11β-羟类固醇脱氢酶1(11β-HSD1)可使无生物活性的皮质酮催化为有活性的皮质醇,本试验利用长白猪肝脏组织提取的RNA反转录出11β-HSD1基因的cDNA,通过反转录—聚合酶链式反应(RT-PCR)技术和DNA重组技术,将11β-HSD1基因构建到pcDNA3.1真核表达载体上,构建了11β-HSD1-pcDNA重组质粒。通过PCR扩增、酶切电泳和测序分析的方法对重组的质粒进行了鉴定,并将其转染了Hepa1-6细胞,通过RT-PCR检测了其过表达强度。试验结果表明,成功构建了猪11β-HSD1-pcDNA真核过表达载体,为转基因动物的研究奠定了基础。

从安徽省的黄羽肉鸡和罗曼蛋鸡中各分离鉴定出1株J亚群禽白血病病毒,克隆获得了2条相应的gp85基因序列,并与参考毒株进行序列比对。结果表明,两分离毒株与J亚群参考毒株同源性为82.1%~99.4%,分离毒株之间同源性为85.4%。其中肉鸡分离毒株与J亚群原型毒株HPRS-103同源性为97.1%,与J亚群国内毒株SD09TA04、SDYC02J同源性均为99.4%;蛋鸡分离毒株与HPRS-103的同源性为89.0%,与SD09TA04和SDYC02J同源性仅为88.6%。两分离毒株的gp85氨基酸序列出现突变和缺失,在高变区hr1、hr2变异明显。进化分析进一步表明,2个分离毒株亲缘关系较远,可能来源于不同的原始病毒株。

为建立产气荚膜梭菌(Clostridium perfringens)α毒素(cpa)克隆表达方法,应用PCR方法从羊源D型产气荚膜梭菌中扩增cpa成熟肽基因序列,将其插入pET-28b载体中,构建重组表达载体pET-28b-cpa;通过PCR扩增、双酶切和测序方法对重组载体进行鉴定及序列分析,然后转入BL21(DE3)pLysS中诱导表达;用SDS-PAGE检测目的蛋白大小及分布,Western blotting方法检测其反应原性。结果表明,所扩增的cpa基因大小为1110 bp,与GenBank参考序列同源性为99%以上;SDS-PAGE分析结果表明,目的蛋白大小为41.2 ku,与预期大小一致,在超声波裂解上清和包涵体中均有分布,但主要以包涵体为主,两者分布均具有和天然毒素相似的反应原性。

本试验首次采用PK-15细胞,通过同步接种的方法,成功分离到了1株猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV,GZ-KY1株),并扩增克隆了该毒株的ORF5基因。试验结果表明,该毒株ORF5基因全长603 bp,系美洲型,与国内强毒株的氨基酸一致性高于弱毒株,与经典美洲型毒株及国内弱毒株亲缘关系较远。

试验采集新疆细毛羊皮肤组织,提取RNA,采用反转录聚合酶链式反应(RT-PCR)技术扩增出KAP6.1基因,并通过DNA重组技术将该基因片段重组于pEGFP-C2真核表达载体上,构建pEGFP-C2-KAP6.1重组质粒,并进行PCR、酶切鉴定。结果表明,本试验成功构建了新疆细毛羊的pEGFP-C2-KAP6.1真核表达重组质粒,为进一步研究该基因所编码的蛋白与毛品质的关系,以及培育超细羊毛等经济性生物学性状相互关系提供理论依据。

根据GenBank中鸡肠炎沙门氏菌ompA基因序列设计1对引物,以鸡肠炎沙门氏菌贵州分离株基因组为模板,扩增鸡肠炎沙门氏菌ompA基因,将其亚克隆到原核表达载体pET-32a(+)中,构建重组表达质粒pET-32a-ompA,转化大肠杆菌BL21(DE3)感受态细胞, 经IPTG诱导, 实现了鸡肠炎沙门氏菌ompA蛋白在大肠杆菌中的表达。SDS-PAGE分析结果表明, 该重组蛋白的分子质量约为55 ku,可溶性分析结果表明表达蛋白大部分以包涵体形式存在。Western blotting分析结果表明,该重组蛋白具备免疫原性。

本试验利用环介导等温扩增技术(LAMP)建立了羊丝状支原体簇的快速检测方法,该方法以羊丝状支原体簇成员的保守性基因16S rRNA为靶序列,设计了4条特异性引物,在65 ℃等温条件下,60 min一步完成反应。在反应管中预先添加羟基萘酚蓝(HNB),阳性呈蓝色,阴性呈紫色。丝状支原体簇成员——丝状支原体山羊亚种(Mmc)、丝状支原体丝状亚种LC型(Mmm LC)、山羊支原体山羊肺炎亚种(Mccp)的LAMP检测为阳性;对其他病原菌没有交叉反应。以Mmc的核酸为模板进行灵敏度检测,LAMP的最低检出限为10 pg/μL。结果表明,本试验建立了一种特异、敏感、快速、简便的羊丝状支原体簇的LAMP方法。

试验参考GenBank中发表的牛病毒性腹泻病毒(bovine viral diarrhea virus,BVDV)毒株基因组序列设计了5对引物,利用PCR扩增出预期的3475 bp目的片段;将扩增产物连接至pMD19-T 载体,经质粒PCR鉴定及双酶切鉴定获得阳性重组质粒并进行核苷酸序列测定。经BLAST同源性分析表明,牦牛BVDV P125基因与BVDV-Ⅰ型的NADL毒株P125基因的同源性为63.4%。系统分析结果表明,牦牛P125基因与BVDV标准毒株P125基因在遗传进化与亲缘关系上均较远,这可能是因为环境诱变的结果或该毒株具有新的遗传衍化来源。

