麋鹿重组朊蛋白单克隆抗体的制备及初步鉴定

›› 2012, Vol. 39 ›› Issue (6): 69-71.

麋鹿重组朊蛋白单克隆抗体的制备及初步鉴定

张鑫鑫^1,2, 刘雨田¹, 吴晓东¹, 刘焕奇², 王志亮¹

1. 中国动物卫生与流行病学中心,山东青岛 266032;
2. 青岛农业大学,山东青岛 266109

收稿日期:2011-12-13 出版日期:2012-06-20 发布日期:2012-07-02
通讯作者: 王志亮。Tel: 0532-87839188;E-mail:zlwang111@yahoo.com.cn E-mail:zlwang111@yahoo.com.cn
作者简介:张鑫鑫(1987－),女,山东人,硕士,研究方向:兽医临床外科及基础病理。
刘雨田(1976－),男,江西人,硕士,从事朊毒体的监测与研究工作。张鑫鑫和刘雨田为共同第一作者。
基金资助:
国家公益性行业(农业)科研专项(200903037)。

Development and Preliminary Identification of Monoclonal Antibodies against Elk Recombinant Prion Protein

ZHANG Xin-xin^1,2, LIU Yu-tian¹, WU Xiao-dong¹, LIU Huan-qi², WANG Zhi-liang¹

1. China Animal Health and Epidemiology Center,Qingdao 266032,China;
2. Qingdao Agricultural University,Qingdao 266109,China

Received:2011-12-13 Online:2012-06-20 Published:2012-07-02

摘要/Abstract

摘要： 为研制鹿慢性消耗性疾病(chronic wasting disease,CWD)单克隆抗体,本研究以原核表达后经纯化的麋鹿重组成熟朊蛋白(PrP^c)为免疫原免疫PrP^c基因敲除小鼠(PrP^c-null mice)。两次加强免疫后,利用淋巴细胞杂交瘤技术,取脾细胞与SP2/0骨髓瘤细胞进行细胞融合,间接ELISA方法筛选阳性杂交瘤细胞,采用3次有限稀释法实现杂交瘤细胞的亚克隆,筛选出5株能稳定分泌针对麋鹿重组成熟朊蛋白特异性单克隆杭体(McAbs)的杂交瘤细胞株5A5、3B2、6D12、5E3、1F5,其腹水ELISA效价均达到1∶10000以上。经鉴定,5株单抗均为IgG抗体,5A5、6D12、5E3株为IgG1亚类,3B2、1F5株为IgG2a亚类。Western blotting鉴定结果表明,获得的McAbs均能特异性识别麋鹿重组成熟朊蛋白和健康麋鹿脑组织匀浆中的PrP^c。本研究制备了CWD腹水McAbs,同时也为CWD的研究及其诊断方法的建立奠定了基础。

关键词: 麋鹿; 重组PrP^c蛋白; 单克隆抗体; Western blotting

Abstract: To develop the monoclonal antibody against chronic wasting disease, in this study, the PrP^c-null mice were immunized with elk purified recombinant prion protein(PrP^c). After twice booster immunizations, mouse spleen cells were fused with myelomas SP2/0 by lymphocyte hybridoma technique. Five hybridoma cell strains which could stably excrete specific monoclonal antibodies against elk PrP^c were obtained by ELISA and three times subclone. The five hybridoma cell strains were named 5A5,3B2,6D12,5E3 and 1F5 respectively, whose ELISA titer were all more than 1∶10000. By evaluating, three strains belonged to IgG1 subset and other two were IgG2a subset. These McAbs could identify both elk recombinant PrP^c and PrP^c from elk healthy brain homogenate by Western blotting. This study filled the void of monoclonal antibody against CWD in China. Furthermore, the monoclonal antibodies laid a foundation for the research and detection of CWD.

Key words: elk; recombinant PrP^c; monoclonal antibody; Western blotting

中图分类号:

张鑫鑫, 刘雨田, 吴晓东, 刘焕奇, 王志亮. 麋鹿重组朊蛋白单克隆抗体的制备及初步鉴定[J]. , 2012, 39(6): 69-71.

ZHANG Xin-xin, LIU Yu-tian, WU Xiao-dong, LIU Huan-qi, WANG Zhi-liang. Development and Preliminary Identification of Monoclonal Antibodies against Elk Recombinant Prion Protein[J]. , 2012, 39(6): 69-71.

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