本试验旨在研究重组牛γ-干扰素(rBovIFN-γ)在Sf21细胞中高效表达及其特性鉴定。利用逆转录—聚合酶链式反应(RT-PCR)技术从奶牛外周血淋巴细胞的总RNA中扩增出不含信号肽的BovIFN-γ基因片段。将其克隆到pFastBac^TMHTA中构建重组质粒pFastBac^TMHTA-BovIFN-γ。然后将重组质粒转化至DH10Bac感受态细胞获得重组穿梭质粒rBacmid-BovIFN-γ。转染Sf21昆虫细胞后获得重组杆状病毒rBac-BovIFN-γ,应用Sf21细胞悬浮培养技术大量表达rBovIFN-γ。利用Western blotting、质谱分析(MS)、抗病毒试验等对rBovIFN-γ进行鉴定。Western blotting分析显示,rBovIFN-γ具有良好的反应原性;MS分析表明,rBovIFN-γ的6个肽段序列与牛IFN-γ的氨基酸序列完全匹配,在蛋白质质谱数据库中搜索结果为牛IFN-γ;MDBK/VSV抗病毒试验显示,rBovIFN-γ具有很高的抗病毒活性,为1.05×10⁵ IU/mg。

通过PCR方法扩增Ⅰa型牛源无乳链球菌地方菌株M7的Sip基因,将目的片段克隆入pGEM-T Easy载体并进行测序,采用多种生物软件对Sip基因及其表达的蛋白质进行分子特征分析。试验结果表明,M7菌株的Sip基因为1305 bp,未出现基因缺失;与GenBank中发表的不同血清型的无乳链球菌菌株的相应核苷酸序列同源性为98.0%~100.0%,推导的氨基酸同源性为97.2%~99.8%。M7的Sip基因与中国菌株Ly2(FJ808732)和美国菌株GB00549(FJ752159)的相应基因的核苷酸同源性和氨基酸同源性最高,核苷酸同源性均为100.0%,氨基酸同源性均为99.8%。该Sip基因表达的蛋白质是一种稳定的分泌性外膜蛋白,疏水性强;其N-末端的第52-95位氨基酸残基之间含有1个LysM超家族的保守结构域;存在1-25位氨基酸的信号肽,剪切位点在第25-26位氨基酸之间;存在多个B细胞和T细胞表位。说明M7菌株的Sip基因是未缺失LysM超家族结构域的比较保守的免疫蛋白。

本试验旨在对猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)在抗体免疫选择压力下分子变异情况进行研究。将HPPRRSV-JXA1株在添加适量抗体或不添加抗体的Marc-145细胞上连续传代各30代,获得毒株JXA1-Abf30和JXA1-f30。对传代前后毒株的ORF3和ORF5基因进行扩增、克隆和序列分析,研究结果显示,JXA1-Abf30和JXA1-f30在ORF3和ORF5基因上核苷酸发生突变位点数累计分别为18和9个,氨基酸发生突变位点数累计分别为15和3个。JXA1-Abf30和JXA1-f30的核苷酸突变速率比为186%,氨基酸突变速率比为500%,非同义突变(NS)与同义突变(S)比值(NS/S)分别为5.0和0.5。此外,抗体压力下传代的毒株ORF5基因有4个碱基位点发生稳定的非同义突变,其中2个(AA31和AA190)与已知抗原表位有关。由研究结果可知,抗体压力下传代的PRRSV的突变速率和非同义突变数目明显高于无抗体压力下的传代毒株;抗体免疫选择压能显著影响PRRSV的ORF5基因变异,并呈现明显的压力选择性突变,对ORF3基因变异的影响小于ORF5基因。

为了丰富优良地方品种隆林山羊的肌细胞生成素(myogenin,MyoG)基因遗传学基础信息,并探究其序列结构及其对山羊肌肉的发育分化调控机理。本研究设计1对特异性引物,采用PCR和克隆技术成功获得隆林山羊MyoG基因2419 bp长的DNA序列。结果表明,该基因包括3个外显子、2个内含子、部分5'UTR和3'UTR区,编码区DNA序列长675 bp,共编码224个氨基酸,该氨基酸序列无信号肽序列和跨膜结构。经同源性分析可知,隆林山羊MyoG编码区核苷酸序列及其编码的氨基酸序列与其他物种比对结果和氨基酸系统进化树的聚类结果相符,均显示隆林山羊与哺乳动物中的绵羊、牛和野猪的亲缘关系最近,氨基酸同源性达到95%以上。因此隆林山羊MyoG基因在哺乳动物中具有较高的保守性,而MyoG基因的克隆、序列分析和结构预测将为今后该基因的表达与调控、肉质改良、山羊开发利用等研究提供了更充分的分子生物学基础信息和理论依据。

为获取纳米铜对大鼠肝脏毒性的蛋白质组表达图谱,试验通过构建大鼠纳米铜中毒模型,采用双向凝胶电泳技术获取了大鼠纳米铜中毒组和对照组肝脏的蛋白质2-DE图谱,结合PDQuest 8.0软件分析发现200 mg/kg纳米铜组大鼠肝脏2-DE图谱中有27个蛋白质斑点表达上调,16个蛋白质斑点表达下调,共有43个差异蛋白质点。试验利用蛋白质组学技术研究大鼠纳米铜肝脏蛋白质组学,为在蛋白质水平阐明纳米铜的毒性作用机制奠定基础。

