糖化酶单抗的研制及其抗原识别位点的分析

›› 2012, Vol. 39 ›› Issue (11): 39-42.

糖化酶单抗的研制及其抗原识别位点的分析

张丹¹, 姜威¹, 李双喜¹, 汪惠泽¹, 冯云飞¹, 刘云迎¹, 李东明², 何祥来³, 王捍东¹

1. 扬州大学兽医学院,江苏省普通高校重点学科内科实验室,江苏扬州 225009;
2. 江苏省常州市出入境检验检疫局,江苏常州 213022;
3. 江苏畜牧兽医职业技术学院,江苏泰州 225300

收稿日期:2012-03-30 出版日期:2012-11-20 发布日期:2012-11-22
通讯作者: 王捍东,教授,硕士生导师。E-mail:ydwhd@sina.com E-mail:ydwhd@sina.com
作者简介:张丹(1987-),女,陕西人,硕士生,研究方向:动物性食品卫生安全。
基金资助:
江苏高校优势学科建设工程和江苏省高校重点实验室开放课题资助。

The Development and Antigenic Analysis of Monoclonal Antibodies to Glucoamylase

ZHANG Dan¹, JIANG Wei¹, LI Shuang-xi¹, WANG Hui-ze¹, FENG Yun-fei¹, LIU Yun-ying¹, LI Dong-ming², HE Xiang-lai³, WANG Han-dong¹

1. Clinical Veterinary Medicine of Jiangsu Provincial Key Discipline,College of Veterinary Medicine,Yangzhou University, Yangzhou 225009,China;
2. Changzhou Entry-exit Inspection and Quarantine Bureau of Jiangsu Province,Changzhou 213022,China;
3. Jiangsu Animal Husbandry and Veterinary College, Taizhou 225300,China

Received:2012-03-30 Online:2012-11-20 Published:2012-11-22

摘要/Abstract

摘要： 为建立掺糖造假蜂蜜中残留糖化酶的检测方法,用从黑曲霉中提取的糖化酶作为免疫原,免疫BALB/c小鼠,利用杂交瘤技术获得了12株稳定分泌针对糖化酶抗体的杂交瘤细胞株。单克隆抗体亚型鉴定结果显示,10株为IgG1,2株为IgG2b,轻链均为κ轻链。Western blotting分析结果表明,12株抗体均可特异性结合糖化酶。其中6株单抗(McAb-2H4F9、6H9D8、8F2F11、8F2E9、1A8G6、1C4D5)细胞株采用体内诱生法制备的腹水效价均1∶1×10⁴以上。采用抗体叠加试验对这6株抗糖化酶单抗的抗原识别位点进行检测,反应增殖结果表明,6株单抗分别针对4类不同抗原位点,McAb-6H9D8和McAb-8F2F11针对第Ⅰ种抗原决定簇;McAb-1A8G6和McAb-1C4D5针对第Ⅱ种抗原决定簇;McAb-8F2E9针对第Ⅲ种抗原决定簇;McAb-2H4F9针对第Ⅳ种抗原决定簇。制备的抗体针对不同的抗原表位,为双抗夹心ELISA方法的建立提供前提。

关键词: 淀粉糖化酶; 单克隆抗体; 抗原识别位点

Abstract: To develop a detection method for glucoamylase in honey, BALB/c mice were immunized with the glucoamylase from Aspergillus niger. Splenocytes of the immunized mice were fused with SP2/0 cells with PEG. 12 monoclonal antibodies(McAbs) against the glucoamylase were obtained and identified. 10 hybridoma cell lines represented subtypes IgG1 and the other were IgG2b, and their light chains were κ chain. Western blotting analysis showed that the 12 McAbs specifically recognized glucoamylase. Hybridoma 2H4F9,6H9D8,8F2F11,8F2E9,1A8G6,1C4D5 excreting anti-glucoamylase McAbs were used to be injected into abdominal cavity of mice(ICR). The titers of the McAbs were all above 1∶1×10⁴. Six strains of monoclonal antibodies were confirmed to be specific for four different kinds of epitopes on glucoamylase competitive binding assay. Among them, McAb-6H9D8 and McAb-8F2F11 might direct to the same antigenic determinant on the GA, McAb-1A8G6 and McAb-1C4D5 to the second antigenic site, McAb-8F2E9 to the third antigenic site, McAb-2H4F9 to the fourth antigenic site.

