猪繁殖与呼吸综合征病毒RT-LAMP快速检测方法的建立

doi:10.16431/j.cnki.1671-7236.2017.06.008

《中国畜牧兽医》 ›› 2017, Vol. 44 ›› Issue (6): 1630-1636.doi: 10.16431/j.cnki.1671-7236.2017.06.008

猪繁殖与呼吸综合征病毒RT-LAMP快速检测方法的建立

陈希文^1,2,3, 汪谦³, 尹苗¹, 李莲^2,3, 罗文涛³, 杨凤¹, 郭爱伟³, 周杰珑³, 王雄清¹

1. 绵阳师范学院动物应用技术研究所, 绵阳 621000;
2. 四川铁骑力士集团冯光德实验室, 绵阳 621006;
3. 西南林业大学生命科学学院, 昆明 650224

修回日期:2017-03-06 出版日期:2017-06-20 发布日期:2017-06-28
通讯作者: 王雄清 E-mail:wangxq193@163.com
作者简介:陈希文(1977-),男,四川宜宾人,博士,研究方向:动物疾病防控,E-mail:xwch05@163.com;Tel/Fax:0816-2578582
基金资助:
四川省科技厅项目（2013JY0127）；四川省重点实验室项目（ESP1505）；四川省教育厅项目（16ZA0321）

Establishment of RT-LAMP for Rapid Detection of Porcine Reproductive and Respiratory Syndrome Virus

CHEN Xi-wen^1,2,3, WANG Qian³, YIN Miao¹, LI Lian^2,3, LUO Wen-tao³, YANG Feng¹, GUO Ai-wei³, ZHOU Jie-long³, WANG Xiong-qing¹

1. Institute of Applied Animal Technology, Mianyang Normal University, Mianyang 621000, China;
2. Fengguangde Laboratory of Sichuan Tieqilishi Group, Mianyang 621006, China;
3. College of Life Science, Southwest Forestry University, Kunming 650224, China

Revised:2017-03-06 Online:2017-06-20 Published:2017-06-28

摘要/Abstract

摘要：

为建立一种快速、灵敏、简便的猪繁殖与呼吸综合征病毒（PRRSV）早期检测方法，本研究利用逆转录环介导恒温扩增技术（RT-LAMP），针对PRRSV的ORF5基因片段设计了4条引物，利用Bst DNA聚合酶在65 ℃恒温条件下进行逆转录扩增，通过1.0%琼脂糖凝胶电泳和加入SYBR Green Ⅰ染料肉眼判断结果，建立了PRRSV RT-LAMP检测方法。结果表明，该检测方法具有良好的特异性，与其他常见病毒如猪瘟病毒、猪圆环病毒2型、猪细小病毒、猪伪狂犬病病毒等无交叉反应，较普通RT-PCR灵敏性高100倍。采用RT-LAMP和RT-PCR分别对10份临床样本同时进行检测，符合率为100%。因此，本研究建立的RT-LAMP是一种可适用于临床PRRSV检测的快速、简单、灵敏、特异的检测方法。

关键词: 逆转录环介导等温扩增（RT-LAMP）; 猪繁殖与呼吸综合征病毒（PRRSV）; 快速检测

Abstract:

In order to diagnose porcine reproductive and respiratory syndrome virus (PRRSV) early, a rapid, sensitive, simple reverse transcription-loop-mediated isothermal amplification (RT-LAMP) assay was established. Four primers targeting the ORF5 gene of PRRSV were designed. Reverse transcription and amplification of the viral cDNA using Bst DNA polymerase was optimal at a constant temperature of 65 ℃. The output of the RT-LAMP assay was visualized using 1.0% agarose gel electrophoresis and color change after the addition of the SYBR Green Ⅰ dye. The assay was also specific for PRRSV and did not cross react with classical swine fever virus (CSFV), porcine circovirus virus type 2 (PCV2), porcine parvovirus (PPV), porcine pseudorabies virus (PRV). The RT-LAMP method was approximately 100-fold more sensitive than RT-PCR for PRRSV detection. The clinical samples (n=10) were identified both by RT-PCR and RT-LAMP, and the coincidece rate was 100%. Thus, the novel RT-LAMP assay was a rapid, simple, sensitive, specific test for PRRSV, and it could potentially be applied in clinical settings.

Key words: reverse transcription loop-mediated isothermal amplification (RT-LAMP); porcine reproductive and respiratory syndrome virus (PRRSV); rapid detection

中图分类号:

S852.65

陈希文, 汪谦, 尹苗, 李莲, 罗文涛, 杨凤, 郭爱伟, 周杰珑, 王雄清. 猪繁殖与呼吸综合征病毒RT-LAMP快速检测方法的建立[J]. 《中国畜牧兽医》, 2017, 44(6): 1630-1636.

CHEN Xi-wen, WANG Qian, YIN Miao, LI Lian, LUO Wen-tao, YANG Feng, GUO Ai-wei, ZHOU Jie-long, WANG Xiong-qing. Establishment of RT-LAMP for Rapid Detection of Porcine Reproductive and Respiratory Syndrome Virus[J]. , 2017, 44(6): 1630-1636.

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猪繁殖与呼吸综合征病毒RT-LAMP快速检测方法的建立

Establishment of RT-LAMP for Rapid Detection of Porcine Reproductive and Respiratory Syndrome Virus

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