本研究选择禽流感病毒H9N2株的HA的两个保守T细胞表位基因和M2基因胞外保守序列(M2e),经人工合成并通过PCR扩增获得HA-M2融合表位基因,将其与含有增强型绿色荧光蛋白的载体pEGFP-N1连接,构建了重组真核表达质粒HA-M2-pEGFP-N1。采用脂质体法转染体外培养的鸭胚成纤维细胞(DEF)后,通过RT-PCR、直接荧光观察和间接免疫荧光检测,结果表明,成功构建了重组真核表达质粒HA-M2-pEGFP-N1,且以HA抗原表位和保守的M2e序列为基础构建的重组蛋白能够在鸭胚成纤维细胞中成功表达。本试验为研制新型的禽流感通用疫苗,进一步探索HA基因与靶细胞相互作用及AIV的感染机理等奠定了基础。

本试验根据GenBank中登录的牛副流感病毒3型(BPIV-3)基因序列,利用在线软件Primer Explorer V4 Software和Primer Premier 5.0,针对BPIV-3 NP基因序列的保守区设计并筛选了一套环介导逆转录等温核酸扩增(RT-LAMP) 引物,建立BPIV-3特异性检测的RT-LAMP方法。在Bst DNA聚合酶作用下,63 ℃恒温反应1 h即可完成扩增过程,扩增产物通过浑浊度比较、凝胶电泳和肉眼可视化进行判定。结果表明,该方法比RT-PCR敏感度更高,最低检出量可达0.069 fg/μL。该方法可用于牛副流感病毒3型的实验室检测和临床初步诊断。

为了构建绵羊透明质酸酶-2(hyaluronidase 2,Hyal-2)的真核表达载体并实现其在牛乳腺上皮细胞内瞬时表达,根据GenBank中绵羊Hyal-2基因序列(登录号:NM_001009754)设计2对引物,并分别在前段上游和后段下游引物5'端引入HindⅢ酶切位点和BamHⅠ酶切位点,同时在上游引物酶切位点后加入KOZAK序列,进行分段PCR扩增。以扩增的两段产物为共同模板运用重叠(overlapping)PCR技术扩增Hyal-2基因全长。通过连接反应将双酶切并纯化后的目的片段克隆于真核表达载体pEGFP-C1上,并通过脂质体转染法将构建好的真核表达载体转染牛乳腺上皮细胞,运用RT-PCR及Western blotting方法分别从核酸及蛋白质水平验证其表达。经测序分析,目的片段与模板核苷酸同源性为99%,氨基酸同源性为99%,且片段插入方向正确。RT-PCR及Western blotting方法检测均出现目的条带,证明成功构建了绵羊透明质酸酶-2的真核表达载体,并在牛乳腺上皮细胞中获得表达。

为建立掺糖造假蜂蜜中残留糖化酶的检测方法,用从黑曲霉中提取的糖化酶作为免疫原,免疫BALB/c小鼠,利用杂交瘤技术获得了12株稳定分泌针对糖化酶抗体的杂交瘤细胞株。单克隆抗体亚型鉴定结果显示,10株为IgG1,2株为IgG2b,轻链均为κ轻链。Western blotting分析结果表明,12株抗体均可特异性结合糖化酶。其中6株单抗(McAb-2H4F9、6H9D8、8F2F11、8F2E9、1A8G6、1C4D5)细胞株采用体内诱生法制备的腹水效价均1∶1×10⁴以上。采用抗体叠加试验对这6株抗糖化酶单抗的抗原识别位点进行检测,反应增殖结果表明,6株单抗分别针对4类不同抗原位点,McAb-6H9D8和McAb-8F2F11针对第Ⅰ种抗原决定簇;McAb-1A8G6和McAb-1C4D5针对第Ⅱ种抗原决定簇;McAb-8F2E9针对第Ⅲ种抗原决定簇;McAb-2H4F9针对第Ⅳ种抗原决定簇。制备的抗体针对不同的抗原表位,为双抗夹心ELISA方法的建立提供前提。

本研究根据GenBank已收录奶牛ApoB100基因序列,设计特异性引物获得目的基因。经pGM-T载体克隆,对重组质粒进行BamHⅠ和EcoRⅠ双酶切鉴定并测序,序列同源性达100%;将目的基因连接到pET-28a表达载体中,提取质粒,转化到Rosetta(DE3)中,筛选的阳性克隆经IPTG诱导。SDS-PAGE初步分析表明,成功获得分子质量为35 ku的蛋白质;Western blotting结果呈阳性,表明通过本试验成功获得了目的蛋白。

将增殖的禽呼肠孤病毒S1733毒株进行浓缩,然后进行蔗糖梯度纯化,测定纯化后病毒的浓度,按每只鼠100 μg的病毒用量免疫BALB/c小鼠,免疫5次后取其脾细胞与骨髓瘤细胞SP2/0 按5∶1进行融合。对融合后的杂交瘤细胞进行筛选,阳性孔经3次有限稀释法克隆。通过间接ELISA方法测定抗体效价,并通过Western blotting、Dot-ELISA、直接免疫荧光和中和反应等方法对2株单克隆抗体特性进行检测。试验结果表明,纯化的病毒含量为43 mg/mL,用纯化的病毒免疫BALB/c小鼠后与骨髓瘤细胞融合,通过克隆筛选成功获得2株能稳定传代并分泌抗禽呼肠孤病毒单克隆抗体的杂交瘤细胞株SF6-3K3和SB2-1K3。2株单克隆抗体的腹水经间接ELISA测定效价达10⁵以上,其抗体为IgG1亚类,特异性试验表明其与其他病毒株没有交叉反应,具有良好的特异性,并且这2株单克隆抗体没有中和禽呼肠孤病毒的能力,具有识别禽呼肠孤病毒的能力,可以用于禽呼肠孤病毒的特异性检测。

