采用实时荧光定量PCR方法比较分析了肉碱棕榈酰转移酶(carnitine palmitoyl transferase,CPT)基因在绵羊和山羊不同组织中的表达差异。研究结果表明,CPT1A mRNA在绵羊肝脏、脾脏中表达明显高于CPT1B、CPT2,CPT1B mRNA在绵羊腹外斜肌中的表达明显高于CPT1A、CPT2。CPT1A mRNA在山羊脾脏中表达明显高于CPT1B、CPT2 mRNA在山羊脾脏中的表达,CPT1B mRNA在山羊后腿股二头肌、腹外斜肌中的表达明显高于CPT1A、CPT2 mRNA在山羊后腿股二头肌中的表达。CPT1A mRNA在绵羊肝脏中的表达显著高于山羊中CPT1A mRNA的表达(P＜0.05)。CPT1A、CPT1B、CPT2基因在绵羊心脏、脾脏、腰大肌中的表达显著高于在山羊中的表达(P＜0.05),CPT1A、CPT1B、CPT2基因在山羊后腿股二头肌中的表达显著高于在绵羊中的表达(P＜0.05)。CPT1A、CPT1B、CPT2基因在绵羊、山羊各组织中的表达存在差异,可能与各基因表达模式、肌肉组织纤维类型、脂肪沉积含量不同等因素有关。

构建重组原核表达载体pET32a-VP73,将pET32a-VP73转化BL21感受态细胞,经IPTG诱导,VP73蛋白主要抗原表位区可稳定高效的表达,SDS-PAGE结果表明,IPTG终浓度为1.0 mmol/L,诱导5 h蛋白质表达量最高,表达蛋白为融合蛋白,分子质量约为42 ku。蛋白质纯化后,经SDS-PAGE及Western blotting鉴定,确定表达产物为非洲猪瘟病毒VP73主要抗原表位区融合蛋白。将纯化的蛋白质免疫新西兰大白兔,免疫前后收集血清。用间接ELISA方法测定血清抗体效价,并以非洲猪瘟阳性血清、兔免疫前后血清及猪瘟、猪繁殖与呼吸综合征、猪伪狂犬病阳性血清为一抗,确定该蛋白质的特异性。结果表明,制备的抗血清效价达到1∶1024000,能与纯化的VP73主要抗原表位区蛋白质发生反应。制备的多克隆抗体为VP73蛋白的免疫学研究和非洲猪瘟血清学诊断奠定了基础。

为了探讨耐喹诺酮类决定区(QRDR)、外排泵负调控基因(acrR、marR和soxR)突变对临床分离株氟喹诺酮(FQs)高水平耐药的影响,本研究对临床分离的18株FQs耐药大肠杆菌(E.coli),采用PCR方法检测QRDR、acrR、marR和soxR的突变情况;通过RT-PCR的方法检测外排泵及膜孔蛋白相关基因的表达水平。结果显示,QRDR的突变主要集中在常规突变GyrA(Ser83Leu 和 Asp87Asn)和ParC(Ser80Ile),同时也检测出稀有突变ParC Glu84Gly、Glu84Lys、Glu84Val和Glu84Ala,ParE Ser458Ala等。ED28在acrR基因存在777 bp插入序列;12株菌(包括ATCC25922)在MarR存在Gly103Ser和Tyr137His双突变,其中EP26和EG42存在插入片段;ED40在SoxR存在Thr38Ser、Gly74Arg氨基酸替换。在多突变药菌株中,AcrAB的表达水平明显升高,OmpC和OmpF表达量降低、甚至缺失。

为阐明小鼠感染肝片吸虫后巨噬细胞中脂肪酸结合蛋白2(FABP2)的分布,采用肝片吸虫囊蚴为感染源,经口分别感染雌性BALB/c野生型(WT)及其IL-4单抗处置小鼠,在运用特异性PCR鉴定成功感染小鼠后获取巨噬细胞,并设立人工巯基醋酸盐诱导巨噬细胞对照组进行体外培养。用荧光定量PCR检测选择性激活巨噬细胞的标记蛋白Relmα、Ym1和 Arginase1以确定其激活状态。采用特异性抗体对所获取的巨噬细胞细胞质染色后用共聚焦显微镜摄取不同时间点从不同小鼠体内获取的巨噬细胞染色后的图片。野生型BALB/c巨噬细胞中Relmα、Ym1和Arginase1均大量表达;IL-4单抗处置BALB/c小鼠和巯基醋酸盐诱导小鼠中巨噬细胞中的Relmα、Ym1和Arginase1的表达量较野生型小鼠中的极显著或显著下降。FABP2在FeMΦ中并不分布于细胞质膜下,而是呈点状广泛分布于细胞质中,其荧光强度在12~24 h间呈上升趋势,在24~48 h间却呈下降趋势。

根据GenBank上公布的牛副结核分枝杆菌C-2染色体的ISMav2基因保守区域序列设计合成1对特异性引物,建立了一套SYBR GreenⅠ荧光定量PCR检测牛副结核分枝杆菌(Mycobacterium paratuberculosis)的方法。以实验室构建的牛副结核分枝杆菌pMD-ISMav2阳性重组质粒为标准品,通过优化反应条件,建立了标准曲线,其相关系数为0.999。以构建的标准品为模板,进行了特异性和敏感性试验。结果显示,该方法检测布氏杆菌、大肠杆菌、沙门氏菌、链球菌DNA均为阴性;最低可检测到相当于每微升1.96×10¹拷贝数的标准品阳性质粒。本研究建立的实时荧光定量PCR具有特异、敏感和快速等优点,可用于牛副结核杆菌病的监测。

