饲料纤维在反刍动物日粮中不仅具有化学成分的重要性,且纤维的物理性状(颗粒大小)还能够影响咀嚼活动、瘤胃发酵、乳脂肪含量及机体健康状况。作者就表征纤维的化学和物理性状的指标——物理有效中性洗涤纤维的定义、内涵、计算方法及对反刍动物进食行为、瘤胃发酵、营养物质消化率和泌乳性能等方面的营养调控功能进行了综述。

本试验研究了玉米—豆粕型日粮中添加高剂量不同水平的植酸酶对0~3和3~6周肉鸡生长性能和血清生化指标的影响。选用1日龄AA肉公雏576只,随机分为6组,每组8个重复,每个重复12只。试验日粮分0~3和3~6周两个阶段,6个处理组分别为:正对照组(前期总磷0.69%,0.45% NPP;后期总磷0.59%,0.35% NPP);负对照组(前期总磷0.60%,0.35% NPP;后期总磷0.49%,0.25% NPP);4个试验组在负对照日粮中分别添加500、2000、8000和32000 FTU/kg 4种水平的植酸酶。结果显示,①日粮添加植酸酶水平显著影响前期(1~21日龄)平均日增重(P＜0.05),对采食量和饲料转化效率(F∶G)影响差异不显著(P＞0.05)。②日粮添加植酸酶水平对后期(22~42日龄)平均日增重和饲料转化效率(F∶G)影响差异显著(P＜0.05),添加植酸酶水平对采食量影响差异不显著(P＞0.05)。③在低磷日粮中添加高水平植酸酶8000 FTU/kg时,饲料转化效率最高。④随着植酸酶水平增加,21日龄肉鸡血清钙水平有降低趋势,血清磷水平显著增加(P＜0.05),血清碱性磷酸酶活性显著降低(P＜0.05),对总蛋白影响差异不显著(P＞0.05)。植酸酶添加水平影响42日龄肉鸡血清钙水平、总蛋白水平和血清碱性磷酸酶活性,对血清磷水平影响显著(P＜0.05)。因此,在低磷日粮中添加高剂量不同水平的植酸酶肉鸡的生长性显著增加,碱性磷酸酶的活性显著降低,添加8000 FTU/kg效果优于500、2000和32000 FTU/kg。

试验旨在研究精料与白酒糟的不同比例对夏季肉牛生产性能及血液生化指标的影响。试验采用单因子设计,选用年龄、体重(345 kg±22 kg)相近、健康无病的西门塔尔杂交牛(西门塔尔×本地黄牛)24头,随机分成4组,饲喂不同日粮(精料与白酒糟的干物质比例分别为1∶1、1∶1.5、1∶2.5、1∶3.5;青干草饲喂量各处理均相同)。结果表明,试验全期舍内温湿度指数最低为72.18,供试验牛处于高湿热应激环境;试验中随着白酒糟饲喂比例的增加,干物质总采食量增加(P＜0.05);精料与白酒糟比例为1∶1.5时,日增重相对最高(P>0.05),比1∶1组提高了11.25%,比1∶2.5组和1∶3.5组提高了12.66%;1∶1.5处理组增重效益也最高(P>0.05),比最低组(1∶1组)提高了40.64%,血清中总蛋白、白蛋白含量以1∶1.5组最高(P＜0.05),其余血液生化指标各处理无显著影响(P>0.05)。综上所述,夏季热应激条件下肥育肉牛,精料与白酒糟的干物质比例以1∶1.5为适宜比例,能改善机体蛋白质代谢水平,提高生长速度;白酒糟饲喂比例过高时,反而降低架子牛育肥中的增重效益。

高铜日粮在养猪生产中应用普遍,近些年来对于其危害的报道也比比皆是,氨基酸铜(主要包括复合氨基酸螯合铜、蛋氨酸铜、赖氨酸铜、甘氨酸铜)作为一种有机铜源,其生物利用率高、毒副作用小等特点已经受到国内外越来越多的学者的关注,并进行了大量的试验研究。作者主要综述了氨基酸铜的理化特性,生物学功能及作为一种无机铜的替代产品在养猪生产中的研究与应用。

为了测定日粮不同纤维水平和品种对猪营养成分表观消化率的影响,试验选用8头4月龄猪,采用4×4拉丁方设计进行试验。4种试验日粮按等能等氮设计,日粮Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ粗纤维水平分别为3%、6%、9%和12%(干物质基础),4个品种分别为莱芜猪(100%)、大莱猪(50%)、大大莱猪(25%)、大约克猪(0%)。在本试验条件下,日粮纤维在较低的范围内(3%~6%)粗蛋白质(CP)消化率随粗纤维含量的增加而提高,赖氨酸、蛋氨酸表观消化率差异不显著,CP在粗纤维含量6%时,消化率最高达到86.90%。不同品种猪对干物质、Ca、P的消化率影响极显著(P＜0.01),但莱芜猪和大约克猪对干物质、CP消化率的影响差异不显著,莱芜猪对NDF的消化率为51.44%,大约克猪为43.51%,两者之间差异极显著(P＜0.01)。NDF和ADF的表观消化率随猪血统中莱芜猪血比例的降低而显著降低,NDF在小肠中已得到有效的分解,本试验结果证实莱芜黑猪具有耐粗饲的特性。不同品种猪对必需氨基酸(EAA)的表观消化率除赖氨酸、苏氨酸、异亮氨酸外影响均不显著。

