水牛徒手克隆的初步研究

›› 2011, Vol. 38 ›› Issue (4): 147-150.

水牛徒手克隆的初步研究

杨春艳, 庞春英, 李日聪, 郑海英, 黄芬香, 杨炳壮, 梁贤威

中国农业科学院广西水牛研究所,广西南宁 530001

收稿日期:2010-09-08 修回日期:1900-01-01 出版日期:2011-04-20 发布日期:2011-04-20
通讯作者: 梁贤威

Study on the Hand-made Cloning (HMC) in Buffalo

YANG Chun-yan, PANG Chun-ying, LI Ri-cong, ZHENG Hai-ying, HUANG Fen-xiang, YANG Bing-zhuang, LIANG Xian-wei

Guangxi Buffalo Research Institute,Chinese Academy of Agricultural Sciences,Nanning 530001,China

Received:2010-09-08 Revised:1900-01-01 Online:2011-04-20 Published:2011-04-20

摘要/Abstract

摘要： 徒手克隆是近年发展起来的一种手工化的核移植技术。本试验探讨了不同的去核方法、融合方法和供体细胞类型对水牛HMC效率的影响。试验结果表明,CB处理法去核与荧光染色法去核相比,去核效率及之后的重组胚发育能力均无显著差异(P＞0.05);一步法的融合率极显著高于两步法(P＜0.01),而两种方法构建的重组胚发育能力则无显著差异(P＞0.05);利用卵丘细胞所构建的HMC胚胎的融合率极显著高于耳皮肤成纤维细胞(P＜0.01),但重组胚的发育效果差异不显著(P＞0.05)。说明利用卵丘细胞作为HMC的供体细胞,采用CB处理法去核和一步融合的方法进行徒手克隆,其生产核移植胚胎效果较好。

关键词: 水牛; HMC; 去核; 融合; 供体细胞

Abstract: The hand-made cloning (HMC) technique describes a simplified nuclear transfer process without the need for micromanipulators. This study was conducted to investigate the effect of different enucleation,fusion methods and donor cell types on the efficiency of HMC in buffalo. The results indicated that chemically assisted enucleation with cytochalasin b (CB) showed similar enucleation efficiency to Hoechst 33342 staining enucleation;the fusion rate of one-step method was significantly higher than two-steps method(P＜0.01),while the developmental abilities of the couplets reconstructed by the two methods were no significant different from each other(P＞0.05).The fusion rate of HMC couplets derived from ear fibroblasts was significantly lower than that of couplets from cumulus cells (P＜0.01),while the cleavage and blastocyst rates of the embryos from the two cell types were not different from each other(P＞0.05). The study showed that CB assisted enucleation,one-step fusion,cumulus cells can be adopted for HMC in buffalo to improve the efficiency of cloning.

Key words: buffalo; HMC; enucleation; fusion; donor cells

中图分类号:

Q785

杨春艳;庞春英;李日聪;郑海英;黄芬香;杨炳壮;梁贤威. 水牛徒手克隆的初步研究[J]. , 2011, 38(4): 147-150.

YANG Chun-yan;PANG Chun-ying;LI Ri-cong;ZHENG Hai-ying;HUANG Fen-xiang;YANG Bing-zhuang;LIANG Xian-wei. Study on the Hand-made Cloning (HMC) in Buffalo[J]. , 2011, 38(4): 147-150.