本研究为体细胞核移植生产转基因动物提供核供体,以阳离子脂质体介导转染同源重组成纤维细胞生长因子5(fibroblast growth factor 5,FGF5)基因打靶载体至体细胞中,经正负双筛选获得了51个细胞克隆,扩繁后剩余12个克隆,最终经DNA及RNA水平的分子生物学鉴定得到4个阳性细胞克隆,即建立了敲除FGF5基因的内蒙古阿尔巴斯绒山羊胎儿皮肤成纤维细胞系。与普通细胞相比,所得的阳性细胞克隆在细胞形态、性状及生长特性等方面均发生了极其显著的变化:细胞体积增大;边界模糊,立体感降低;生长速率明显下降;胰蛋白酶消化所需时间明显增加。研究结果表明上述变化可能是受到了敲除FGF5基因、细胞转染和药物筛选作用等的影响所致。

本试验利用PCR扩增3种冠环线虫5个样品的核糖体DNA内转录间隔区(ITS)及5.8S片段,将PCR扩增产物纯化后直接进行序列测定和分析。序列比对和分析结果显示,所测样品ITS1-5.8S-ITS2的长度范围为748~843 bp,总变异位点(包括gaps)119个,简约信息位点18个;其中ITS1和ITS2的长度范围分别为367~370 bp和228~320 bp,变异位点分别为14个和105个,简约信息位点均为9个。所有测试样品的5.8S片段完全相同,长度为153 bp。5条序列ITS1区的G+C含量(48.0%~48.5%)明显高于ITS2区(37.7%~40.3%)。通过序列两两比对,3种冠环线虫ITS1和ITS2的种间差异性分别为1.9%~3.5%和5.6%~31.8%;而种内差异性分别为0~0.5%和0~0.9%。并且所测序列与GenBank中已知序列的同源性为99.07%~99.41%。本研究认为,ITS序列可以作为冠环线虫种类鉴定的分子标记。

为探索建立马病病毒基因芯片检测方法,采用人工拼接的方式拼接了非洲马瘟病毒(ASHV)核酸序列,通过分子克隆技术获得西尼罗病毒(WNV)和马冠状病毒(ECV)的特异基因片段。用芯片点样仪逐点分配到处理过的玻片上,制备成检测芯片。以拼接、克隆的核酸序列为模板通过多重不对称RT-PCR进行特异性扩增和荧光标记后滴加到芯片上进行杂交,对杂交结果进行扫描检测和计算机软件分析。结果显示,制备的基因芯片可同时检测和鉴别上述3种病毒,ECV质粒样品、WNV质粒样品检测灵敏度为10²拷贝;AHSV质粒样品检测灵敏度为10⁴拷贝。其他病毒材料未出现荧光信号,验证了本方法的特异性。证明基因芯片技术可快速、准确和灵敏地同时进行多种病毒的检测。

猪繁殖与呼吸综合征(PRRS)是由猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)引起的高度接触性传染病,主要引起母猪繁殖障碍,表现为妊娠后期流产、死胎、木乃伊胎及弱仔。E蛋白是由ORF2b编码的一个非糖基化结构蛋白,分子质量约10 ku,具有影响病毒复制的作用,促使病毒粒子脱壳,但对病毒的装配不起作用,认为具有离子通道蛋白活性。作者就E蛋白的特性、亚细胞定位和拓扑结构、离子通道活性作一综述。

环介导等温基因扩增技术(loop-mediated isothermal amplification,LAMP)是一种特异、灵敏、快速的检测方法。为提高犬瘟热病毒(CDV)检测效率、降低检测成本,针对犬瘟热病毒N基因保守区的8个位点设计了6条引物进行RT-LAMP一步法扩增。对反应体系及条件优化,检测特异性、敏感性,扩增产物通过凝胶电泳、显色反应和浑浊度比较进行判定。试验结果表明,该方法特异性强、敏感度高,操作简便、快速、便于观察,适用于门诊和现场检测。

利用RT-PCR分段扩增的方法,扩增出猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)中山分离株(ZS-GD株)、珠海分离株(ZH-GD株)覆盖全长基因组的10个片段,分别克隆入pMD18-T载体进行序列测定,获得了PRRSV ZS-GD株和ZH-GD株基因组全长15320 bp的核苷酸序列。利用生物信息学软件对PRRSV ZS-GD株和ZH-GD株全基因组序列进行了遗传进化分析,结果显示PRRSV ZS-GD株和ZH-GD株与美洲型参考株的核苷酸序列相似性分别为88.1%~97.8%和88.4%~98.0%;与欧洲型参考株(Lelystad)的核苷酸序列相似性分别为60.6%和60.4%,且在2株毒的Nsp2蛋白上有30个aa的缺失,表明PRRSV ZS-GD株和ZH-GD株均为美洲型分离株的缺失变异株。

本试验采用PCR方法扩增出完整的PCV2 ORF2基因,并将其克隆到Bac-to-Bac杆状病毒表达系统的转移载体pFastBac1^TM中,获得重组转移载体pFast-ORF2,再将其转化DH10Bac感受态细胞,发生转座反应,通过抗性及蓝白斑筛选获得含有ORF2基因的重组杆粒,通过Cellfectin转染试剂介导将重组杆粒DNA转染Sf9昆虫细胞,获得重组杆状病毒。用该重组杆状病毒感染Sf9昆虫细胞,并通过间接免疫荧光法和Western blotting检测目的蛋白的表达。结果表明,ORF2基因在昆虫细胞中获得表达,表达的蛋白质可被PCV2阳性血清识别,这为进一步研究PCV2亚单位疫苗及诊断抗原奠定了基础。

干扰素制剂具有广谱的抗病毒和免疫调节活性,在医学和兽医临床上具有广阔的应用前景。但在实际生产中,液体剂型干扰素制剂存在热稳定性差、不易长期保存和远距离运输等问题,冻干后则可延长保存期、增加稳定性。作者主要对冻干技术的原理、干扰素冻干保护剂和冻干工艺的筛选等进行了综述。

