羊痘病毒环介导等温扩增(LAMP)检测方法的建立

›› 2012, Vol. 39 ›› Issue (6): 72-75.

羊痘病毒环介导等温扩增(LAMP)检测方法的建立

黄鹤^1,2, 李应国², 肖进文², 聂福平², 王昱², 刘力¹

1. 西南大学动物科技学院,重庆 400715;
2. 重庆市进出口食品安全工程中心,重庆 400020

收稿日期:2011-12-04 出版日期:2012-06-20 发布日期:2012-07-02
通讯作者: 李应国。E-mail:ciqlyg@163.com
刘力。E-mail:liuli6825@126.com E-mail:ciqlyg@163.com; liuli6825@126.com
作者简介:黄鹤(1987－),女,四川人,硕士生,研究方向:动物及动物产品检疫检验。
基金资助:
质检总局科研专项(2010IK015);质检总局科研专项(2009IK027)。

Development of a Loop-mediated Isothermal Amplification Method for Rapid Detection of Capripoxvirus

HUANG He^1,2, LI Ying-guo², XIAO Jin-wen², NIE Fu-ping², WANG Yu², LIU Li¹

1. College of Animal Science and Technology,Southwest China University,Chongqing 400715,China;
2. Chongqing Import and Export Food Safety Engineering Center,Chongqing 400020,China

Received:2011-12-04 Online:2012-06-20 Published:2012-07-02

摘要/Abstract

摘要： 为建立羊痘病毒(CaPV)的环介导等温扩增(LAMP)检测方法,本研究根据GenBank中羊痘病毒的保守基因序列,设计出针对羊痘病毒的LAMP引物,利用LAMP Real Time Turbidimeter LA-320仪优化得到病毒核酸等温扩增最佳条件是62 ℃恒温反应60 min。在此条件下,病毒核酸的最低检测含量为3.1×10^-2 pg/μL,灵敏度比OIE推荐的PCR方法高10⁴倍。添加钙黄绿素(calcein)建立的目测法,还可实现对上述病原体检测结果肉眼观察。本研究获得的CaPV LAMP仪器法和目测法可特异性地扩增羊痘病毒属的山羊痘病毒、绵羊痘病毒及牛疙瘩皮肤病病毒核酸,具有反应快速、特异性强、灵敏度高、操作简便、设备要求低等特点。

关键词: 羊痘病毒; 山羊痘病毒; 绵羊痘病毒; 牛疙瘩皮肤病病毒; LAMP

Abstract: A method for detection of capripoxvirus (CaPV) through the loop-mediated isothermal amplification (LAMP) was established. The conditions for amplification of CaPV DNAs were optimized using LAMP Real Time Turbidimeter LA-320. It was found that at 62 ℃ for 60 min, highly efficient amplification of the goat pox virus(GPV), sheep pox virus(SPV)and bovine lump skin disease virus (LSDV) were achieved. The minimum detection of viral nucleic acid content was up to 3.1×10^-2 pg/μL, 10⁴ times higher than the PCR method recommended by OIE. The method was rapid, specific and easy to operate.

Key words: CaPV; GPV; SPV; LSDV; LAMP

中图分类号:

S858.26

黄鹤, 李应国, 肖进文, 聂福平, 王昱, 刘力. 羊痘病毒环介导等温扩增(LAMP)检测方法的建立[J]. , 2012, 39(6): 72-75.

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