牛传染性鼻气管炎是由牛疱疹病毒1型感染而引起的高传染性疾病。该病临床症状以呼吸道炎症为主,另外伴有结膜炎、流产、脑炎等并发症。20世纪50年代早期,美国科罗拉多州某些牧场首次发现该病。目前缺乏有效的治疗性药物,对动物实施疫苗免疫是防控该病较理想的方法。目前,某些国家仍然使用传统疫苗,然而,经过基因改造的糖蛋白E基因缺失疫苗已在欧盟上市,该疫苗分为活苗和灭活苗两种。文章着重对牛传染性鼻气管炎基因缺失疫苗、亚单位疫苗、活载体疫苗及DNA疫苗最新的研究进行评述。

为了丰富广西巴马小型猪细胞因子生物学数据,本试验采取广西巴马小型猪的外周血,分离淋巴细胞,提取总RNA,利用设计的引物进行RT-PCR扩增,将克隆出的与目的基因大小相符的片段回收,再与T载体连接,转化到大肠杆菌DH5α中,筛选阳性克隆,将重组菌测序后提交NCBI,比较克隆序列与已知序列的同源性,并利用软件对克隆序列进行分析。结果表明,已克隆出的巴马小型猪细胞因子IL-2、IL-12、IFN-γ、TNF-α基因序列长度分别为338、377、380、402 bp,测序结果均与目的基因预期估计值吻合。序列分析结果发现与已知的家猪或野猪的相应基因同源性较高,IL-2、IL-12、IFN-γ、TNF-α序列同源性分别为98.9%、99.5%、99.2%、100%。研究巴马小型猪细胞因子基因序列不仅丰富了生物学数据,而且为细胞因子的功能研究提供了依据,也为细胞因子的定量检测奠定了基础。

糖基化是生物体一种最为常见且最主要的蛋白质翻译后修饰方式,对蛋白质性状及其功能的影响具有重要的生物学意义。近年来,随着糖生物学与糖基化工程的发展,已有越来越多的药物应用于临床。文章概括了蛋白质糖基化修饰的种类及糖基化修饰对蛋白质特性的影响;在此基础上,总结了近年来蛋白质糖基化工程在生物制药中的发展与应用。蛋白质糖基化工程作为一种新型的改良蛋白质性质的手段,必然会在蛋白质的改造中发挥越来越重要的作用。

生长激素释放肽(Ghrelin)是一种在动物体内广泛存在的生长激素促分泌素受体(GHSR)的内源性配体, Ghrelin与位于下丘脑的GHSR结合后,具有促进生长激素释放、增加食欲、调节消化系统功能及能量代谢等作用。文章就Ghrelin的结构、分布、生物学效应及在畜牧业上的应用前景等方面进行综述,以期促进Ghrelin的进一步深入研究。

本研究从牛外周血单个核细胞提取细胞总RNA,RT-PCR获得编码牛PU.1蛋白的cDNA;以pIRES2 DsRed-Express2为骨架构建牛PU.1基因表达载体pIRES2 DsRed-Express2-PU.1,并利用脂质体介导重组质粒分别转染H293T细胞和牛胎儿成纤维细胞,通过荧光观察和Western blotting鉴定表明成功构建了牛PU.1的表达载体,为下一步研究牛血单核细胞分化及牛抗病育种奠定基础。

为了研究日粮维生素A(vitamin A)添加量与肉牛牛肉品质的关系,选用16头24月龄安格斯×秦川黄牛阉牛,以添加0、1100、2200、4400 IU/kg干物质VA的日粮育肥4个月后屠宰分析不同日粮VA添加量对肉牛屠宰性能和牛肉品质的影响。试验结果表明,①在肉牛屠宰特性方面,VA添加量对肉牛屠宰率、净肉率、肠系膜脂肪质量/活体重、大理石花纹评分和眼肌面积均无显著影响(P＞0.05);VA添加量显著影响肉牛末期体重、日增重、背部皮下脂肪厚度、肋部皮下脂肪厚度和肉品剪切力(P＜0.05),其中日增重以2200 IU/kg干物质VA添加量时最高,低于此添加量则有随VA添加量升高而增加的趋势,而背部皮下脂肪厚度和剪切力均以1100 IU/kg干物质VA添加量时最低;②在肉品常规成分(以鲜样为基础) 方面,日粮VA添加量显著影响背最长肌干物质及粗蛋白含量和臀中肌干物质及粗灰分含量(P＜0.05),而对背最长肌粗脂肪及粗灰分含量和臀中肌粗蛋白和粗脂肪含量无显著影响(P＞0.05);③在牛肉氧化稳定性方面,VA添加量对吊挂成熟的背最长肌和臀中肌的总色素含量、硫代巴比妥酸反应物值(TBARS)和滴水损失均有显著影响(P＞0.05)。其中,总色素含量在背最长肌和臀中肌均以1100 IU/kg干物质VA添加量时最高,TBARS值在背最长肌以2200 IU/kg干物质VA添加量时最低,在臀中肌以1100 IU/kg干物质VA添加量时最低。综合各方面结果,在该试验条件下,以1100 IU/kg干物质VA添加量饲喂秦安杂交阉牛的效果较好。

