【目的】克隆猪的Microrchidia家族CW锌指蛋白2（Microrchidia family CW-type zinc finger 2，MORC2）基因，利用生物信息学手段分析其序列特征，并检测MORC2基因在猪不同组织中的表达情况和卵巢中的定位。【方法】以猪卵巢cDNA为模板扩增和克隆MORC2基因完整CDS区，并进行相似性比对及系统发育树构建；利用生物信息学软件对猪MORC2蛋白序列进行预测；使用实时荧光定量PCR检测MORC2基因在猪不同组织中的表达情况；利用免疫组化方法检测猪MORC2蛋白在猪卵巢中的定位情况。【结果】猪MORC2基因CDS区序列全长3 102 bp，编码1 033个氨基酸。猪MORC2蛋白氨基酸序列与人、黑猩猩、恒河猴、小鼠、牛、绵羊、鸡和斑马鱼的相似性分别为94.8%、94.6%、94.9%、91.9%、93.8%、93.9%、80.8%和64.3%。系统进化树表明，猪与灵长类亲缘关系最近，与反刍动物和啮齿类次之，与斑马鱼（鱼类）亲缘关系最远。猪MORC2蛋白分子质量为117.44 ku，理论等电点为8.16，半衰期为30 h，属于不稳定蛋白。MORC2蛋白的平均疏水性为―0.736，为亲水性蛋白，不含跨膜结构和信号肽。猪MORC2蛋白有174个磷酸化位点、81个糖基化位点；亚细胞定位属于核蛋白，细胞质次之，线粒体中有少量表达；含有经典的MORC蛋白家族结构：GHKL-ATPase、zf-CW和CC结构域。组织表达谱结果显示，MORC2基因在猪各组织中广泛表达，其中在肝脏中表达量最多，显著高于其他组织（P＜0.05），在心脏、肺脏和肌肉中表达量较少，显著低于其他组织（P＜0.05）。免疫组化结果显示，MORC2蛋白在健康猪卵泡颗粒细胞和膜细胞中均有表达且表达量较高，在闭锁的卵泡颗粒细胞和膜细胞中表达量较少。【结论】试验成功获得猪MORC2基因完整CDS区序列，该基因在猪各组织中广泛表达，MORC2蛋白主要在健康猪的卵泡颗粒细胞和膜细胞中表达。研究结果为进一步研究MORC2蛋白调控猪卵巢发育和卵泡闭锁的分子机制提供理论依据。

【目的】确定银黑狐黑素皮质激素受体1（melanocortin 1 receptor，MC1R）基因的核心启动子区，为探究该基因的表达调控机制提供理论依据。【方法】以银黑狐基因组DNA为模板，PCR扩增获得MC1R基因5'-UTR区序列，利用3个在线生物学软件综合预测MC1R基因启动子活性区；PCR扩增获得该基因5'-UTR区不同长度的缺失片段，并克隆至pMD19-T载体，将重组质粒转染至黑色素B16细胞中，利用双荧光素酶检测技术对10个缺失片段进行荧光素酶活性检测。【结果】成功获得银黑狐MC1R基因5'-UTR区序列，软件预测显示－596/＋73 bp可能为启动子活性区。双荧光素酶活性检测发现，构建的10个缺失片段的荧光素酶表达载体均具有启动子活性，其中pGL3-MC1RP8（－520/＋73 bp）有较强的活性，提示其为核心启动子区，与软件预测结果基本一致。【结论】试验确定了银黑狐MC1R基因的核心启动子区为―520/＋73 bp，为深入研究该基因的毛色调控机制奠定了理论基础。

【目的】试验旨在对bta-miR-34b/c和bta-miR-449a/b/c的序列保守性、转录因子和靶基因进行生物信息学预测和分析，探究其影响精子发生的作用机制，为研究其生物学功能及作用机制提供指导和思路。【方法】利用miRBase数据库获取不同物种的bta-miR-34b/c和bta-miR-449a/b/c序列并进行相似性分析；通过TargetScan、miRWalk、miRDB等方法预测bta-miR-34b/c和bta-miR-449a/b/c的靶基因，对获得的靶基因集合分别进行GO功能和KEGG通路富集分析；通过AnimalTFDB获取共同调控bta-miR-34b/c和bta-miR-449a/b/c的转录因子，并构建TF-miRNA-mRNA作用网络。【结果】bta-miR-34b/c和bta-miR-449a/b/c在不同物种间高度保守。预测得到2个转录因子和49个候选靶基因，这些靶基因主要富集在精子发生、钙离子依赖性胞吐的调节、胰岛素分泌的调节等GO条目，以及HIF-1信号通路、甲状腺激素信号通路、Wnt信号通路等KEGG通路。bta-miR-34b/c、bta-miR-449a/b/c与上游转录因子NR2C2和HIC1，下游靶基因AXL、E2F3、DAAM1等共同构成的作用网络通过调控减数分裂、细胞周期、细胞凋亡、精子细胞能量代谢等生物过程影响精子发生。【结论】bta-miR-34b/c、bta-miR-449a/b/c通过上游转录因子和下游靶基因组成的分子调控网络共同调节精子发生过程。

【目的】探索犬酸性核磷蛋白32（canis acidic （leucine-rich） nuclear phosphoprotein 32 ku，caANP32）对不同物种A型流感病毒（Influenza A virus，IAV） RNA 聚合酶活性的影响。【方法】利用实时荧光定量PCR方法分析caANP32家族基因（caANP32A、caANP32B及caANP32E）的组织分布并对其进行扩增和克隆，评估caANP32家族蛋白对不同物种A型流感病毒RNA聚合酶活性的支持作用。【结果】caANP32家族基因在不同组织中分布相似，其中caANP32B基因组织丰度显著或极显著高于caANP32A和caANP32E基因（P＜0.05；P＜0.01），在心脏、盲肠和大脑中caANP32E基因组织丰度极显著或显著高于caANP32A基因（P＜0.01；P＜0.05），在肝脏、肺脏等组织中caANP32E与caANP32A基因丰度均无显著差异（P>0.05）。在犬心脏组织和MDCK细胞中发现，caANP32A基因仅存在1个转录本，caANP32B基因存在3个不同剪接变体：caANP32B_X1、caANP32B_X2和caANP32B_X3；caANP32E 基因具有2个不同剪接变体：caANP32E_X1和caANP32E_X2。通过分析ANP32家族蛋白对不同物种A型流感病毒RNA聚合酶活性的影响发现，caANP32A和caANP32B均能支持犬流感病毒（H3N2_GD11）和马流感病毒（H3N8_JL89）RNA聚合酶活性，而对禽流感病毒（H9N2_ZJ12）RNA聚合酶活性支持较低。caANP32B_X2剪接变体对哺乳动物流感病毒RNA聚合酶活性的支持能力显著高于caANP32B_X1和caANP32B_X3（P＜0.05）；而caANP32E不支持A型流感病毒RNA聚合酶活性。【结论】本研究初步解析了caANP32家族蛋白的组织分布及序列多态性，阐明了其对不同物种A型流感病毒RNA聚合酶活性的支持作用，为解析MDCK细胞作为流感病毒分离和疫苗生产细胞系的分子机制提供了新的借鉴。

【目的】克隆大白猪三基序结合蛋白3（tripartite motif-containing 3，TRIM3）基因，并对其进行生物信息学和组织表达分析。【方法】采用PCR技术扩增并克隆大白猪TRIM3基因CDS全长序列，连接pMD18-T载体并转化大肠杆菌DH5α感受态细胞，通过蓝白斑筛选阳性克隆，菌液PCR鉴定后测序，与不同物种TRIM3基因序列比对并构建系统进化树；应用多种在线软件对其编码蛋白进行生物信息学分析，并利用实时荧光定量PCR方法检测TRIM3基因在大白猪不同组织中的相对表达量。【结果】大白猪TRIM3基因CDS序列全长2 235 bp，编码744个氨基酸。相似性和遗传进化分析结果显示，大白猪与野猪的相似性最高，达99.7%，与鸭的相似性最低，为75.1%；大白猪TRIM3基因与野猪先聚为一类，与牛和山羊亲缘关系较近。生物信息学分析显示，大白猪TRIM3蛋白分子质量为80.58 ku，理论等电点（pI）为8.32，不稳定系数为40.85，为亲水性蛋白，但不是分泌蛋白，无糖基化位点，预测其有60个磷酸化位点，主要存在于细胞质内；在TRIM3蛋白二级结构中以无规则卷曲为主，占41.67%，三级结构模型预测结果与二级结构一致。组织表达分析表明，大白猪TRIM3基因在心脏、肝脏、脾脏、肺脏、肾脏、肌肉、气管、结肠中均有分布，肺脏中表达量最多且显著高于其他组织（P＜0.05）。【结论】本研究成功克隆大白猪TRIM3基因CDS全长序列，并进行了生物信息学和组织表达分析，为进一步研究大白猪TRIM3蛋白的免疫学功能提供理论依据，对探究大白猪TRIM3基因参与先天性免疫和抗病毒感染分子机制具有重要意义。

