伪狂犬病毒EP0基因的克隆及其在大肠杆菌中的表达研究

›› 2012, Vol. 39 ›› Issue (6): 57-60.

伪狂犬病毒EP0基因的克隆及其在大肠杆菌中的表达研究

孙磊磊, 程艺, 梁梓森, 周慧英, 琚春梅

华南农业大学兽医学院,广东广州 510642

收稿日期:2011-11-21 出版日期:2012-06-20 发布日期:2012-07-02
通讯作者: 琚春梅(1976－),女,湖北人,博士,副教授,从事兽医微生物学与免疫学研究。E-mail:juchunmei@scau.edu.cn;Tel:020-85280244 E-mail:juchunmei@scau.edu.cn
作者简介:孙磊磊(1987－),男,山东人,硕士,研究方向:兽医微生物学与免疫学。
程艺(1988－),女,河南人,硕士,研究方向:兽医微生物学与免疫学。孙磊磊、程艺对本文具有同等贡献,并列为第一作者。
基金资助:
国家自然科学基金项目(31001074);广东省科技计划项目(2008B020600003)。

Cloning of EP0 Gene of Pseudorabies Virus and its Expression in E. coli

SUN Lei-lei, CHENG Yi, LIANG Zi-sen, ZHOU Hui-ying, JU Chun-mei

College of Veterinary Medicine, South China Agricultural University, Guangzhou 510642, China

Received:2011-11-21 Online:2012-06-20 Published:2012-07-02

摘要/Abstract

摘要： 为了研究EP0蛋白在伪狂犬病毒粒子中的定位及其功能,试验利用PCR从伪狂犬病毒基因组中扩增PRV EP0基因的编码区,克隆至pMD18-T载体,构建重组质粒pMD-EP0。经测序鉴定正确后,用EcoRⅠ和Hind Ⅲ双酶切pMD-EP0,回收EP0基因与经同样双酶切处理的pET-32a(+)进行连接,构建重组质粒pET-EP0。将pET-EP0转化大肠杆菌BL21(DE3),经IPTG诱导后,通过SDS-PAGE和Western blotting检测融合蛋白的表达情况及反应原性。结果表明,成功扩增得到EP0基因编码区序列,大小为1227 bp;重组表达质粒 pET-EP0经诱导后,EP0融合蛋白获得了表达,大小约为75 ku,主要以包涵体形式存在,且能与伪狂犬病毒阳性血清反应。

关键词: 伪狂犬病毒; EP0基因; 克隆; 表达

Abstract: To study the location and function of EP0 protein in particles of pseudorabies virus, CDS region of EP0 gene was amplified by PCR, and then ligated with pMD18-T to construct a recombinant plasmid pMD-EP0.After identification by sequencing analysis, EP0 gene was extracted from this plasmid digested by EcoRⅠ and Hind Ⅲ, and cloned into pET-32a(＋)vector to construct a recombinant expression plasmid pET-EP0.This plamid was identified by PCR and sequencing analysis and then transformed into E. coli BL21(DE3).The target protein was detected by SDS-PAGE and Western blotting. The result showed that CDS region of EP0 gene, a fragment containing 1227 bp was amplified successfully and EP0 protein was expressed efficiently with the size of 75 ku and existed in inclusion body. The result of Western blotting showed that the expressed EP0 protein could be combined with positive serum of PRV.

Key words: pseudorabies virus; EP0 gene; cloning; expression

中图分类号:

孙磊磊, 程艺, 梁梓森, 周慧英, 琚春梅. 伪狂犬病毒EP0基因的克隆及其在大肠杆菌中的表达研究[J]. , 2012, 39(6): 57-60.

SUN Lei-lei, CHENG Yi, LIANG Zi-sen, ZHOU Hui-ying, JU Chun-mei. Cloning of EP0 Gene of Pseudorabies Virus and its Expression in E. coli[J]. , 2012, 39(6): 57-60.

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