将8只40日龄安装永久性皱胃瘘管的无角陶赛特与小尾寒羊杂交F1代母羔(平均体重为8.90 kg±0.38 kg)根据体重分为2组,每组4只,在60~80、81~120和121~240日龄分别饲喂日粮1、2和3,并分别添喂1.2%、0.8%和0.4%的赖氨酸,以研究添喂赖氨酸对到达羔羊皱胃营养物质的影响。结果表明,与对照组相比,在日粮1、2和3中添喂不同水平的赖氨酸,使羔羊到达皱胃的干物质分别增加了7.01%(P＞0.05)、11.59%(P＜0.01)和10.65%(P＜0.05),有机物分别增加了8.48%(P＞0.05)、13.01%(P＜0.05)和12.14%(P＜0.01),粗蛋白质分别增加了11.12%(P＞0.05)、21.73%(P＜0.01)和12.44%(P＜0.05),微生物蛋白分别增加了13.46%(P＜0.05)、26.85%(P＜0.01)和15.08%(P＜0.05),总氨基酸分别增加了39.22%(P＜0.01)、35.52%(P＜0.01)和28.27%(P＜0.05),总必需氨基酸分别增加了49.21%(P＜0.01)、34.40%(P＜0.01)和28.11%(P＜0.05),赖氨酸分别增加43.77%(P＜0.01)、37.25%(P＜0.01)和34.38%(P＜0.05)。在对照组和试验组中,到达皱胃的赖氨酸主要为结合赖氨酸,而游离赖氨酸一般低于总赖氨酸量的1%。添喂赖氨酸使羔羊的干物质自由采食量分别比对照组提高了12.57%(P＞0.05)、19.38%(P＜0.01)和16.29%(P＜0.01),前胃干物质消化量分别增加了20.81%(P＞0.05)、35.64%(P＜0.01)和19.97%(P＜0.01),日增重分别提高了17.34%(P＜0.05)、21.30 %(P＜0.01)和17.76%(P＜0.05)。因此,给60~240日龄羔羊添喂赖氨酸可增加到达皱胃的营养物质的量和前胃有机物的消化量,从而增加羔羊的营养供应。

试验依据国家饲料卫生标准(GB13078—2001)中的检测方法对平菇不同生长阶段培养基的基质组分进行了检测和安全性评定。通过对平菇不同生长阶段培养基(以棉籽壳和玉米芯为主)基质组分的检测及对基质饲料价值的评定,结果发现,第4潮菌糠用作饲料营养价值较高且生产成本较低。此时粗蛋白质含量为10.10%,较初始培养基提高了59.31%,而粗纤维含量降低了29.57%,木质素、纤维素和半纤维素的降解率分别提高到63.62%、46.60%和77.06%;并依据国家饲料卫生标准要求对第4潮菌糠中的游离棉酚、黄曲霉毒素B₁和重金属含量等指标进行了检测,其中游离棉酚的含量仅为67.90 mg/kg,未测出黄曲霉毒素B₁的含量(＜10 μg/kg),铅、氟、铬、镉、汞的含量均符合国家饲料安全标准。因此,用第4潮菌糠制备反刍动物粗饲料可满足要求,切实可行。

近年来随着中国养猪业不断规模化、集约化的发展,如何提高母猪的繁殖性能已成为养猪行业的热点。母猪的繁殖性能受遗传、营养、环境、健康状况等因素综合影响,其中营养因素是十分重要的因素之一。在母猪饲养管理的不同阶段采取一些简单可行的营养学方法,会显著提高母猪繁殖性能。作者在分析影响母猪繁殖性能的营养因素的基础上,提出了在母猪不同饲养阶段所采取的营养调控措施。

试验旨在研究发芽玉米对荷斯坦奶牛瘤胃发酵、血液成分、产奶性能及乳品质的影响。选取胎次、分娩日龄、产奶量相近的荷斯坦泌乳奶牛15头,试验分为3组,每组5头。对照组饲喂基础日粮(TMR和苜蓿干草),T1、T2组分别在基础日粮中添加20%发芽玉米和20%发酵发芽玉米。结果表明,添加发芽玉米及发酵发芽玉米均能降低瘤胃pH的变化幅度,提高挥发性脂肪酸和氨态氮浓度,但差异均不显著(P＞0.05);与对照组相比,T1、T2组4%乳脂校正乳极显著提高(P＜0.01),并可显著提高T2组的饲料效率(P＜0.05),显著降低乳中体细胞数(P＜0.05);T1、T2组具有降低乳中胆固醇含量的趋势,并对血液成分无显著影响。因此,饲料中添加发芽玉米可改善瘤胃内环境,显著提高产奶量与饲料效率,显著降低乳中体细胞数,且乳中胆固醇含量有降低的趋势。

本试验旨在探讨经理囊散治疗不孕症奶牛前后,血清中微量元素(Cu、Fe、Mn、Zn)与白介素(IL-1、IL-6)的含量变化规律。利用火焰法原子吸收光谱法和酶联免疫吸附法分别检测试验组和对照组治疗前、后血清中微量元素和白介素的含量。试验结果表明,①理囊散治疗卵泡囊肿有效率为83.33%,排卵延迟有效率为90.91%;②在卵泡囊肿型奶牛中,Mn、Zn含量治疗前均显著低于正常组(P<0.05),Fe治疗前显著高于正常组(P<0.05),经治疗后逐渐达到正常值水平,Cu、IL-1、IL-6含量治疗前后差异不显著;③在排卵延迟型奶牛中,Fe治疗前显著高于正常组(P<0.05),Mn含量治疗前极显著低于正常组(P<0.01),Zn含量治疗前显著低于正常组(P<0.05),经治疗后逐渐达到正常值水平,Cu、IL-1、IL-6含量治疗前后差异不显著。因此,理囊散对奶牛不孕症血清中部分微量元素和白介素含量有微调作用,在奶牛不孕症治疗效果上有不可忽视的作用。