【目的】旨在通过分析细胞色素P450家族成员11A1（CYP11A1）的生物信息功能及其在新西兰白兔卵巢颗粒细胞中对繁殖性能相关基因的调控作用，为探究其在卵泡发育过程中调控功能奠定基础。【方法】根据GenBank上兔CYP11A1基因的序列，设计特异性引物，以新西兰白兔卵巢组织cDNA为模板，PCR扩增并克隆CYP11A1基因序列，构建pcDNA3.1-CYP11A1过表达重组载体；用Mega 5.1在线软件构建系统进化树，并通过生物信息学软件对CYP11A1蛋白的氨基酸组成、理化性质、磷酸化位点、保守结构域、二级结构、三级结构、亚细胞定位、蛋白互作进行预测分析。分离新西兰白兔卵巢颗粒细胞，并通过免疫荧光法鉴定颗粒细胞特异性抗体卵泡刺激素受体（FSHR）的表达。设计3条干扰CYP11A1基因表达的引物（siRNA-1、siRNA-2、siRNA-3），筛选出干扰效率最高的1条，并将其与pcDNA3.1-CYP11A1过表达重组载体转染到卵巢颗粒细胞中，用实时荧光定量PCR检测颗粒细胞中羟基类固醇17-β脱氢酶1（HSD17B1）、骨形态发生蛋白15（BMP15）和促卵泡刺激素受体（FSHR）等繁殖相关基因mRNA表达水平。【结果】成功克隆新西兰白兔CYP11A1基因，其CDS全长序列为1 557 bp，编码518个氨基酸，其中亮氨酸含量（10.6%）最高，精氨酸（7.6%）、缬氨酸（7.4%）和丙氨酸（7.2%）次之。进化树分析显示，CYP11A1蛋白序列与家鼠、人和猩猩的距离最近。生物信息学分析显示，CYP11A1蛋白理论等电点为7.4，正负电荷残基数各占50个，脂肪族氨基酸指数为82.16，不稳定性指数39.54，其中氨基酸序列中亲水性残基数量多于疏水性残基；CYP11A1蛋白具有40个潜在的磷酸化位点，其中以苏氨酸、丝氨酸和酪氨酸最为丰富；CYP11A1蛋白二级结构由α-螺旋（48.31%）、无规则卷曲（40.22%）、延伸链（7.42%）和β-转角（4.04%）组成，三级结构为弯曲螺旋状。亚细胞定位预测结果显示，CYP11A1蛋白主要分布于线粒体（52.2%）、细胞质（17.4%）和细胞核（13.0%）中，还具有1个p450家族的结构域，并与多个繁殖性能相关的蛋白（STAR、CYP21A2、CYP17A1和FDX1）相互作用。分离的兔颗粒细胞表达FSHR，可以用于后续试验；CYP11A1基因在颗粒细胞中过表达后，HSD17B1和FSHR基因表达量极显著上调（P＜0.05），BMP15基因表达量显著上调（P＜0.01）；干扰CYP11A1基因表达后，BMP15和FSHR基因的表达量极显著下调（P＜0.01），HSD17B1基因表达量显著下调（P＜0.05）。【结论】CYP11A1是一个稳定、亲水、相对保守且具有抗氧化和类固醇激素合成功能的蛋白。CYP11A1基因可调控卵巢颗粒细胞中与繁殖性能相关的基因HSD17B1、BMP15、FSHR的表达，说明CYP11A1基因在母兔繁殖过程中发挥一定作用。

【目的】优化紫锥菊根中菊苣酸提取工艺，并测定菊苣酸在肠道细胞中的抗氧化效果。【方法】试验选用有机溶剂乙醇作为紫锥菊根粉末（80目）提取溶剂，对提取溶剂浓度、提取温度、提取时间、提取次数以及原料与溶剂的比例等因素进行分析，得到每个因素下菊苣酸得率和该因素的对应曲线，再在单因素基础上，选择溶剂浓度（30%、40%、50%）、提取温度（60、70、80 ℃）、提取时间（1、2、3 h）和料液比（1∶12、1∶15、1∶18）4个因素3个水平设计正交试验。用不同浓度H₂O₂（100、200、400、600、800、1 000 μmol/L）处理人结肠腺癌细胞（Caco-2）与猪小肠上皮细胞（IPEC-J2）建立氧化应激模型。分别使用不同浓度菊苣酸（0、100、200、400、600、800、1 000 μmol/L）处理氧化应激前后的细胞24 h，应用MTT法，分别测定菊苣酸对两种肠道细胞氧化应激的保护和缓解效果。【结果】菊苣酸最佳提取条件为：50%浓度的乙醇在70 ℃下采用1∶18的料液比，超声辅助提取2 h，得率为1.89 mg/g。细胞抗氧化试验结果显示，菊苣酸对Caco-2和IPEC-J2两种肠道细胞氧化应激均具有保护和缓解效果，对Caco-2细胞的保护作用和缓解作用的半数抑制浓度（IC₅₀）值分别为172.6和207.5 μmol/L，对IPEC-J2细胞的保护作用和缓解作用的IC₅₀值分别为133.1和196.5 μmol/L。【结论】试验得到了紫锥菊根粉中菊苣酸的最佳提取方案，为工业化高效提取菊苣酸提供了参考；同时菊苣酸对氧化应激的肠道细胞具有很好的保护作用，经计算其保护作用的IC₅₀值较缓解效果更小，进一步证明了菊苣酸具有成为肠道抗氧化剂的潜力。

【目的】探讨奶牛脂肪间充质干细胞（bovine adipose-derived mesenchymal stem cells，bAD-MSCs）对氧化应激条件下奶牛子宫内膜上皮细胞迁移能力的影响。【方法】使用0、5、25、50、100、200 μmol/L H₂O₂处理奶牛子宫内膜上皮细胞2、4、6、8、12 h后，通过MTT试验检测细胞存活率、流式细胞术检测细胞内活性氧（ROS）水平来筛选H₂O₂诱导奶牛子宫内膜上皮细胞氧化应激模型的最佳条件。在细胞划痕试验中设立对照组、H₂O₂组、bAD-MSCs共培养组（1∶0.5）、bAD-MSCs共培养组（1∶1）、奶牛乳腺上皮细胞（MACT）共培养组（1∶0.5）和MACT共培养组（1∶1）共6组，分析奶牛子宫内膜上皮细胞迁移能力，并利用Western blotting检测细胞外蛋白调节激酶（Erk）和磷酸化细胞外蛋白调节激酶（pErk）蛋白的表达水平。【结果】MTT试验结果显示，4~12 h内50 μmol/L H₂O₂组细胞存活率为50%~80%，适用于构建氧化应激模型。流式细胞术结果显示，用50 μmol/L H₂O₂刺激奶牛子宫内膜上皮细胞2 h时，ROS水平显著高于对照组与4、6、8、12 h组（P<0.05）。划痕试验结果显示，与对照组相比，H₂O₂组奶牛子宫内膜上皮细胞的迁移能力显著降低（P＜0.05）；与H₂O₂组相比，bAD-MSCs共培养组奶牛子宫内膜上皮细胞的迁移能力均显著增加（P＜0.05），MACT共培养组细胞迁移能力均显著降低（P＜0.05）。Western blotting结果显示，与对照组相比，H₂O₂组奶牛子宫内膜上皮细胞中pErk蛋白表达水平显著降低（P＜0.05）；与H₂O₂组相比，bAD-MSCs共培养组奶牛子宫内膜上皮细胞中pErk蛋白表达水平均显著升高（P＜0.05），MACT共培养组细胞中pErk蛋白表达水平均显著降低（P＜0.05）。【结论】50 μmol/L H₂O₂处理2 h可成功构建奶牛子宫内膜上皮细胞氧化应激模型，bAD-MSCs可促进氧化应激条件下奶牛子宫内膜上皮细胞的迁移并参与调控Erk蛋白的表达。

【目的】探讨高脂高果糖饮食对老年小鼠视网膜形态结构改变的影响。【方法】将12只4周龄的SPF级雄性C57BL/6J小鼠饲养至12月龄后分成普通饮食组（ND）和高脂高果糖饮食组（HFHFD），每组6只，普通饮食组饲喂普通饲料，高脂高果糖饮食组饲喂高脂高果糖饲料，18月龄取眼球，左眼球用眼球固定液固定，右眼球冻存备用；采用HE染色法观察小鼠视网膜组织结构改变情况，采用免疫组织化学法（IHC）检测小鼠视网膜组织中磷酸化乙酰辅酶A羧化酶（p-ACC）表达，采用免疫荧光（IF）法检测视网膜组织中固醇调节元件结合蛋白-1（SREBP1）的表达情况，采用Western bloting法检测p-ACC、p-AMPK、SREBP1蛋白的表达水平。【结果】HE染色结果显示，与普通饮食组相比，高脂高果糖饮食组视网膜组织出现视杆和视椎层厚度不均匀，局部增生，延伸入外颗粒层，细胞排列疏松等现象；免疫组化结果显示，与普通饮食组相比，高脂高果糖饮食组p-ACC表达水平显著下降（P＜0.05）；免疫荧光结果显示，与普通饮食组相比，高脂高果糖饮食组SREBP1蛋白表达显著增加（P＜0.05）；Western bloting结果显示，与普通饮食组相比，高脂高果糖饮食组p-AMPK和p-ACC蛋白表达水平均显著降低（P＜0.05），SREBP1蛋白表达水平显著升高（P＜0.05）。【结论】高脂高果糖饮食可诱导老年小鼠视网膜病变，抑制AMPK的活化，降低p-ACC的表达，升高SREBP1的表达，结果可为进一步探索高脂高果糖饮食影响视网膜结构改变的机制提供参考。

【目的】本试验旨在研究全价颗粒饲粮代谢能/总氮（ME/N）和性别对全舍饲简州大耳羊生长性能及养分消化代谢的影响。【方法】采用2×4两因素试验设计，选择健康、体况良好的5月龄简州大耳羊64只，公羊（26.56 kg±2.96 kg）和母羊（25.75 kg±2.46 kg）各32只，公母各随机分成4组，每组8只羊，分别饲喂ME/N为0.59、0.51、0.43、0.35的全价颗粒饲粮，过渡期5 d，预饲期10 d后进行30 d饲养试验，再按照平均体重每组选择4只羊开展为期11 d的全收粪尿消化代谢试验（预饲7 d，正试期4 d）。【结果】①饲粮ME/N显著影响试验羊平均日增重（ADG）和干物质采食量（DMI）（P＜0.05），在ME/N为0.43时ADG达到最佳（259±58 g/d）；试验公羊ADG和DMI显著高于试验母羊（P＜0.05），饲粮ME/N和性别对DMI具有显著的交互作用（P＜0.05）。②随着ME/N降低，试验羊尿能（UE）显著增加（P＜0.05），对总能摄入量（GEI）、粪能（FE）、消化能（DE）和总能（GE）表观消化率无显著影响（P＞0.05）；试验公羊GEI、FE、DE均显著高于试验母羊（P＜0.05）。③随着饲粮ME/N降低，试验羊摄入氮（NI）和氮表观消化率均显著增加（P＜0.05），公羊NI、沉积氮（NR）、净蛋白利用率（NPU）和氮的生物学价值（BV）均显著高于母羊（P＜0.05）。④随着饲粮ME/N降低，试验羊粗脂肪（EE）和酸性洗涤纤维（ADF）的表观消化率先增加后降低（P＜0.05），其他养分消化率无显著变化（P＞0.05）；公羊干物质（DM）、磷（P）、ADF、中性洗涤纤维（NDF）的表观消化率均显著高于母羊（P＜0.05）；性别和饲粮ME/N对养分表观消化率无显著交互作用（P＞0.05）。【结论】当全价颗粒饲粮能量一致，适当降低ME/N（增加N浓度）可以显著提高全舍饲生长育肥期简州大耳羊生长性能和养分表观消化率，但继续降低ME/N不能提高试验羊生长性能和养分消化代谢，在本试验条件下最适的饲粮ME/N为0.43；生长育肥期公羊对养分消化代谢及生长性能均优于同期母羊。