本研究的目的是优化棉粕源生物蛋白质饲料底物微量元素的添加量。试验采用5因子6水平均匀设计(uniform design)法,通过测定发酵产物中游离棉酚(free gossypol,FG)含量和活性酵母菌数,优化热带假丝酵母(Candida tropicalis ZD-3)和酿酒酵母(Saccharomyces cerevisiae ZD-5)对棉粕源基础底物复合发酵的底物微量元素的添加量。应用DPS v7.05 统计软件分析试验数据,建立回归模型,获得优化结果。底物微量元素添加量的优化结果为硫酸亚铁540 mg/kg,硫酸铜4 mg/kg,硫酸锰180 mg/kg,硫酸锌15 mg/kg,亚硒酸钠0 mg/kg。

选用7日龄海兰褐蛋用公雏鸡180只,随机分成3组(对照组,试验Ⅰ组、试验Ⅱ组),每组设3个重复,每重复20只雏鸡。对照组饲喂基础日粮,试验Ⅰ、Ⅱ组在基础日粮中分别添加2.5%和5%的酵母培养物,试验期6周,研究酵母培养物对雏鸡生长性能、免疫器官发育和血清相关激素的影响。结果表明,①在日粮中添加酵母培养物可以提高蛋雏鸡的平均日增重(P＜0.05),降低料重比(P＜0.05),并提高成活率(P＞0.05);②酵母培养物能够促进蛋雏鸡免疫器官的发育,提高其器官指数(P＜0.05)。③血清激素含量测定结果表明,添加酵母培养物组鸡血清中三碘甲状腺原氨酸(T3)、甲状腺激素(T4)水平显著提高(P＜0.05),皮质醇(COR)含量显著降低(P＜0.05),生长激素(GH)含量有所升高(P＞0.05)。

硒(Se)是动物机体必需的微量元素,在机体抗氧化体系、免疫细胞功能、促生长及精子的形成和游动、前列腺素的功能等方面起着重要作用。动物体内已知存在35种以上的含硒蛋白质,其中谷胱甘肽过氧化物酶(GPx1-GPx6)和硫氧还蛋白还原酶(TrxR1-TrxR3)在机体抗氧化体系中发挥着重要的作用。国内生产中通常应用亚硒酸钠作为补硒制剂,但亚硒酸钠在使用中存在吸收率低、过氧化作用及潜在的污染等问题。有机硒和纳米硒具有吸收率高、生物活性强、环境污染小等优点。与有机硒相比,纳米硒有更显著的低毒高效性,是已发现的毒性最低的补硒制剂。近年来,纳米硒替代有机硒、无机硒源的研究已成为热点。

大豆黄酮在反刍动物生产中的应用主要体现在能够促生长、提高泌乳量、改善乳成分,提高其营养价值、增强机体免疫力及改善山羊绒毛质量等。作者综述了大豆黄酮的提取、来源、吸收、代谢及在反刍动物生产中的应用研究现状,为大豆黄酮在反刍动物生产中应用研究提供参考依据。

藤茶黄酮是从藤茶中提取的一种天然植物添加剂,二氢杨梅素是其主要的化学成分。近年来,研究者对藤茶黄酮及二氢杨梅素在畜禽生产上的应用效果进行了广泛研究,发现以其作为饲料添加剂,能有效提高动物机体免疫力,增强生产性能、促进生长,并具有抗氧化作用,可改善动物产品品质。作者主要阐述了藤茶黄酮作为一种新型天然饲料添加剂在动物生产上的研究进展。

本试验采用2(ME:14.32、14.64 MJ/kg)×3(CP:38%、34%、32%)因子水平交叉设计方案,在育成期水貂的营养水平研究中,不同能量、蛋白质水平对水貂干物质采食量有显著影响(P＜0.05)。雄貂和雌貂的处理Ⅳ组(CP:38%,ME:14.64 MJ/kg),在添加20％的新鲜海杂鱼基础上,日增重最高,雄性水貂平均日增重量达到22.11 g/d,雌性水貂平均日增重8.15 g/d。

研究不同脉冲频率GnRH对GTH细胞分泌LH的影响。利用细胞体外培养技术结合荧光定量PCR技术,对体外培养的大鼠原代垂体细胞在不同脉冲频率GnRH刺激下,细胞LHβ mRNA的变化进行了研究。在相同振幅条件下,高频刺激(30 min间隔)时,LHβ mRNA表达水平达到高峰。结果表明,高频脉冲主要引起LH的表达,支持了GnRH脉冲频率本身就是一个调控信号的假说。

对未性成熟的雌性小鼠注射孕马血清促性腺激素和人绒毛膜促性腺激素,在适当的时间摘取小鼠卵巢进行卵巢黄体细胞的体外培养,培养用液为含10%血清的DMEM和含10%血清的RPMI 1640。结果发现,用前者培养的细胞在形态、规则程度和数量上都优于后者,为小鼠黄体细胞体外培养液的选择和进一步研究提供了参考。

以实验室分离保存的6株芽孢杆菌为材料,对其主要生物学特性进行了研究,包括产酶活力,对NaCl、牛胆盐、人工胃液和人工肠液的耐受性及对抗生素的敏感性。结果显示,枯草芽孢杆菌1、凝结芽孢杆菌和蜡样芽孢杆菌均能产生较高活性的中性蛋白酶和淀粉酶;2株枯草芽孢杆菌和凝结芽孢杆菌能耐较高浓度的NaCl;枯草芽孢杆菌2、凝结、纳豆和蜡样芽孢杆菌对牛胆盐的耐受性较强;除地衣芽孢杆菌外,其他5株芽孢杆菌对胃液和肠液的耐受性较好;6株芽孢杆菌均对常用饲用抗生素敏感。结果表明,枯草1、凝结、蜡样芽孢杆菌是优良的候选益生菌菌株。