乳糖是乳中的特有成分,与产奶量密切相关。影响牛奶中乳糖合成的因素很多,作者主要综述与其相关基因,包括乳腺葡萄糖转运蛋白、细胞内催化乳糖合成的酶类、与泌乳和乳糖合成相关的激素(胰岛素、催乳素、生长激素、糖皮质激素、瘦素)、细胞因子(IGF-Ⅰ、IGF-Ⅱ、EGF)及其主要的信号传导通路的研究进展。

肝脏是家禽体内最大的消化腺,其发生发育与功能的行使紧密相连。本研究从组织学的角度观察肉鸡肝脏组织在胚胎发育过程中的特点,并比较高、低脂系间肝脏组织在发育过程中的区别。结果发现,肝叶体积随日龄的增长而增加;胚胎发育至12日龄时肝小叶结构基本发育完整;在胚胎发育后期,肝细胞内脂滴明显增加,且肝叶周边的肝细胞较肝叶中心的肝细胞增殖活动旺盛。而在整个胚胎发育过程中,两系间肝细胞内脂滴沉积并没有明显的区别。

比较完整羊膜和去上皮羊膜、不同冻存时间的羊膜对山羊角膜缘上皮细胞体外培养的影响,筛选出羊膜最适处理方法。将山羊角膜缘组织块分别接种于完整羊膜、去上皮羊膜、新鲜去上皮羊膜、冻存30 d去上皮羊膜、冻存90 d去上皮羊膜、冻存180 d去上皮羊膜上,比较在完整羊膜和去上皮羊膜及不同冻存时间羊膜上角膜缘上皮细胞的生长特性和组织结构。试验结果显示,在去上皮羊膜上角膜缘组织块贴壁和细胞增殖能力较完整羊膜强,角膜缘上皮细胞在2组羊膜上均能形成多层结构,但完整羊膜上形成的组织表层角质化较严重;在冻存30 d羊膜上角膜缘组织块贴壁和细胞增殖能力较新鲜羊膜、冻存90 d羊膜、冻存180 d羊膜强,角膜缘上皮细胞在各组羊膜上均形成多层结构,其结构无明显差异。结果表明,冻存30 d去上皮羊膜是构建组织工程人工角膜最适的羊膜载体材料。

将280只50周龄健康、生产性能相近的黑羽绿壳蛋鸡随机均分为4组,每组设5个重复,每个重复14只。对照组饲喂基础日粮,试验组在基础日粮中分别添加0.5%、1.0%、1.5%益母草粉,观察其对黑羽绿壳蛋鸡血清生化指标、血液激素及卵巢的影响。结果表明,与对照组相比,在绿壳蛋鸡日粮中添加1.0%和1.5%益母草粉可显著降低血清中总胆固醇(TC)、甘油三酯(TG)和低密度脂蛋白(LDL)含量,提高高密度脂蛋白(HDL)、雌二醇(E₂)和促卵泡激素(FSH)含量,增加卵巢相对重量。益母草可以影响脂肪代谢,具有降低血脂的作用,考虑到生产成本问题,最适添加量为1.0%。

细胞凋亡是细胞为维持内环境稳定,更好地适应生存环境而主动形成的一种自我死亡过程,它涉及一系列基因的激活、表达及调控等作用。附植前的胚胎就已经观察到凋亡的发生,研究认为超出一程度的凋亡不利于胚胎的发育。作者主要对哺乳动物附植前胚胎发生凋亡的研究进行阐述,为改进体外培养体系、提高胚胎质量提供一定的理论依据。

细胞悬浮培养是利用生物反应器大规模培养动物细胞生产生物制品的核心技术,是当前国际上生物制品生产的主流模式。作者就微载体的发展、各种生物反应器的基本原理及应用状况、悬浮培养技术存在问题、中国悬浮培养技术产业化存在的挑战和展望等作一综述。

为进一步筛选苦马豆的主要毒性成分和生物碱类活性物质,对苦马豆生物碱成分进行初步分析。采用生物碱预试、薄层色谱和气相色谱质谱联用等方法对宁夏采集的苦马豆生物碱成分进行定性分析。经薄层色谱分析,苦马豆生物碱出现了Rf值与苦参碱相近的斑点;气相色谱质谱联用分析确定苦马豆生物碱出现了与苦参碱色谱保留时间相近的峰,且该峰对应的离子碎片质谱图与苦参碱离子碎片质谱图一致。但通过薄层色谱和气相色谱质谱联用分析均未从苦马豆中检出吲哚里西啶生物碱——苦马豆素。结果表明,宁夏采集的苦马豆中含有苦参碱,不含苦马豆素或所含苦马豆素低于检测限。

阳离子抗菌肽是生物体抵御外源性病原微生物入侵而产生的一类小分子多肽, 广泛分布于生物体内,具有广谱抗菌活性,是生物体先天性免疫防御系统的重要组成部分。除了具有抗细菌功能外,还具有抗真菌、抗原虫、抗病毒及抑制肿瘤细胞等功能,并对正常的真核细胞毒性较低,是新一代抗生素的理想替代品,但是同抗生素一样,部分细菌也能对抗菌肽产生抗药性。作者将从阳离子抗菌肽的杀菌及抗药性机制等方面进行阐述。