【目的】评估建立奶牛疾病预测模型的6种机器学习（machine learning，ML）算法的性能及预测变量的重要性。【方法】选取2020年12月至2021年11月，共计944头泌乳牛的生产信息、行为信息作为预测因子，疾病信息作为输出变量，训练并验证模型。将日产奶量、反刍量、活动量、胎次和泌乳天数作为输入变量，利用ML算法建立奶牛疾病的预测模型，评估决策树（Decision Tree，DT） C5.0、CHAID算法、人工神经网络（Artificial Neural Network，ANN）、随机森林（Random Forests，RF）、贝叶斯网络（Bayesian Networks，BN）和逻辑回归（Logistic Regression，LR）6种ML算法的性能，评估预测变量的重要性，以及将胎次和泌乳天数纳入预测变量后模型性能的改善情况。采用敏感性和特异性评估模型性能，按照权重排序评估输入变量对模型预测的重要性。【结果】DT C5.0算法敏感性>85%，特异性>90%，为性能最佳的模型；RF总敏感性为56.8%，对各类牛预测的性能较稳定；ANN、BN、DT CHAID则对样本量较多的疾病预测性能较好，可达74.4%；LR对病牛正确识别率不足40.0%，大多识别为健康牛。产奶量为RF、ANN、LR最重要的预测变量，泌乳天数为DT C5.0、CHAID和BN最重要的预测变量；纳入胎次和泌乳天数后，模型预测的敏感性平均提高9.8%。【结论】ML算法在对奶牛疾病的预测方面表现出很大潜力，其中，DT C5.0更适合用于预测奶牛疾病。产奶量和泌乳天数为疾病预测模型中相对重要的变量，此外，将胎次和泌乳天数纳入预测变量，可提高模型的预测精度。

【目的】研究饲粮中添加地衣芽孢杆菌和解淀粉芽孢杆菌对断奶仔猪生长性能、血常规、血清生化及抗炎抗氧化指标的影响。【方法】选取108头28日龄杜长大断奶仔猪，按体重分为3组，每组6个重复，每个重复6头。对照组饲喂基础饲粮，其余两组分别在基础饲粮中添加1 g/kg地衣芽孢杆菌、1 g/kg解淀粉芽孢杆菌，试验期28 d。在试验第14和28天，空腹称重并计算采食量，每个重复选取2头仔猪，前腔静脉采血并用血细胞分析仪和试剂盒方法测定血常规及血清生化指标。【结果】各组断奶仔猪之间的平均日增重、平均日采食量、料重比均无显著性差异（P＞0.05）。与对照组相比，解淀粉芽孢杆菌组断奶仔猪的腹泻率显著降低（P＜0.05）；地衣芽孢杆菌组和解淀粉芽孢杆菌组断奶仔猪第14天血液淋巴细胞百分含量均显著升高，白细胞介素-2（IL-2）、丙二醛含量及乳酸脱氢酶、谷草转氨酶活性均显著降低（P＜0.05）；解淀粉芽孢杆菌组断奶仔猪第14天血液中碱性磷酸酶活性显著降低，血红蛋白含量显著升高，第28天血液中IL-2含量显著降低，总蛋白、球蛋白含量均显著升高（P＜0.05）。【结论】饲粮中添加地衣芽孢杆菌或解淀粉芽孢杆菌对断奶仔猪生长性能无显著影响，但能够改善仔猪血液指标，保护肝脏功能，且添加解淀粉芽孢杆菌还可以提高仔猪新陈代谢，降低仔猪腹泻率。

肠道微生物在调节宿主生理机能、代谢和免疫功能等方面发挥着非常重要的作用，是影响猪健康和重要经济性状表型的重要因素之一。近年来，人们对猪肠道微生物的研究和了解越来越深入，了解猪肠道微生物组成将有助于为从肠道菌群方向入手改善猪群健康和提高生产性能提供参考。作者首先综述了不同发育阶段、不同肠道部位以及主要商品猪和中国地方猪肠道核心菌群组成；其次系统总结了宿主遗传背景、饲粮种类、性别、环境以及抗生素、益生菌和饲料添加剂使用等因素对猪肠道微生物组成的影响；最后概述了猪肠道微生物主要功能及其对饲料利用率、脂肪沉积、宿主行为和免疫炎症等方面的影响。

【目的】通过研究柑橘提取物对肥育猪后肠食糜蛋白质代谢产物的影响，旨在为柑橘提取物从源头调控臭气的产生提供依据。【方法】选取108头56日龄（19.73±0.39）kg杜×长×大猪，公母各半，随机分为3组，每组分6栏，每栏6头猪。对照组饲喂基础饲粮，抗生素组在基础饲粮中添加75 g/t金霉素，柑橘提取物组在基础饲粮中添加柑橘提取物（56~112日龄添加250 mL/t柑橘提取物，113~194日龄添加200 mL/t柑橘提取物）。194日龄时收集肥育猪盲肠和结肠食糜，测定食糜中游离氨基酸、酚和吲哚类物质、生物胺的含量。【结果】①在盲肠食糜中，与对照组相比，柑橘提取物组和抗生素组牛磺酸、天冬氨酸、丙氨酸、缬氨酸、亮氨酸、赖氨酸、组氨酸、精氨酸、吲哚和甲胺含量均显著降低（P＜0.05）。与对照组相比，柑橘提取物有降低苏氨酸、丝氨酸、谷氨酸、甘氨酸、瓜氨酸、异亮氨酸、脯氨酸和粪臭素含量的趋势（0.05≤P＜0.10），苯酚、腐胺、酪胺和精胺含量均显著降低（P＜0.05）。与抗生素组相比，柑橘提取物组腐胺和酪胺含量均显著减少（P＜0.05）。②在结肠食糜中，与对照组相比，柑橘提取物组和抗生素组天冬氨酸、丝氨酸、异亮氨酸、胱硫醚、亮氨酸、γ-氨基丁酸、总氨基酸、苯酚、对甲酚、粪臭素和甲胺含量均显著降低（P＜0.05），脯氨酸和吲哚含量均有降低的趋势（0.05≤P＜0.10）。柑橘提取物组丝氨酸、异亮氨酸、胱硫醚、亮氨酸、总氨基酸和对甲酚含量均显著低于抗生素组（P＜0.05）；与对照组相比，柑橘提取物组苏氨酸、谷氨酸、甘氨酸、鸟氨酸和酪胺含量均显著降低（P＜0.05），亚精胺含量有降低的趋势（0.05≤P＜0.10）；与对照组和抗生素组相比，柑橘提取物组苯丙氨酸、色氨酸和赖氨酸含量均显著降低（P＜0.05）。【结论】柑橘提取物降低了肥育猪后肠食糜蛋白质代谢产物的含量，可减少臭气的产生。

【目的】利用套算法评定不同来源菜籽粕的鹅代谢能及营养物质利用率。【方法】选取健康、体重接近的200日龄成年公鹅30只，随机分为5组（Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ、Ⅴ组），每组6个重复，每个重复1只鹅。4种菜籽粕分别由加拿大进口油菜籽及江苏省苏州市、宿迁市、盐城市本地生产的油菜籽榨油而成。采用强饲法进行代谢试验，强饲量80 g，试验Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ组分别以4种菜籽粕替代30%基础饲粮，试验Ⅴ组强饲基础饲料，并收集内源粪便，做内源校正。【结果】①4种菜籽粕中的总能（GE）、干物质（DM）、粗蛋白质（CP）、粗脂肪（EE）、粗灰分（Ash）、酸性洗涤纤维（ADF）、中性洗涤纤维（NDF）、钙（Ca）、总磷（TP）含量的平均值分别是17.48 MJ/kg、88.95%、42.22%、2.47%、7.93%、22.42%、37.81%、0.83%和1.09%。②鹅对4种菜籽粕的表观代谢能（AME）、真代谢能（TME）平均值分别为12.27和13.05 MJ/kg，且AME、TME存在显著的组间差异（P＜0.05）；鹅对4种菜籽粕CP真利用率平均值为44.84%，对DM、EE、Ash、ADF、NDF、Ca和TP的表观利用率平均值分别为70.71%、76.48%、38.07%、43.31%、51.67%、46.09%和48.99%，其中，CP、DM、EE和NDF利用率存在显著的组间差异（P＜0.05）。【结论】菜籽粕营养成分丰富，其代谢能与豆粕、麦麸等接近；鹅对菜籽粕EE、NDF、Ca、TP利用率较高，但对CP利用率较低。鹅对不同地区菜籽粕的代谢能、CP、DM和NDF利用率有显著差异，其中，试验Ⅰ组的AME、TME高于其他3组，试验Ⅳ组的CP利用率最高。

