 王晓虎, 王刚, 白挨泉, 蔡汝健. 猪繁殖与呼吸综合征病毒诱导的炎症反应及抗炎药物研究进展[J]. 中国畜牧兽医, 2024, 51(8): 3528-3539.
[4]	董泽霞, 林鑫, 周期律, 王楠, 黄雷, 刘志国, 冯政, 牟玉莲. CD163基因敲除iPAMs的构建及其感染PRRSV的特征分析[J]. 中国畜牧兽医, 2024, 51(8): 3471-3483.
[5]	罗琴, 刘宝玲, 乔常宏, 陈翔宇, 刘丁语, 王晓虎, 王刚, 刘昊, 蔡汝健. 脂质代谢和糖代谢在PRRSV感染宿主细胞中作用研究进展[J]. 中国畜牧兽医, 2024, 51(4): 1686-1695.
[6]	张蓉蓉, 潘爱銮, 吴娟, 方兵兵, 汪最, 卢琴, 张腾飞, 温国元, 罗青平. 鸭坦布苏病毒非结构蛋白亚细胞定位及其在IFN-β信号通路中的作用[J]. 中国畜牧兽医, 2024, 51(12): 5470-5478.
[7]	张旭亮, 陈莉, 赵志刚, 马畅, 尤金炜, 董敏, 恽时锋. 小鼠细小病毒NS1蛋白的原核表达、多克隆抗体制备及其免疫原性评价[J]. 中国畜牧兽医, 2024, 51(11): 4923-4931.
[8]	王慧, 冯保亮, 向光明, 黄雷, 刘志国, 李奎, 牟玉莲. CD163单等位基因表达的iPAMs细胞系的构建及其介导PRRSV感染的特征分析[J]. 中国畜牧兽医, 2023, 50(7): 2617-2628.
[9]	徐媛媛, 郑海英, 杨春艳, 邓廷贤, 黄晨茜, 冯超, 陆杏蓉, 段安琴, 莫霞, 马小娅, 尚江华. 抑制BMP/Smad信号通路对水牛卵巢颗粒细胞生长和类固醇激素合成的影响[J]. 中国畜牧兽医, 2023, 50(6): 2354-2362.
[10]	康溥, 任照文, 蔡汝健, 吕宗吉, 黄育浩, 王晓虎. 广东及周边省份猪繁殖与呼吸综合征病毒2型谱系8毒株变异规律和传播研究[J]. 中国畜牧兽医, 2023, 50(5): 2001-2011.
[11]	陈天宝, 王娅妮, 刘宝玲, 王刚, 王晓虎, 柳旭辉, 蔡汝健, 贺东生. 中药抗猪繁殖与呼吸综合征病毒的作用机制研究进展[J]. 中国畜牧兽医, 2023, 50(5): 2114-2129.
[12]	李华玮, 郭科威, 王旭英, 张小雨, 路紫微, 李新锋, 马辉, 侯文静. 猪繁殖与呼吸综合征病毒非结构蛋白7真核表达及亚细胞定位[J]. 中国畜牧兽医, 2023, 50(3): 1160-1168.
[13]	闫普普, 刘欣, 林冰, 刘佳丽, 夏瑾瑾, 黄永熙, 白若男, 刘国平, 杨小林, 郭利伟. 基于生物信息学探讨猪繁殖与呼吸综合征病毒感染特征及银花甘草汤防治机制[J]. 中国畜牧兽医, 2023, 50(10): 4196-4209.
[14]	王慧慧, 冯茜莉, 蒲飞洋, 李易聪, 汪梦竹, 周小凯, 赵泽阳, 马忠仁, 李倬, 马晓霞. 牦牛源BVDV非结构蛋白NS5A的原核表达及抗原表位分析[J]. 中国畜牧兽医, 2022, 49(8): 3180-3189.
[15]	刘庆庆, 吴鹏, 李培东, 张江伟, 陈创夫, 肖陈诚. 表达猪繁殖与呼吸综合征病毒N蛋白的重组腺病毒的构建及其免疫原性分析[J]. 中国畜牧兽医, 2022, 49(3): 1024-1031.