牛微小隐孢子虫表面抗原CP15基因原核表达及其表达产物的鉴定

›› 2012, Vol. 39 ›› Issue (6): 50-53.

牛微小隐孢子虫表面抗原CP15基因原核表达及其表达产物的鉴定

满达¹, 兰丽^1,2, 王艳霞¹, 王敏¹, 格日勒图¹

1. 内蒙古农业大学乳品生物技术与工程教育部重点实验室,内蒙古呼和浩特 010018;
2. 内蒙古农业大学生命科学学院,内蒙古呼和浩特 010018

收稿日期:2011-12-19 出版日期:2012-06-20 发布日期:2012-07-02
通讯作者: 格日勒图(1972－),博士,教授,硕士生导师,主要从事乳酸菌分子生物学研究。E-mail:geriletunjau@yahoo.com.cn E-mail:geriletunjau@yahoo.com.cn
作者简介:满达(1982－),男,内蒙古人,硕士,研究方向:蛋白质化学。
基金资助:
国家自然基金项目(30960279);内蒙古自然基金项目(2011BS0408)。

Prokaryotic Expression and Identification of Cryptosporidium parvum Surface Antigen CP15 Gene in Escherichia coli BL21

MANDA¹, LAN Li^1,2, WANG Yan-xia¹, WANG Min¹, GERILETU¹

1. Key Laboratory of Dairy Biotechnology and Engineering, Ministry of Education,Hohhot 010018,China;
2. College of Life Sciences, Inner Mongolia Agricultural University,Hohhot 010018,China

Received:2011-12-19 Online:2012-06-20 Published:2012-07-02

摘要/Abstract

摘要： 试验旨在构建微小隐孢子虫表面抗原CP15基因原核表达载体并获得重组CP15蛋白。试验以已知重组质粒pMD-CP15为模板,PCR方法扩增出CP15基因片段,并亚克隆到pGEX4T-3,构建了在E.coli BL21中GST融合表达载体pGEX-CP15;经1 mmol/L IPTG进行诱导表达获得目的蛋白,其大小采用SDS-PAGE电泳和Western blotting进行鉴定。结果表明,扩增出约390 bp的微小隐孢子虫表面抗原CP15基因片段并成功构建pGEX-CP15质粒,表达出分子质量为42 ku的融合蛋白,与推导的理论值相符。Western blotting显示该蛋白能被GST血清识别。牛微小隐孢子虫表面抗原CP15基因在大肠杆菌中得到了高效表达。

关键词: 牛微小隐孢子虫; CP15基因; 原核表达; 鉴定

Abstract: To construct a recombinant plasmid contain CP15 gene of Cryptosporidium parvum(C.parvum) and obtain recombinant protein. The surface antigen CP15 gene fragment of C.parvum was amplified from plasmid pMD-CP15 by PCR,and subcloned into pGEX 4T-3.The fusion express recombinant vector pGEX-CP15 was constructed in E.coli BL21. The recombinant protein was induced by 1 mmol/L IPTG and identified by SDS-PAGE and Western blotting. The CP15 gene fragment was amplified correctly as the size of gene was about 390 bp, and the recombinant plasmid pGEX-CP15 was constructed. The protein band with a molecular weight of 42 ku was detected on SDS-PAGE, which totally same with the theoretical size. The expressed protein was identified by Western blotting performed with GST serum. The fusion protein of CP15 was highly expressed in E.coli.

Key words: Cryptosporidium parvum; CP15 gene; prokaryotic expression; identify

中图分类号:

Q786

满达, 兰丽, 王艳霞, 王敏, 格日勒图. 牛微小隐孢子虫表面抗原CP15基因原核表达及其表达产物的鉴定[J]. , 2012, 39(6): 50-53.

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