为研究促性腺激素受体(FSHR、LHR)在广西雌性水牛生殖器官中的分布情况,运用免疫组化SABC法对处于不同发情周期(卵泡期、黄体期)成年水牛的卵巢、子宫、输卵管中FSHR、LHR分别进行染色定位。结果表明,FSHR/LHR阳性细胞在卵巢主要见于卵巢内膜细胞及卵泡颗粒细胞;子宫主要见于子宫内膜上皮细胞和腺体细胞;输卵管主要见于柱状上皮纤毛细胞。其中,随着发情周期不同,FSHR、LHR的表达量也有所差异,卵巢中卵泡期FSHR、LHR的表达量均高于黄体期;子宫中FSHR的表达量卵泡期高于黄体期,LHR的表达量黄体期高于卵泡期;而输卵管并没有显著差异。

为了探讨麻醉药对正常家兔心电图、呼吸率和血压的影响,将5~6月龄的家兔20只随机分成4组,分别为正常对照组、水合氯醛组、速眠新Ⅱ组、二甲苯胺噻唑组。采用RM6240BD多通道生理信号采集处理系统,测定家兔动脉血压、呼吸率,Ⅱ导联家兔心电图(electrocardiograph,ECG)波形和心率(heart rate,HR)变化。结果显示,ECG各波形变化均比较恒定,仅动作电位在传导过程中各段时间变化存在差异;注射不同的麻醉药后,水合氯醛使家兔HR加快,而注射速眠新Ⅱ及二甲苯胺噻唑后则使HR明显减慢,尤其是二甲苯胺噻唑对HR的影响较大;呼吸率(respiration rate,RR)的变化,3种麻醉药均比正常组高,而二甲苯胺噻唑组最高;血压变化,动脉收缩压(systolic blood pressure,SBP):二甲苯胺噻唑＞水合氯醛＞速眠新Ⅱ,且均低于正常水平;动脉舒张压(diastolic blood pressure,DBP):水合氯醛＞二甲苯胺噻唑＞速眠新Ⅱ,但水合氯醛组与二甲苯胺噻唑组差异不显著(P＞0.05)。家兔正常状态下,其心电图、心率、呼吸频率和血压的变化与有关文献存在差异,有必要正确掌握其变动范围。

用纯化的猪繁殖与呼吸系统综合征病毒(PRRSV)免疫Balb/c小鼠,应用淋巴细胞杂交瘤技术,使脾细胞与SP2/0骨髓瘤细胞融合,经间接ELISA 筛选,4次有限稀释法克隆,得到1株能稳定分泌抗猪繁殖与呼吸障碍综合征病毒单克隆抗体的杂交瘤细胞株(3D₆),经鉴定,该单抗为IgG2a亚类,杂交瘤细胞的平均染色体数目为99条,杂交瘤细胞培养上清及小鼠腹水单克隆抗体的ELISA效价分别为1∶512和1∶20480。这株单克隆抗体与伪狂犬病毒、猪丹毒、猪细小病毒均不发生交叉反应,显示出良好的特异性。连续培养20代后能稳定分泌抗体,此单克隆抗体的获得为PRRSV的研究及快速诊断方法的建立奠定了基础。

设计及合成细菌素Bacteriocin E50-52(H)基因,克隆到组成型分泌表达质粒pGAPZαA中构建重组质粒pGAPZα-Bacteriocin E(H),经PCR、测序验证正确后,电转化整合到毕赤酵母基因组,基因组PCR、测序验证结果表明成功构建了细菌素组成型重组表达载体,为在毕赤酵母中表达奠定了基础。

从疑似感染H9亚型禽流感病毒的病鸡内脏组织中分离到1株能凝集鸡红细胞的病毒,通过血凝抑制试验、鸡胚中和试验、RT-PCR鉴定,确认其为H9亚型禽流感病毒,并命名为CH02株。该病毒HA效价为2^7.67±0.58;其血凝性可被抗H9亚型禽流感病毒阳性血清完全抑制,HI效价为7log2;鸡胚半数感染量(EID₅₀)为10^-8.68 EID₅₀/0.1 mL;最小致死剂量致鸡胚死亡的平均时间(MDT)为85.6 h;1日龄鸡脑内致病指数(ICPI)为0.625;其NS基因与香港株、南京株、北京株、汕头株、韩国株、巴基斯坦株的核苷酸同源性为88.6%~100%,经进化分析CH02株与香港株(A/duck/Hong Kong/Y280/97)同属一个分支。

本试验旨在建立特异检测牛奶蛋白质含量的ELISA方法。利用提纯酪蛋白免疫试验动物,获得针对酪蛋白的多克隆抗体;利用棋盘格试验确定抗原抗体的最佳作用浓度,并优化各步骤反应条件;根据标准样品建立牛奶中蛋白质含量的定量ELISA检测方法,并对该方法的特异性、敏感性、检测范围及重复性进行评价。通过试验确定封闭液为1% BSA,37 ℃孵育120 min;血清抗体工作浓度为1∶12000稀释,37 ℃孵育90 min;酶标二抗最适浓度为1∶3000稀释,37 ℃孵育30 min。牛奶酪蛋白检出范围为0.063~0.500 μg/mL;该方法具有良好的特异性、敏感性、重复性,回归率范围为97.6%~123%。成功建立了牛奶蛋白含量的定量ELISA检测方法。