试验选用30头"军牧1号"猪,随机分成5组,包括常温对照组和4个冷应激组。常温组在21 ℃±2 ℃饲养,冷应激组的温度设置分别为:-10 ℃±2 ℃、-5 ℃±2 ℃、0 ℃±2 ℃、5 ℃±2 ℃。冷应激2 h屠宰后采集腹腔脂肪、颈部皮下脂肪、胸部皮下脂肪和肝脏组织样品,通过荧光定量PCR方法检测细胞因子信号转导抑制因子3(suppressor of cytokine signaling 3,SOCS3)的mRNA的表达量,初步探讨冷应激对猪脂肪及肝脏组织中SOCS3 mRNA表达量的影响。试验结果显示,冷应激猪SOCS3在腹腔脂肪、颈部皮下脂肪、胸部皮下脂肪和肝脏组织中,随着温度的降低,表达量逐渐升高,且总体差异显著(P＜0.05)。试验结果表明,SOCS3受到冷应激的影响,在不同脂肪组织部位发生了变化,可能参加了脂肪细胞因子的调控,从而改变脂肪组织分布及脂肪代谢平衡,为研究冷应激对机体的影响及作用机制奠定了试验依据和理论基础。

本试验采用聚合酶链反应(PCR)方法检测鱼源小肠结肠炎耶尔森氏菌的四环素类耐药基因(tetA、tetC、tetM)、磺胺类耐药基因(sul1、sul2、sul3)和氨基糖苷类耐药基因(aph(3')-Ⅲa、aac(6')-Ⅰb、ant(3'')-Ⅰa、aac(3)-Ⅱa),并采用κ-B法检测该菌对14种抗生素的耐药表型。结果表明,小肠结肠炎耶尔森氏菌8种耐药基因(tetC、tetM、sul1、sul2,aph(3')-Ⅱa、aac(6')-Ⅰb、ant(3'')-Ⅰa、aac(3)-Ⅱa)被检测出,而tetA、sul3基因未被检测出。该菌株对复方新诺明、磺胺异恶唑、红霉素、利福平、洁霉素和头孢噻吩6种抗生素耐药,对氟哌酸、氟苯尼考和头孢曲松等8种抗生素敏感。这为治疗小肠结肠炎耶尔森氏菌引起的鱼病积累了资料。

本试验根据GenBank已登录的致病性嗜水气单胞菌保守序列16S rDNA和Aero,设计2对引物,以嗜水气单胞菌纯培养物为起始材料,建立PCR检测方法。从12株分离物中均扩增到16S rDNA片段,从3株分离物中均扩增到Aero片段,经序列测定和分析,所扩增的片段均为嗜水气单胞菌的核苷酸序列。结果表明,建立的PCR方法可用于检测致病性嗜水气单胞菌。

随着全基因扫描、QTL定位及比较基因组技术的进步,鸡羽色基因定位的研究取得了一定的进展。目前,7个羽色遗传座位已经完成基因定位,包括黑素皮质素受体1(melanocortin 1 receptors,MC1R)、细胞周期依赖性激酶抑制剂2A(cyclin dependent kinase inhibitor 2A,CDKN2A)、水溶载体45家族第2成员(solute carrier family 45 member 2,SLC45A2)、PMEL17、酪氨酸酶基因、SOX10及melanophilin基因。尽管一些羽色基因仍有待进一步研究,如哥伦比亚羽座位、隐性黑羽座位及铅笔线样式座位,但分子生物学技术在羽色基因定位及遗传分析中可显示出强大的威力。相继发现的羽色基因型揭示羽色遗传是一个复杂过程,既涉及到单个基因功能的获得与缺失,也涉及到多个基因互相作用。羽毛颜色是一种重要的经济性状,作者就羽色形成机理及相关基因定位作一综述。

本研究从贵州发病鸭中分离到1株致病菌,经生化试验、16S rRNA序列分析、血清学试验和动物回归试验,鉴定为1型鸭疫里氏杆菌(RA),药敏试验结果表明,其对头孢拉定、头孢曲松钠、头孢噻肟和氟苯尼考高度敏感;同时根据GenBank中鸭疫里氏杆菌ompA基因序列,设计1对引物,成功克隆出鸭疫里氏杆菌ompA基因,扩增产物大小为1149 bp。采用DNAStar Protean程序,综合运用二级结构、亲水性、可塑性和抗原性指数等参数,对鸭疫里氏杆菌ompA基因的氨基酸序列进行了B细胞表位预测,为进一步研究鸭疫里氏杆菌表位疫苗和分子诊断技术的建立奠定基础。

长链非编码RNA(long non-coding RNA, LncRNA)是一类转录本长度超过200 nt的RNA分子,没有或少有编码蛋白的能力。LncRNA参与编码基因表达调控的表观遗传机制,能够直接调控靶基因的转录与蛋白的降解等,在基因组印记、转录调控及人类疾病等方面有着广泛功能。作者着重对LncRNA的特点、分类、作用机制及其在医学和家畜方面的研究进展作一综述,最后对LncRNA在家畜方面的研究与应用进行展望。