Key words: glucoamylase; monoclonal antibodies; epitopes

中图分类号:

S852.4^＋3

张丹, 姜威, 李双喜, 汪惠泽, 冯云飞, 刘云迎, 李东明, 何祥来, 王捍东. 糖化酶单抗的研制及其抗原识别位点的分析[J]. , 2012, 39(11): 39-42.

ZHANG Dan, JIANG Wei, LI Shuang-xi, WANG Hui-ze, FENG Yun-fei, LIU Yun-ying, LI Dong-ming, HE Xiang-lai, WANG Han-dong. The Development and Antigenic Analysis of Monoclonal Antibodies to Glucoamylase[J]. , 2012, 39(11): 39-42.

参考文献

1 刘秀梵. 单克隆抗体在农业上的应用[M].合肥:安徽科学技术出版社,1994.
2 刘萍,陈苗苗,刘学荣,等. 单克隆抗体研究进展[J].中国畜牧兽医, 2012, 39(1): 67~70.
3 孙智锋, 杜念兴, 徐为燕. 兔出血症病毒单克隆抗体的抗原识别位点分析[J].南京农业大学学报,1997,20(1):68~72.
4 朱青, 王毕妮, 梁艳,等. 蜂蜜掺假检测方法的研究进展[J].中国蜂业, 2008,59(10):35~37.
5 何永强, 盛祖恬, 杜青云,等. 抗猪口蹄疫病毒单克隆抗体的抗原识别位点分析[J].中国兽医学报, 2003,23(5):43~45.
6 张秀媛, 袁永俊, 何扩. 糖化酶的研究概况[J].食品研究与开发, 2006,27(9):163~166.
7 李丹丹, 张馨心, 赵立平,等. 猪戊型肝炎病毒单克隆抗体的抗原识别位点分析[J].动物医学进展, 2008,29(4):42~44.
8 李军生, 何仁, 江权燊, 等. 蜂蜜淀粉酶在鉴别蜂蜜掺假中的应用研究[J].食品科学, 2004,25(10):59~62.
9 孟继鸿,戴星. 不同基因型戊型肝炎病毒重组蛋白的抗原性分析[J].东南大学学报(医学版), 2002,21(1):31~35.
10 常小斌. 己烯雌酚单克隆抗体的制备及鉴定[J].畜牧与兽医, 2008,40(10):76~78.
11 Cardona F, Got A, Brandi A, et al. Molecular dynamics simulations on the complexes of glucoamylase Ⅱ (471) from aspergillus awamori var. X100 with 1-deoxynojirimycin and lentiginosine[J]. Journal of Molecular Modeling, 1997,3(7):249~260.
12 Juge N,Le Gal-Coffet M F, Furniss C S M, et al. The starch binding domain of glucoamylase from aspergillus niger: Overview of its structure, function, and role in raw-starch hydrolysis[J]. Biologia Bratislava, 2002,57(SUP/2):239~246.
13 Lowry O H, Rosebrough N J, Farr A L, et al. Protein measurement with the Folin phenol reagent[J].J Biol Chem,1951,193(1):265~275.
14 Xu Y, Huystee R B. Identification of an antigenic determinant on anionic peanut peroxidase by monoclonal antibodies[J]. Journal of Experimental Botany, 1991,42(7):935.