本试验利用微滴、微穴和平板培养系统对徒手克隆(hand-made clone,HMC)重组胚进行体外培养;采用了40% EG(ethylene glycol,EG)、25% EG＋25% DMSO(dimethylsulphoxide,DMSO) 和20% EG＋20% DMSO＋0.5 mol/L蔗糖作为玻璃化冷冻液对HMC囊胚进行了超低温冷冻;并且比较了HMC与传统核移植的胚胎生产效率及囊胚冷冻存活率。结果表明,微穴系统的卵裂率要显著高于平板系统(P<0.05),极显著高于微滴系统(P<0.01);且微穴系统的囊胚率(40.0%)极显著高于平板(19.8%)和微滴系统(8.3%)(P<0.01)。采用20% EG＋20% DMSO＋0.5 mol/L蔗糖作为冷冻保护剂时HMC囊胚存活率极显著高于40% EG(P<0.01);HMC重组胚的融合率和囊胚率均高于传统核移植法(P<0.05;P<0.01),而HMC囊胚的冷冻存活率与传统核移植生产的囊胚没有显著差异。以上结果说明水牛HMC可以替代传统核移植法生产克隆胚胎,微穴体系最适合水牛HMC胚胎的体外培养,且采用20% EG＋20% DMSO＋0.5 mol/L蔗糖对HMC囊胚进行玻璃化冷冻可以取得良好的冷冻效果。

马精液冷冻保存是一种将种公马精液加入抗冻保护剂,再进行一系列处理,最后保存在超低温中(液氮、干冰)的技术。近年来该技术随着马冷冻精液在许多国家马匹繁殖育种中逐渐应用而得到了较好的发展。作者综述了马精液冷冻保存技术的精液稀释、离心、再稀释、降温平衡、分装剂型、降温冷冻、液氮保存的研究进展,旨在对马精液冷冻保存技术的进一步研究提供一定的参考,以期推动中国现代马业的健康可持续发展。

绵羊在发情周期中各生殖激素浓度变化与卵泡发育、成熟和排卵有着密切的关系。为了研究巴美肉羊血清生殖激素的动态变化及其与排卵数关系,试验采用电化学法,测定了12只成年母羊发情期血清中2种类固醇激素(E₂和P₄)的浓度水平,分析其动态变化规律,并用SAS 9.0的方差分析程序分析激素浓度与排卵数的关系。结果表明,两种激素在排单卵组和排双卵组绵羊间变化规律不同,E₂在排单卵组表现为先下降后升高的变化趋势,在排双卵组表现为持续下降趋势;P₄在排单卵组表现为持续上升的趋势,在排双卵组为先上升后下降的变化趋势。排单卵和排双卵组绵羊在各时间点的E₂和P₄激素浓度差异均不显著(P＞0.05)。

为优化冷冻和解冻方法,提高冷冻效果,本试验比较了不同冷冻速率(-100 ℃ 10 min、-120 ℃ 10 min、-140 ℃ 10 min)和不同解冻温度(37 ℃ 30 s、45 ℃ 30 s、52 ℃ 30 s、60 ℃ 30 s)对猪精液冷冻效果的影响。结果表明,采用-120 ℃熏蒸10 min,解冻后精子活力为0.36,质膜完整率和顶体完整率也优于其他2组,且差异显著(P<0.05)。采用37 ℃ 30 s方法解冻,精子活力、质膜完整率显著高于其他3组,顶体完整率也高于其他3组,但差异不显著(P>0.05),其畸形率最低和60 ℃ 30 s组差异明显(P<0.05),但与45 ℃ 30 s组和52 ℃ 30 s组差异不显著(P>0.05)。因此,采用-120 ℃平衡10 min冷冻,37 ℃ 30 s水浴解冻方法更为适合0.25 mL细管猪冻精解冻。

为优化猪精子冷冻技术,提高解冻后精子的活力和受精能力,本试验分别以含精浆浓度为10%、20%和30%的冷冻保护剂处理精子,以冷冻前、解冻后精子活力和质膜完整性,解冻后精子进行体外受精(IVF)的卵裂率和囊胚率等作为检测指标,同时以含有卵黄的Tris-柠檬酸－葡萄糖(Tris-citric acid-glucose,TCG)冷冻基础液作为对照研究精浆对猪冷冻精子的保护作用。结果显示,在含有10%精浆浓度的稀释液中,冷冻前质膜完整性,解冻后精子活率、质膜完整性、IVF囊胚率相对于对照组均显著提高(P<0.05);当含有10%精浆的冷冻精液解冻后用于人工授精时,与配母猪妊娠率、窝产仔数、窝产活仔数等仍显著低于鲜精授精组(P<0.05)。上述结果表明,含10%精浆的冷冻保护剂能提高精子的冷冻后活力和IVF胚胎发育率,但用于人工授精配种与鲜精相比还有一定差距。

为探讨湘西黄牛分子遗传特征和寻找生长性状相关的分子标记,本试验采用PCR-SSCP方法检测湘西黄牛生长抑素(somatostatin,SST)基因第1外显子126 bp处g.934G>A位点的多态性,并进行了多态性与生长性状的关联分析。结果表明,湘西黄牛在g.934G>A位点有G和A两个等位基因,G等位基因占优势,检测到GG、AG和AA 3种基因型,呈中度多态,达到Hardy-Weinberg平衡状态(P>0.05)。湘西黄牛GG基因型个体的体高和体长显著大于AA基因型个体(P<0.05);GG和AG基因型个体的胸围和体重极显著大于AA基因型个体(P<0.01)。G等位基因对湘西黄牛的体高、体长、胸围和体重4个性状均为正效应。本试验结果提示,SST基因g.934G>A位点可能为湘西黄牛生长性状的分子遗传标记位点。