本试验根据GenBank中登录的禽白血病病毒(ALV)基因组序列,设计合成了2对引物,外部引物的扩增片段大小为478 bp,内部引物的扩增片段大小为314 bp,建立了适合ALV快速检测的套式PCR方法(nested-PCR)。采用该方法对ALV毒株进行了检测,试验结果表明,能扩增到314 bp的条带,禽流感病毒(H9亚型)、新城疫病毒、传染性法氏囊病病毒、减蛋综合征病毒、禽网状内皮增生病病毒、禽呼肠孤病毒、马立克氏病病毒的扩增结果均为阴性。该方法第1次扩增的敏感性是100 pg,第2次扩增的敏感性是1 fg,第2次比第1次扩增的敏感性高10⁵倍。所建立的套式PCR方法具有敏感性高、重复性好、特异性强等优点,可用于禽白血病病毒(ALV)的临床诊断和分子流行病学调查等。

试验旨在研究檀香树叶和种子对文昌鸡肉品质的影响,选择180只体重为1.05 kg左右的70日龄文昌母鸡,随机分为4个处理,每个处理3个重复,每个重复15只。对照组饲喂玉米—豆粕型基础日粮,试验1、2、3组分别在基础日粮中添加8%发酵檀香树叶和1%檀香种子、4%檀香树叶和1%檀香种子、3%檀香树叶和2%檀香种子。结果表明,与对照组相比,除试验1组腿肌红度有所下降、亮度有所增加外,其他试验组腿肌的颜色(红度和黄度)均有增加的趋势,但色泽有所减弱;嫩度呈升高的趋势,但失水率和蒸煮损失率略有降低;pH差异不显著。试验1组胸肌校正肌苷酸含量显著高于对照组(P＜0.05),肌苷酸含量比对照组高9.2%(P＞0.05),胸肌K值比对照组低26%(P＞0.05);试验1组胸肌不饱和脂肪酸、油酸C18∶1、亚油酸C18∶2、胸肌必需氨基酸、游离氨基酸和鲜味氨基酸含量与对照组相比均有升高的趋势。因此,日粮中添加发酵处理的檀香树叶和种子能提高文昌鸡肌肉品质,改善肉质风味。

通过体外试验分别从麦饭石的添加量、溶液pH、溶液初始浓度、吸附时间等方面研究麦饭石对重金属镉的吸附作用,确定其最佳吸附条件,并进一步研究麦饭石对其他矿物元素的吸附性。结果表明,麦饭石对重金属镉的吸附率随麦饭石添加量、溶液pH的增加而增加;随着溶液中镉的初始浓度的增加麦饭石的吸附率下降,麦饭石对镉的单位吸附量在镉的初始浓度为50 mg/L时达到最大,而吸附率随着溶液中镉的初始浓度的升高而降低;麦饭石对重金属镉的吸附在60 min时达到吸附平衡;在锌、铁、铜、锰、硒、镉和钴离子的混合溶液中,麦饭石对各种矿物元素的吸附大小为 Cd＞Fe＞Se＞Co＞Cu＞Zn＞Mn。

本试验以3只健康的卡拉库尔羊为瘤胃液供体,采集瘤胃液进行体外发酵培养,试验设计为基础日粮中分别添加不同来源样组:对照组(G0)、10%胀果甘草粗提物组(G1)、10%刺果甘草粗提物组(G2)、10%刚果甘草粗提物(G3)、10%甘草原样(G4);分别添加不同水平甘草提取物组:0%组(Z0)、0.5%组(Z1)、1%组(Z2)、3%组(Z3)、5%组(Z4)、7%组(Z5),研究其对瘤胃发酵参数:pH、挥发性脂肪酸(乙酸、丙酸、丁酸)、产气量、氨态氮浓度(NH₃-N)的影响。结果显示,本试验添加的G1、G2、G3、G4组在一定程度上均可以降低瘤胃产气量和乙酸产量;添加不同剂量的甘草粗提取物时,Z3组的添加剂量使瘤胃pH在正常范围,同时对产气量无显著影响,乙酸/丙酸比值为最低。

选取12月龄海门山羊公、母羊和波尔山羊×海门山羊F₁代公羊3个群体为试验素材,分别取颊肌、斜方肌、臂三头肌、背最长肌、股二头肌、股四头肌和腓肠肌7个部位肌肉来研究海门山羊不同部位肌肉中氨基酸的含量。采用高效液相色谱法测定肌肉中氨基酸的种类和含量。结果表明,所测3个类群山羊7个部位的氨基酸均以谷氨酸含量最高;海门山羊(♂)斜方肌的脯氨酸含量显著高于臂三头肌、背最长肌(P＜0.05);海门山羊(♀)斜方肌的丝氨酸、甘氨酸、精氨酸、脯氨酸、半胱氨酸和苯丙氨酸的含量显著高于背最长肌(P＜0.05);波尔山羊×海门山羊F₁(♂)斜方肌的甘氨酸含量显著大于其他部位肌肉中含量(P＜0.05);3个类群7个部位的必需氨基酸、鲜味氨基酸和总氨基酸含量均无显著差异(P＞0.05),但鲜味氨基酸含量较丰富。总体来说,海门山羊不同类群及不同部位除了个别氨基酸存在差异外,大部分氨基酸均差异不显著,但海门山羊尤其公羊的鲜味氨基酸含量丰富,肉质鲜味较好。

