牛γ-干扰素基因的克隆及在大肠杆菌中的表达

›› 2011, Vol. 38 ›› Issue (4): 117-120.

牛γ-干扰素基因的克隆及在大肠杆菌中的表达

宋佰芬, 刘哲, 曹宏伟, 马金柱, 徐闯, 崔玉东, 朱战波, 黄玉兰

黑龙江八一农垦大学生命科学技术学院,黑龙江大庆 163319

收稿日期:2010-10-18 修回日期:1900-01-01 出版日期:2011-04-20 发布日期:2011-04-20
通讯作者: 崔玉东

Cloning and Expression of Bovine IFN-γ Gene in E.coli

SONG Bai-fen, LIU Zhe, CAO Hong-wei, MA Jin-zhu, XU Chuang, CUI Yu-dong, ZHU Zhan-bo, HUANG Yu-lan

College of Life Sciences and Technology,Heilongjiang Bayi Agricultural University,Daqing 163319,China

Received:2010-10-18 Revised:1900-01-01 Online:2011-04-20 Published:2011-04-20

摘要/Abstract

摘要： 根据GenBank发表的牛γ-干扰素基因设计1对特异性引物,从牛脾脏淋巴细胞提取基因组总RNA,采用反转录―聚合酶链式反应(reverse transcriptase-PCR,RT-PCR)技术扩增出IFN-γ基因,与pMD18-T载体连接后进行酶切、PCR鉴定及序列测定和分析,并将其连接到pQE-30原核表达载体中,命名为pQE30-IFN-γ,转化到大肠杆菌x-LI Blue感受态细胞,IPTG(1.0 mmol/L)37 ℃诱导表达。结果显示,对重组质粒进行PCR鉴定,扩增到510 bp片段,重组蛋白大小为22 ku,与预期大小相符;Western blotting分析结果表明,重组蛋白能与抗His-tag单克隆抗体反应,为下一步研究干扰素的功能奠定了基础。

关键词: 干扰素; 基因; 克隆; 表达

Abstract: A pair of special primers was designed according to the sequence of IFN-γ in GenBank. Total RNA was extracted from cow spleen lymphocyte,IFN-γ gene was amplified by the reverses transcription polymerase chain reaction. After linked with pMD18-T vector,it was digested by enzyme,PCR and gene sequencing were carried. And this fragment was cloned into the multiple cloning sites of pQE-30 vector. The recombinant plasmid was designated pQE30-IFN-γ and was transformed into E.coli x-LI Blue competent cells. Expression of the recombinant protein was induced by IPTG under 37 ℃ condition. The length of PCR product of recombinant plasmid was 510 bp,the size of recombinant protein was 22 ku. The results of Western blotting showed that it could be recognized by anti-His tagged mouse monoclonal antibody. These results were benefit to research for function of IFN-γ.

Key words: IFN; gene; clone; expression 

中图分类号:

宋佰芬;刘哲;曹宏伟;马金柱;徐闯;崔玉东;朱战波;黄玉兰. 牛γ-干扰素基因的克隆及在大肠杆菌中的表达[J]. , 2011, 38(4): 117-120.

SONG Bai-fen;LIU Zhe;CAO Hong-wei;MA Jin-zhu;XU Chuang;CUI Yu-dong;ZHU Zhan-bo;HUANG Yu-lan. Cloning and Expression of Bovine IFN-γ Gene in E.coli[J]. , 2011, 38(4): 117-120.

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