【目的】研究植物精油（13.5%百里酚和4.5%肉桂醛）对笼养山麻鸭机体免疫、抗氧化力和肠道微生物的影响。【方法】选取200只健康的40周龄山麻鸭（产蛋性能及体重相近），随机分为4组，每组5个重复，每个重复10只山麻鸭。4个处理组分别在基础饲粮的基础上添加0（对照组）、50、150和200 mg/kg植物精油，试验期30 d。于试验第28~30天，每组随机选取10枚鸭蛋（接近平均蛋重），用于分析鸭蛋品质；于试验结束时，每个重复选取1只鸭，采集血清，检测血清免疫球蛋白（Ig）、补体蛋白及抗氧化指标，剖杀后采集山麻鸭盲肠内容物用于检测肠道菌群结构。【结果】与对照组相比，植物精油组蛋重、蛋壳重、蛋白重、蛋黄重和横径均显著提高（P＜0.05），血清丙二醛含量均显著降低（P＜0.05），但各组之间蛋成分所占比例差异不显著（P＞0.05）；150和200 mg/kg植物精油组山麻鸭血清免疫球蛋白A、免疫球蛋白G、免疫球蛋白M含量和谷胱甘肽过氧化酶含量均显著提高（P＜0.05），山麻鸭盲肠拟杆菌门、Parabacteroides菌属和Prevotellaceae NK3B31 group菌属丰度提高，Ralstonia菌属丰度降低。【结论】饲粮中添加植物精油可提高鸭蛋重量，改善山麻鸭免疫机能，提高笼养山麻鸭血清抗氧化性能，并能一定程度上改善山麻鸭盲肠菌群结构。综合考虑，添加150 mg/kg植物精油效果较好。

【目的】研究健脾消导中药复方对6月龄西门塔尔牛×本地黄牛杂交犊牛（西杂牛）生长性能、瘤胃发酵参数和血清生化指标的影响。【方法】选取体重为193 kg±20 kg的西杂牛28头，随机均分为对照组和试验组。对照组饲喂基础饲粮，试验组在基础饲粮中添加0.5%健脾消导中药复方，预试期7 d后连续饲喂90 d，于第91天晨饲前称重并采集瘤胃液和血液，测定瘤胃液短链脂肪酸和血清生理生化指标。【结果】与对照组相比，试验组平均日增重（ADG）显著增加（P＜0.05），料重比（F/G）降低；瘤胃液pH、乙酸、丙酸、丁酸、总短链脂肪酸含量及乙酸/丙酸比值均无显著差异（P＞0.05）；血清总胆固醇（CHO）含量升高；总胆红素（TBIL）、直接胆红素（DBIL）、谷丙转氨酶（ALT）和丙二醛（MDA）含量均显著降低（P＜0.05）；免疫球蛋白A（IgA）、免疫球蛋白G（IgG）、胃泌素（GAS）、三碘甲状腺原氨酸（T₃）、还原型谷胱甘肽（GSH）含量均显著升高（P＜0.05）；胃动素（MTL）和生长激素（GH）含量虽有升高但均差异不显著（P＞0.05）。【结论】在6月龄西杂牛的饲粮中添加健脾消导中药复方可以调节激素分泌、促进草料消化吸收、增强抗氧化能力、提高机体免疫力，进而提升西杂牛的生长性能。

【目的】评估贵州地区野猪（Sus scrofa）的遗传多样性和遗传结构，为进一步开展保护遗传学研究和种群生态管理提供理论依据，进而为研究野猪的保护生物学及其对环境的适应奠定基础。【方法】对野猪线粒体Cytb基因进行PCR扩增及测序，结合从GenBank中下载的国内其他9个地区的55条野猪线粒体Cytb基因序列，利用Mega 7.0软件进行碱基组成和遗传距离分析，并使用DnaSP 6.0软件进行遗传多样性分析。【结果】贵州野猪Cytb基因（1 140 bp）碱基组成与其他地区野猪种群相似，AT含量高于GC含量；贵州采集的11头野猪的Cytb基因共有6个变异位点，4种单倍型，单倍型多样性为0.600，核苷酸多样性为0.00118；单倍型多样性与核苷酸多样性仅高于江西和东北地区的野猪种群；种内遗传距离较小，亲缘关系较近；中性检验Tajima’s D值和Fu’s Fs值均为负值且差异不显著，错配分布分析呈单峰分布，表明贵州野猪种群在历史上较为稳定。使用Network构建单倍型网络图，结合Mega 7.0软件构建的单倍型系统发育树分析结果表明，贵州野猪单倍型与其他地区种群存在共享单倍型（Hap_1和Hap_10）。【结论】贵州野猪种群正历经种群扩张阶段，但种群遗传多样性低于全国多个地区的野猪种群，种群内遗传距离较小，与国内其他地区种群间遗传距离适中，因此，应加强对其种群遗传多样性的保护管理。

【目的】探究肌细胞增强因子2C（myocyte enhancer factor 2C，MEF2C）基因多态性对黔东南小香鸡体重和体尺性状的影响。【方法】试验以251羽300日龄黔东南小香鸡为研究对象，利用PCR扩增和直接测序技术对MEF2C基因全部（15个）外显子进行单核苷酸多态性（single nucleotide polymorphism，SNP）位点筛选，并运用SPSS 18.0统计分析软件对不同SNPs位点所对应的基因型与黔东南小香鸡的体重、体尺性状进行相关性分析。【结果】黔东南小香鸡群体中仅在MEF2C基因外显子12上发现3个SNPs位点：g.1819 T＞C、g.2426 T＞C和g.2543 C＞T，在其他外显子中未发现多态位点。χ²检验结果表明，3个SNPs在黔东南小香鸡群体中均偏离Hardy-Weinberg平衡状态（P＞0.05）。关联分析结果显示，g.1819 T＞C位点TC基因型个体体斜长、胸深和胫围均极显著高于TT和CC基因型，体重极显著高于TT基因型（P＜0.01）；TC基因型个体胫长显著高于TT和CC基因，龙骨长显著高于TT基因型（P＜0.05）。g.2426 T＞C和g.2543 C＞T位点互为连锁平衡位点，对胫围有极显著影响（P＜0.01）。【结论】黔东南小香鸡MEF2C基因外显子具有较强的保守性，g.1819 T>C位点可以作为黔东南小香鸡分子标记辅助选育参考位点。

【目的】探究外源性RF-酰胺相关肽3（RF-amide related peptide 3，RFRP-3）和褪黑素（melatonin，MLT）对雄性昆明小鼠初情期生长、繁殖性能的影响及两者之间的关系。【方法】以初情期雄性昆明小鼠为研究对象，单独给予雄鼠生理盐水、外源性RFRP-3或MLT以及混合给予RFRP-3、MLT，检测其对雄鼠平均增重、平均采食量、料重比、睾丸发育情况，血清生长激素（growth hormone，GH）、黄体生成素（luteinizing hormone，LH）水平，以及生长、生殖相关基因表达的影响。【结果】外源性RFRP-3能抑制雄鼠GH基因表达，并抑制体重增长，提高料重比；而外源性MLT促进雄鼠GH基因表达，使体重增长较快，料重比降低；RFRP-3和MLT共同处理下，GH基因表达增加，体重增长速度与单独给予MLT组接近。RFRP-3可抑制褪黑素受体1A（melatonin receptor 1A，Mtnr1A）、LH基因表达及睾酮分泌，小鼠睾丸各级生精细胞和间质细胞数量减少；MLT可促进Mtnr1A、LH基因表达及睾酮分泌，睾丸间质细胞密度极显著增加（P＜0.01）；MLT和RFRP-3共同处理下，小鼠睾丸各级生精细胞和间质细胞数量减少，睾酮分泌显著减少（P＜0.05）。【结论】外源性RFRP-3能一定程度抑制雄性小鼠初情期的生长及繁殖性能，外源性MLT可促进初情期雄性小鼠的生长及繁殖性能。

【目的】研究miR-140-5p在前脂肪细胞（3T3-L1）成脂分化过程中的功能及其作用机制。【方法】待3T3-L1细胞汇合度达100%时诱导其成脂分化，收集分化第―1（诱导分化前1 d）、0、1、2、3、5、7天的细胞，用实时荧光定量PCR检测miR-140-5p相对表达量；将miR-140-5p mimics、NC转染3T3-L1细胞并诱导成脂分化，油红O染色观察脂滴形成情况，实时荧光定量PCR检测成脂标志基因CAAT增强子结合蛋白β（C/EBPβ）、CAAT增强子结合蛋白δ（C/EBPδ）与过氧化物酶体增殖物激活受体γ（PPARγ）相对表达量；利用miRandn和TargetScan在线网站预测miR-140-5p的靶基因；通过对比序列差异分析P300/CBP相关因子（PCAF）的3'-UTR序列中与miR-140-5p的结合位点序列在小鼠、人等不同物种间的序列保守性。将miR-140-5p mimics、inhibitor、NC转染3T3-L1细胞并诱导成脂分化，实时荧光定量PCR检测miR-140-5p、PCAF相对表达量，Western blotting检测PCAF蛋白水平；将PEGFP-N1-PCAF、PEGFP-N1转染3T3-L1细胞，油红O染色观察脂滴形成情况，实时荧光定量PCR检测PCAF、C/EBPδ、PPARγ基因相对表达量，Western blotting检测C/EBPβ、C/EBPδ、PPARγ蛋白表达水平。将3条PCAF siRNA（siRNA1、siRNA2、siRNA3）、siRNA NC转染3T3-L1细胞，Western blotting法检测PCAF蛋白水平，筛选最佳PCAF siRNA。将最佳PCAF siRNA和siRNA NC转染3T3-L1细胞，油红O染色观察脂滴形成情况，实时荧光定量PCR检测PCAF、C/EBPβ、C/EBPδ与PPARγ基因相对表达量，Western blotting检测C/EBPβ、PPARγ蛋白表达水平。分别将miR-140-5p mimics、NC与PGL0-PCAF 3'-UTR载体和PGLO空载体共转染293T细胞，用双荧光素酶报告试验检测miR-140-5p与PCAF的靶向关系。【结果】在诱导3T3-L1细胞成脂分化过程中，与诱导分化前1 d相比，在细胞成脂分化第1、2天时miR-140-5p相对表达量极显著升高（P＜0.01），在分化第3天时显著升高（P＜0.05）。与NC组相比，miR-140-5p mimics组脂滴数量明显增加，miR-140-5p mimics组成脂标志基因C/EBPδ与PPARγ相对表达量均极显著升高（P＜0.01）。靶基因预测结果表明，miR-140-5p与PCAF存在预期结合位点；保守性分析结果表明，靶基因PCAF结合位点序列在不同物种间具有高度保守性。与NC组相比，mimics组miR-140-5p和PCAF相对表达量均极显著升高（P＜0.01），inhibitor组miR-140-5p极显著降低（P＜0.01）、PCAF显著降低（P＜0.05），PCAF蛋白表达量显著升高（P＜0.05）。与PEGFP-N1组相比，PEGFP-N1-PCAF组脂滴数量增多，PCAF、PPARγ基因相对表达量和C/EBPβ、C/EBPδ蛋白水平极显著升高（P＜0.01），PPARγ蛋白水平显著升高（P＜0.05）。PCAF siRNA1、siRNA2与siRNA3均极显著抑制PCAF蛋白的表达（P＜0.01），siRNA3的效果最显著，因此选择siRNA3进行后续试验。与NC组相比，PCAF siRNA3组3T3-L1细胞中脂滴数量较少，PCAF、C/EBPβ、C/EBPδ、PPARγ基因相对表达量和C/EBPβ蛋白水平均极显著下降（P＜0.01）。双荧光素酶报告试验结果显示，miR-140-5p与PCAF基因之间无靶标关系。【结论】内源性miR-140-5p在3T3-L1细胞分化过程中表达升高，miR-140-5p可能通过间接上调PCAF基因表达促进3T3-L1细胞成脂分化。

