牛PU.1基因真核表达载体的构建、表达及鉴定

›› 2012, Vol. 39 ›› Issue (11): 69-72.

牛PU.1基因真核表达载体的构建、表达及鉴定

刘利, 张路培, 高雪, 高会江, 李俊雅, 许尚忠

中国农业科学院北京畜牧兽医研究所,牛遗传育种研究室,北京 100193

收稿日期:2012-05-02 出版日期:2012-11-20 发布日期:2012-11-22
通讯作者: 许尚忠,研究员。E-mail:simmenta@vip.sina.com E-mail:simmenta@vip.sina.com
作者简介:刘利(1982-),男,内蒙古人,博士生,主要从事奶牛乳房炎分子抗病育种的研究。
基金资助:
优质肉牛新品种(系)选育与关键技术研究及示范(2011BAD28B04);基于高密度SNP建立中国肉牛群体全基因组选择优化方案(2010jc-2)。

Construction,Expression and Identification of Eukaryotic Expression Vector of Bovine PU.1 Gene

LIU Li, ZHANG Lu-pei, GAO Xue, GAO Hui-jiang, LI Jun-ya, XU Shang-zhong

Laboratory of Bovine Genetics and Breeding,Institute of Animal Sciences, Chinese Academy of Agricultural Sciences,Beijing 100193,China

Received:2012-05-02 Online:2012-11-20 Published:2012-11-22

摘要/Abstract

摘要： 本研究从牛外周血单个核细胞提取细胞总RNA,RT-PCR获得编码牛PU.1蛋白的cDNA;以pIRES2 DsRed-Express2为骨架构建牛PU.1基因表达载体pIRES2 DsRed-Express2-PU.1,并利用脂质体介导重组质粒分别转染H293T细胞和牛胎儿成纤维细胞,通过荧光观察和Western blotting鉴定表明成功构建了牛PU.1的表达载体,为下一步研究牛血单核细胞分化及牛抗病育种奠定基础。

关键词: 牛; PU.1基因; 单核细胞

Abstract: Total RNA was extracted from bovine,the cDNA encoding PU.1 protein was cloned using reverse transcription polymerase chain reaction (RT-PCR). The PU.1 gene was subcloned into pIRES2 DsRed-Express2 vector and then the recombinant plasmids were transferred into H293T cells and bovine fetal fibroblasts cells by the method of lipofectaming. The results showed that we had successfully constructed the expression plasmid of PU.1 gene by fluorescence observation and identification of Western blotting,which layed the foundation for the differentiation of bovine blood monocytes and breeding for disease resistance in cattle.

Key words: cattle; PU.1 gene; monocytes

中图分类号:

刘利, 张路培, 高雪, 高会江, 李俊雅, 许尚忠. 牛PU.1基因真核表达载体的构建、表达及鉴定[J]. , 2012, 39(11): 69-72.

LIU Li, ZHANG Lu-pei, GAO Xue, GAO Hui-jiang, LI Jun-ya, XU Shang-zhong. Construction,Expression and Identification of Eukaryotic Expression Vector of Bovine PU.1 Gene[J]. , 2012, 39(11): 69-72.

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