[1]	徐媛媛, 郑海英, 杨春艳, 邓廷贤, 黄晨茜, 冯超, 陆杏蓉, 段安琴, 莫霞, 马小娅, 尚江华. 抑制BMP/Smad信号通路对水牛卵巢颗粒细胞生长和类固醇激素合成的影响[J]. 中国畜牧兽医, 2023, 50(6): 2354-2362.
[2]	肖鹏, 尚江华, 杨春艳, 李孟琪, 段安琴, 马小娅, 冯超, 黄晨茜, 张博, 周金陈, 韦科龙, 郑威, 郑海英. α-亚麻酸对水牛卵巢颗粒细胞体外培养的影响[J]. 中国畜牧兽医, 2023, 50(6): 2380-2387.
[3]	唐庆凤, 李玲, 黄加祥, 方文远, 农皓如, 唐艳, 陆呈委, 韦盘秋, 冯玲. 广西地区不同饲养模式及不同季节水牛奶霉菌毒素污染状况调查[J]. 中国畜牧兽医, 2022, 49(9): 3665-3675.
[4]	任杰, 林泠, 汤德元, 曾智勇, 王彬, 禹光美, 郑如雯, 吴道义, 黄涛. 牛病毒性腹泻病毒E0-E2基因融合腺病毒的构建及小鼠免疫效果评价[J]. 中国畜牧兽医, 2022, 49(6): 2056-2063.
[5]	侯伟. 噬菌体展示系统的构建及其在疾病防控领域应用研究进展[J]. 中国畜牧兽医, 2022, 49(5): 1688-1696.
[6]	刘新勇, 谭正准, 李辉, 黄健, 罗华, 曾令湖, 程隽如, 钟华配, 杨春艳, 王晓丽, 覃广胜. 热应激对摩拉和尼里-拉菲水牛血液生化指标的影响[J]. 中国畜牧兽医, 2022, 49(2): 521-528.
[7]	张艳敏, 周亚南, 曹磊, 田园, 刘旭平, 谭文松, 赵亮. 猪瘟病毒E2-GM-CSF融合蛋白在HEK293T细胞中的表达和免疫原性分析[J]. 中国畜牧兽医, 2022, 49(2): 669-676.
[8]	徐媛媛, 莫霞, 黄晨茜, 冯超, 陆杏蓉, 马小娅, 杨春艳, 郑海英, 尚江华. 水牛TRAIL基因克隆及生物信息学分析[J]. 中国畜牧兽医, 2022, 49(10): 3693-3703.
[9]	梁莎莎, 庞春英, 邓廷贤, 陆杏蓉, 段安琴, 马小娅, 方艳艳, 梁贤威. 水牛MFSD2A基因多态性及其与产奶性状的关联分析[J]. 中国畜牧兽医, 2022, 49(10): 3856-3865.
[10]	郑海英, 杨春艳, 李玲玉, 唐丽萍, 郑威, 尚江华. 白藜芦醇对体外培养的水牛卵丘细胞增殖活力及其相关基因mRNA表达的影响[J]. 中国畜牧兽医, 2022, 49(1): 208-215.
[11]	李玲玉, 郑海英, 陈明棠, 唐丽萍, 尚江华, 杨春艳. 卵母细胞来源对水牛体细胞核移植胚胎发育潜能的影响[J]. 中国畜牧兽医, 2022, 49(1): 241-247.
[12]	谢珊珊, 杨琴, 邓肖玉, 易继海, 王震, 陈创夫. 线粒体融合蛋白2基因干扰与过表达对布鲁氏菌诱导巨噬细胞凋亡的影响[J]. 中国畜牧兽医, 2022, 49(1): 283-293.
[13]	段安琴, 陆杏蓉, 马小娅, 梁莎莎, 邓廷贤. 干扰HSD17B4基因对水牛乳腺上皮细胞乳脂和酪蛋白的影响[J]. 中国畜牧兽医, 2021, 48(9): 3128-3137.
[14]	马小娅, 梁燕银, 陆杏蓉, 段安琴, 梁莎莎, 邓廷贤. 水牛ABCD基因家族生物信息学分析及ABCD1基因表达研究[J]. 中国畜牧兽医, 2021, 48(9): 3171-3182.
[15]	庞春英, 梁莎莎, 文崇利, 陈明棠, 陆呈委, 韦科龙, 潘玉红, 梁贤威. 水牛犊牛血浆外泌体的分离与鉴定[J]. 中国畜牧兽医, 2021, 48(9): 3200-3205.