【目的】探究不同日龄伊拉兔睾丸和附睾组织在性成熟前的变化规律，为其初情期及性成熟的判定提供组织学依据。【方法】将45只伊拉兔随机分为9组，每组5只，从30日龄开始每隔15日采集1组试验兔的睾丸及其附睾，运用形态学与组织解剖学方法对其生长发育规律进行研究分析。【结果】随着日龄的增加，睾丸指数、睾丸重、睾丸长径、睾丸短径及厚径等指标逐步增加，且150日龄时各指标均显著高于其他组（P＜0.05）；30、45、60日龄睾丸内生精小管排列稀疏，75、90、105日龄时睾丸间质成分逐渐增多，管腔逐步形成，120、135、150日龄时间质细胞进一步增生并成群分布，90日龄起出现圆形和长形未成型精子，120日龄的睾丸生精小管、附睾管腔中出现少量成型精子，150日龄时有大量精子密集分布于睾丸管腔内，且在120、135、150日龄时生精小管面积、上皮细胞厚度、支持细胞数均显著大于其他组（P＜0.05）；30日龄以上各组间质细胞个数在各组间差异不显著（P＞0.05），但均显著高于30日龄；120、135、150日龄时附睾头、体、尾的直径均极显著高于其他组（P＜0.05），而附睾头的柱状上皮厚度和纤毛长度则从105日龄起就显著高于30、45、60、75和90日龄组（P＜0.05）。【结论】伊拉兔睾丸和附睾随日龄增加同步发育，在120日龄时达到初情期，在150日龄时睾丸和附睾已发育成熟，基本达到性成熟。

【目的】试验旨在研究以褪黑素和地诺前列腺素组成的复合添加剂对奶牛性控冻精解冻后精子质量及奶牛人工授精后受胎率的影响。【方法】30份奶牛性控冻精样均分为2组：试验组和对照组，试验组添加由24 ng/mL褪黑素、1.5 mg/mL地诺前列腺素及精液稀释液组成的250 μL复合添加剂，对照组添加250 μL精液稀释液，试验组和对照组均与解冻后的奶牛性控冻精按照1∶1（V/V）进行混合，室温孵育0、2及4 h，通过免疫荧光染色分析精子活率、顶体完整率、高能线粒体活性精子比率；对216头青年奶牛和82头头胎奶牛输精后通过28 d早孕检测来确定受胎率情况。【结果】与对照组相比，经复合添加剂处理0 h的性控冻精活率、顶体完整率及高能线粒体活性精子比率均无显著变化（P＞0.05）；经复合添加剂处理2 h的性控冻精活率、顶体完整率、高能线粒体活性精子比率均显著升高（P＜0.05）；经复合添加剂处理4 h的性控冻精活率和顶体完整率均无显著变化（P＞0.05），高能线粒体活性精子比率显著升高（P＜0.05）。在输精试验中，试验组青年奶牛和头胎奶牛中的受胎率分别为65.22%和48.21%，均显著高于对照组（P＜0.05）。【结论】以褪黑素和地诺前列腺素组成的复合添加剂可以促进解冻后奶牛性控冻精精液品质以及青年奶牛和头胎奶牛输精后的受胎率。

【目的】研究miR-449b对绵羊早期胚胎发育的影响。【方法】采用Percoll密度梯度离心法获得纯化绵羊精子，将绵羊卵丘-卵母细胞复合体（COCs）在培养箱中培养16~18 h获得成熟卵母细胞，从1月龄纯种萨福克绵羊耳组织分离成纤维细胞，通过实时荧光定量PCR比较绵羊精子、成熟卵母细胞与成纤维细胞中miR-449b的相对表达量；给成熟卵母细胞分别显微注射0.9 %生理盐水（Con组）、miR-449b模拟物对照（NC mimic）与miR-449b模拟物（miR-449b mimic），注射后进行孤雌激活，分别于激活的第2、7天统计胚胎卵裂率与囊胚率；将成熟卵母细胞进行体外受精（IVF），收集IVF、Con、NC mimic与miR-449b mimic组2-细胞胚胎，采用免疫荧光法比较组蛋白H3K9me3的变化。【结果】miR-449b在精子中的表达显著高于成熟卵母细胞和成纤维细胞（P＜0.05）；与Con组相比，miR-449b mimic和NC mimic组胚胎的卵裂率均显著降低（P＜0.05），NC mimic组胚胎卵裂率显著低于miR-449b mimic组（P＜0，05）；miR-449b mimic组胚胎囊胚率提高，但差异不显著（P＞0.05）；IVF、Con、NC mimic与miR-449b mimic组2-细胞胚胎均表达组蛋白H3K9me3，且都在细胞核表达。与Con组相比，NC mimic组2-细胞胚胎组蛋白H3K9me3的表达水平显著增加（P＜0.05），miR-449b mimic组显著降低（P＜0.05）；NC mimic组2-细胞胚胎组蛋白H3K9me3的表达水平显著高于miR-449b mimic组（P<0.05），miR-449b mimic与IVF组无显著差异（P＞0.05）。【结论】miR-449b能显著提高绵羊早期胚胎的发育率，且降低早期胚胎中H3K9me3的表达水平。

【目的】研究内质网IP3受体（IP3R）抑制剂2-氨基乙基联苯基硼酸酯（2-APB）对玻璃化冷冻-解冻牛MⅡ期卵母细胞发育能力的影响。【方法】将体外成熟24 h的卵丘-卵母细胞复合体（COCs）用0.1%透明质酸酶消化去除卵丘颗粒细胞，获得的卵母细胞分为对照组和2-APB组，采用OPS法进行玻璃化冷冻，对照组直接进行玻璃化冷冻，2-APB组在玻璃化冷冻前先用10 μmol/L 2-APB预处理10 min。2 d后解冻卵母细胞，统计解冻后（0 h）及恢复培养2 h时卵母细胞的存活率，用FITC-PNA荧光探针检测恢复培养2 h时卵母细胞皮质颗粒（CG）的分布，用2'，7'-DCHFDA和Cell Tracker Blue CMF2HC分别检测胞内活性氧（ROS）和谷胱甘肽（GSH）含量。将成熟培养24 h未冷冻卵母细胞（Fresh组），与解冻后恢复2 h的对照组和2-APB组卵母细胞同时进行孤雌激活，于培养的第2、7天分别统计孤雌胚胎的卵裂率和囊胚率。【结果】与对照组相比，2-APB组冷冻-解冻卵母细胞0和2 h的存活率均显著增加（P＜0.05）；2-APB组皮质颗粒皮质区分布比例显著提高（P＜0.05），损伤型分布比例显著降低（P＜0.05）；2-APB组卵母细胞内GSH含量显著增加（P＜0.05），ROS含量显著降低（P＜0.05）；2-APB组卵母细胞孤雌激活胚胎的卵裂率、囊胚率均显著增加（P＜0.05），且与Fresh组无显著差异（P＞0.05）。【结论】2-APB预处理可通过增加卵母细胞内GSH含量，降低卵母细胞皮质颗粒损伤型分布比例和胞内ROS含量，提高玻璃化冷冻保存牛MⅡ期卵母细胞质量及早期胚胎发育能力。

【目的】丰富非洲猪瘟病毒（African swine fever virus，ASFV）感染后猪外周血淋巴细胞长链非编码RNA（long non-coding RNA，lncRNA）表达谱，并进一步挖掘影响Toll样受体信号通路的调控网络。【方法】试验动物感染ASFV，于第7天采集外周血并分离得到外周血淋巴细胞，运用Illumina高通量组学测序对外周血淋巴细胞中lncRNA进行测序，原始数据经处理后筛选获得差异表达的lncRNA，并进行靶基因预测，利用生物信息学方法对靶基因进行GO功能和KEGG信号通路富集分析，初步绘制与Toll样受体信号通路相关的lncRNA-mRNA调控网络，并对lncRNA-ENSSSCG00000041959在内的4个lncRNAs进行实时荧光定量RT-PCR验证。【结果】共筛选到73个差异表达的lncRNAs，其中上调表达lncRNAs 38个，下调表达lncRNAs 35个。GO功能分析结果显示，靶基因显著富集在调节免疫系统过程、防御反应、生物刺激、病毒反应和先天性免疫；KEGG信号通路富集分析显示，大部分靶基因与细胞循环、疾病及免疫应答有关，其中免疫相关信号通路有Toll样受体信号通路、TNF信号通路、产生IgA的肠道免疫网络等。进一步挖掘出lncRNA-ENSSSCG00000041959-RIPK1和lncRNA-ENSSSCG00000041959-IRAK1可能是影响Toll样受体信号通路的重要调控网络，实时荧光定量RT-PCR与测序结果一致。【结论】本研究初步鉴定出lncRNA-ENSSSCG00000041959-RIPK1和lncRNA-ENSSSCG00000041959-IRAK1可能是影响Toll样受体信号通路的lncRNA-mRNA调控网络，为进一步探索lncRNA调控ASFV感染机体免疫反应奠定了理论基础。