为了探讨鸭疫里默氏杆菌(Riemerella anatipestifer, RA)云南流行株的外膜蛋白A (OmpA)的基因序列差异及其与16S rRNA序列的相关性,PCR扩增18株云南流行株鸭疫里默氏杆菌OmpA基因及16S rRNA核苷酸序列,分别构建其系统进化树,分析其系统进化关系。结果表明,18株鸭疫里默氏杆菌OmpA基因分为2个群,其同源性分别为86%~99.2%和92.6%~100%。18株鸭疫里默氏杆菌16S rRNA基因同属1个群,同源性高达96.1%~100%。 RA-1、RA-2、RA-11和RA-39 4株分离株的OmpA基因位于进化树的同一个亚群,其16S rRNA基因也位于进化树的同一亚群,两者呈现出明显的相关关系,其他14株分离株的OmpA基因系统进化树与16S rRNA基因系统进化树无明显的相关关系。

染色体是生物细胞内遗传物质的主要携带者,其在细胞水平上对生物的性状进行控制,在生物进化过程中对物种的形成起到了重要的作用。近年来,随着细胞遗传学研究方法的不断进步,对鹿科动物染色体的研究也逐渐深入。作者回顾了近年来国内外鹿科动物染色体的研究进展,同时结合国内鹿科动物现状,提出了鹿科动物染色体研究中存在的问题及进一步研究方向。

海藻糖属非还原性双糖,在生物体内作为一种贮藏性糖类,可提供能量来源,同时它也是一种重要的应激代谢产物,对应激状态具有高度抗性。外源性海藻糖对细胞、抗体等生物活性物质同样具有非特异性生物保护作用。文章综述了海藻糖的能量储备、抗应激、细胞稳定剂等生物学特性,以及对细胞、抗体和ELISA中包板抗原或抗体的保护作用,并对其在ELISA技术改善中的应用前景做了推测与展望。

本试验用PCR方法扩增了牛疱疹病毒Ⅰ型(bovine herpesvirus-1,BHV-1)Bartha Nu/67株gB、gE基因片段,将其克隆到pGEM-T-easy载体。经转化、筛选、鉴定后将重组质粒经BamHⅠ和EcoRⅠ双酶切后,与经相同方法处理的杆状病毒转移载体pFastBacHTb连接,得到了重组质粒pFBHgB、pFBHgE。经酶切和测序鉴定后,将其转化入含穿梭载体Bacmid的感受态细胞DH10Bac,经抗性、蓝白斑筛选和PCR鉴定,得到了含gB、gE基因的重组穿梭载体。

从几个发生禽病的地区分离到6株病毒,经过血凝试验、血凝抑制试验、中和试验、分子生物学试验等确定为鸡新城疫病毒;根据GenBank公布的新城疫F基因强弱毒株相关基因序列设计合成1对特异性引物,扩增出的F基因片段长度约为610 bp,测序后进行序列比对,并分析其核苷酸序列和氨基酸序列,结果显示,有3株具有新城疫强毒株特性,同时还具备新城疫Ⅶ基因型特征,另外根据平均死亡时间(MDT)、脑内致病指数(ICPI)和静脉致病指数(IVPI)指标测定结果,最终判定这3株是新城疫强毒株且属于基因Ⅶ型,其余3株病毒分离株与La Sota的核酸序列同源性与氨基酸序列同源性均为99%。

参照已发表的日本乙型脑炎病毒(Japanese encephalitis virus,JEV)基因组序列,设计合成1对特异性引物,PCR扩增长约972 bp的E基因片段。将目的片段定向克隆到pET30a表达载体中,酶切及测序鉴定均正确后,转化BL21表达菌,经IPTG诱导得到了以包涵体形式表达的重组蛋白。将重组蛋白变性、纯化和复性后,免疫印迹检测证明纯化的重组蛋白具有良好的抗原性和特异性。

根据GenBank上发表的鸭呼肠孤病毒基因组序列,利用生物学软件设计合成内外2对引物,建立了检测番鸭呼肠孤病毒(Muscovy duck reovirus,MDRV)的套式RT-PCR检测方法,并运用建立的检测方法对分离病毒与其他禽病病毒进行检测。结果显示,该方法能从MDRV中扩增到与预期大小相符的特异性目的片段,检测灵敏度达到0.1 pg病毒RNA,对禽呼肠孤病毒(avian reovirus,ARV)、鸡传染性法氏囊病病毒(infectious bursal disease virus,IBDV)、番鸭细小病毒(Muscovy duck parvovirus,MDPV)、鹅细小病毒(goose parvovirus,GPV)、鸭病毒性肝炎病毒(duck hepatitis virus,DHV)等病毒样品的扩增结果均为阴性。因此,本研究为番鸭呼肠孤病毒病的快速检测及诊断研究提供参考。

本研究于2011年8月从山东省某鸡场鸡群中分离一株病毒,通过对分离株进行病毒血凝试验及血凝抑制试验、RT-PCR、动物回归试验等方法证实已分离到禽流感病毒(avian influenza virus,AIV) H9N2,命名为WUDI-H9N2株。根据GenBank上发表的AIV H9病毒的HA基因序列,用Oligo 6.0生物学软件设计引物,对分离株WUDI-H9N2株HA基因进行扩增、测序及序列分析。将分离的AIV H9毒株与其他血清型代表参考毒株分别进行核苷酸和氨基酸系统发生进化关系分析。WUDI-H9N2株 HA基因全序列长为1708 bp,无核苷酸的插入和缺失,cDNA包含了1个完整的开放阅读框(ORF),编码区由1683 bp组成,共编码560个氨基酸。HA序列与国内参考毒株的核苷酸序列的同源性在92.9%~98.1%之间,其中与安徽分离株A/chicken/China/AH-10-012010(H9N2)同源性为98.1%。

利用RT-PCR技术,从ConA活化的猪外周血淋巴细胞中扩增出γ-干扰素(interferon-γ,IFN-γ) cDNA,克隆到pMD18-T载体中进行测序后,与原核表达载体pET32a(+)重组,表达含His×6的IFN-γ重组蛋白;测序结果与GenBank中已发表的序列进行比对,核苷酸同源性在98.6%~100.0%之间,氨基酸同源性在96.4%~99.4%;经SDS-PAGE和Western blotting分析结果表明,该重组蛋白分子质量约为27 ku,主要存在于包涵体中,且具有良好的免疫学活性,为进行γ-干扰素深入的研究奠定了基础。