试验分别从pH、温度、菌体密度、IPTG浓度、诱导时间等条件对β2m在pMAL-p2X的表达进行优化,表达蛋白经过Amylose树脂柱进行纯化。结果发现,β2m在pMAL-p2X的最佳表达条件为:pH=7.5、T(温度)=37 ℃、D_{600 nm}=0.3、IPTG=0.5 mmol/L和t(诱导时间)=5 h;在最佳表达条件下β2m的相对表达含量可达到45%;纯化后的融合蛋白纯度达到90%以上。

试验利用PCR技术扩增并获得了人IL-3、GM-CSF和人溶菌酶(human lysozyme,Hly)基因组基因编码区序列,人IL-3和GM-CSF基因PCR产物与pMD19-T连接,Hly基因PCR产物同pEASY-Blunt载体连接,转化大肠杆菌JM109感受态细胞,蓝白斑筛选后经PCR及酶切鉴定,选取测序正确的克隆连接到pIRESneo载体中构建相关真核表达载体,分别用这些基因的表达载体转染PK15细胞,48 h后提取转染细胞的总RNA,并采用RT-PCR方法获得了人IL-3、GM-CSF和Hly基因的cDNA,结果发现,所获得的cDNA序列同NCBI登录的序列完全同源。

为获得转Mx1基因的阳性陆川猪成纤维细胞,本研究以干扰素诱导猪成纤维细胞Mx1基因表达,提取细胞总RNA,RT-PCR获得编码猪Mx1蛋白的cDNA;以pMSCV-IRES-GFP为骨架构建猪Mx1基因表达载体pMSCV-IRES-GFP-Mx1,并利用脂质体2000介导重组质粒转染陆川猪胎儿成纤维细胞,通过荧光观察和PCR检测分析结果表明Mx1蛋白基因整合进入陆川猪胎儿成纤维细胞。

肝素结合性表皮生长因子(hepafin-binding epidermal growth factor-like,HB-EGF)是表皮生长因子(epidermal growth factor,EGF)家族的成员之一。本研究采用Real-time PCR分析了在民猪冷诱导后该基因在骨骼肌内的表达变化情况。结果表明,低温组(－20 ℃)的HB-EGF基因的表达水平与常温组(10 ℃)相比出现了极显著下降(P＜0.01)。据此推测,冷应激抑制了HB-EGF基因的表达,也间接抑制了民猪的正常生长。

通过不同方式处理猪外周血淋巴细胞,对不同保存时间的淋巴细胞进行流式细胞术检测,探讨其对T淋巴细胞亚群中CD3^＋、CD4^＋、CD8^＋亚群的影响。采用肝素钠、EDTA、枸橼酸钠3种抗凝剂抗凝猪外周静脉血,分别在第1、2、4、6、8、10天用流式细胞仪检测。结果表明,肝素钠抗凝,第1、2、4天内检测差异不显著(P＞0.05),第6天检测CD4^＋、CD8^＋细胞显著减少(P＜0.05),第8、10天极显著减少(P＜0.01)。EDTA抗凝,第1、2、4天内检测差异不显著(P＞0.05),第6天检测CD3^＋细胞显著减少(P＜0.05),第8、10天极显著减少(P＜0.01);枸橼酸钠抗凝,第1、2、4、6、8天内检测差异不显著(P＞0.05),第10天检测CD3^＋、CD4^＋细胞极显著减少(P＜0.01),CD8^＋细胞显著减少(P＜0.05)。3种抗凝剂检测比较,处理后的第1、2、4、6天肝素钠抗凝管检测结果CD3^＋、CD4^＋、CD8^＋均高于EDTA和枸橼酸钠抗凝。本研究表明,流式细胞术检测猪外周血优选肝素钠抗凝,样本采集后4 d内检测完毕。

本研究按照牛轮状病毒(BRV)结构蛋白VP6基因序列,设计合成引物和探针,经各反应条件的优化,建立了BRV TaqMan实时荧光定量RT-PCR技术。对BRV进行了特异性、敏感性和重复性试验。结果表明,TaqMan实时荧光RT-PCR最低可检测到100个拷贝病毒RNA;与牛病毒性腹泻病毒(BVD)、猪瘟病毒(CSFV)、牛结核杆菌(MB)和牛传染性鼻气管炎病毒(IBRV)不发生交叉反应;所制作的标准曲线在10²~10⁹拷贝/μL浓度范围内有极好的线性关系且线性范围宽,相关系数为0.997;与常规的RT-PCR相比,该方法具有快速、特异、敏感、重复性好、可同时检测大量样品等优点。可对样品中微量BRV进行准确检测,对BRV的诊断有重要意义。

为建立一种快捷、灵敏的牛附红细胞体检测方法,本研究根据GenBank上发表的16S rRNA基因(登录号:AF016546)序列设计合成2对LAMP特异引物,建立了检测牛附红细胞体环介导等温扩增(LAMP)方法,并优化了LAMP的各反应条件,进行了敏感性和特异性试验。LAMP扩增产物经电泳、显色鉴定。结果显示,LAMP方法扩增牛附红细胞体产物呈特征性梯状条带,显色反应呈现绿色荧光;敏感性检测最低浓度为25.6 fg/μL;特异性试验结果显示,牛附红细胞体检测管显色后呈阳性,而猪附红细胞体、牛新孢子虫、弓形虫及牛瑟氏泰勒虫等对照组均呈阴性,说明本研究建立的LAMP方法具有灵敏、特异、快速等优点,适合于牛附红细胞体的检测。