【目的】建立非洲猪瘟病毒（African swine fever virus，ASFV）ELISA抗体检测方法。【方法】以重组截短p72（p72s）蛋白作为检测抗原，通过方阵滴定法，确立ELISA的抗原、待检血清和酶标抗体的最佳工作浓度，优化抗原包被、酶标板封闭、血清/酶标抗体反应及底物显色等工作条件；应用受试者工作特征（receiver operating characteristic，ROC）曲线阈值评价标准，确定方法的阴阳性临界值；检测方法的特异性、敏感性、批内与批间重复性；最后分别用建立的ELISA方法和商品试剂盒检测124份血清，比较两者的阳性检出率，并通过Western blotting验证ELISA的检测结果。【结果】ELISA方法的抗原最佳包被浓度为0.5 μg/mL，待检血清与酶标抗体的最适稀释度分别为1∶100和1∶5 000；反应条件为：抗原于37 ℃孵育1 h后经4 ℃包被酶标板过夜、于37 ℃封闭1 h或室温封闭2 h、待检血清和酶标抗体分别于37 ℃反应60和45 min及加入底物后于室温避光显色20 min；阴阳性血清的判定标准为：当待检血清的D_{450 nm}值≥0.365时，判定为阳性；当D_{450 nm}值＜0.365时，判定为阴性。该方法只与ASFV阳性血清发生特异性结合，与猪瘟病毒、伪狂犬病病毒、猪繁殖与呼吸综合征病毒等病毒抗血清均无交叉反应；能检测到ASFV抗血清中的总蛋白量为0.091~0.153 mg/mL，低于商品试剂盒的最低检测量（0.110~0.554 mg/mL）；批内和批间重复性试验的平均变异系数分别为4.70%与5.125%。对临床血清样本检测时，建立方法和商品试剂盒的阳性检出率分别为75.81%（94/124）和32.26%（40/124）。进一步验证表明，Western blotting与ELISA的检测结果完全一致。【结论】建立了基于ASFV-p72s蛋白的ELISA抗体检测方法，该方法特异、敏感和重复性稳定，能够用于ASF临床诊断与流行病学调查，具有极大的开发应用潜力。

【目的】表达与纯化猪丁型冠状病毒（Porcine deltacoronavirus，PDCoV）的核衣壳（nucleocapsid，N）蛋白，并制备其多克隆抗体（polyclonal antibody，PcAb）。【方法】以PDCoV CHN-HN-1601分离株基因组RNA为模板，利用RT-PCR扩增PDCoV全长的N基因编码序列，将其克隆至原核表达载体pET-28a（+）中构建重组质粒pET-28a-PDCoV-N。经酶切和测序鉴定后，将重组质粒转化大肠杆菌BL21（DE3）感受态细胞，利用0.5 mmol/L IPTG于37 ℃诱导表达12 h。在非变性条件下，利用Ni-NTA琼脂糖树脂从菌体裂解液上清中纯化N-端和C-端均携带6×His标签的重组N蛋白，并将其免疫新西兰白兔制备抗血清。利用Protein A/G琼脂糖树脂从免疫兔的抗血清中亲和层析纯化多克隆抗体，并对多克隆抗体进行Western blotting和间接免疫荧光试验（IFA）鉴定及抗体效价的间接ELISA测定。【结果】重组PDCoV-N蛋白以可溶性和包涵体两种形式表达，分子质量约为42 ku；上清可溶性N蛋白的纯化纯度可达90%、蛋白浓度为0.45 mg/mL；纯化后的多克隆抗体纯度较高，ELISA方法检测其效价为1∶6 400，能特异性地识别重组N蛋白和PDCoV，与可引起猪腹泻的猪流行性腹泻病毒（PEDV）、猪传染性胃肠炎病毒（TGEV）、猪轮状病毒（PRoV）无交叉反应。【结论】本研究成功制备重组PDCoV-N蛋白及其多克隆抗体，为后续深入研究N蛋白的功能、PDCoV优化血清学检测方法、免疫层析试纸条的制备及开展PDCoV相关基础研究提供参考。

【目的】实现A型塞内卡病毒（Seneca virus A，SVA）VP1蛋白在大肠杆菌中的高效可溶性表达，以建立SVA抗体液相芯片技术检测方法。【方法】根据GenBank收录的SVA VP1基因序列（登录号：KY747514.1），基于大肠杆菌的密码子偏好性优化合成VP1基因，克隆到pCold TF载体，构建重组质粒pCold TF-VP1。将重组质粒pCold TF-VP1转化大肠杆菌BL21（DE3）感受态细胞，进行IPTG诱导表达。通过优化诱导时间及IPTG浓度得出最佳诱导表达条件。采用His标签镍柱纯化VP1重组蛋白，将纯化后的SVA VP1蛋白与荧光微球进行偶联，偶联好的微球与阴阳性血清反应，利用Luminex 200系统上机检测背景及阴阳性血清的中值荧光强度（MFI），从而判断阴阳性，以用于猪血清中SVA抗体的检测。【结果】重组质粒pCold TF-VP1成功转入大肠杆菌BL21感受态细胞，并以可溶性蛋白形式表达。经诱导表达在约82 ku处出现阳性条带。当重组菌株诱导条件为16 ℃、IPTG终浓度为1.2 mmol/L、诱导时间为3 h时，VP1蛋白表达量最高；经Western blotting分析，可在82 ku处出现明显条带。将VP1 蛋白与荧光微球偶联，阴性对照（背景）的平均荧光值为17（＜100）。测试孔的平均MFI为2 339.5（＞2 000），证明SVA VP1蛋白与微球偶联成功，偶联成功的荧光微球可用于检测猪血清中SVA抗体的检测。【结论】本研究在大肠杆菌中成功表达并纯化了SVA VP1蛋白，初步建立了SVA抗体液相芯片检测方法，为后续研究奠定了基础。

【目的】制备鸭多杀性巴氏杆菌灭活疫苗，有效控制贵州省鸭多杀性巴氏杆菌发生和流行。【方法】以实验室分离保存的A：L1型多杀性巴氏杆菌地方流行株为菌种，通过涂板法测定该菌株生长曲线，并采用改良寇氏法计算该菌株对鸭的半数致死量（median lethal dose，LD₅₀），将该菌培养至终浓度为1×10¹⁰ CFU/mL后分别制备白油佐剂灭活疫苗和卡波姆佐剂灭活疫苗，经疫苗质量检验后进行免疫雏鸭试验；通过攻毒保护试验评价比较两种疫苗的保护率，并对攻毒试验鸭肝脏、肺脏、脾脏进行病理组织学观察。【结果】A：L1型多杀性巴氏杆菌疫苗株培养至18 h到达峰值，活菌数可达1.0×10¹⁰ CFU/mL；LD₅₀为5 CFU；制备的两种疫苗安全性良好；攻毒保护试验结果显示，一免后卡波姆佐剂灭活疫苗免疫保护率可达62.5%，高于白油佐剂灭活疫苗（50.0%）及商品灭活疫苗（50.0%）。二免后卡波姆佐剂灭活疫苗优势更为明显，免疫保护率可达87.5%，高于白油佐剂灭活疫苗（75.0%）及商品灭活疫苗（62.5%）。病理组织学结果显示，一免后卡波姆佐剂灭活疫苗能对肺脏提供较好的保护效果，二免后在肝脏、肺脏和脾脏的保护效果上，卡波姆佐剂灭活疫苗组优势明显。【结论】利用贵州地区流行的A：L1型菌株所制备的卡波姆佐剂灭活疫苗免疫效果明显，能对贵州地区多杀性巴氏杆菌病的防控起到重要作用。

【目的】调查广东省内部分地区马匹寄生虫感染情况，探索区域内马匹寄生虫感染优势虫种、感染情况和耐药情况，为区域内马肠道寄生虫病的防治提供参考。【方法】采用饱和食盐溶液漂浮法和饱和蔗糖溶液漂浮法对广东省内7个城市24个马术俱乐部375份新鲜马粪样品进行处理，光学显微镜下观察虫卵/卵囊的形态结构特征并进行分类，并根据麦氏计数法计算每克粪便中虫卵/卵囊数（EPG），统计感染率和感染强度。对EPG＞500的阳性样本进行粪便虫卵减少量计数试验（FECRT），以评估各马术俱乐部流行寄生虫耐药情况。提取5份＜1岁幼驹的粪便样本DNA，利用巢式PCR检测样品是否存在隐孢子虫感染。【结果】375份样品中有120份样品呈寄生虫虫卵/卵囊阳性，总感染率为32.00%。共检出4种肠道寄生虫，分别为圆线虫、马副蛔虫、类圆线虫和马蛲虫，总感染率分别为30.40%、3.70%、0.80%和0.30%。1~4岁马匹感染率显著高于其他年龄段（P＜0.05），但不同性别马匹寄生虫感染情况无显著差异（P＞0.05）。受调查马匹感染强度以低排卵（EPG＜200）为主，占马匹总数83.47%。FECRT结果显示，样本所在马术俱乐部常用驱虫药（主要成分为伊维菌素、阿苯达唑）有效，未见耐药现象。5份＜1岁幼驹的粪便样本隐孢子虫巢式PCR检测均为阴性。【结论】广东省部分地区马术俱乐部道寄生虫防控情况总体良好，区域内各马术俱乐部寄生虫防控效果存在差异，建议区域内各马术俱乐部加强马肠道寄生虫监测工作，依据本场监测情况合理用药，避免场内流行寄生虫对所用驱虫药物产生耐药性。