试验旨在研究添加不同比例发酵棉粕对黄羽肉鸡血液生化指标及其免疫性能的影响。选用14日龄健康黄羽肉鸡320只,随机分成4组,每组4个重复,每个重复20只鸡,Ⅰ组为空白对照组饲喂基础日粮,Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ组分别在基础日粮中添加3%、6%和9%发酵棉粕,研究不同添加量的发酵棉粕对肉仔鸡生长前期(14~28日龄)、中期(29~45日龄)、后期(46~65日龄)各阶段血液生化指标和免疫性能的影响。结果表明:①各试验组血清生化指标Ⅲ组变化最为明显。较Ⅰ组而言,Ⅲ组前、中、后期的总蛋白含量分别显著提高41.96%、52.57%、28.53%(P＜0.05);Ⅲ组前期的白蛋白含量极显著提高21.31%(P＜0.01),中、后期则显著提高18.10%、19.00%(P＜0.05);Ⅲ组中、后期Ca含量分别提高18.03%(P＜0.01)、51.23%(P＜0.05);Ⅲ组前、中期血清P含量分别显著提高34.55%、31.16%(P＜0.05),后期血清P含量极显著提高27.65%(P＜0.01);Ⅳ组后期总胆固醇含量较Ⅰ组显著降低21.22%(P＜0.05)。②较Ⅰ组而言,Ⅱ组后期IgA含量显著提高11.07%(P＜0.05),Ⅲ、Ⅳ组分别极显著提高24.41%、13.07%(P＜0.01);Ⅱ组后期IgG含量显著提高15.27%(P＜0.05),Ⅲ、Ⅳ组分别极显著提高28.09%、16.63%(P＜0.01);Ⅲ组后期IgM含量极显著提高26.02%(P＜0.01),Ⅱ、Ⅳ组分别显著提高11.13%、10.26%(P＜0.05)。③与Ⅰ组相比,Ⅲ组前期脾脏指数显著提高55.86%(P＜0.05),Ⅳ组极显著提高75.17%(P＜0.01),Ⅳ组中、后期分别显著提高30.66%、44.68%(P＜0.05);Ⅱ组前期法氏囊指数显著提高28.08%(P＜0.05),Ⅲ、Ⅳ组前、中期分别极显著提高69.23%、46.54%、39.74%、37.18%(P＜0.01),Ⅲ组后期显著提高64.71%(P＜0.05)。因此,添加6%发酵棉粕组在提高总蛋白、白蛋白、Ca、P、IgA、IgG、IgM、法氏囊指数都要优于3%、9%发酵棉粕组,而9%发酵棉粕组在降低胆固醇含量和提高脾脏指数方面优于3%、6%发酵棉粕组。

通过对肉牛饲喂低于治疗水平的不同种类抗生素,研究其对肉牛废弃粪便微生物群落中四环素耐药基因数量与持久性的影响。试验肉牛被分成不同抗生素处理组,即氯四环素组、氯四环素和磺胺甲嘧啶组及对照组。将每个围栏中所有动物的新鲜粪便混匀为一份混合样品作为模式样品(每个处理组3份),分别露天放置,在第7、14、28、42、56、70、84、98、112、126和175 天时采样并提取DNA,利用Real-time PCR方法测定四环素耐药基因tet(B),tet(C),tet(L),tet(M),tet(W)及16S rRNA的浓度。结果显示,16S rRNA的浓度在不同处理间相似,在56 d内均有增加的趋势(P＜0.05);总体上看,四环素组的耐药基因初始浓度较高(P＜0.05);所有处理组的tet(B)和tet(C)浓度到56 d时均增长了1~2个对数级,到175 d时又降低到初始水平,而tet(M)与tet(W)的浓度与其他耐药基因相比较高。因此,四环素耐药基因可以在废弃粪便中持续存在超过175 d,而某些基因的最初数量可能会导致错估其后的变化,其浓度的暂时改变并不能归因于微生物群落数量的变化。

生物活性肽属于多功能因子。随着各种生物活性的不断发现,对其生理功能的不断探究,生物活性肽越来越受到人们的关注。作者对不同来源的生物活性肽,依其不同的生理功能进行了综述,以期为生物活性肽的研发提供参考。

为探讨不同比例的中短链和长链脂肪酸混合物对奶牛免疫功能的影响,试验选用72头产奶量、胎次及泌乳日龄相近的中国荷斯坦奶牛,按随机区组试验设计,分为对照组和5个处理组,对照组饲喂基础日粮,处理组在基础日粮上分别添加400 g/d 长链脂肪酸(LCFA,A组)、80 g/d中短链脂肪酸(SMCFA)+320 g/d LCFA(B组)、400 g/d 黄油(C组)、240 g/d SMCFA+160 g/d LCFA(D组)及400 g/d SMCFA(E组)。试验期为63 d,第1周为预试期,试验期最后1 d采集血液样品,用于测定血清中免疫球蛋白及细胞因子的含量。结果显示,日粮添加不同比例的中短链和长链脂肪酸对奶牛血清中免疫球蛋白M(IgM)及前列腺素(PGE₂)的含量没有显著影响(P＞0.05);A组免疫球蛋白A(IgA)的含量显著高于B、E组(P＜0.05),B、D组免疫球蛋白G(IgG)的含量显著高于其余4组(P＜0.05)。日粮中添加脂肪酸均能提高奶牛血清中IL-4及IL-10的含量,尤其是D组,增加效果极显著(P＜0.01)。因此,添加240 g/d SMCFA 和160 g/d LCFA更能提高泌乳中期奶牛的免疫性能。