本试验旨在研究基础日粮中添加谷氨酰胺替代饲用抗生素对黄羽肉鸡免疫器官指数及小肠黏膜免疫的影响。将180只1日龄体重相近、健康的黄羽肉鸡随机分为5个处理组,每个处理组3个重复,每个重复12只。阴性对照组饲喂基础日粮,阳性对照组在基础日粮中添加0.3 g/kg那西肽和0.25 g/kg硫酸黏杆菌素,试验Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ组分别在基础日粮中添加1、2、3 g/kg谷氨酰胺。结果显示,试验Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ组黄羽肉鸡免疫器官重量及免疫器官指数与阳性、阴性对照组相比差异均不显著(P＞0.05),且各试验组之间差异也不显著(P＞0.05)。45 d 时,试验Ⅰ、Ⅱ组黄羽肉鸡十二指肠、空肠肠黏膜蛋白质中溶菌酶的含量低于阳性对照组,但差异不显著(P＞0.05);与阳性对照组相比,试验Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ组和阴性对照组的十二指肠内容物中细菌数量均显著提高(P＜0.05)。77 d时,试验Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ组十二指肠、空肠、回肠肠黏膜蛋白质中溶菌酶的含量均与阳性对照组差异不显著(P＞0.05);十二指肠黏膜蛋白质中分泌型免疫球蛋白A的含量均低于阳性、阴性对照组;回肠内容物中乙酸、丙酸及总酸的浓度均低于阳性对照组,高于阴性对照组。因此,在基础日粮中添加谷氨酰胺替代饲用抗生素可能会提高黄羽肉鸡的细胞免疫水平,改善小肠黏膜免疫功能。

中国"三鹿奶粉事件"使得三聚氰胺受到国内外的广泛关注,近年来陆续报道了关于三聚氰胺及其与三聚氰酸的联合作用对人、鼠、鸡、猪等的毒性。作者就三聚氰胺和三聚氰酸的理化性质及其对人、鼠、鸡等的影响,以及三聚氰胺所导致的结石结构进行综述,为进一步研究提供参考。

试验旨在研究转植酸酶基因玉米对肉仔鸡血液生理生化指标和免疫功能的影响。采用单因子完全随机设计,将160只1日龄AA肉仔公雏鸡分成2组,分别为对照组和试验组,每组10个重复笼,每个重复笼8只鸡。对照组饲喂非转植酸酶基因亲本玉米日粮,试验组饲喂转植酸酶基因玉米日粮,两组鸡在试验期间饲喂日粮中的可利用磷等所有养分含量均相等或相近。试验期为42 d,分为1~21和22~42日龄2个饲养阶段。结果显示,试验组与对照组相比,42日龄肉仔鸡的血液生理生化指标、免疫器官指数、血清新城疫抗体滴度和全血T淋巴细胞转化率均无显著差异(P＞0.05);21日龄肉仔鸡的血清新城疫抗体滴度也无显著差异(P＞0.05)。因此,转植酸酶基因玉米日粮对肉仔鸡未产生不良影响,可安全饲喂于肉仔鸡。

作者对自然状态发酵牛肉、接种金黄色葡萄球菌的发酵牛肉和接种发酵剂(植物乳杆菌、戊糖片球菌)与金黄色葡萄球菌的发酵牛肉中金黄色葡萄球菌及其肠毒素等指标在加工过程中的变化规律做了研究。研究结果表明,自然发酵牛肉中没有金黄色葡萄球菌及其肠毒素;接种发酵剂和金黄色葡萄球菌的发酵牛肉中金黄色葡萄球菌先是上升然后快速下降,且金黄色葡萄球菌肠毒素为阴性;接种金黄色葡萄球菌的发酵牛肉中金黄色葡萄球菌及其肠毒素都显著高于接种发酵剂的发酵牛肉(P＜0.05)。由试验结果可知,发酵剂植物乳杆菌和戊糖片球菌对金黄色葡萄球菌有很强的抑制作用。

为给截短侧耳素类动物专用抗生素的研发提供试验依据,本试验合成了4种含丁胺侧链的截短侧耳素衍生物,研究了取代基的空间位阻对4种截短侧耳素衍生物鸡毒支原体抑制活性的影响。试验结果表明,化合物1、2的最小抑菌浓度均为0.0125 μg/mL,化合物3的最小抑菌浓度为0.25 μg/mL,化合物4的最小抑菌浓度为0.5 μg/mL。

为建立一种准确、可靠的测定人工抗原偶联比方法,本试验应用高效液相色谱法方法测定全抗原二喹噁啉羟酸—牛血清白蛋白(QCA-BSA)合成中游离二喹噁啉羟酸的含量。采用Waters 2695分离系统、2489紫外检测系统;流动相:甲醇∶水(60∶40);柱温:30 ℃;流速:1 mL/min; 检测波长320 nm。试验结果表明,游离二喹噁啉羟酸的线性范围为0.2~128 μg/mL,线性方程为y=17526x+4648,R²=1,RSD为0.28%,全抗原QCA-BSAⅠ、Ⅱ、Ⅲ的偶联比分别为1.76∶1、28.60∶1、65.63∶1。建立的方法准确、可靠,适用于喹噁啉类人工抗原偶联比的测定。

本试验旨在了解桑杏平喘颗粒的安全性,为临床用药提供数据支持。选用健康Wistar大白鼠80只,随机分成4组(1个对照组和3个试验组),每组20只,雌雄各半,对照组灌服生理盐水,试验组分别以桑杏平喘颗粒煎剂,相当于原药材3、15、30 g/kg体重灌胃给药,连续给药30 d,在给药10、20、30 d采血,测定血清中部分生化功能指标。试验结果表明,桑杏平喘颗粒对大鼠肝脏、肾脏、心脏功能的影响较小,是一种适合临床应用的低毒、安全的中药制剂。