本研究旨在分析长沙市四棘食道口线虫分离株线粒体细胞色素c氧化酶第Ⅰ亚基(cox1)基因部分序列(pcox1)的遗传变异情况。应用聚合酶链反应(PCR)扩增四棘食道口线虫虫株的pcox1,应用Clustal X 1.83程序对序列进行比对,同时利用DNAStar 5.0中的MegAlign程序进行同源性分析,并与GenBank^TM中已知四棘食道口线虫相应基因序列进行比较分析。所得pcox1序列长度一致,均为393 bp,与GenBank公布的线虫相关序列进行比较分析结果表明,各个分离株与已知四棘食道口线虫相应基因的相似性分别在98%以上,与其它科线虫的相似性均小于91%。四棘食道口线虫pcox1序列种内相对保守,种间差异明显。本研究为进一步研究四棘食道口线虫的群体遗传学奠定了基础。

根据GenBank发表的牛γ-干扰素基因设计1对特异性引物,从牛脾脏淋巴细胞提取基因组总RNA,采用反转录―聚合酶链式反应(reverse transcriptase-PCR,RT-PCR)技术扩增出IFN-γ基因,与pMD18-T载体连接后进行酶切、PCR鉴定及序列测定和分析,并将其连接到pQE-30原核表达载体中,命名为pQE30-IFN-γ,转化到大肠杆菌x-LI Blue感受态细胞,IPTG(1.0 mmol/L)37 ℃诱导表达。结果显示,对重组质粒进行PCR鉴定,扩增到510 bp片段,重组蛋白大小为22 ku,与预期大小相符;Western blotting分析结果表明,重组蛋白能与抗His-tag单克隆抗体反应,为下一步研究干扰素的功能奠定了基础。

为构建牛分支杆菌ag85b基因的重组表达质粒pET-32a-ag85b,采用聚合酶链反应(PCR)从牛分支杆菌AF2122/97基因组DNA中扩增出ag85b基因(978 bp),然后对扩增产物和载体pET-32a以核酸内切酶EcoR Ⅰ及Sal Ⅰ分别进行双酶切;将两种酶切产物以T4 DNA Ligase连接,将靶基因克隆入载体pET-32a,构建重组质粒。将此重组质粒转化入大肠杆菌DH5α,抽提重组质粒首先经EcoR Ⅰ及Sal Ⅰ双酶切检验,再进行PCR扩增鉴定,最后测序鉴定。酶切片段及PCR扩增片段大小均与预期相符,测序结果与GenBank登录序列完全相同。结果表明,成功地克隆并构建了ag85b基因重组表达质粒pET-32a-ag85b。

在制备三聚氰胺单克隆抗体的基础上建立了一种用于检测牛奶中三聚氰胺含量的间接竞争酶联免疫检测方法,采用一步法操作,评估了方法的回收率、准确度、精密度和特异性,并利用液相色谱―串联质谱法进行了盲样确证试验。结果显示,该方法的线性检测范围为10~810 ng/mL,灵敏度为10 ng/mL,回收率为84.0%~90.0%,同类似物交叉反应率均小于0.1%。本试验建立的ELISA一步法能满足牛奶中三聚氰胺的检测要求。

本研究比较了丙酮沉淀法制备蛋白质不同上样量对绵羊精浆蛋白质二维电泳图谱的影响。结果显示,精浆总蛋白经SDS-PAGE电泳,得到分子质量在14.4~116 ku的28条蛋白质条带。二维电泳图经PDQuest 8.0分析,上样量为0.8、1.0、1.2 mg时检测出的蛋白质点分别为207±10、281±13和374±16个,分子质量基本分布在20~80 ku、等电点为4~9的区域内,随着上样量的增加,分子质量在20~80 ku的蛋白质点明显增多,但每个分子质量区间的蛋白质点所占的比率较为恒定。研究结果表明,采丙酮沉淀制备精浆蛋白结合合适的上样量能够建立绵羊精浆全蛋白质图谱,为进一步研究绵羊精浆蛋白质组学奠定基础。

本试验利用内蒙古白绒山羊5个家系中的632个个体,用11号染色体上的7个微卫星标记,构建绒山羊11号染色体遗传连锁图。结果表明,7个标记的等位基因数变化范围为8~14,杂合度在0.5886~0.9348之间,平均杂合度为0.8612,各标记的多态信息含量在0.7712~0.8990之间,平均多态信息含量为0.8472。构建的遗传连锁图总长度127.7 cM,其中标记ILSTS028与INRA108间距最大,为41.2 cM;ILSTS049和INRA131间距最小,为5.1 cM。

采用PCR-RFLP方法对4个不同品种家兔MHC-DQA基因外显子2的遗传多态性进行检测,并进行聚类分析。结果表明,在家兔MHC-DQA基因外显子2的第103 bp处表现出多态性;χ²适合性检验结果表明,Mbo Ⅱ酶切位点在齐卡大型新西兰白兔和齐卡巨型白兔群体均没有达到Hardy-Weinberg平衡状态(P＜0.05),而在齐兴肉兔和加利福尼亚兔群体均达到Hardy-Weinberg平衡状态(P＞0.05);聚类分析结果表明,齐卡大型新西兰白兔与齐卡巨型白兔亲缘关系最近。试验结果为进一步利用MHC进行抗病育种提供了分子生物学基础。