根据本教研室分离得到的副猪嗜血杆菌,选择毒力强、生长性能和毒力都稳定的菌株作为原始毒株。通过化学诱导剂诱导原始菌株发生突变,再经过毒力试验,挑选出毒力有明显减弱的菌株。安全性试验发现,这些减毒菌株具有较高的安全性,为弱毒疫苗的研制奠定基础。

对伊犁部分地区健康绵羊的鼻拭子、肛拭子、青贮、土壤进行检测,共检测280个样本,经培养特性、生化特性鉴定,并针对单核细胞增多性李氏杆菌高度保守的hly基因设计的特异性引物进行PCR扩增,同时对扩增产物进行分析,结果有5株分离株为单核细胞增多性李氏杆菌,分布率达1.78%。ERIC-PCR结果表明,此5株单核细胞增多性李氏杆菌与标准单核细胞增多性李氏杆菌对照株指纹图谱有差异,属于不同基因型。

本试验以1日龄雏鸡为研究对象,采用细胞培养和MTT检测技术,通过T、B淋巴细胞增殖能力的测定,研究了益生菌对新城疫疫苗免疫雏鸡外周血液和免疫器官T、B淋巴细胞对ConA或PMA增殖能力的影响。结果表明,雏鸡ND疫苗免疫后,益生菌应用雏鸡和ND疫苗免疫雏鸡外周血液和免疫器官中淋巴细胞增殖能力均不同程度高于对照雏鸡,且益生菌联合ND疫苗免疫雏鸡较ND疫苗单独免疫雏鸡,其淋巴细胞增殖能力显著增强。NDV强毒攻击后,无论是益生菌联合ND疫苗免疫雏鸡还是ND疫苗单独免疫雏鸡外周血液和免疫器官T、B淋巴细胞增殖能力均不同程度高于对照雏鸡,而益生菌联合ND疫苗免疫雏鸡淋巴细胞增殖能力又强于ND疫苗单独免疫雏鸡。且益生菌联合ND疫苗免疫雏鸡保护率为100%,ND疫苗单独免疫雏鸡为80%,对照雏鸡发生典型新城疫病全部死亡,表明益生菌可增强ND疫苗的免疫效应,提高ND疫苗免疫雏鸡对NDV强毒攻击的免疫保护力。

本病例通过对创伤性膈疝实施手术修复,并对膈疝成因及手术成功的因素做了总结,对于该类手术的实施及预后,有了进一步的经验积累。

本试验对吉林部分地区规模化猪场进行猪传染性萎缩性鼻炎病原学调查。采集吉林不同地区6个规模化猪场阳性猪鼻腔黏液148份,进行病原菌的分离与鉴定。结果表明,148头猪中有84头被支气管败血波氏杆菌感染,占56.76%;被产毒素多杀巴氏杆菌感染53头,占35.81%;混合感染的11头,占7.43%。结果提示,吉林地区规模化猪场中猪传染性萎缩性鼻炎多以支气管败血波氏杆菌感染为主,混合感染程度轻微。

猪细环病毒(Torque teno sus virus,TTSuV)1999年由美国学者报道,随后多个国家都相继证实了该病毒在猪群中广泛存在。文章就猪细环病毒流行范围、病毒遗传变异、易感动物、传播途径和其致病性最新研究进行综述。

白细胞介素、干扰素、粒巨噬细胞集落刺激因子等细胞因子作为疫苗的免疫佐剂能增强机体的细胞和体液免疫应答,从而增强疫苗的特异性免疫反应,在细菌、病毒、寄生虫及肿瘤疫苗的研究中具有重要的作用。对细胞因子免疫佐剂的效应机制及其在兽医临床中的应用进展进行阐述,为细胞因子佐剂在兽医临床上的进一步应用提供参考。

高致病性猪繁殖与呼吸综合征是由PRRSV变异株引起的一种急性高致病性传染病,近些年给养猪业造成巨大的损失。文章就高致病性猪繁殖与呼吸综合征的最新流行特点、诊断、防治等方面予以介绍。

从临床疑似猪伪狂犬病发病仔猪的脑组织等病料中,经PCR扩增出大小为217 bp的伪狂犬病病毒gp50的基因片段,结果证实为猪伪狂犬病病毒(porcine pseudorabies virus,PRV)感染。随后采用BHK-21细胞进行猪伪狂犬病病毒的分离培养,该分离株经细胞传代培养5代后,能够产生典型的细胞病变,经PCR鉴定为伪狂犬病病毒,其病毒感染力达10^8.68 TCID₅₀/0.1mL。最后用10^7.0 TCID₅₀/mL病毒培养物接种家兔,48 h后注射部位出现典型瘙痒、皮肤破损等症状,于72 h后全部死亡。结果表明,该伪狂犬病病毒分离株对易感动物具有高致病性,为进一步开展该病毒流行病学、致病机理、疫苗免疫及诊断研究奠定了基础。

犬细小病毒病是一种急性、烈性、致死性传染病,特征是非化脓性心肌炎或出血性肠炎,心肌炎型多见于4~6周龄的幼犬,临床症状未出现就突然死亡,出血性肠炎在临床上极为常见,多数能治愈,多发于幼犬,病死率为10％~50％。为了解犬细小病毒病的发病率与犬的月龄、品种、性别、发病时间之间的关系,在2010年3月至2011年2月收治105例犬细小病毒病例,根据流行病学可以看出,2、3月龄的犬发病率最高,纯种犬发病率高,在其秋冬季应当加重预防与治疗,综合本次调查,对本病提出一些科学防治的建议。

