D型产气荚膜梭菌α毒素基因的克隆与高效表达

›› 2012, Vol. 39 ›› Issue (12): 10-13.

D型产气荚膜梭菌α毒素基因的克隆与高效表达

李娜¹, 吴建勇², 李建军², 杨学云², 王登峰², 段新华², 王治才²

1. 石河子大学动物科技学院,新疆石河子 832003;
2. 新疆畜牧科学院兽医研究所,新疆乌鲁木齐 830000

收稿日期:2012-06-12 出版日期:2012-12-20 发布日期:2012-12-19
通讯作者: 王治才。Tel:0991-4833184;E-mail: zhicai.w@163.com E-mail:zhicai.w@163.com
作者简介:李娜(1987-),女,新疆人,硕士生,主要从事动物微生物与免疫学研究。
基金资助:
农业公益性行业科研专项(201103008);新疆多胎(多羔)肉羊杂交生产体系建设行动计划项目。

Cloning and Expression of α Toxin Gene from Toxin Type D Clostridium perfringens

LI Na¹, WU Jian-yong², LI Jian-jun², YANG Xue-yun², WANG Deng-feng², DUAN Xin-hua², WANG Zhi-cai²

1. College of Animal Science & Technology,Shihezi University,Shihezi 832003,China;
2. Institute of Veterinary Medicines,Xinjiang Academy of Animal Science,Urumqi 830000,China

Received:2012-06-12 Online:2012-12-20 Published:2012-12-19

摘要/Abstract

摘要： 为建立产气荚膜梭菌(Clostridium perfringens)α毒素(cpa)克隆表达方法,应用PCR方法从羊源D型产气荚膜梭菌中扩增cpa成熟肽基因序列,将其插入pET-28b载体中,构建重组表达载体pET-28b-cpa;通过PCR扩增、双酶切和测序方法对重组载体进行鉴定及序列分析,然后转入BL21(DE3)pLysS中诱导表达;用SDS-PAGE检测目的蛋白大小及分布,Western blotting方法检测其反应原性。结果表明,所扩增的cpa基因大小为1110 bp,与GenBank参考序列同源性为99%以上;SDS-PAGE分析结果表明,目的蛋白大小为41.2 ku,与预期大小一致,在超声波裂解上清和包涵体中均有分布,但主要以包涵体为主,两者分布均具有和天然毒素相似的反应原性。

关键词: 产气荚膜梭菌; α毒素; 克隆; 表达

Abstract: To establish the method for cloning and expression of Clostridium perfringens α toxin gene(cpa),the cpa gene was amplified by PCR from toxin type D strain,then was inserted into pET-28b to construct pET-28b-cpa.Identified by PCR,restriction enzyme digestion and sequencing methods,the recombinant plasmid was transformed into BL21 (DE3) pLysS and induced to express by IPTG. The size and distribution of the target protein were detected by SDS-PAGE,and its reactionogenicity was confirmed by Western blotting.The results showed that the cpa gene was 1110 bp and the homology with reference sequence of GenBank was greater than 99%.In SDS-PAGE analysis,the target protein was 41.2 ku as expected and distributed in ultrasonic lysis supernatant as well as in inclusion bodies,but mainly existed in inclusion bodies. Both of them showed similar reactionogenicity to native α toxin.

Key words: Clostridium perfringens; α toxin; cloning; expression

中图分类号:

S852.61⁺6.3

李娜, 吴建勇, 李建军, 杨学云, 王登峰, 段新华, 王治才. D型产气荚膜梭菌α毒素基因的克隆与高效表达[J]. , 2012, 39(12): 10-13.

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