试验旨在研究日粮中添加屎肠球菌T013复合制剂对生长猪的生产性能、粪便微生物、环境指标及血清指标的影响。选用体重在(31.75±3.78)kg的杜×长×大三元杂交仔猪120头,随机分成对照组(基础日粮)、试验Ⅰ组(基础日粮中添加3%屎肠球菌T013复合制剂)和试验Ⅱ组(基础日粮中添加6%屎肠球菌T013复合制剂),每组4个重复,每个重复10头猪,试验期为28 d。结果表明,屎肠球菌T013复合制剂能增加生长猪日采食量和日增重,降低料重比,但差异不显著(P＞0.05),并且能显著减少腹泻率(P＜0.05);试验Ⅱ组能够极显著降低粪便pH和减少大肠杆菌数量,增加乳酸菌数量(P＜0.01);试验组均能够极显著的减少NH₃的排放(P＜0.01);试验Ⅱ组能够显著增加血清IgG含量和减少尿素氮含量(P＜0.05),对总蛋白、白蛋白、白蛋白/球蛋白和葡萄糖的含量无显著影响(P＞0.05)。因此,屎肠球菌T013复合制剂能够降低生长猪的腹泻率,改善肠道微生态环境,减少NH₃ 的排放,增强猪的免疫能力。

牛肉是一种营养价值较高的食品,具有高蛋白、低脂肪、低胆固醇等优点。随着健康水平和保健意识的提高,人们越来越意识到健康和饮食的关系,这使消费者不仅仅注重牛肉的营养价值,而且要求生产出富含功能性成分的保健型牛肉来提高消费者的健康水平,防止疾病的发生。因此,生产富含功能性成分的牛肉日益成为研究的热点。作者对富含功能性脂肪酸牛肉生产的意义、生产机理及日粮营养调控技术进行了综述。

乳蛋白作为乳中重要的组成成分,含有人体所需的几乎所有必需氨基酸。然而,奶牛乳蛋白的合成受很多因素影响,如日粮组成、遗传因素、饲养环境等,但具体影响机制尚不明确。因此,研究乳蛋白合成机理,结合营养调控措施提高其在乳中的含量,成为目前研究的热点和重点。作者就目前日粮营养水平对奶牛乳蛋白合成的影响及其作用机理的研究进行了综述。

动物生产中饲料营养价值的高低直接影响动物的生产性能及畜产品的品质,实验室常用体外法来评价和估测饲料降解率。体外法主要通过测定底物如饲料降解后的残余量和发酵产物生成量(微生物数量、挥发性脂肪酸)或气体的产量来评价饲料营养价值。体外产气法是基于瘤胃发酵与产气高度相关的一种瘤胃体外模拟技术,该法具有简便、经济、快速、费用低等优点,目前在国内外多用于评价反刍动物饲草的饲用价值。作者主要综述了体外产气法在反刍动物生产中的应用及体外产气法中较为经典的发酵动力学模型。

试验以小花棘豆为研究对象,测定其总黄酮提取物在体内的抗氧化活性。采用超声波协助提取法提取小花棘豆中总黄酮,并使用肝脏损伤小鼠模型(四氯化碳造模)测定小花棘豆总黄酮提取物在体内的抗氧化活性。结果表明,小花棘豆总黄酮可以显著提高小鼠血清和肝脏中超氧化物歧化酶(SOD)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)的活性,并降低丙二醛(MDA)含量和脑组织中脂褐素(LP)含量。因此,小花棘豆总黄酮具有一定的体内抗氧化活性,有一定的利用前景。

N-氨甲酰谷氨酸(N-carbamylglutamate,NCG)是一种新型的猪用饲料添加剂,在饲料中按一定比例添加可显著提高猪的繁殖性能和生产性能。N-氨甲酰谷氨酸(NCG)主要通过促进精氨酸的内源合成,提高母猪窝产仔数和初生重,增强公猪的繁殖力,促进仔猪的生长和发育。作者将NCG在养猪生产中的应用进行了综述,以期为提高养猪生产效率提供参考依据。

研究主要是通过比较水牛卵巢颗粒细胞在不同培养基中的生长状态,并对细胞的增殖、核型及凋亡情况进行检测,以了解水牛卵巢颗粒细胞体外生长特性,建立水牛卵巢颗粒细胞的体外培养体系。结果发现,分离获得的水牛卵巢颗粒细胞存活率约为60%;采用DMEM培养基,颗粒细胞的生长速度和生长状态优于TCM-199和DMEM/F12培养基;细胞培养24 h后开始零星增殖,3~5 d增殖速度达到高峰;第1、3、5、7代颗粒细胞正常核型比率差异不显著,均在85%以上;第1代颗粒细胞的凋亡率与第5代差异显著(P<0.05),与第7代差异极显著(P<0.01)。结果表明,DMEM培养基更适宜用于水牛颗粒细胞的体外培养;水牛颗粒细胞能稳定地进行传代培养,染色体的数目不会发生明显改变,但细胞凋亡率会随着培养代数的增加而明显升高。

试验旨在建立肝脏特异性表达Cre重组酶猪成纤维细胞系,为获得肝脏特异性表达Cre重组酶转基因猪奠定基础。通过PCR方法分别从血液和pcDNA3.1(+)载体上扩增肝脏特异性启动子α1-抗胰蛋白酶启动子(PhAAT)和BGHpolyA片段。通过双酶切(XhoⅠ、SalⅠ)从载体pGC-FRT2neo上获得FRT2neo交换盒,再利用重叠PCR方法获得猪源的Cre重组酶基因,最后通过三重融合PCR方法和酶切方法将4个片段连接。利用真核表达载体pC1-neo构建出Cre表达载体pC1-PhAATCreBGHpolyA-FRT2neo。Lipofectamine^TM2000介导转染猪成纤维细胞,通过G418筛选出阳性细胞系,最后通过PCR鉴定证明构建的Cre重组酶表达载体pC1-PhAATCreBGHpolyA-FRT2neo成功整合到细胞的基因组中,获得了肝脏特异性表达Cre重组酶猪成纤维细胞,为最终通过核移植方法获得肝脏特异性表达Cre重组酶转基因猪奠定基础。

