禽流感病毒HA-M2融合表位与EGFP蛋白在鸭胚成纤维细胞中的表达

›› 2012, Vol. 39 ›› Issue (11): 27-30.

禽流感病毒HA-M2融合表位与EGFP蛋白在鸭胚成纤维细胞中的表达

王善辉¹, 王文秀¹, 沈志强¹, 池贤凤², 高三阳¹

1. 山东省滨州畜牧兽医研究院,山东滨州 256600;
2. 山东绿都生物科技有限公司,山东滨州 256600

收稿日期:2012-03-29 出版日期:2012-11-20 发布日期:2012-11-22
通讯作者: 沈志强,博士,研究员,主要从事预防兽医学与兽医生物制品研究。E-mail:bzshenzq@163.com E-mail:bzshenzq@163.com
作者简介:王善辉(1977-),女,内蒙古人,助理研究员,主要从事分子病原学与免疫学研究。
基金资助:
山东省优秀中青年科学家科研奖励基金(BS2011SW026)。

Expression of HA-M2 Multiple-Epitopes Fusion Protein of Avian Influenza Virus and EGFP Protein in Duck Embryo Fibroblasts

WANG Shan-hui¹, WANG Wen-xiu¹, SHEN Zhi-qiang¹, CHI Xian-feng², GAO San-yang¹

1. Shandong Binzhou Animal Science & Veterinary Medicine Institute, Binzhou 256600, China;
2. Shandong Lvdu Bio-Science & Technology Co., Ltd., Binzhou 256600, China

Received:2012-03-29 Online:2012-11-20 Published:2012-11-22

摘要/Abstract

摘要： 本研究选择禽流感病毒H9N2株的HA的两个保守T细胞表位基因和M2基因胞外保守序列(M2e),经人工合成并通过PCR扩增获得HA-M2融合表位基因,将其与含有增强型绿色荧光蛋白的载体pEGFP-N1连接,构建了重组真核表达质粒HA-M2-pEGFP-N1。采用脂质体法转染体外培养的鸭胚成纤维细胞(DEF)后,通过RT-PCR、直接荧光观察和间接免疫荧光检测,结果表明,成功构建了重组真核表达质粒HA-M2-pEGFP-N1,且以HA抗原表位和保守的M2e序列为基础构建的重组蛋白能够在鸭胚成纤维细胞中成功表达。本试验为研制新型的禽流感通用疫苗,进一步探索HA基因与靶细胞相互作用及AIV的感染机理等奠定了基础。

关键词: 禽流感; 融合表位基因; 增强型绿色荧光蛋白; 鸭胚成纤维细胞

Abstract: In this study, two T cell epitopes genes of hamagglutinin conserved domains of avian influenza virus H9N2 strain and M2 gene of extracellular domain were synthetized and joined as HA-M2 multiple-epitopes fusion gene of avian influenza virus by RT-PCR. The recombinant eukaryotic expression plasmid of HA-M2 fusion gene containing enhanced green fluorescent protein (EGFP) report gene was constructed, and transfected by lipofectin to prepared duck embryo fibroblasts (DEF). The fluorescence expression was directly detected with fluorescence microscope, and the expression of HA-M2 was tested by RT-PCR and indirect immunofluorescence assay (IFA) respectively. The results indicated the successful construction of the eukaryotic expression plasmid HA-M2-pEGFP-N1, and showed that HA-M2 gene was expressed efficiently in transfected DEF. It provided a basis for the study of new universal influenza vaccines and further research on interaction of HA gene and its target cells and as for infection mechanism of AIV.

Key words: avian influenza; epitopes fusion gene; EGFP; duck embryo fibroblasts

中图分类号:

S858.3

王善辉, 王文秀, 沈志强, 池贤凤, 高三阳. 禽流感病毒HA-M2融合表位与EGFP蛋白在鸭胚成纤维细胞中的表达[J]. , 2012, 39(11): 27-30.

WANG Shan-hui, WANG Wen-xiu, SHEN Zhi-qiang, CHI Xian-feng, GAO San-yang. Expression of HA-M2 Multiple-Epitopes Fusion Protein of Avian Influenza Virus and EGFP Protein in Duck Embryo Fibroblasts[J]. , 2012, 39(11): 27-30.

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