以京海黄鸡为试验材料,采用PCR-SSCP技术检测斑联蛋白(zyxin)基因外显子9的SNP,探讨zyxin基因该位点多态性与京海黄鸡屠宰性状之间的关系。结果发现该位点存在1个SNP突变位点,表现为3种基因型:AA、AB和BB。统计分析表明,公鸡的胸肌重AA基因型显著高于AB基因型(P＜0.05),活体重和屠体重AA基因型显著高于BB基因型(P＜0.05);母鸡的活体重、头重、爪重和屠体重AA基因型显著高于BB基因型(P＜0.05),全净膛重AA基因型显著高于AB基因型(P＜0.05)。

以109只海南文昌鸡为试验动物,利用PCR-SSCP技术检测了促卵泡激素(follicle-stimulating hormone β,FSHβ)基因的多态性,在其内含子1区域内发现了1个SNP,在群体中检测出2种基因型:AA、AB。将不同基因型个体与产蛋数、畸形蛋数、体重和开产日龄等进行了关联分析。结果表明,AA基因型鸡个体的产蛋数比AB基因型个体多9.54枚,畸形蛋数比AB基因型个体少1.54枚,开产日龄比AB基因型个体早2.97 d,且差异均不显著(P＞0.05)。22~26、27~30和31~34周龄的AA基因型鸡的产蛋量显著高于AB基因型(P＜0.05),而18~21和35~39周龄的AA基因型鸡的产蛋量也明显高于AB基因型,但差异不显著(P＞0.05)。AA基因型鸡6、8、14、20周龄的体重高于AB基因型个体,AA基因型个体18周龄的体重却低于AB基因型个体,差异均不显著(P＞0.05)。总体而言,FSHβ基因位点的A等位基因对产蛋数、畸形蛋数、体重和开产日龄的影响均未达到差异显著水平。

本试验比较了水牛卵母细胞体外受精后注射外源DNA的时间(5~6、9~10、13~14、17~18、21~22 h)和外源DNA的浓度(10、50、100 μg/mL)对Fat-1转基因水牛胚胎的发育影响。结果显示,9~10 h组的胚胎表达率和囊胚表达率最高,其中胚胎表达率极显著高于5~6 h组,囊胚表达率极显著高于21~22 h组(P<0.01);在浓度试验中,50 μg/mL浓度组的胚胎表达率和囊胚表达率最高,且极显著高于100 μg/mL(P<0.01)。

本研究以胰岛素样生长因子Ⅰ(insulin-like growth factors-Ⅰ, IGF-Ⅰ)基因作为候选基因,运用PCR-RFLP法检测基因变异,并分析其变异与鸡末期产蛋性能的相关性。以绿壳蛋鸡(n=113)作为试验材料,对IGF-Ⅰ基因5'调控区进行遗传多样性研究。研究结果表明,该调控区扩增产物经PstⅠ酶切后出现AA、AB、BB共3种基因型,经χ²检验绿壳蛋鸡在IGF-Ⅰ位点上符合Hardy-Weinberg平衡状态(P＞0.05)。相关分析表明,IGF-Ⅰ基因5'调控区PstⅠ位点对于产蛋末期(14和15月龄)的产蛋性能没有显著影响(P＞0.05)。

本研究旨在筛选中国地鼠微卫星位点,为中国地鼠遗传分析提供遗传标记。根据建立的中国地鼠微卫星富集文库,对筛选的含微卫星DNA序列的克隆应用引物设计软件Primer 3.0设计引物135对,选择合成11对理论上易出现影子带的引物,用20个中国地鼠个体对这些引物进行了评估。结果显示,11对引物均能扩增出谱带,这11条带的平均多态信息含量(PIC)为0.4195,平均观察杂合度(Ho)为0.3895,平均期望杂合度(He)为0.4565,每个位点的平均等位基因数为5.818。筛选出的微卫星位点均可用于中国地鼠种群遗传结构分析,这将为中国地鼠品种选育、种系评估提供更多的微卫星遗传标记信息。

甲基化对胚胎发育和机体形成具有重要的调控作用,体细胞核移植胚胎常常表现出异常的DNA甲基化,DNA甲基转移酶抑制剂能抑制细胞的DNA甲基化水平,从而达到提高体细胞核移植效率的作用。作者主要综述了DNA甲基转移酶抑制剂在动物体细胞核移植研究中的应用。

采用PCR产物直接测序技术对30只贵妃鸡样品的线粒体DNA控制区(mtDNA D-loop)第Ⅰ高变区序列进行了分析。结果表明,在所分析的D-loop区部分序列中(520 bp),A、G、C、T平均含量分别为26.8%、13.0%、31.1%和29.1%;共发现13个核苷酸多态位点,均为转换位点,未检测到插入/缺失和颠换,核苷酸多样度(Pi)为0.0059,单倍型变异度(Hd)为0.538,中性检验Tajima’s D值为-0.67065。通过群体构建的NJ聚类图分子系统树发现,贵妃鸡起源于红原鸡。

本试验旨在检测注射藏绵羊肌肉抑制素C-端重组蛋白后对小鼠的影响,研究肌肉抑制素的作用,为今后生产实践提供参考。本试验对50只小白鼠(雌、雄鼠各25只)进行分组,随机将雌雄鼠分为2组,其中对照组注射生理盐水,试验组注射肌肉抑制素蛋白,每隔1 d称重,试验期共3个月。试验期结束后,处死小鼠,并取小腿肌肉样本,利用石蜡切片法和浸渍离析法,测定小鼠肌纤维直径。试验结果表明,藏绵羊肌肉抑制素C-端重组蛋白对小鼠肌肉生长早期(37~45日龄)具有抑制作用。当小鼠体内对藏绵羊肌肉抑制素C-端重组蛋白产生抗体后,对小鼠肌肉生长的抑制作用逐渐减弱。藏绵羊肌肉抑制素C-端重组蛋白可使小鼠腿肌肌纤维横切面积增加、腿肌肌纤维直径增加。

