水牛卵巢颗粒细胞的分离培养及凋亡测定

›› 2012, Vol. 39 ›› Issue (10): 140-144.

水牛卵巢颗粒细胞的分离培养及凋亡测定

高亚可, 陆凤花, 马帆, 乔树叶, 陈施蓓, 石德顺

广西大学亚热带生物资源保护利用国家重点实验室,广西南宁 530005

收稿日期:2012-04-06 出版日期:2012-10-20 发布日期:2012-10-19
通讯作者: 陆凤花,女,研究员,从事动物胚胎工程与转基因动物研究。E-mail: lfhgggg@163.com石德顺,男,研究员,从事动物胚胎工程与转基因动物研究。E-mail: ardsshi@gxu.edu.cn E-mail:lfhgggg@163.com; ardsshi@gxu.edu.cn
作者简介:高亚可(1987-),男,河南人,硕士生,研究方向:动物繁殖新技术与动物胚胎工程。
基金资助:
国家"863"项目(2011AA100607);国家自然科学基金项目(31072033);教育部高等学校博士学科点博导基金项目(20114501110001);教育部回国基金项目(AC150070);广西科学基金项目(2010GXNSFF013002);广西优秀人才资助计划(2010.1.1)。

Isolation, Culture and Apoptosis Determination of Buffalo Ovarian Granulosa Cells

GAO Ya-ke, LU Feng-hua, MA Fan, QIAO Shu-ye, CHEN Shi-bei, SHI De-shun

State Key Laboratory for Conservation and Utilization of Subtropical Agro-bio Resources, Guangxi University, Nanning 530005, China

Received:2012-04-06 Online:2012-10-20 Published:2012-10-19

摘要/Abstract

摘要： 研究主要是通过比较水牛卵巢颗粒细胞在不同培养基中的生长状态,并对细胞的增殖、核型及凋亡情况进行检测,以了解水牛卵巢颗粒细胞体外生长特性,建立水牛卵巢颗粒细胞的体外培养体系。结果发现,分离获得的水牛卵巢颗粒细胞存活率约为60%;采用DMEM培养基,颗粒细胞的生长速度和生长状态优于TCM-199和DMEM/F12培养基;细胞培养24 h后开始零星增殖,3~5 d增殖速度达到高峰;第1、3、5、7代颗粒细胞正常核型比率差异不显著,均在85%以上;第1代颗粒细胞的凋亡率与第5代差异显著(P<0.05),与第7代差异极显著(P<0.01)。结果表明,DMEM培养基更适宜用于水牛颗粒细胞的体外培养;水牛颗粒细胞能稳定地进行传代培养,染色体的数目不会发生明显改变,但细胞凋亡率会随着培养代数的增加而明显升高。

关键词: 水牛; 卵巢颗粒细胞; 原代培养; 培养基; 增殖; 凋亡

Abstract: The purpose of this study is to compare the growth of buffalo ovarian granulosa cells (GCs) cultured with different culture medium, and research the proliferation, karyotype and apoptosis of GCs to know well the growth characteristic of GCs in vitro, so that to establish a culture system of buffalo ovarian GCs in vitro. The results showed: the viability of GCs was about 60% after isolation. The growth speed and density of GCs were more dominant as culturing in DMEM medium than that of TCM-199 and DMEM/F12 medium. The GCs began to proliferate after cultured for 24 h, and reached a proliferation peak during cultured for 3 to 5 d. Karyotype analysis displayed that beyond 85% of GCs had normal karyotype in the 1, 3, 5, 7 passage, which did not show that significant difference among these passages. The apoptosis ratio of the 5 and 7 passages of GCs was higher as comparing with the 1 passage (P<0.05, P<0.01). These results indicated that the DMEM medium was more suitable for GCs culturing in vitro, and the GCs could be passaged and keep relatively stable karyotype, but the apoptosis ratio would be elevate with the increase of the passage in vitro culture.

Key words: buffalo; granulosa cell; primary culture; culture medium; proliferation; apoptosis

中图分类号:

S823.8⁺3

高亚可, 陆凤花, 马帆, 乔树叶, 陈施蓓, 石德顺. 水牛卵巢颗粒细胞的分离培养及凋亡测定[J]. , 2012, 39(10): 140-144.

GAO Ya-ke, LU Feng-hua, MA Fan, QIAO Shu-ye, CHEN Shi-bei, SHI De-shun. Isolation, Culture and Apoptosis Determination of Buffalo Ovarian Granulosa Cells[J]. , 2012, 39(10): 140-144.

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