高原环境主要的生态因子为低氧分压,高原民族和动物定居高原的时间和海拔不同,受到不同程度和不同时间的低氧选择。血液生理特征是机体适应低氧环境的一个重要表现,血液生理指标能直接反应机体对低氧环境的适应性。同时,低氧适应相关基因在机体低氧适应的调控过程中起着非常重要的作用。高原民族和动物低氧适应研究的热点集中于血液生理及其形成的分子机制领域,而随着分子生物学技术的发展,越来越多参与低氧适应调控通路的基因被发现,作者就低氧适应血液生理特征和相关基因的研究进展进行综述。

以0.02%胰酶4 ℃过夜消化,分离表皮,37 ℃消化30 min,打成单细胞悬液,经100 μg/mL Ⅳ型胶原处理的培养皿黏附10 min,除掉未黏附的细胞,加入培养基(80% DMEM-F12+20% FBS+氢化可的松(25 μg/mL)+青霉素(100 IU/mL)+链霉素(100 μg/mL)+胰岛素(15 μg/mL)+转铁蛋白+EGF(20 μg/mL))培养24 h,而后将此细胞消化接种到经20 μg/mL丝裂霉素C处理4 h的成年绒山羊成纤维细胞滋养层上,培养2 周后有各种形态的克隆状细胞集落出现,用碱性磷酸酶(AKP)染色呈深黑紫色,初步判断细胞呈阳性。本研究旨在分离绒山羊皮肤干细胞,为研究干细胞分化机制,探索绒毛发育机理,培育高产高质绒毛性状奠定分子育种理论基础。

为探讨游泳应激对小鼠肾脏、肺脏和脑组织脂质过氧化水平的影响,本试验选取50只小鼠进行游泳试验,于游泳前、游泳10、20、30、50 min后分别随机选取10只小鼠眼眶采血致死,采集肾脏、肺脏和脑组织,测定样品中MDA含量、SOD和GSH-Px活性。结果表明,10或20 min游泳应激后,小鼠肾脏、肺脏和脑组织MDA含量均显著增加(P<0.05),之后均有不同程度的降低;游泳过程中小鼠肾脏SOD活性持续升高,30和50 min后均显著升高(P<0.05),游泳20 min后肺脏SOD活性显著降低(P<0.05),30 min后有所回升,50 min后又轻微下降,游泳过程中脑组织SOD活性均无显著性变化;游泳20和30 min后,肾脏GSH-Px活性显著增加(P<0.05),50 min后显著下降(P<0.05),游泳前40 min过程中肺脏GSH-Px持续下降,30 min组显著降低(P<0.05),游泳10和20 min后,脑组织GSH-Px活性显著降低(P<0.05),之后发生波动性变化。结果提示,游泳应激显著影响小鼠肾脏、肺脏和脑组织脂质过氧化水平,推测游泳应激可能引起小鼠全身脂质过氧化反应。

本试验旨在考察重组人干扰素α1b喷雾剂在皮肤应用的局部药代动力学特性,分别在小型猪完整皮肤、通透性增强皮肤和破损皮肤上进行透皮吸收研究。采用1、3、5及25 μg/mL重组人干扰素α1b喷涂于受试部位,在用药后0、1、2、4 h分别取用药部位皮肤组织制成匀浆,检测匀浆中干扰素活性。药物可渗透进入小型猪完整皮肤;在小型猪通透性增强和破损皮肤中,用药4 h内,药物可达到有效治疗浓度;用药剂量和用药时间与皮肤组织中药物活性相关,不同剂量组间和不同检测时间组间差异显著(P<0.05)。5 μg/mL重组人干扰素α1b喷雾剂间隔4 h用药可在用药局部起到抗病毒作用。

防御素(defensins)是一类低分子质量抗菌肽,广泛地分布于动物和植物界。小肠潘氏细胞防御素是存在于哺乳动物小肠肠腺底部的潘氏细胞颗粒内的一类抗菌肽,是肠道天然屏障的重要组成部分。作者综述了小肠潘氏细胞防御素的分类、分布、分子特征和抗微生物活性及其在肠道免疫中的作用。

本试验通过PCR-RFLP技术对大白猪、长白猪和杜洛克猪的视黄醇结合蛋白4(retinol binding protein 4,RBP4)基因第4外显子Msp Ⅰ酶切位点进行多态性分析,并对各基因型母猪的第2、3胎次产仔数、产活仔数、断奶仔猪数、初生窝重、21日龄的窝重及断奶成活率进行测定,进而分析RBP4基因多态性与繁殖性能的关系。结果表明,RBP4基因在3个品种中均存在多态位点;χ²适合性检验表明大白猪在该位点偏离Hardy-Weinberg平衡状态(P<0.05),而长白猪和杜洛克猪在该位点处于Hardy-Weinberg平衡状态(P>0.05)。其中,大白猪中优势基因型为BB基因型,而长白猪和杜洛克猪中优势基因型为AA基因型。在繁殖性能上,长白猪BB基因型群体第2胎总产仔数、产活仔数、断奶仔猪数、初生窝重、21日龄断奶窝重分别高于AA基因型0.97头、1.28头、0.92头、1.74 kg和4.42 kg,高于AB基因型0.92头、1.02头、0.98头、1.43 kg和4.98 kg;第3胎次中总体上BB基因型也为有利基因型。

为了解2009－2010年间在河南、甘肃地区分离鉴定的5株大肠埃希菌O157(E.coli O157)携带stx的情况及不同分离株间stx分子进化与变迁的情况,本研究利用PCR方法对分离株进行了stx基因检测,并完成了序列测定与系统演化分析。结果表明,5株不同动物源的分离株均含有stx1及stx2基因。序列分析结果显示5株分离株间stx1、stx2的核苷酸及氨基酸同源性均较高;stx1基因均与参考株中的山羊源和食品源E.coli O157菌株的同源性较高,进化树中遗传距离最近;分离株的stx2基因与多株牛源及少数人源参考株也具有较高的同源性,进化树中虽然5株分离菌均在一个大主干分支中,但分离株27与其他各分离株及参照株遗传距离最远,独自处于一次级分支中;分离株L37与W、12与50分别分布于牛源、人源E.coli O157小次级分支中;由此可推测,分离株所携带的stx1很有可能是经食品源或羊源E.coli O157传递而来;分离株L37与W、分离株12与50的stx2可能是由牛源、人源E .coli O157菌株传递而来,分离株27的stx2来源不清楚。研究结果表明,5株E.coli O157分离株均含有stx1、stx2基因,但两个基因的起源存在差异。