精原干细胞介导法制备转基因动物是用试验导入的方法将外源基因移入动物细胞并整合到其基因组中,伴随着精原干细胞分化成精子,通过受精最终使外源基因得以表达。近年来,随着对精原干细胞研究的不断深入,人们发现其在建立转基因动物方面具有巨大的应用潜力和优势。作者从精原干细胞的生物学特性及携带外源基因的原理等方面阐述了其应用于转基因动物制备的理论机制,同时介绍了精原干细胞介导法在制备转基因动物方面,特别是转基因羊生产中的应用现状。

选择年龄在3~4.5岁的不同品种的种公牛20头,观察四季变化对其精液次均采集量、平均密度、平均活力、精液利用率及制冻数量的影响。结果显示,在四个季节中,鲁西牛春、夏季的精液密度极显著高于其他季节(P＜0.01),秋季精子活力极显著低于春季(P＜0.01),夏、秋季的精液利用率及制冻数量显著低于春季(P<0.05);蒙贝利亚牛在夏季的精液采集量显著高于其他季节(P＜0.05),夏、秋季精液密度均显著低于春季(P＜0.05,P＜0.01),夏季精子活力显著低于春季(P＜0.05),夏、秋两季精液利用率及制动数量显著低于春季(P＜0.05);德系西门塔尔牛夏季精液采集量有明显上升,显著高于冬季(P＜0.05),秋季的精液密度显著低于春季(P＜0.05),而夏、秋季精子活力显著低于春、冬季(P＜0.01,P＜0.05),春季的精液利用率及制冻数量显著高于冬季与夏、秋季(P＜0.05,P＜0.01)。综上所述,季节变化均会对各品种公牛精液指标产生不同程度的影响,其中对鲁西牛的影响较小。

A型流感病毒是目前传播最广泛的人畜共患病病原之一,到目前为止全球至少暴发了5次人流感大流行,尤其是1997年以来多起H5N1亚型高致病性禽流感病毒跨越种间屏障由禽直接感染并致死人的事件造成了极大恐慌。流感病毒致病性和跨种传播的分子机制研究是有效预防和控制流感的基础,而BALB/c小鼠模型的应用极大地促进了这些研究进程,作者就BALB/c小鼠作为试验动物模型在流感病毒致病性及跨种传播研究中的应用作一综述。

本研究建立了大鼠肝微粒体温孵体系中血根碱的高效液相色谱含量测定方法。采用Shimadzu VP-ODS (150 mm×4.6 mm,5 μm)为色谱柱,以乙腈-0.1%磷酸水溶液(30∶70,V/V)为流动相,以1 mL/min流速进样量10 μL在284 nm波长下进行检测,结果显示500和1000 nmol/L血根碱对照品溶液的方法回收率分别为98.3％和98.9%;250、500、1000 nmol/L标准溶液的日内RSD分别为3.76%、2.88%和3.56%,日间RSD分别为5.19%、4.96%和3.84%;血根碱的摩尔浓度在250~10000 nmol/L内与峰面积呈良好的线性关系,表明该方法简单、快速、灵敏度高、特异性好,可用于血根碱在肝微粒体温孵体系中的含量测定。

应用6-羟基多巴胺(6-hydroxydopamine,6-OHDA)制造帕金森病(Parkinson’s disease,PD)大鼠模型,建模成功后采用组织化学方法检测模型黑质多巴胺能神经元变化,并从行为学及黑质多巴胺能神经元数目的变化对模型进行综合评价。取Wistar大鼠,采用立体定向法,进行右侧纹状体区6-OHDA 双点注射。结果表明,6-OHDA纹状体注射可成功的诱导帕金森大鼠模型。

江西某猪场的后备母猪发生以体温升高、呼吸困难、皮肤发绀为主要特征的疫病,剖检病死猪的病理变化主要表现为肺水肿,肺脏、肝脏和脾脏肿大并有少量灰白色坏死点,全身淋巴结肿大和出血。肺门淋巴结触片,经瑞氏染色镜检可见镰刀形或半月形的弓形虫滋养体;无菌取肺门淋巴结腹腔接种BALB/c鼠,分离得一株弓形虫,该弓形虫分离株对小鼠具有稳定的致病力,小鼠接种弓形虫腹水(0.05~0.1 mL/只)后4~5 d死亡,腹水中有大量成丛、双在或分散的弓形虫滋养体。根据流行病学、临床症状、病理变化及实验室检查结果,诊断该后备母猪场的疫病为猪弓形虫病。

为了掌握菏泽地区犬瘟热流行病学情况,采用临床症状观察与实验室诊断相结合的方法对菏泽市3家动物医院共2716份病例进行检测。结果表明,检出犬瘟热阳性病例754份,总感染率为27.8%。犬瘟热感染存在品种、年龄、季节、性别和免疫状况的差异。其中,纯种犬发病率最高,为51.6%,土种犬发病率最低,为18.3%;3~12月龄的犬感染犬瘟热的比率最高,为65.1%,而3月龄以下的犬感染率最低,仅为2.5%;4~6月份是该病的高发期,从未接种过犬瘟热疫苗的犬发病率较高,而严格按照免疫程序接种疫苗的犬发病率较低。犬瘟热传播速度快、传染性强,因此做好犬瘟热病的免疫、隔离和消毒工作尤为重要。

