猪11β-HSD1真核过表达载体的构建及其在Hepa1-6细胞中的表达

›› 2012, Vol. 39 ›› Issue (12): 1-5.

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猪11β-HSD1真核过表达载体的构建及其在Hepa1-6细胞中的表达

夏吉瀚, 王超群, 阮进学, 杨述林, 李奎

中国农业科学院北京畜牧兽医研究所,北京 100193

收稿日期:2012-04-11 出版日期:2012-12-20 发布日期:2012-12-19
通讯作者: 杨述林,副研究员。E-mail: hi_ysl@yahoo.com.cn E-mail:hi_ysl@yahoo.com.cn
作者简介:夏吉瀚(1985-),男,重庆人,硕士生,研究方向:细胞工程与基因工程。
基金资助:
国家科技支撑计划(2012BAI39B04,2011BAI15B02);"863"计划(SQ2011AAJY2795);"973"计划(2011CBA01005)。

Construction of 11β-HSD1 Eukaryotic Overexpression Vector and its Expression in Hepa1-6 Cell

XIA Ji-han, WANG Chao-qun, RUAN Jin-xue, YANG Shu-lin, LI Kui

Institute of Animal Sciences,China Academy of Agricutural Sciences,Beijing 100193,China

Received:2012-04-11 Online:2012-12-20 Published:2012-12-19

摘要/Abstract

摘要： 11β-羟类固醇脱氢酶1(11β-HSD1)可使无生物活性的皮质酮催化为有活性的皮质醇,本试验利用长白猪肝脏组织提取的RNA反转录出11β-HSD1基因的cDNA,通过反转录—聚合酶链式反应(RT-PCR)技术和DNA重组技术,将11β-HSD1基因构建到pcDNA3.1真核表达载体上,构建了11β-HSD1-pcDNA重组质粒。通过PCR扩增、酶切电泳和测序分析的方法对重组的质粒进行了鉴定,并将其转染了Hepa1-6细胞,通过RT-PCR检测了其过表达强度。试验结果表明,成功构建了猪11β-HSD1-pcDNA真核过表达载体,为转基因动物的研究奠定了基础。

关键词: 11β-HSD1; 真核表达; 基因克隆; 载体构建; 转基因

Abstract: Glucocorticoids can be produced from inactive 11-keto forms through the enzyme 11β-hydroxysteroid dehydrogenase type 1. The cDNA of porcine 11β-HSD1 gene was amplified from the tissue of landrace pigs liver by RT-PCR and cloned into the eukaryotic expression vector pcDNA3.1. The recombinant was further identified by PCR amplification,enzyme digestion and DNA sequencing. The recombinant plasmid 11β-HSD1-pcDNA was transfected into the Hepa1-6 cell and its expression intensitye was detectable by RT-PCR. The results showed that the eukaryotic exprssion vector 11β-HSD1-pcDNA was successfully constructed which could provide a necessary basis for the research of transgenic pigs.

Key words: 11β-HSD1; eukaryotic expression; gene cloning; vector construction; transgenic

中图分类号:

夏吉瀚, 王超群, 阮进学, 杨述林, 李奎. 猪11β-HSD1真核过表达载体的构建及其在Hepa1-6细胞中的表达[J]. , 2012, 39(12): 1-5.

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猪11β-HSD1真核过表达载体的构建及其在Hepa1-6细胞中的表达

Construction of 11β-HSD1 Eukaryotic Overexpression Vector and its Expression in Hepa1-6 Cell

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