【目的】探究宽谱大肠杆菌O157∶H7噬菌体的生物学特性和全基因组特征。【方法】采用双层琼脂平板法从广西南宁某猪场污水样品中分离宽谱大肠杆菌O157∶H7裂解性噬菌体，通过空斑试验、噬斑试验对噬菌体进行宿主谱和裂解效价的测定；利用透射电镜观察、最佳感染复数测定、一步生长曲线测定、热稳定性与酸碱稳定性评估、杀菌试验及全基因组测序的方法分析噬菌体的形态学、生物学和全基因组特征。【结果】试验成功分离1株宽谱大肠杆菌O157∶H7裂解性噬菌体，命名为vB_EcoM_GXBP08。噬菌体vB_EcoM_GXBP08能高效裂解14株大肠杆菌，裂解效价可达10⁹~10¹⁰ PFU/mL。以大肠杆菌O157∶H7 CVCC4050为宿主菌测得噬菌体的最佳感染复数（multiplicity of infection，MOI）为1。一步生长曲线显示，该噬菌体的潜伏期和爆发期分别为20和50 min，爆发量为154 PFU/cell，耐受温度范围为30~70 ℃，在pH为4.0~10.0的环境中能维持其活性。在宿主菌CVCC4050中的杀菌试验结果显示，MOI为1时噬菌体vB_EcoM_GXBP08具有良好的杀菌效果。根据透射电镜观察和全基因组序列分析，该噬菌体属于有尾噬菌体目肌尾噬菌体科T4-like噬菌体属，基因组片段总长为108 114 bp，GC含量为36.23%。噬菌体vB_EcoM_GXBP08基因组中含有8个CDS，编码与噬菌体裂解有关的蛋白，未发现与抗生素耐药性、毒力因子、毒素和溶源性相关的基因。【结论】噬菌体vB_EcoM_GXBP08宿主谱宽、效价高，且温度、酸碱稳定性良好，在液体培养基中的杀菌能力强，本研究结果为后续研制宽谱噬菌体制剂以及在食品业、养殖业防治大肠杆菌O157∶H7感染中的应用提供参考。

【目的】考察口服灭蝇蛆药除虫脲（diflubenzuron，DFB）预混剂灌服给药后，在猪体内的药代动力学特征，建立猪血浆中除虫脲浓度的液相色谱-串联质谱（LC-MS/MS）检测方法。【方法】以除虫脲-¹³C₆（DFB-¹³C₆）为内标，血浆样品经甲醇沉淀蛋白，离心后取上清液减压浓缩至干，甲醇-水（1∶1）复溶后进行分析。色谱柱为ZORBAX Eclipse Plus C18柱；流动相为甲醇-0.1%甲酸水（含5 mmol/L甲酸铵），进行梯度洗脱；流速为0.4 mL/min；柱温为35 ℃；进样量为10 μL。电喷雾离子源，正离子模式，多离子反应监测模式检测，DFB及内标的定量离子对分别为m/z 311.1→158.1和m/z 317.1→158.1。对色谱和质谱条件优化后，考察该方法的专属性、定量下限、基质效应、线性范围、准确度、精密度和样品稳定性等。【结果】所建立的方法灵敏度高，检测限为0.5 ng/mL，定量限为1 ng/mL；基质效应对样品的检测影响较小；标准溶液在1~1 000 ng/mL的浓度范围内，线性关系良好（R²≥0.998）；在定量下限1 ng/mL及低（2 ng/mL）、中（100 ng/mL）、高浓度（800 ng/mL）的添加水平下，平均准确度在97.78%~115.06%之间，批内、批间变异系数均<10%，符合方法学要求。在考察的条件下，标准溶液、空白血浆加标样品及处理后的样品，稳定性良好；但应避免样品的反复冻融。【结论】建立的LC-MS/MS检测方法简便、专属性强、灵敏度高、准确可靠，可用于猪血浆中除虫脲浓度的检测，进而应用于除虫脲预混剂在猪体内的药代动力学研究。

【目的】探究马兜铃酸Ⅰ（aristolochic acid Ⅰ，AA-Ⅰ）对大鼠五脏（心脏、肝脏、脾脏、肺脏和肾脏）的毒性及功能影响，为今后马兜铃属类中药临床用药提供参考。【方法】将SD大鼠随机分为AA-Ⅰ给药组和空白对照组，给药组按20 mg/kg灌服AA-Ⅰ，连续7 d。于给药后0.25、0.5、1、2、24 h及停药后15 d，采集大鼠五脏组织。利用HPLC法检测各个时间点五脏组织中的AA-Ⅰ及马兜铃内酰胺Ⅰ（aristolactams-Ⅰ，AL-Ⅰ）含量，并检测大鼠五脏主要生理功能及病理组织学变化。【结果】给药后0.25 h，AA-Ⅰ主要分布于心脏、肝脏、脾脏和肺脏，同时在肝脏和脾脏中检测到AL-Ⅰ；给药后0.5 h，AA-Ⅰ主要分布于心脏、肝脏、脾脏、肺脏和肾脏，除心脏外，其余四脏中AA-Ⅰ含量均达到高峰值，且在肝脏、肺脏、肾脏中检测到AL-Ⅰ；给药后1 h，AA-Ⅰ主要分布于肝脏和肺脏，且在肝脏中检测到AL-Ⅰ；给药后2 h，AA-Ⅰ主要分布于心脏、肝脏、肺脏和肾脏，且在肾脏中检测到AL-Ⅰ；给药后24 h，AA-Ⅰ主要分布于心脏和肝脏，且在肝脏中检测到AL-Ⅰ；停药后15 d，五脏中均未检测到AA-Ⅰ及AL-Ⅰ。功能检测结果显示，大鼠灌服AA-Ⅰ可引起五脏发生氧化应激损伤。【结论】连续7 d给大鼠灌服20 mg/kg AA-Ⅰ，在五脏中均可检测到不同含量的AA-Ⅰ，且在肝脏、肾脏、肺脏及脾脏中检测到AL-Ⅰ。AA-Ⅰ可对五脏造成不同程度的损伤，其损伤与氧化应激有关。

【目的】探讨火炭母口服液对鼠伤寒沙门菌感染小鼠肝脏的保护作用及其机制。【方法】将48只雄性BALB/c小鼠随机分为6组：空白对照组、模型组、阳性药物组及火炭母高、中、低剂量组，每组8只。阳性药物组小鼠灌胃庆大霉素（20 mg/kg），火炭母高、中、低剂量组小鼠分别灌胃16、8和4 g/kg火炭母，空白对照组和模型组小鼠分别给予等体积的PBS，连续给药8 d。预防性给药2 d后，空白对照组小鼠灌胃0.2 mL PBS，其他组小鼠一次性灌胃0.2 mL 5×10⁴ CFU/mL鼠伤寒沙门菌溶液。给药结束后处死小鼠，解剖取肝脏，制作组织切片并经HE染色观察肝脏病理变化，平板培养基培养肝脏组织悬液检测小鼠肝脏载菌量，Western blotting检测α干扰素（IFN-α）、IFN-β、IFN-γ、肿瘤坏死因子α（TNF-α）、白介素1β（IL-1β）、TANK结合激酶1（TBK1）、干扰素调节因子3（IRF3）蛋白表达水平。【结果】肝脏病理观察结果显示，模型组小鼠肝脏有淤血，大量炎性细胞浸润，肝细胞明显肿胀、排列紊乱，胞质染色加深，肝细胞坏死和凋亡；经火炭母处理后，高剂量组小鼠肝脏组织中少量炎症细胞，淤血及肝细胞坏死和凋亡的情况得到改善，肝细胞染色深、轻微肿胀、排列紊乱，而中、低剂量组除肝细胞胞质染色深、轻微肿胀、排列紊乱外，其他病变不明显。与空白对照组相比，模型组小鼠肝脏中鼠伤寒沙门菌负荷显著增加（P＜0.05），IRF3、P-IRF3、IFN-α、IFN-β和IFN-γ表达显著下降（P＜0.05），TNF-α和IL-1β表达水平则显著上升（P＜0.05）；与模型组相比，火炭母各剂量组小鼠肝脏中鼠伤寒沙门菌负荷均显著降低（P＜0.05），中剂量火炭母能明显增强TBK1蛋白的磷酸化和IRF3蛋白的表达及其磷酸化水平（P＜0.05），增加IFN-α、IFN-β、IFN-γ的蛋白水平（P＜0.05），且能显著降低TNF-α和IL-1β的分泌（P＜0.05）。【结论】火炭母可能通过上调TBK1-IRF3途径诱导IFN产生，缓解鼠伤寒沙门菌感染致小鼠肝损伤，以8 g/kg给药剂量效果较好。