将试验小白鼠随机分为6组,对照组(0.15 mg/kg)、缺硒组(0.01 mg/kg)、低硒组(0.16 mg/kg)、中硒组(0.31 mg/kg)和高硒组(0.61 mg/kg),试验鼠自由采食。待成功建立缺硒及各剂量组动物模型后,测定试验鼠肝脏谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)活性和雄性小鼠繁殖性能的指标(精液品质—畸形率、顶体反应、渗透性)。试验结果显示,在第9周末成功建立缺硒动物模型;补硒各组的生殖脏器指数与对照组间无显著差异,但与缺硒组差异显著或极显著;缺硒组精子活力仅23.1%±2.3%,精子畸形率达57.9%±0.3%,顶体完整率仅47.0%±6.3%,低渗膨胀率为43.8%±2.1%,产仔率为0,均与其它各组差异极显著;补硒组精子活力和活率均有加强,且除低渗膨胀率外,其它繁殖指标均与对照组差异显著或极显著。缺硒导致雄性小鼠生长受阻及繁殖性能降低,含硒化合物,尤其是有机硒化合物有增强繁殖性能的作用,且安全剂量范围内的高剂量组的促进作用更为明显。

本试验研究了不同FSH来源、羔羊日龄、不同诱导方法对细胞质量及卵母细胞成熟时间对卵裂率的影响,以及不同激素诱导卵母细胞的IVF效果和卵母细胞级别对体外发育效果的影响。结果表明,用加拿大产FSH对羔羊进行处理,与宁波所产FSH相比获得卵母细胞数差异不显著,但是加拿大超排后回收的卵母细胞可用率及卵裂率都高于国产激素;卵母细胞成熟培养26~30 h效果较好,不同级别卵母细胞体外发育效果差异不显著。

徒手克隆是近年发展起来的一种手工化的核移植技术。本试验探讨了不同的去核方法、融合方法和供体细胞类型对水牛HMC效率的影响。试验结果表明,CB处理法去核与荧光染色法去核相比,去核效率及之后的重组胚发育能力均无显著差异(P＞0.05);一步法的融合率极显著高于两步法(P＜0.01),而两种方法构建的重组胚发育能力则无显著差异(P＞0.05);利用卵丘细胞所构建的HMC胚胎的融合率极显著高于耳皮肤成纤维细胞(P＜0.01),但重组胚的发育效果差异不显著(P＞0.05)。说明利用卵丘细胞作为HMC的供体细胞,采用CB处理法去核和一步融合的方法进行徒手克隆,其生产核移植胚胎效果较好。

雌激素是一种在较高等动物和人体内存在的内源性雌性激素,雌激素主要有雌二醇、雌三醇和雌酚等。雌激素对雌性哺乳动物生殖发育及泌乳能力的影响已经成为近年来的研究热点之一。作者对雌激素及其受体对雌性哺乳动物乳腺上皮细胞的作用作一简要综述。

试验旨在研究Leptin和SCD1基因多态性对天祝白牦牛肌肉脂肪酸含量的影响。通过对PCR产物直接测序,在Leptin基因外显子2和3共发现7个SNPs位点(其中4个是错义突变);在SCD1基因第5外显子区发现1个SNP位点(错义突变),对所有SNPs等位基因替代效应对25种单一脂肪酸、单一不饱和度指数、多不饱和度指数和去饱和效应指数的影响进行了检测。结果发现,SCD1基因SNP和Leptin基因3个SNPs位点在不同程度上影响到由饱和脂肪酸FA到单一不饱和脂肪酸MUFA的去饱和作用。说明除了SCD1基因对FA去饱和作用的影响外,Leptin基因错义突变也会对肌肉脂肪中FA的组成产生影响。

对119只萨福克肉羊进行超排处理,其中48只为首次超排处理,71只为第二次超排处理。结果表明,首次超排胚胎回收率显著高于二次超排胚胎回收率(P＜0.05);首次超排和二次超排间供体羊平均黄体数、胚胎可用率均差异不显著(P＞0.05);供体羊经第二情期或埋栓同期发情处理后均能达到预期的效果,但首次超排和二次超排供体羊胚胎回收率均差异显著(P＜0.05)。

根据牙釉质(amelogenin,AMEL)同源基因在山羊X、Y染色体上存在不同程度碱基缺失的特点,设计1对引物,对山羊血液基因组DNA混合样进行PCR扩增,将PCR产物纯化、克隆并测序;然后对46个山羊血液DNA样本(♀:22个,♂:24个)进行性别鉴定。结果显示,雌性山羊样品经扩增只产生一条非特异性条带,雄性山羊样品产生一条非特异性条带和一条特异性条带;非特异性片段长度为349 bp,特异性片段为289 bp;46个山羊血液DNA样本鉴定结果与实际性别对比,雌性准确率为100%(22/22),雄性准确率为100%(24/24)。

传染性海绵状脑病(transmissible spongiform encephalopathies,TSEs)是由朊病毒引起的人和多种哺乳动物以神经退行性变化为主要特征的一种慢性消耗性传染病,也称作朊病毒病;其是由体内正常细胞表面的PrP^C转变成PrP^Sc蛋白所导致。但PrP^Sc主要在脑内表达,在其他组织表达量很低,因此快捷准确的诊断方法对于该病有重要意义。作者重点介绍以朊病毒的致病特点为依据建立的检测方法,便于对该疾病的早期诊断、预防以及食品安全检测提供帮助,保障畜牧业的有序发展以及人类的健康。

