猪γ-干扰素全基因克隆及原核表达

›› 2012, Vol. 39 ›› Issue (10): 91-94.

猪γ-干扰素全基因克隆及原核表达

马超英

青海省海西州乌兰县铜普兽医站, 青海乌兰 817000

收稿日期:2012-03-16 出版日期:2012-10-20 发布日期:2012-10-19
作者简介:马超英(1970-),男,青海人,学士,兽医师,研究方向:动物疫病防治。

Cloning and Prokaryotic Expression of Interferon Gamma Full Gene in Pig

MA Chao-ying

The Station of Veterinary in Haixi Tongpu Town,Ulan County Qinghai Province,Ulan 817000,China

Received:2012-03-16 Online:2012-10-20 Published:2012-10-19

摘要/Abstract

摘要： 利用RT-PCR技术,从ConA活化的猪外周血淋巴细胞中扩增出γ-干扰素(interferon-γ,IFN-γ) cDNA,克隆到pMD18-T载体中进行测序后,与原核表达载体pET32a(+)重组,表达含His×6的IFN-γ重组蛋白;测序结果与GenBank中已发表的序列进行比对,核苷酸同源性在98.6%~100.0%之间,氨基酸同源性在96.4%~99.4%;经SDS-PAGE和Western blotting分析结果表明,该重组蛋白分子质量约为27 ku,主要存在于包涵体中,且具有良好的免疫学活性,为进行γ-干扰素深入的研究奠定了基础。

关键词: 基因克隆; 原核表达; IFN-γ基因; 猪

Abstract: To amplify pig interferon-γ(pIFN-γ) cDNA from ConA-activated peripheral-blood lymphocyte by RT-PCR, then was cloned into pMD18-T and sequenced, and recombined with pET32a(+) vector, the target protein His×6 IFN-γ was induced by IPTG;the sequence analysis showed that the nucleotide sequences of the IFN-γ in the study shared 98.6% to 100.0% homology with that of pig published in GenBank, and the identity of amino acid was 96.4% to 99.4%.This recombinant protein, a molecular weight of about 27 ku and mainly presenting in inclusion bodies, was approved to have immunological activity by Western blotting analysis and SDS-PAGE. It laid a foundation for further research of IFN-γ.

Key words: gene cloning; prokaryotic expression; interferon-γ gene; pig

中图分类号:

马超英. 猪γ-干扰素全基因克隆及原核表达[J]. , 2012, 39(10): 91-94.

MA Chao-ying. Cloning and Prokaryotic Expression of Interferon Gamma Full Gene in Pig[J]. , 2012, 39(10): 91-94.

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