胰岛素样生长因子-Ⅰ(insulin-like growth factor-Ⅰ,IGF-Ⅰ)基因的表达产物对猪肌肉的生长有着重要的调控作用。以IGF-Ⅰ基因作为撒坝猪生长性状的候选基因,运用PCR-RFLP技术对其HhaⅠ位点的多态性进行了检测,并对IGF-Ⅰ基因的多态性与12个阶段体重、日增重和体尺性状的关系进行了分析。结果表明,撒坝猪IGF-Ⅰ基因的多态性较为丰富,产生AA、AB和BB 3种基因型,其基因型频率分别是0.3473、0.5149、0.1378,等位基因A和B的频率分别是0.6048、0.3952,且该基因座位处于Hardy-Weinberg平衡状态,撒坝猪IGF-Ⅰ基因的遗传变异对其生长性状有着显著的影响(P<0.05或P<0.01),其中,不同阶段体重和日增重的增效基因型为AB基因型,180日龄体尺性状的增效基因型多为BB基因型(部分性状表现为AB基因型最高)。结合前人的研究,初步推断IGF-Ⅰ基因可能是影响猪生长性状的一个主效基因或是一个与影响猪生长性状的数量性状座位(quantiative trait locus, QTL)连锁的基因。

绵羊的繁殖特性已成为绵羊生产的一个重要研究方向,对绵羊繁殖力进行遗传改良是提升中国绵羊生产水平的必由之路,母羊的年产羔能力主要受单胎产羔数和季节性发情的影响。本研究对影响产羔能力的排卵数和季节性发情相关基因及miRNA的研究进行了简要的综述,并对全基因组比较在繁殖性状相关QTL检测中的应用进行了展望。

试验旨在探讨催乳素受体(prolactin receptor,PRLR)基因遗传多态性及其与松辽黑猪、长白猪繁殖性状的关联性。采用PCR-RFLP方法对松辽黑猪和长白猪PRLR基因第10外显子进行了多态性检测,并运用最小二乘法分析各基因型对母猪繁殖性能的遗传效应。结果表明,两个猪种中都存在A、B 2个等位基因和AA、AB、BB 3种基因型,松辽黑猪和长白猪等位基因A的频率分别0.551和0.578,A为优势基因。两个猪种的AA基因型个体的断奶仔猪数、乳头数都显著高于其他两个基因型(P＜0.05),初产松辽黑猪AA基因型个体的TNB、NBA显著高于其他基因型(P＜0.05),对其他繁殖性状影响不显著,但呈现出AA＞AB＞BB的趋势。

MicroRNAs(miRNAs)是近年来研究较为广泛的一种短小RNA,主要通过转录后调控参与真核生物细胞多种生理和病理过程。动物产肉性状为一数量性状,肌纤维是肌肉的组成单位,主要由肌球蛋白组成,而肌球蛋白的合成受到了内外环境的高度调控。作者就近年来miRNAs在主要畜禽肌肉生长和发育过程中的研究进行了综述,为相关研究提供参考。

本试验旨在观察不同组分、不同纯度中药复方多糖对小鼠血液指标的影响。选用环磷酰胺造成小鼠免疫抑制模型,灌服不同组分、不同纯度中药复方多糖、复方总多糖和复方水煎剂,测定它们对小鼠外周血象的影响。结果表明A2多糖组分、B2纯度多糖、复方总多糖、复方水煎剂均能使小鼠红细胞数、白细胞数、白细胞分类数中的嗜中性粒细胞百分比、淋巴细胞百分比明显升高,与模型组比较有极显著性差异(P<0.01)。A2多糖组分、B2纯度多糖、复方总多糖、复方水煎剂可改善环磷酰胺所致小鼠血液参数减少的外周血象,调节免疫失衡。

猪流行性腹泻是对养猪业危害较大的一种疾病,导致腹泻的原因多种多样,给临床诊断带来了困难。本研究将套式PCR技术成功应用于猪流行性腹泻临床病例的快速诊断中,旨在为猪流行性腹泻临床病例的快速鉴别诊断提供一种新的思路。

猪繁殖与呼吸综合征(PRRS)是严重危害养猪业的传染病之一,自2006年夏秋季节,中国自南向北相继暴发高致病性猪繁殖与呼吸综合征,采取快速准确的诊断方法与技术确定病原在PRRS的整个防控过程中具有举足轻重的作用。作者详细介绍了PRRSV诊断方法和技术的最新进展,以期为猪繁殖与呼吸综合征的诊断与防控提供技术支持和参考。

本试验从福建省某猪场疑似猪细小病毒病死胎的淋巴结、肝脏中分离到1 株病毒。病料接种PK-15细胞36 h后出现了圆缩、集聚、脱落等细胞病变,猪细小病毒阳性血清能特异性地中和该分离病毒。根据已发表的细小病毒(PPV) VP2基因的序列设计并合成了一对引物,采用PCR方法可扩增531 bp DNA片段。测序结果表明,分离株VP2基因与NCBI公布的NADL-2株的同源性高达99.2％,证实分离的病毒株为猪细小病毒。为进一步开展该病毒致病机理、流行病学、诊断研究与疫苗免疫等奠定了基础。

从临床疑似犬瘟热的病貉组织中分离到1株病毒,经形态特征、血凝试验、中和试验、间接免疫荧光试验和分子生物学鉴定,该分离病毒为犬瘟热病毒。本研究为研究犬瘟热病毒貉株分子生物学特性、致病机理及构建基因工程疫苗奠定了基础。