免疫活性肽是源于蛋白质的多功能化合物,具有促进和调节免疫功能的作用;其以活性高、来源广、稳定性强等优点受到国内外的广泛关注,并进行了大量的探究与试验。作者对不同来源的各种活性肽作一概述。

本研究以氯羟吡啶原药为基础,合成了带羧基的氯羟吡啶衍生物,经质谱鉴定结构正确,并用活性酯法和氯甲酸异丁酯法合成抗原,紫外测定偶联比率和最终抗原蛋白浓度,免疫制备抗血清并测定血清特异性和灵敏度,为建立氯羟吡啶酶联免疫法(ELISA)奠定坚实基础。

无菌采集病死红腹锦鸡肝脏、脾脏和心血,接种多种培养基分离细菌。以生化试验和小鼠攻毒试验,鉴定分离细菌及其致病性。采用PCR方法扩增分离细菌16S rRNA,测定核苷酸序列,与GenBank中大肠杆菌相应基因序列进行分析比较,绘制系统进化树。结果表明,分离细菌为大肠杆菌,可以致小鼠死亡。其16S rRNA基因序列与GenBank登录的大肠杆菌相应基因同源性超过99%。由此证明,该红腹锦鸡死于大肠杆菌病。

弓形虫已对世界范围水源造成潜在威胁,水源性弓形虫病曾在发展中国家和一些发达国家暴发,造成了巨大的经济损失。人和动物感染水源性弓形虫病主要是由于食用含有活组织包囊的生肉或者摄入含有卵囊污染的食物或水而引起的,卵囊感染比组织包囊感染所引起的临床症状更加严重,弓形虫卵囊能够通过多种途径污染水源,传播疾病,对人和动物的健康和水资源的安全卫生造成了威胁。作者就近年来水源性弓形虫病的研究进展作一综述。

为了评价建立的口蹄疫固相竞争酶联免疫吸附试验(solid phase competition ELISA,SPC-ELISA)方法与传统的中和试验(VNT)和液相阻断酶联免疫吸附试验(liquid phase block ELISA,LPB-ELISA)检测方法之间的关系,本研究对野外采集的不同种类的猪、牛和牦牛共94份血清样品分别进行O型口蹄疫病毒SPC-ELISA、LPB-ELISA和VNT检测,并分别比较3种方法的符合率和阳性检出率。结果表明,建立的O型口蹄疫病毒SPC-ELISA方法与VNT 具有很好的符合率,达88.3%,其中,猪和牦牛血清符合率高达90%和89.5%,阳性检出率为91.2%比LPB-ELISA更符合VNT,因此建立的SPC-ELISA方法比LPB-ELISA方法更符合VNT。

为获得纯度较高,能进行动物免疫试验的DNA疫苗,在高密度发酵工程菌的基础上,通过传统的碱裂解,获得粗提的质粒;用氯化钙去除裂解液中的大部分RNA,并用Sartobran P囊式过滤器获得了澄清的溶液。用聚乙二醇法沉淀超螺旋质粒DNA,去除大部分菌体蛋白和宿主DNA。最后用source 30Q阴离子交换色谱填料去除几乎全部的内毒素并浓缩了质粒。本试验纯化的DNA疫苗经质量检验达到了转染动物的要求。该工艺实现了一步色谱纯化DNA疫苗的目的,具有工艺简单、快速的优点。

从疑似刚果嗜皮菌感染的盘羊皮肤病料中分离刚果嗜皮菌,并进行鉴定。将皮肤病料于28 ℃风干、粉碎,加无菌水浸泡15 d,静置,取上清加6%酵母膏液,60 ℃条件下30 min,混匀后连续10倍倍比稀释涂板,37 ℃培养48 h后挑取可疑菌落进行细菌形态学、培养特性、间接免疫酶标染色法鉴定,并根据GenBank上发表的刚果嗜皮菌16S rRNA序列设计特异性引物对分离株进行PCR扩增,得到与预期相符的606 bp基因片段,结果证实该盘羊分离株为刚果嗜皮菌。

犬瘟热病毒是一种引起犬类、毛皮动物、野生动物和部分海洋哺乳动物发生多系统感染的病毒性传染病。犬瘟热的宿主范围和组织嗜性主要由其感染动物的细胞表面受体决定。目前,已经确认的犬瘟热受体有信号淋巴细胞激活因子。为了更好地对犬瘟热病毒的受体进行研究,就当前犬瘟热病毒的受体研究进行综述。

本试验通过细菌检测、生化试验、血清型鉴定、动物回归试验等对长春市某猪场送检疑似细菌感染的病死猪进行系统地分析,初步判定为猪丹毒杆菌致死。药敏试验分析结果表明,该菌株仅对青霉素、红霉素、呋喃唑酮、呋喃妥因4种药物敏感,对大多数抗菌药物高度耐药。经电镜负染观察及传代细胞系进行病毒分离,结果均为阴性。

猪增生性肠炎是由胞内劳森氏菌引起的一种肠道传染病,临床表现以慢性型及亚临床型为主。猪增生性肠炎易造成猪饲料转化率低,生长速度慢。猪增生性肠炎在全球猪场流行,其发病率呈上升趋势,造成了重大经济损失。目前,国内对该病的研究较薄弱,应引起足够的重视。作者综述了猪增生性肠炎的诊断技术研究进展。