为了解钩端螺旋体病在犬、猫体内的感染情况,2011年,在北京地区建立了20个宠物疫病监测点,随机收集了犬、猫血清及尿液样本396份,进行犬、猫钩端螺旋体病的流行病学调查。调查结果为显微镜凝集试验检测犬、猫血清共计200份,抗体阳性的样品共有106份,阳性率为53%,其中猫血清为阳性的样品有20份,阳性率为27.8%;犬血清为阳性的样品有86份,阳性率为67.2%。RT-PCR检测犬、猫尿液共计196份,阳性的样品共有54份,阳性率为27.6%,其中猫尿样21份,阳性样品4份,阳性率为19%;犬尿样175份,阳性样品50份,阳性率为28.6%。

2011年从辽宁省采集以多发性纤维素性浆膜炎为主要特征的病猪肺脏、心包液、血液等病料,通过分离培养、生化试验和PCR检测等方法确认分离到1株副猪嗜血杆菌Hps LN111013,同时应用多种药物对该菌株进行了药物敏感性试验及分析;结果表明该菌株在形态、培养特性和生化试验等方面与国内其他地区所分离到的菌株基本一致,纸片法药敏试验证明本菌对氟苯尼考、头孢噻呋、洛美沙星最为敏感。本研究为进一步确认辽宁省副猪嗜血杆菌流行菌株的血清型和基因型,查明其传染来源和遗传变异情况奠定了基础,为制定辽宁省副猪嗜血杆菌病防控措施提供依据。

奶牛的体况、粪便和行走评分三大指标是判断奶牛健康与否及衡量奶牛饲养管理水平高低不可或缺的指标,在实际生产中受到广泛重视。鉴于此,在前人研究的基础上,作者对三大评分体系在奶牛饲养管理中的应用进行了综述。

试验旨在筛选一株地衣芽孢杆菌M109(Bacillus licheniformis M109)进行培养基和发酵条件的优化。采用单因素试验方法筛选出最佳碳源和氮源的培养基,并利用正交试验方法确定其最佳的碳氮比。为了继续提高地衣芽孢杆菌M109的发酵水平,研究其在发酵过程中的生长曲线、pH和溶氧(DO)水平的变化曲线,通过对发酵过程中生长参数的测定,优化了地衣芽孢杆菌M109最佳的接种量和最适pH。结果发现,溶氧限制是地衣芽孢杆菌M109生长的关键因素;在限定通风量的条件下,通过调节搅拌转速的方法来提高培养基中的溶氧水平,提高发酵密度;通过流加培养基的方法也能提高地衣芽孢杆菌M109的发酵水平。因此,通过对培养基和发酵条件的优化,使地衣芽孢杆菌M109的发酵水平由最初的1.0×10⁹ CFU/mL提高到1.2×10¹⁰ CFU/mL,芽孢形成率为88%。

为掌握规模化养猪场舍内外环境空气质量的变化,为猪舍空气质量对人、动物健康影响的风险评估和相关控制技术的研究提供理论依据。试验采用环境检测方法对南京市郊某规模化养猪场的哺乳仔猪舍、保育舍和生长育肥舍进行空气质量检测。结果显示,春、夏、秋、冬猪舍内环境空气中平均细菌总数分别为118.77×10³、28.51×10³、102.04×10³、62.71×10³ CFU/m³,NH₃的浓度分别为9.67、10.87、9.95、12.74 mg/m³,H₂S的浓度分别为2.81、1.95、2.68、2.78 mg/m³;猪舍外环境空气中平均细菌总数分别为13.57×10³、13.20×10³、16.70×10³、11.85×10³ CFU/m³,NH₃的浓度分别为1.01、1.44、1.07、0.42 mg/m³,H₂S的浓度分别为0.06、0.08、0.03、0.01 mg/m³。猪舍内环境空气中细菌总数春季＞秋季＞冬季＞夏季(P＜0.05),且猪舍内细菌总数高于舍外(P＜0.05),猪舍内在春、秋、冬季除生长育肥舍外,均超出国家规定的标准,而夏季在规定的标准范围内;环境空气中NH₃、H₂S的浓度在国家规定的标准范围内;猪舍内外环境温度、相对湿度和风速等环境指标均符合国家规定的标准。

麋鹿(Elaphurus davidianus)是国家Ⅰ级重点保护动物,为中国特有种。由于人类的猎捕和环境的变迁,在1900年左右该种群在中国基本灭绝。麋鹿重引入是中国第一个重大物种重引入项目,目前已经建立了北京南海子麋鹿苑、江苏大丰麋鹿国家级自然保护区和湖北石首麋鹿国家级自然保护区,分别代表了中国麋鹿的人工圈养、半人工圈养和自然放养3种方式。作者从麋鹿的生物学特征、生境、种群、遗传繁殖、饲养管理及药用价值等方面进行了归纳分析,详细阐述了中国麋鹿种群发展现状及其研究方面取得的成果,为促进麋鹿种群的健康繁衍和保护提供理论依据。

为找出宁夏肉牛患肾结石的营养学诱因,试验对宁夏肉牛患肾结石的日粮营养成分、结石成分和血液生化指标进行测定。结果表明,40头屠宰的肉牛有23头患肾结石,发病率为57.5%;肉牛日粮的精粗比和钙、磷含量均过高,且钙磷比偏低。通过结石能谱分析,结果显示结石的主要化学成分为磷和镁,初步判断为磷酸镁铵或磷酸镁钾;血液中磷和镁偏高而钙偏低,这说明肉牛日粮的高精粗比、高钙高磷日粮、钙磷比偏低是肉牛肾结石的营养学诱因;日粮镁离子含量对肾结石也可能存在着一定的促进作用。