山羊痘病毒毒力因子KLP2的表达及多克隆抗体的制备

doi:10.16431/j.cnki.1671-7236.2017.10.004

《中国畜牧兽医》 ›› 2017, Vol. 44 ›› Issue (10): 2851-2857.doi: 10.16431/j.cnki.1671-7236.2017.10.004

山羊痘病毒毒力因子KLP2的表达及多克隆抗体的制备

李金娜¹, 宋书婷^1,2, 陈宏伟¹, 刘涛¹, 赵爱云^1,2, 李有文^1,2

1. 塔里木大学动物科学学院, 阿拉尔 843300;
2. 新疆生产建设兵团塔里木畜牧科技重点实验室, 阿拉尔 843300

收稿日期:2017-03-20 出版日期:2017-10-20 发布日期:2017-10-20
通讯作者: 李有文 E-mail:lyw_lk@163.com
作者简介:李金娜(1993-),女,新疆塔城人,硕士生,研究方向:动物疫病防控,E-mail:1605563842@qq.com
基金资助:
国家自然基金（31360616）；塔里木畜牧科技兵团重点实验室开放课题（HS201307）

Expression of Goatpox Virus Virulence Factor KLP2 and Preparation of Polyclonal Antibody

LI Jin-na¹, SONG Shu-ting^1,2, CHEN Hong-wei¹, LIU Tao¹, ZHAO Ai-yun^1,2, LI You-wen^1,2

1. College of Animal Science, Tarim University, Alar 843300, China;
2. Construction Corps Key Laboratory of Livestock Technology in Tarim, Alar 843300, China

Received:2017-03-20 Online:2017-10-20 Published:2017-10-20

摘要/Abstract

摘要：

为了研究羊痘病毒（capripox virus），制备其毒力因子KLP2的多克隆抗体，试验采用基因同源重组的方法分别构建了羊痘病毒两个结构域（KLP2-1和KLP2-2）的原核表达载体并进行测序鉴定。提取质粒后转化大肠杆菌BL21感受态细胞并用IPTG诱导表达，目的蛋白采用SDS-PAGE和Western blotting检测，并用KCl染色切胶纯化，纯化蛋白加弗氏佐剂免疫家兔，制备的抗体用Western blotting和ELISA检测评价。结果表明，试验成功构建了表达载体pET42b-KLP2-1和pET42b-KLP2-2，测序结果显示KLP2-1和KLP2-2基因大小分别为657和984 bp，分别表达了约27和38 ku的蛋白，与理论值相符。切胶纯化的蛋白浓度在1~2 mg/mL之间，制备的抗体用Western blotting检测发现，蛋白有明显的特异条带，ELISA检测抗体的效价均为1∶512。说明试验成功表达了KLP2-1、KLP2-2蛋白，制备了相应的多克隆抗体。

关键词: 羊痘病毒; KLP2基因; 蛋白表达; 抗体制备

Abstract:

In order to study capripox virus, and prepare polyclonal antibody of its virulence factor KLP2, the prokaryotic expression vector of two structure domains (KLP2-1 and KLP2-2) were built with the method of homologous recombination genes and identified by sequencing. The plasmid were transformed into E. coli BL21 and inducing expressed by IPTG, objective protein were tested by SDS-PAGE and Western blotting, and purified by KCl dyeing rubber cutting.The rabbits were immuned with freund's adjuvant, the prepared antibody were evaluated by Western blotting and ELISA test. The results showed that the expression vector of pET42b-KLP2-1 and pET42b-KLP2-2 were built successfully, and KLP2-1 and KLP2-2 genes were 657 and 984 bp, and expressed about 27 and 38 ku protein, respectively, it was consistent with theories value. The concentrations of rubber cutting purified protein was 1 to 2 mg/mL. The antibody showed obvious specific bands detecting by Western blotting, and its titer were 1:512 detecting by ELISA. This result indicated that KLP2-1 and KLP2-2 proteins were expressed successfully, and the corresponding polyclonal antibody were prepared.

Key words: capripox virus; KLP2 gene; protein expression; antibody preparation

中图分类号:

S852.65

李金娜, 宋书婷, 陈宏伟, 刘涛, 赵爱云, 李有文. 山羊痘病毒毒力因子KLP2的表达及多克隆抗体的制备[J]. 《中国畜牧兽医》, 2017, 44(10): 2851-2857.

LI Jin-na, SONG Shu-ting, CHEN Hong-wei, LIU Tao, ZHAO Ai-yun, LI You-wen. Expression of Goatpox Virus Virulence Factor KLP2 and Preparation of Polyclonal Antibody[J]. , 2017, 44(10): 2851-2857.

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Expression of Goatpox Virus Virulence Factor KLP2 and Preparation of Polyclonal Antibody

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