微线体蛋白(microneme protein,MIC)是由位于弓形虫前端的微线体(microneme)分泌产生的,具有识别、黏附与侵染宿主细胞的性质。近年来研究结果证明,弓形虫的多种微线体蛋白在侵染宿主的过程中发挥重要作用,并且可以作为抗弓形虫病的疫苗候选分子。作者对目前研究较多的弓形虫微线体蛋白进行综述,为弓形虫疫苗的研究提供理论依据。

从江苏省某市菜市场采集商品规格(体重0.5~0.6 kg)的鲤鱼(Cyprinus carpio),利用SS选择培养基分离纯化获得107株肠道细菌,对其中2个典型菌株(编号CS-1、CS-2)进行细菌形态学观察、生化试验及药敏试验等研究。结果表明,CS-1、CS-2菌株均为革兰氏阴性小杆菌,均能利用葡萄糖产气,MR试验阳性、氧化酶和VP试验阴性;其中CS-1菌株吲哚产生阴性,硫化氢、半固体试验阳性;CS-2菌株则相反,初步鉴定CS-1为沙门氏菌,CS-2为志贺氏菌。药敏试验结果显示,CS-1、CS-2两菌株对先锋必素、先锋霉素Ⅳ、头孢孟多、头孢噻吩、呋喃妥因、氧哌嗪青霉素等药物高度敏感;对氯洁霉素、洁霉素、灭滴灵、利福平、红霉素等药物不敏感。该研究对水产品食品安全检疫及鱼类疾病防治等具有重要参考价值。

空肠弯曲菌(Campylobacter jejuni)是世界范围内广泛流行的人畜共患病,在公共卫生学上具有重要意义。空肠弯曲菌可引发人和多种动物疾病,其抗原结构复杂,致病机理尚不清楚。作者通过对空肠弯曲菌可能的毒力因子及其在致病中的作用作一简要概述,为空肠弯曲菌的诊断防治提供依据。

核酶是一类具有催化活性的小RNA分子,可以特异性地识别并结合目标基因mRNA,使该mRNA断裂失活,从而阻断或降低目标基因的表达,起到基因沉默的作用。此外,核酶不会对细胞基因组产生任何副作用,因此核酶作为一种既安全又有效的分子生物学工具受到越来越多研究者的关注。核酶的这一特性可用于基因治疗,针对某些病原或肿瘤的基因设计特异性核酶,并将其导入细胞以阻断或降低这些基因在细胞内的表达,最终达到抑制病原增殖、肿瘤扩散的目的。作者就近几年核酶在人类和动物疾病治疗中的应用研究进展作一综述。

试验选用120头平均体重为(7.64±0.13) kg的杜×长×大三元杂交断奶仔猪,采用单因素试验设计。研究饲料中添加中草药白头翁散剂(150、300 mg/kg)和白头翁皂苷(12.5、25 mg/kg),对断奶仔猪生产性能的影响,且寻求最佳添加量。试验共分6个处理,每个处理4个重复,每个重复5头猪。试验期共为28 d,分为前期(1~14 d)和后期(15~28 d)2个阶段。试验结果表明,日粮中添加中草药白头翁散剂和白头翁皂苷对断奶仔猪的日增重、料重比、平均采食量及腹泻率均有显著影响(P<0.05)。

本试验采取随机分组,病理模型复制的方法,将14日龄AA肉雏鸡随机分为紫锥菊复合物组(高、中、低3个剂量)、药物对照组(中药对照组、西药对照组)、疫苗对照组、阴性对照组、健康对照组共8个组,每组30只,以验证紫锥菊复合物对鸡新城疫强度抑制效果。结果表明,紫锥菊复合物对新城疫强毒感染雏鸡具有明显的保护作用,可以用于鸡新城疫的预防和治疗。

克伦特罗已严禁用于动物生产,监控其非法使用意义重大。毛发取材容易,药物残留浓度高且稳定,国内外已有研究报道将毛发作为监控克伦特罗使用的靶器官。作者对毛发中克伦特罗的检测方法进行综述,包括对毛发样品的洗涤、提取、净化方法及检测技术的研究进展。

采用伪狂犬gB抗体ELISA检测试剂盒对一规模化猪场的4头母猪所产整窝仔猪从出生到出栏进行伪狂犬抗体跟踪监测,掌握了伪狂犬抗体的消长变化,发现仔猪断母源抗体可以维持至30 d以上,确定了仔猪伪狂犬疫苗的初免时间为35 d左右,并同时进行伪狂犬gPI抗体检测,了解了各个阶段的野毒感染情况。

作者综述了枯草芽孢杆菌的作用机制及其在家禽、猪、反刍动物、水产动物生产中的应用效果,以期为生产实践中科学合理利用枯草芽孢杆菌提供一定的理论依据。

为了解青海省民和县奶牛布鲁氏菌病的分布和流行情况,净化布鲁氏菌病,对来自12个乡镇的10308份奶牛血清采用试管凝集反应试验(SAT)进行了血清学检测,检出阳性血清23份,阳性率为0.223%,表明青海民和地区存在奶牛布鲁氏菌的感染。

作者综述了发酵床养猪工艺的起源、特点,并与传统集约化养猪工艺进行了比较,为研究和使用发酵床养猪工艺提供一些参考。

鸡舍的消毒对于鸡的养殖尤为重要,严格的消毒可以有效地消灭病原菌,保护鸡的健康,促进机体正常的新陈代谢。作者主要简述了一些常用的消毒药品、消毒方法以及消毒过程中应该注意的问题。