猪流感病毒实时荧光定量RT-PCR检测方法的建立

›› 2012, Vol. 39 ›› Issue (6): 181-184.

猪流感病毒实时荧光定量RT-PCR检测方法的建立

张太翔¹, 凌宗帅², 岳志芹³, 徐彪³, 梁成珠³, 刘文鹏¹, 张焕海¹, 张艺兵¹

1. 潍坊出入境检验检疫局,山东潍坊 261041;
2. 济南出入境检验检疫局,山东济南 250014;
3. 山东检验检疫局,山东青岛 250023

收稿日期:2011-12-02 出版日期:2012-06-20 发布日期:2012-07-02
作者简介:张太翔(1974—),男,山东人,高级兽医师,博士,主要从事动物检疫和动物传染病学研究。
基金资助:
国家质量监督和检验检疫总局科研立项(2010IK023)。

Real-Time Quantitative RT-PCR Assay for Detection of Swine Influenza Virus

ZHANG Tai-xiang¹, LING Zong-shuai², YUE Zhi-qin³, XU Biao³, LIANG Cheng-zhu³, LIU Wen-peng¹, ZHANG Huan-hai¹, ZHANG Yi-bing¹

1. Weifang Entry -Exit Inspection and Quarantine Bureau, Weifang 261041,China;
2. Jinan Entry -Exit Inspection and Quarantine Bureau,Jinan 250014,China;
3. Shandong Entry -Exit Inspection and Quarantine Bureau,Qingdao 250023,China

Received:2011-12-02 Online:2012-06-20 Published:2012-07-02

摘要/Abstract

摘要： 本研究选取猪流感病毒(swine influenza virus,SIV)的NP基因序列设计引物和探针,建立了检测SIV的TaqMan实时荧光定量PCR方法。以梯度稀释的含有SIV目的扩增片段的质粒作为标准品,进行定量PCR反应以确定检测灵敏度。2.0×10⁸至2.0×10²拷贝/μL 7个数量级的范围内定量PCR有"S"型扩增曲线,检测灵敏度为20个拷贝/μL。根据病毒拷贝数与Ct值的关系绘制了标准曲线。该方法具有特异性,对猪瘟病毒、伪狂犬病病毒、口蹄疫病毒和猪繁殖与呼吸综合征病毒核酸都没有扩增反应。本研究建立的实时定量PCR方法,灵敏度高、特异性好,可以进行定量分析,在猪流感的快速检测上具有重要意义。

关键词: 猪流感病毒; 实时荧光定量PCR; TaqMan探针

Abstract: A real-time quantitative RT-PCR assay was developed for detection of Swine influenza virus (SIV).Primers and probe were designed based on NP gene of SIV by Primer Express 2.0 software. The plasmid containing the target sequence was constructed to detect the sensitivity and prepare the standard curve. The real-time RT-PCR assay had a detection limit of 20 copies, with a dynamic range of detection between 2×10⁸ to 2×10² copies/μL. The standard curve was prepared based on the linear relationship between the amount of plasmid RNA and cycle threshold (Ct).The method is specific for SIV, which failed to react with the classical swine fever virus, pseudorabies virus, foot and mouth disease virus and porcine reproductive and respiratory syndrome virus nucleic acid.The real-time RT-PCR assay that described with high sensitivity, specificity and accuracy is considered to be a powerful tool for the rapid detection and quantification of SIV.

Key words: SIV; real-time quantitative RT-PCR; TaqMan probe

中图分类号:

S851.21

张太翔, 凌宗帅, 岳志芹, 徐彪, 梁成珠, 刘文鹏, 张焕海, 张艺兵. 猪流感病毒实时荧光定量RT-PCR检测方法的建立[J]. , 2012, 39(6): 181-184.

ZHANG Tai-xiang, LING Zong-shuai, YUE Zhi-qin, XU Biao, LIANG Cheng-zhu, LIU Wen-peng, ZHANG Huan-hai, ZHANG Yi-bing. Real-Time Quantitative RT-PCR Assay for Detection of Swine Influenza Virus[J]. , 2012, 39(6): 181-184.

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