【目的】从鹅粪中分离芽孢杆菌属和乳杆菌属细菌，为鹅源功能菌研究和合理用药提供参考。【方法】收集30只50周龄健康北方白鹅的直肠粪便，利用特异性培养基和生化反应试验分离筛选菌株，筛选的菌株通过DNA提取、PCR扩增16S rDNA测序鉴定后，与GenBank中参考菌株进行比对构建进化树，进行相似性比对确定菌株种类。培养48 h后检测细菌的生长特性、最适酸碱度和温度，以pH 7.0、无胆盐环境下细菌生长状态为对照，检测其耐酸耐胆盐能力，并进行药敏试验检测其对抗菌药的耐受性。【结果】经分离筛选共获得9株细菌，通过生化试验最终选出2株菌，根据进化树的进化距离和相似性比对确定其分别是特基拉芽孢杆菌CC2FG2和类肠膜魏斯氏菌JY0R2。生长特性结果显示，特基拉芽孢杆菌CC2FG2在培养基pH为6.5、温度为30 ℃条件下培养16 h的增殖效果最好，可以耐受1.2%胆盐，活菌数是无胆盐的69.2%，耐酸特性比较强，培养基pH为3.5的强酸环境下活菌数是pH为7.0的81.5%；抗菌药耐受性结果显示，其对氧氟沙星、诺氟沙星、卡那霉素、链霉素、克拉霉素、红霉素、复方新诺明和万古霉素敏感，对头孢呋辛，头孢唑林、头孢噻肟、氨苄西林、呋喃妥因、环丙沙星、庆大霉素和四环素不敏感。类肠膜魏斯氏菌JY0R2在培养基pH为6.0、温度为36.5 ℃的环境中培养18 h增殖效果最好，在1.2%胆盐下活菌数是无胆盐的50.6%，在pH为3.5的强酸环境下活菌数是pH为7.0的87.6%，对环丙沙星、氧氟沙星、诺氟沙星、克拉霉素和红霉素敏感，对卡那霉素、呋喃妥因和四环素中度敏感，对头孢呋辛、头孢唑林、头孢噻肟、氨苄西林、复方新诺明、万古霉素、庆大霉素和链霉素不敏感。【结论】鹅源特基拉芽孢杆菌CC2FG2和类肠膜魏斯氏菌JY0R2具有很好的耐酸、耐胆盐特性，且特基拉芽孢杆菌可以与部分β-内酰胺类、喹诺酮类、氨基糖苷类、硝基呋喃类和四环素类抗菌药联合使用，类肠膜魏斯氏菌可以与部分β-内酰胺类和氨基糖苷类抗菌药联合使用。该结果可为鹅源功能菌的研发提供参考。

【目的】建立动物源肠球菌对抗菌促生长剂的流行病学临界值，并基于此了解2019-2021年动物源肠球菌对饲用抗菌促生长剂的耐药情况。【方法】测定2019-2021年从北京、河北、四川、山西、陕西和内蒙古养殖场动物样本中分离得到的肠球菌对7种抗菌促生长剂（吉他霉素、黄霉素、恩拉霉素、那西肽、阿维拉霉素、维吉尼亚霉素和杆菌肽）的最小抑菌浓度（MIC）值。根据CLSI-VET中规定的方法，利用统计软件ECOFFinder对MIC分布数据进行非线性回归模拟，以95%置信区间下的流行病学临界值计算动物源肠球菌对7种抗菌促生长剂的耐药率。【结果】确定了动物源肠球菌对吉他霉素、黄霉素、恩拉霉素、那西肽、阿维拉霉素、维吉尼亚霉素和杆菌肽的流行病学临界值分别为8、8、8、0.25、8、8和32 μg/mL。由此计算的药物耐药率为64.38%、34.48%、80.06%、14.69%、19.06%、50.69%和24.96%，其中动物源肠球菌对恩拉霉素、吉他霉素和维吉尼亚霉素的耐药情况最为严重，而对那西肽最敏感。在2019-2021年的耐药率变化情况统计中，黄霉素和杆菌肽的耐药率下降趋势较为明显。【结论】本研究制定了动物源肠球菌对7种养殖业常用抗菌促生长剂的流行病学临界值，可作为动物源肠球菌对饲用抗菌促生长剂敏感和耐药的初步判定标准，为进一步制定耐药折点，监测动物源肠球菌对抗菌促生长剂的耐药情况变化提供数据基础和科学依据。

【目的】了解广东地区猪链球菌（Streptococcus suis，S.suis）临床分离株对四环素类抗生素的耐药性及耐药基因携带情况。【方法】采用药敏纸片扩散法对2016－2020年分离自广东地区的34株猪链球菌进行四环素类抗生素耐药分析，并通过PCR方法检测四环素耐药基因tetA、tetC、tetD、tetM、tetO和tetX携带情况。【结果】34株猪链球菌对四环素的耐药率高达100%（34/34），其次为米诺环素82.4%（28/34）、多西环素47.1%（16/34）。34株猪链球菌中3重耐药菌株有15株，占比44.1%（15/34），2重耐药菌株有14株，占比41.1%（14/34），耐1种药物的菌株5株，占比14.7%（5/34）。耐药基因检测结果显示，tetA、tetC、tetD、tetM、tetO和tetX基因携带率分别为0、0、0、14.7%（5/34）、100%（34/34）和0。【结论】广东地区猪链球菌临床分离株四环素类抗生素的耐药率较高，主要携带的四环素耐药基因为tetO和tetM基因。

【目的】筛选具有优良益生特性的鲤源乳酸菌作为水产养殖用微生态制剂候选菌株。【方法】以鲤鱼肠道内容物及黏膜为菌株的分离来源，采用MRS培养基进行菌株分离纯化，经16S rRNA测序鉴定后，对分离菌株生长特性、产酸能力、耐酸、耐胆盐、抑菌特性、药物敏感性及安全性等生物学特性进行分析。【结果】试验成功分离到1株植物乳杆菌，将其命名为YY001，该分离株在MRS培养基上菌落形态为圆形、表面光滑、边缘整齐、呈乳白色，革兰氏染色为阳性、无芽孢、两端钝圆的短小杆菌；4 h后进入对数期生长，12 h后生长达到稳定期；具有较强的产酸能力，产酸曲线显示，0~12 h pH迅速下降，培养16 h的菌液pH达3.8；在pH 3.0和0.3%胆盐的条件下具有一定耐受性；该分离株对水产常见致病菌柱状黄杆菌、维气氏单胞菌和嗜水气单胞菌均具抑菌效果，且对柱状黄杆菌的抑菌效果最显著，抑菌圈直径达34.19 mm；药物敏感性试验结果显示，分离株对卡那霉素、链霉素和万古霉素耐药；每天一次连续1周灌胃10⁸CFU分离菌株对小鼠无毒害作用。【结论】本研究分离到的菌株YY001具有优良的生物学特性，可作为水产养殖用微生态制剂候选菌株，为后续制备鲤鱼用微生态制剂奠定基础。

【目的】探究不同培养及发酵条件对地衣芽孢杆菌19148抑菌作用的影响及地衣芽孢杆菌19148的耐药性。【方法】设计单因素试验，分别在不同温度、酸碱度、金属离子、摇床转速、发酵时间和接种量的条件下培养地衣芽孢杆菌19148菌液，将培养后的菌液离心、过滤制成无菌滤液，并通过牛津杯抑菌试验探究无菌滤液对大肠杆菌K88、鼠伤寒沙门氏菌和金黄色葡萄球菌1882的抑制能力。通过药敏纸片法探究地衣芽孢杆菌19148对27种抗菌药的耐药性。【结果】地衣芽孢杆菌19148在4和75 ℃下生长受到抑制，25、37和45 ℃能正常生长，其中在37 ℃抑菌活性最好。在pH 5.0~9.0的条件下能正常生长，在pH为6.0条件下抑菌活性最好，对铜离子不耐受，但对镁离子表现出了良好的耐受性，且不同浓度镁离子处理组间抑菌活性无显著差异（P＞0.05）。体外发酵试验中，地衣芽孢杆菌19148在3%种子液接种量、150 r/min发酵28 h时，体外发酵的抑菌活性最好。耐药性评价试验结果显示，地衣芽孢杆菌19148对青霉素、四环素、头孢他啶、呋喃唑酮和多黏菌素B 5种抗菌药中介，对头孢哌酮和红霉素等其他22种抗菌药敏感。【结论】地衣芽孢杆菌19148具有较好的稳定性，能应用于工业发酵饲料生产，对抗菌药不具有耐药性。

黄曲霉毒素（aflatoxin，AF）是霉菌产生的毒性极强的次级代谢产物，主要存在于乳与乳制品和霉变谷物中。目前研究较多的黄曲霉毒素有黄曲霉毒素B₁（AFB₁）、AFB₂、AFG₁、AFG₂、AFM₁和AFM₂，黄曲霉毒素物理与化学性质稳定，加热处理很难将其破坏，是目前公认的毒性最强的致癌物之一。黄曲霉毒素不仅会造成动物营养不良及免疫力下降等问题，进入人体后还会对人体的肝脏造成极大的损害，而且原料乳中黄曲霉毒素的存在会对整个乳制品产业链造成严重的危害。因此，建立简便的、特异性好、灵敏度高的检测乳与乳制品中黄曲霉毒素的方法具有十分重要的意义。作者综述了乳与乳制品中黄曲霉毒素的检测方法进展，介绍了国内外近年来质谱法、电化学法、光谱法、色谱法、试纸条法等方法在检测乳与乳制品中黄曲霉毒素的应用，总结以上各种方法在检测乳与乳制品中黄曲霉毒素中的优势与其面临的挑战，并对今后乳与乳制品中黄曲霉毒素检测方法的发展方向进行了展望，以期为设计新的乳与乳制品中黄曲霉毒素检测方法提供思路。

【目的】探讨堆肥时添加高温期堆料对青藏高原羊粪堆肥有机成分降解及酶活性的影响。【方法】在青藏高原地区将高温期羊粪堆料添加于羊粪和油菜秸秆混合物中，以不添加高温期堆料作为对照，进行了28 d条垛式堆肥试验，通过测定堆肥过程中堆肥温度、pH、总有机碳、总氮、铵态氮、硝态氮、种子发芽指数、有机质、木质纤维素等指标以及各种酶活性来判断高温期堆料对青藏高原羊粪堆肥发酵品质的影响。【结果】添加高温期堆料可促进堆体升温，提升堆体最高温度，并延长堆体高温期6 d；堆肥结束时，与对照组相比，添加高温期堆料可显著降低堆肥中铵态氮与硝态氮比值、E₄/E₆以及碳氮比（P＜0.05）；可显著提高堆肥种子发芽指数（P＜0.05）；可显著提高有机质、半纤维素、纤维素和木质素降解率（P＜0.05）；并可显著提升堆肥过程中蛋白质酶、脲酶、蔗糖酶、纤维素酶、β-葡萄糖苷酶、过氧化物酶及多酚氧化酶活性（P＜0.05）。【结论】高温期堆料可促进青藏高原羊粪堆肥有机成分降解，提升堆肥产品腐熟度及提升堆肥过程中多种酶的活性。