为测定不同年龄段封闭群五指山小型猪主要脏器重量和脏器系数,研究影响脏器系数的因素,试验选用普通级封闭群五指山小型猪74头(其中♂43头,♀31头),测定体重和心脏、肝脏、肺脏、脾脏、肾脏、胃6个脏器的重量,计算脏器系数,分别以年龄和体重为研究因素,对脏器重量和脏器系数进差异性、相关和回归分析。性别间比较显示,不同年龄段小型猪脏器重量少量脏器间存在显著性差异(P<0.05),但脏器系数性别间差异不显著(P＞0.05)。单因素分析结果显示,随着年龄和体重的增大,脏器重量显著增加(P<0.0001);在脏器系数对年龄因素的分析中,心脏、肝脏、肺脏和胃出现显著减小的趋势(P<0.0001),而脾脏和肾脏的减小趋势不明显(P＞0.05),而在脏器系数对体重因素的分析中,所有脏器系数均出现明显减小的趋势(P<0.01)。多因素分析结果显示,各脏器的重量和脏器系数受体重的影响程度不同。研究结果表明,性别因素对五指山小型猪脏器重量和脏器系数的影响不大,年龄和体重是主要的影响因素,其中体重因素最为关键,脏器重量随着体重的增加而显著增加,而脏器系数明显减小。

近年来,随着规模化养猪场的迅猛发展和集约化程度的不断提高,猪病的流行日趋加重。中草药黄芪多糖,作为一种新型免疫增强剂和免疫佐剂,以其安全、无毒副作用等优点,逐渐被广大养殖户所认识,许多研究者也纷纷对其进行研究。作者就近年来学者关于黄芪多糖对猪免疫功能影响的有关研究进展作一综述,以期为兽医临床中猪病的防制提供参考。

随着人类生活水平和健康水平的提高,绿色食品(肉、蛋、奶)的需求越来越大,消费者更关心食品的安全性。世界各国,尤其是欧洲、日本等发达国家在大力开展研究药物饲料添加剂的代用品。积极鼓励和倡导绿色安全饲料添加剂的研究和推广,微生态制剂受到世人的瞩目。但是,科学家们仍需进一步探讨该类产品的稳定性和连续性与生理、生化、营养各方面的关系。国内外的学者正在致力于细菌素(抗菌肽(antibacterid peptides)或多肽抗生素(peptide antibiotics))的研究。随着国内外研究的进展和深入,人们相继发现这类多肽不但具有抗细菌、抗真菌的作用,还具有抗寄生虫、病毒、癌细胞等功能,在医药学和食品保鲜技术上,成为研究的热点。在食品安全的今天,细菌素作为一种高效安全的饲料添加剂正在成为可能,需要加大力度进行研究和开发,细菌素的基因工程、蛋白质工程及分子筛选法将继续研究和突破,最终真正能够替代抗生素成为人类生产绿色食品。

从北京某猪场疑似猪伪狂犬病发病死亡仔猪脑及内脏中分离到1株病毒并进行了鉴定。该分离毒株接种ST细胞24 h后出现圆缩、聚集、脱落等典型的细胞病变(CPE);分离毒株能够被伪狂犬病病毒标准阳性血清中和;分离病毒接种家兔后,引起家兔出现奇痒等典型的伪狂犬病临床症状;同时根据GenBank公布的PRV的gD基因设计引物并扩增出特异性的目的片段,扩增产物经过测序比较,表明扩增产物序列为猪伪狂犬病病毒基因序列。以上结果证实该病毒为猪伪狂犬病病毒,依据分离地点命名为猪伪狂犬病病毒北京株。

试验选取70日龄大恒优质肉鸡4个纯系与2个杂交品系共120只(各品系公、母各10只)为试验材料,对其胸肌肌苷酸和鲜味氨基酸的含量进行了研究。结果表明:①肌苷酸含量在品系间存在差异,其中S08品系的含量最高;除了S03与S08、S02与 S06、S02与 S08×S01、S06与 S08×S01之间差异不显著,其他各品系两两间均达到差异显著水平(P＜0.05);②谷氨酸、甘氨酸、天冬氨酸、丙氨酸和精氨酸含量在各品系间存在差异,其中杂交品系S08×S01的5种鲜味氨基酸含量均最高;③性别对肌苷酸的含量没有显著影响(P＞0.05)。大部分品系不同性别间的5种鲜味氨基酸含量均达到差异显著水平(P＜0.05)。

作者对饲喂优质玉米和霉变玉米的猪分别进行猪瘟抗体和疫病检查,结果发现,饲喂霉变玉米的猪群猪瘟抗体水平低,且有玉米赤霉烯酮毒素中毒继发猪瘟的现象;饲喂优质玉米的猪群猪瘟抗体水平全部合格,猪群没有发生疫病。

文章旨在通过颗粒剂制备流程中各辅料种类及其用量的选择、成型工艺和稳定性的考察,确定"加味白头翁"最佳的颗粒剂制备工艺。以软材品质为考察指标,考察药液与总辅料的用量比;采用正交试验,以外观、澄明度、含水量与颗粒质量损失率为综合考察指标对可溶性淀粉用量、α-乳糖用量、糊精用量与羧甲基纤维素钠(HPMC)浓度4因素进行优化研究,确定颗粒的最佳制备工艺。试验结果表明,当辅料与药液比为5∶1时,软材品质良好;当可溶性淀粉∶α-乳糖∶糊精为3∶1∶1时,以0.3％ HPMC作黏合剂,颗粒剂各方面指标最优。通过试验证明,中药复方"加味白头翁"的颗粒剂制备在实验室条件下具有可行性,制备工艺简单明了,所制备颗粒成型好、稳定性高,各方面性质符合药典规定。

样品采集是兽医科学研究中必不可少的环节。以中华人民共和国农业行业标准《动物疫病实验室检验采样方法》为基础,结合临床实践和研究经历,介绍了基于不同研究目的和内容的样品采集种类、数量和操作,以及样品收装、保存和处理方法,重点概述了国内外关于采样方法的最新进展,从而为今后的兽医科学研究提供参考。