[1]	侯浩宇, 郑南南, 吴宏举, 陈寅龙, 李潮, 张昂克, 姬鹏超, 万博, 杜永坤, 张改平. 非洲猪瘟病毒p30蛋白单克隆抗体制备和鉴定[J]. 中国畜牧兽医, 2023, 50(3): 1241-1249.
[2]	王乐铭, 王瑜瑞, 曾子轩, 饶国顺, 吴正姣, 靳纬坤, 王冬英. 抗大片形吸虫Cat L1单克隆抗体的制备及其双抗体夹心ELISA检测方法的建立[J]. 中国畜牧兽医, 2022, 49(2): 677-686.
[3]	赵少若, 黄甜, 郝丽影, 吴洪超, 汪志艳, 崔宁宁, 王亚玲, 邓均华, 田克恭. 犬轮状病毒单克隆抗体制备及胶体金试纸条检测方法的建立[J]. 中国畜牧兽医, 2022, 49(11): 4429-4437.
[4]	莫红芳, 揭凯, 陈鑫, 文威, 刘文强, 陈焕春, 钱平, 李祥敏. 猪塞尼卡谷病毒单克隆抗体的制备及鉴定[J]. 中国畜牧兽医, 2022, 49(1): 307-317.
[5]	胡换仪, 汪建中, 刘昌锦, 林敏, 刘小兰, 魏黄思梧, 邓舜洲. 绿色荧光蛋白的真核表达及其单克隆抗体制备[J]. 中国畜牧兽医, 2022, 49(1): 328-337.
[6]	曾建宇, 董振远, 贾文凤, 张国中, 薛佳. 新城疫病毒M蛋白单克隆抗体的制备与鉴定[J]. 中国畜牧兽医, 2021, 48(9): 3423-3431.
[7]	李思, 蒋蔚, 程婷婷, 卢春慧, 辛思培, 曹敬政, 王权, 孙卫东. 沙拉沙星间接竞争化学发光酶联免疫检测方法的建立[J]. 中国畜牧兽医, 2021, 48(5): 1772-1783.
[8]	杨松鑫, 冯建远, 郭旋, 韦柳源, 梁翼莹, 严昊, 张子仪, 陈海兰. 小分子化合物单克隆抗体的制备及其在动物医学领域的应用[J]. 中国畜牧兽医, 2021, 48(3): 1121-1131.
[9]	李洁森, 孙荣航, 邝燕齐, 陈路漫, 刘青, 郭霄峰. 猪流行性腹泻病毒S1D蛋白的优化表达及其单克隆抗体的制备[J]. 中国畜牧兽医, 2021, 48(12): 4641-4651.
[10]	李青梅, 郭军庆, 孟泽锟, 李艳华, 刘肖, 石建州, 李鸽, 柴书军, 罗俊, 邓瑞广, 张改平. H9N2亚型禽流感病毒中和单克隆抗体的制备与应用[J]. 中国畜牧兽医, 2021, 48(10): 3761-3769.
[11]	王治平, 张云静, 孙玉洁, 徐鑫, 汪志艳, 黄柏成, 田克恭. 基于单克隆抗体捕获的猪血清和乳汁中PEDV IgA抗体间接ELISA方法的建立和评估[J]. 中国畜牧兽医, 2020, 47(7): 2248-2255.
[12]	石建州, 李青梅, 王彦红, 刘肖, 李鸽, 郭军庆, 邓瑞广, 张改平. H1N1亚型猪流感病毒单克隆抗体IPMA检测方法的建立[J]. 中国畜牧兽医, 2019, 46(9): 2691-2698.
[13]	林伟东, 隋修锟, 王召阳, 贾红, 房立春, 王海春, 朱良全, 鑫婷. 牛分枝杆菌MarP蛋白的表达纯化及其单克隆抗体制备[J]. 《中国畜牧兽医》, 2019, 46(6): 1774-1782.
[14]	项自来, 王玲, 夏苏干, 邹辉, 顾建红, 袁燕, 刘学忠, 刘宗平, 卞建春. 苯乙醇胺A单克隆抗体的研制及ELISA检测方法的建立[J]. 《中国畜牧兽医》, 2019, 46(3): 849-857.
[15]	周曼莉, 周玉成, 张海威, 乔连江, 杨艳玲. 牛分枝杆菌MPB70蛋白单克隆抗体的制备及检测[J]. 中国畜牧兽医, 2019, 46(10): 3075-3083.