悬浮培养Sf21细胞高效表达牛γ-干扰素及其特性鉴定

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悬浮培养Sf21细胞高效表达牛γ-干扰素及其特性鉴定

王海春, 贾红, 袁维峰, 侯绍华, 郭晓宇, 鑫婷, 朱鸿飞

中国农业科学院北京畜牧兽医研究所,北京 100193

收稿日期:2012-05-19 出版日期:2012-11-20 发布日期:2012-11-22
通讯作者: 朱鸿飞(1965-),男,研究员。Tel:010-62819061;E-mail:bioclub@vip.sina.com.cn E-mail:bioclub@vip.sina.com.cn
作者简介:王海春(1987-),男,山东人,硕士生,研究方向:动物疫苗及分子免疫学。
基金资助:
公益性行业(农业)科研专项经费项目(200903027);863计划(SQ2011AAJY2746,2012AA101302);中央级公益性科研院所基本科研业务费(2010js-1,2011js-3);"十一五"国家科技支撑计划重点项目(2010BAD04B02);2011年及2012年农业部动物疫情监测与防治项目。

Efficient Expression and Characterization of Bovine Interferon-γ in Suspension Sf21 Cells

WANG Hai-chun, JIA Hong, YUAN Wei-feng, HOU Shao-hua, GUO Xiao-yu, XIN Ting, ZHU Hong-fei

Institute of Animal Sciences, Chinese Academy of Agricultural Sciences, Beijing 100193, China

Received:2012-05-19 Online:2012-11-20 Published:2012-11-22

摘要/Abstract

摘要： 本试验旨在研究重组牛γ-干扰素(rBovIFN-γ)在Sf21细胞中高效表达及其特性鉴定。利用逆转录—聚合酶链式反应(RT-PCR)技术从奶牛外周血淋巴细胞的总RNA中扩增出不含信号肽的BovIFN-γ基因片段。将其克隆到pFastBac^TMHTA中构建重组质粒pFastBac^TMHTA-BovIFN-γ。然后将重组质粒转化至DH10Bac感受态细胞获得重组穿梭质粒rBacmid-BovIFN-γ。转染Sf21昆虫细胞后获得重组杆状病毒rBac-BovIFN-γ,应用Sf21细胞悬浮培养技术大量表达rBovIFN-γ。利用Western blotting、质谱分析(MS)、抗病毒试验等对rBovIFN-γ进行鉴定。Western blotting分析显示,rBovIFN-γ具有良好的反应原性;MS分析表明,rBovIFN-γ的6个肽段序列与牛IFN-γ的氨基酸序列完全匹配,在蛋白质质谱数据库中搜索结果为牛IFN-γ;MDBK/VSV抗病毒试验显示,rBovIFN-γ具有很高的抗病毒活性,为1.05×10⁵ IU/mg。

关键词: 牛γ-干扰素; 杆状病毒; 悬浮培养; 质谱分析; 抗病毒活性

Abstract: In the study, we mainly did the research about efficient expression and characterization of bovine interferon-γ in suspension Sf21 cells. Bovine IFN-γ gene was amplified by RT-PCR, and inserted into the pFastBac^TM HTA to get the recombinant plasmid, named as pFastBac^TMHTA-IFN-γ. After transformation and transfection,the recombinant baculovirus was obtained. The target protein named rBovIFN-γ was successfully expressed in Sf21 insect cells during suspension culture. We identified the rBovIFN-γ with SDS-PAGE,Western blotting and mass spectrum(MS). Western blotting analysis showed that the recombinant protein had good activity. The protein MS identification results confirmed the recombinant bovine IFN-γ expression via the baculovirus expression system. MDBK/VSV antiviral test results showed that the rBovIFN-γ had high antiviral activity at 1.05×10⁵ IU/mg.

Key words: bovine interferon-γ; baculovirus; suspension culture; MS; antiviral

中图分类号:

王海春, 贾红, 袁维峰, 侯绍华, 郭晓宇, 鑫婷, 朱鸿飞. 悬浮培养Sf21细胞高效表达牛γ-干扰素及其特性鉴定[J]. , 2012, 39(11): 1-6.

WANG Hai-chun, JIA Hong, YUAN Wei-feng, HOU Shao-hua, GUO Xiao-yu, XIN Ting, ZHU Hong-fei. Efficient Expression and Characterization of Bovine Interferon-γ in Suspension Sf21 Cells[J]. , 2012, 39(11): 1-6.

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