腹腔镜手术具有术中腹腔脏器显露充分、对施术动物损伤小、手术切口小、出血量少、术后痛苦轻、恢复快和组织粘连少等优点。腹腔镜技术从20世纪80年代就普遍应用于人医临床,在兽医领域国外早就有腹腔镜技术在动物中应用的报道,而国内腹腔镜技术在动物上的应用则相对较少。腹腔镜技术在小动物中的应用主要包括在活组织检查中的应用、在消化系统中的应用,在泌尿系统中的应用及在生殖系统中的应用。

通过临床症状、流行病学特点和犬细小病毒抗原试剂盒对疑似细小病毒感染的216例病犬进行确诊,并对确诊为细小病毒感染的部分病例进行抗体水平检测,以判断其预后,采用中西结合的综合措施治疗发病犬,治愈率达到70%,提出了有效的预防措施。

为调查发病鸭场的病原,本试验从发病鸭场中分离到1株鸭肝炎病毒,Reed-Muench法测定该病毒对鸭胚ELD₅₀为10^-5.53/0.2 mL,动物回归试验显示攻毒雏鸭复制出原发病鸭场鸭的临床症状和病理变化,鸭病毒性肝炎病毒(DHV)Ⅰ型阳性血清对分离株病毒无中和作用,RT-PCR鉴定分离株病毒为新型鸭肝炎病毒。

本试验将从山东省临朐、新泰、高唐、微山、禹城、博兴等地的40多个不同鸭场分离到的鸭疫里默氏杆菌RA10型LQ09、RA1型YC11和鸭大肠杆菌优势血清型菌株O₇₈型LQ06、O₉₂型BX02作为菌种,采用液体培养工艺进行增菌后,制备鸭疫里默氏杆菌和大肠杆菌的二联油乳剂灭活疫苗。该疫苗经无菌和安全检验合格后,进行免疫原性研究。结果表明,对3日龄肉鸭雏鸭颈部皮下注射0.3 mL/羽即可产生良好的免疫应答,免疫后10日龄用同源菌株攻击保护率可达70%,17日龄达80%,24日龄至出栏达100%;对7日龄肉鸭雏鸭颈部皮下注射0.5 mL/羽即可产生良好的免疫应答,免疫后14日龄用同源菌株攻击保护率可达80%,21日龄直至出栏达100%;该疫苗经田间试验,效果良好。

2011年某蛋鸡场部分病鸡内脏发生增生性肿瘤性疾病,经流行病学调查、临床诊断及实验室检测,确诊为鸡J亚型淋巴白血病。文章就该病例的诊断过程做了详细阐述,并对禽常见传染性肿瘤病的鉴别、白血病的预防和控制进行了归纳总结。

为研究穿心莲水提物与临床常用10种抗菌药联用对鸡致病性大肠杆菌的体外抑菌效果,本试验采用传统的水提法制备穿心莲中药液并浓缩至浓度为1 g/mL,用琼脂平板稀释法测定穿心莲水提物分别与阿莫西林、头孢曲松等10种常用抗菌药物联用对临床分离的10株鸡致病性大肠杆菌的体外抑菌作用。结果表明,穿心莲和头孢曲松、穿心莲和氟苯尼考联用100%呈现协同作用;穿心莲和头孢噻呋联用90%呈现协同作用,10%呈现无关作用;穿心莲和大观霉素联用80%呈现协同作用,20%呈现无关作用;穿心莲和林可霉素联用50%呈现协同作用,40%为无关或颉颃作用,10%为无关作用;穿心莲与阿莫西林、安普霉素、阿米卡星、多西环素、恩诺沙星联用以无关或颉颃作用为主。以上结果表明,在体外,穿心莲与头孢曲松、头孢噻呋、大观霉素、氟苯尼考联用对鸡致病性大肠杆菌呈现协同作用,与阿莫西林、安普霉素、阿米卡星、林可霉素、多西环素、恩诺沙星联用呈现无关或颉颃作用。

猪圆环病毒是猪圆环病毒病的主要致病因素,该病给养猪业带来很大的经济损失。猪圆环病毒变异较快,是单链DNA病毒中最高的;易感猪主要通过消化道和呼吸道水平传播而感染,猪圆环病毒Ⅱ型(PCV2)人工或自然感染猪的排泄物、鼻腔、口腔和扁桃体拭子和患畜的尿液和粪便中均能检测到PCV2。断奶仔猪多系统衰竭综合征(PMWS)的发病主要与猪体内PCV2含量有关。PCV2特异抗体对猪群的PCV2感染具有保护作用。PCV2诱导猪继发性免疫缺陷,淋巴细胞缺失,影响PCV2感染结果的因素有:病毒、宿主、混合感染和免疫调节等。

小反刍兽疫(peste des petits ruminants,PPR)是由副黏病毒科麻疹病毒属小反刍兽疫病毒(peste des petits ruminants virus,PPRV)引起的一种急性、烈性、接触性传染病,目前已给中国养羊业造成巨大损失与威胁。作者对PPR的流行病学、诊断方法及疫苗研制进展等方面作一简要综述,以期为该病的防控提供有效的参考。

了解湖南省畜禽粪便及其污染物排泄情况,为畜禽养殖业污染物防控与治理提供依据。本论文以《2011湖南农村统计年鉴》中畜禽出栏数作为统计基数,根据畜禽粪便排放系数和粪污含量,估测了2011年湖南省畜禽粪污排泄情况。结果表明,2011年湖南省畜禽粪便产生总量为6680.29万t,COD 327.49万t,BOD 302.39万t,NH₃-N 26.04万t,总磷30.78万t,总氮64.45万t;畜禽粪便中重金属排泄量分别为Zn 3802.54 t,Cu 2772.43 t,Cr 335.67 t,Pb 265.06 t,Cd 51.11 t,Ni 240.60 t,As 47.63 t,Hg 2.16 t;2011年湖南省畜禽粪便发酵生产沼气总量约为572088万m³。畜禽养殖业粪污排泄量巨大,危害之大,应坚持减量化、无害化和资源化三原则,倡导畜牧健康养殖理念。

