J亚群禽白血病病毒套式PCR检测方法的建立

›› 2012, Vol. 39 ›› Issue (12): 60-63.

J亚群禽白血病病毒套式PCR检测方法的建立

陈国强¹, 刁富花²

1. 青海省西宁市湟中县土门关乡兽医站,青海西宁 811603;
2. 青海省大通县后子河兽医站,青海大通 810105

收稿日期:2012-04-18 出版日期:2012-12-20 发布日期:2012-12-19
作者简介:陈国强(1972-),男,青海人,兽医师,研究方向:兽医临床。

Establishment of a Nested PCR Assay for Detection of Avian Endogenous ALV-J

CHEN Guo-qiang¹, DIAO Fu-hua²

1. Animal Husbandry and Veternay Station of Tumenguan, Huangzhong County, Xining City, Qinghai Province, Xining 811603,China;
2. Veterinary Station of Houzihe District Datong County, Qinghai Province,Datong 810105,China

Received:2012-04-18 Online:2012-12-20 Published:2012-12-19

摘要/Abstract

摘要： 本试验根据GenBank中登录的禽白血病病毒(ALV)基因组序列,设计合成了2对引物,外部引物的扩增片段大小为478 bp,内部引物的扩增片段大小为314 bp,建立了适合ALV快速检测的套式PCR方法(nested-PCR)。采用该方法对ALV毒株进行了检测,试验结果表明,能扩增到314 bp的条带,禽流感病毒(H9亚型)、新城疫病毒、传染性法氏囊病病毒、减蛋综合征病毒、禽网状内皮增生病病毒、禽呼肠孤病毒、马立克氏病病毒的扩增结果均为阴性。该方法第1次扩增的敏感性是100 pg,第2次扩增的敏感性是1 fg,第2次比第1次扩增的敏感性高10⁵倍。所建立的套式PCR方法具有敏感性高、重复性好、特异性强等优点,可用于禽白血病病毒(ALV)的临床诊断和分子流行病学调查等。

关键词: 禽白血病病毒; 逆转录套式PCR; 检测

Abstract: According to the sequence of RNA polymerase gene of avian leukosis virus subgroup J (ALV-J) strain published in GenBank,two pairs of primers were designed and synthesized.The outer primers amplified a fragment of 478 bp in length, and the inner primers amplification fragment size was 314 bp in length, a nested PCR assay for rapid detection of ALV was established.A specific 314 bp fragment was amplified from RNA templates of ALV strain,but no bands were amplified with templates extracted respectively from avian influenza virus(AIV) subtype H9,Newcastle disease virus(NDV), infectious bursal disease virus(IBDV),egg drop syndrome virus (EDSV), reticuloendotheliosis virus(REV), avian reovirus (ARV), Marek’s disease virus(MDV). Sensitivity of the 1st and 2nd amplifications by the nested PCR assay was 100 pg and 1 fg,respectively.The sensitivity of the 2nd amplifications was increased by 10⁵ times.The results showed that the nested PCR was specific,sensitive,rapid,and accurate,and could be used as a routine assay for the detection of ALV.This method had good reproducibility, specificity and sensitivity, and might detect low content ALV accurately and rapidly. This method could be used as a method for the diagnosis and detection of clinical cases,and for molecular epidemiological investigation of ALV.

Key words: avian endogenous ALV-J; nested-PCR; detection

中图分类号:

陈国强, 刁富花. J亚群禽白血病病毒套式PCR检测方法的建立[J]. , 2012, 39(12): 60-63.

CHEN Guo-qiang, DIAO Fu-hua. Establishment of a Nested PCR Assay for Detection of Avian Endogenous ALV-J[J]. , 2012, 39(12): 60-63.

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