禽呼肠孤病毒S1733株单克隆抗体的制备及特性鉴定

›› 2012, Vol. 39 ›› Issue (11): 47-51.

禽呼肠孤病毒S1733株单克隆抗体的制备及特性鉴定

谢志勤, 谢芝勋, 刘加波, 庞耀珊, 邓显文, 谢丽基, 彭宜, 范晴

广西壮族自治区兽医研究所,广西畜禽疫苗新技术重点实验室,广西南宁 530001

收稿日期:2012-04-05 出版日期:2012-11-20 发布日期:2012-11-22
通讯作者: 谢芝勋(1963-),男,广西人,研究方向:畜禽传染病分子生物学研究。E-mail:xiezhixun@126.com E-mail:xiezhixun@126.com
作者简介:谢志勤(1965-),男,广西人,研究员,研究方向:畜禽传染病分子生物学研究。
基金资助:
广西特聘专家专项经费资助项目(2011B020);新世纪百千万人才工程国家级人选专项基金(945200603);广西壮族自治区回国基金项目(桂科回0639016)。

Preparation and Identification of Monoclonal Antibody against Reovirus S1733

XIE Zhi-qin, XIE Zhi-xun, LIU Jia-bo, PANG Yao-shan, DENG Xian-wen, XIE Li-ji, PENG Yi, FAN Qing

Guangxi Key Laboratory of Animal Vaccine and New Technology, Guangxi Veterinary Research Institute,Nanning 530001,China

Received:2012-04-05 Online:2012-11-20 Published:2012-11-22

摘要/Abstract

摘要： 将增殖的禽呼肠孤病毒S1733毒株进行浓缩,然后进行蔗糖梯度纯化,测定纯化后病毒的浓度,按每只鼠100 μg的病毒用量免疫BALB/c小鼠,免疫5次后取其脾细胞与骨髓瘤细胞SP2/0 按5∶1进行融合。对融合后的杂交瘤细胞进行筛选,阳性孔经3次有限稀释法克隆。通过间接ELISA方法测定抗体效价,并通过Western blotting、Dot-ELISA、直接免疫荧光和中和反应等方法对2株单克隆抗体特性进行检测。试验结果表明,纯化的病毒含量为43 mg/mL,用纯化的病毒免疫BALB/c小鼠后与骨髓瘤细胞融合,通过克隆筛选成功获得2株能稳定传代并分泌抗禽呼肠孤病毒单克隆抗体的杂交瘤细胞株SF6-3K3和SB2-1K3。2株单克隆抗体的腹水经间接ELISA测定效价达10⁵以上,其抗体为IgG1亚类,特异性试验表明其与其他病毒株没有交叉反应,具有良好的特异性,并且这2株单克隆抗体没有中和禽呼肠孤病毒的能力,具有识别禽呼肠孤病毒的能力,可以用于禽呼肠孤病毒的特异性检测。

关键词: 禽呼肠孤病毒; 单克隆抗体; 制备; 鉴定

Abstract: The reovirus S1733 harvested from chicken embryos allantoic fluid was purified by sucrose gradient purification. The concentration was tested by protein testing kit. Then BALB/c mice were regularly immunized with purified reovirus S1733 contain 100 μg protein. After injecting four times, the spleen cells were collected and infused with myeloma cell SP2/0 follow ratio 5∶1. After selection in time and 3 times clone by limiting dilution. The two monoclonal antibodies were detected by indirect ELISA, Dot-ELISA, and immunofluorescence methods. The results showed that the purification protein was 43 mg/mL. Two hybridoma cells lines against reovirus named SF6-3K3 and SB2-1K3 were obtained. The titers were all above 10⁵ by indirect ELISA detection. It was not cross with others virus strains in this test by Dot-ELISA. The subtype was IgG1. It indicated that two hybridoma cell lines possessed the favorable specificity. Both of them could be used to detect reovirus in the future.

Key words: reovirus; monoclonal antibody; preparation; identification

中图分类号:

S852.65^＋9.4

谢志勤, 谢芝勋, 刘加波, 庞耀珊, 邓显文, 谢丽基, 彭宜, 范晴. 禽呼肠孤病毒S1733株单克隆抗体的制备及特性鉴定[J]. , 2012, 39(11): 47-51.

XIE Zhi-qin, XIE Zhi-xun, LIU Jia-bo, PANG Yao-shan, DENG Xian-wen, XIE Li-ji, PENG Yi, FAN Qing. Preparation and Identification of Monoclonal Antibody against Reovirus S1733[J]. , 2012, 39(11): 47-51.

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