为了建立寒痢宁口服液的质量控制标准,采用薄层色谱法对寒痢宁口服液中的黄连、厚朴、陈皮、补骨脂进行定性鉴定。试验结果表明,黄连、厚朴、陈皮和补骨脂的特征成分在与对照品和对照药材色谱相应位置上显相同颜色的斑点,阴性对照无干扰。该方法专属性强,稳定性和重现性好,为寒痢宁口服液的质量控制建立了定性鉴定方法。

苜蓿营养丰富、产量高、蛋白质转化率高,是奶牛重要的粗饲料。目前中国优质苜蓿资源缺乏,商品苜蓿供不应求,供需失衡造成优质苜蓿价格不断攀升,进口量不断增加。国内苜蓿产业发展缓慢,主要问题是数量少、质量差、价格高;苜蓿种植缺乏政策扶持和配套的收割机械;干草加工设备技术落后,物流成本高。推进国内苜蓿产业发展的对策和建议是明确苜蓿产业战略地位,做好科学规划;产业发展走规模化、企业化模式;创新经营机制,带动产业发展;加大苜蓿产业科研和技术推广;和农产品一样享受"绿色通道"优惠政策;对苜蓿产业实行重点补贴。

本试验旨在建立根黄分散片中黄芩苷的含量测定方法以及考察该制剂的稳定性,为制定该制剂质量标准中含量测定方法及保质期提供依据。采用反相高效液相色谱(RP-HPLC)法,色谱柱为YWG-C18(150 mm×4.6 mm,10 μm),流动相∶甲醇∶0.2%磷酸水溶液(47∶53),流速:1 mL/min,检测波长:280 nm,柱温:30 ℃,进样量:10 μL;根据药典,采用强光照射试验、加速试验及部分长期稳定性试验考察分散片中黄芩苷的稳定性。结果表明,黄芩苷的含量在1.018~50.90 μg/mL范围内与峰面积呈良好的线性关系,r=0.9999(n=6),平均加样回收率为97.27%,RSD为0.75%(n=9);强光照射试验、加速试验及部分长期稳定性试验结果表明该产品基本稳定;此方法简便、灵敏、重现性好,可用于根黄分散片中黄芩苷的含量测定,且该制剂的稳定性良好。

本试验利用RT-PCR检测方法对犬瘟热病毒(CDV)自然感染宠物犬的不同部位样品进行检测,确定CDV在感染犬组织中的分布情况。对14只CDV阳性犬的血液、眼分泌物、鼻液、唾液、粪便和尿液进行检测,RT-PCR方法检出的阳性率分别为92.9%、85.7%、100%、85.7%、100%和66.7%,结果显示粪便和鼻液样品的检出率最高,检出率达100%,宜于作为检测对象取材。

试验以中华蜜蜂和意大利蜜蜂为材料,应用激光诱导击穿光谱技术对两蜂种工蜂3个生长阶段(初生蜂、哺育蜂、采集蜂)体质主要微量元素进行初步定性和半定量分析。结果表明,中华蜜蜂和意大利蜜蜂的初生蜂、哺育蜂及采集蜂体质中富含Fe、Ca、Ba、Li、K、Na等元素,其中Ca元素的相对含量最高,明显高于其他几种元素的相对含量。另外,同种蜜蜂不同生长阶段及不同蜂种同一生长阶段中各元素的相对含量也不一样。因此,激光诱导击穿光谱技术能够用于检测蜜蜂体质中的微量元素,并具有快速的定性和半定量分析能力。

为探讨青天葵乙酸乙酯提取物对小鼠急性肺损伤(acute lung injury,ALI)的保护作用,本试验选择50只昆明小鼠随机分为模型组、青天葵(高、中、低)治疗组和空白对照组,采用内毒素腹腔注射法建立急性肺损伤模型。观察肺脏湿/干重比(W/D)、病理切片、肺脏组织匀浆中丙二醛(malondialdehyde,MDA)、超氧化物歧化酶(SOD)的含量变化。结果发现,青天葵乙酸乙酯提取物可以明显减轻损伤肺脏组织的形态学变化,肺脏组织匀浆中MDA、SOD与模型组相比差异极显著,证实青天葵乙酸乙酯提取物对小鼠急性肺损伤具有保护作用。

作者介绍了基于福利的新型多元化猪生产系统的相关技术,分析了多元化生产系统对猪的健康、福利和生产的影响,认为对于生产者而言,究竟选择哪一种生产方式,要考虑多方面的因素而定。虽然新型生产系统仍有许多技术层面的问题需要进一步深入研究,但遵循一定的福利评价体系进行生猪生产将会是未来发展的方向。

作者借助Excel和SPSS统计软件对测定的青海高原半细毛羊40只公羊和100只母羊的体重、毛长及体尺指标进行相关性分析和回归分析。结果表明,青海高原半细毛羊成年公羊的体重为90.2 kg,母羊体重为39.2 kg,毛长分别为10.1和8.7 cm,公羊和母羊体尺指标和毛长对体重的回归方程分别为:Y(体重)=-65.62+5.04X₆(胸深)(P＜0.01)和Y(体重)=-11.62+0.41X₄(胸围)+0.76X₅(胸宽)(P＜0.01)。通过数据分析,为简化和改进选育技术提供参考。