定量检测牛奶中蛋白质ELISA方法的建立

›› 2011, Vol. 38 ›› Issue (4): 84-87.

定量检测牛奶中蛋白质ELISA方法的建立

李萌, 许会会, 高晋渝, 雷连成

吉林大学畜牧兽医学院,吉林长春 130062

收稿日期:2010-09-16 修回日期:1900-01-01 出版日期:2011-04-20 发布日期:2011-04-20
通讯作者: 雷连成

Development of an Optimized ELISA for the Quantitative Detection of Protein in the Milk

LI Meng, XU Hui-hui, GAO Jin-yu, LEI Lian-cheng

College of Animal Science and Veterinary Medicine,Jilin University,Changchun 130062,China

Received:2010-09-16 Revised:1900-01-01 Online:2011-04-20 Published:2011-04-20

摘要/Abstract

摘要： 本试验旨在建立特异检测牛奶蛋白质含量的ELISA方法。利用提纯酪蛋白免疫试验动物,获得针对酪蛋白的多克隆抗体;利用棋盘格试验确定抗原抗体的最佳作用浓度,并优化各步骤反应条件;根据标准样品建立牛奶中蛋白质含量的定量ELISA检测方法,并对该方法的特异性、敏感性、检测范围及重复性进行评价。通过试验确定封闭液为1% BSA,37 ℃孵育120 min;血清抗体工作浓度为1∶12000稀释,37 ℃孵育90 min;酶标二抗最适浓度为1∶3000稀释,37 ℃孵育30 min。牛奶酪蛋白检出范围为0.063~0.500 μg/mL;该方法具有良好的特异性、敏感性、重复性,回归率范围为97.6%~123%。成功建立了牛奶蛋白含量的定量ELISA检测方法。

关键词: 乳蛋白; 酪蛋白; ELISA; 定量检测

Abstract: This experiment is aimed to develop a ELISA method to detect the precise content of protein in the milk specificly. Immune the rabbit with pure casein,the polyclonal antibodies against casein were obtained. The best working concentration of antigen and antibody was determined using the checkerboard test, and the reaction conditions of each steps were optimized. The 1% BSA was served as blocking agent, and its incubation time was 120 min. The optimal dilution and incubation time of serum sample and enzyme-labeled second antibody were 1∶12000 for 90 min and 1∶3000 for 30 min respectively. The detection range of casein was 0.063 to 0.500 μg/mL. The method had good specificity, accuracy, repeatability, the range of regression rate was 97.6% and 123%.The ELISA method for detecting the protein content of milk was successfully established.

Key words: milk protein; casein; ELISA; quantitative detection

中图分类号:

TQ973

李萌;许会会;高晋渝;雷连成. 定量检测牛奶中蛋白质ELISA方法的建立[J]. , 2011, 38(4): 84-87.

LI Meng;XU Hui-hui;GAO Jin-yu;LEI Lian-cheng. Development of an Optimized ELISA for the Quantitative Detection of Protein in the Milk[J]. , 2011, 38(4): 84-87.

[1]	张芳源, 蔺雅婷, 杨大为, 陈虎, 李桂梅, 单虎. 非洲猪瘟病毒P30蛋白原核表达及间接ELISA检测方法建立[J]. 中国畜牧兽医, 2023, 50(5): 2012-2022.
[2]	牟一娇, 于瑞明, 张莉萍, 王永录. 基于猪流行性腹泻病毒变异毒株重组全长S2蛋白IgA抗体ELISA检测方法的建立及应用[J]. 中国畜牧兽医, 2023, 50(3): 1185-1194.
[3]	牛小杰, 徐明国, 肖莉, 刘文豪, 陈创夫, 王勇. 鸡白痢沙门氏菌IPAJ蛋白的表达纯化、多克隆抗体制备及ELISA方法的建立[J]. 中国畜牧兽医, 2023, 50(3): 1218-1228.
[4]	张凯, 张春平, 戈胜强, 孙春喜, 程杰, 伏春雨, 王刚, 牛星, 彭军. 非洲猪瘟病毒p22蛋白表达、多克隆抗体制备及间接ELISA方法的建立[J]. 中国畜牧兽医, 2023, 50(1): 270-279.
[5]	韩瑞, 杨行, 张文波, 陈佳玲, 周晓丽. 猪链球菌自溶素的原核表达及其抗体间接ELISA检测方法的建立[J]. 中国畜牧兽医, 2022, 49(9): 3508-3519.
[6]	唐庆凤, 李玲, 黄加祥, 方文远, 农皓如, 唐艳, 陆呈委, 韦盘秋, 冯玲. 广西地区不同饲养模式及不同季节水牛奶霉菌毒素污染状况调查[J]. 中国畜牧兽医, 2022, 49(9): 3665-3675.
[7]	张文燕, 王亚文, 袁晨, 冯亚文, 滕召剑, 商佳亮, 逯纪成, 宋勤叶. 基于非洲猪瘟病毒截短p72蛋白的间接ELISA抗体检测方法的建立[J]. 中国畜牧兽医, 2022, 49(7): 2688-2697.
[8]	田广原, 王宇琛, 周雅坪, 郭婷, 赵红梅, 赵逢淼, 孙雅婕, 卞宇晨, 于佳梁, 周雨霞. 绵羊肺炎支原体P60_58aa-928aa蛋白的原核表达及间接ELISA方法的建立[J]. 中国畜牧兽医, 2022, 49(5): 1960-1969.
[9]	王乐铭, 王瑜瑞, 曾子轩, 饶国顺, 吴正姣, 靳纬坤, 王冬英. 抗大片形吸虫Cat L1单克隆抗体的制备及其双抗体夹心ELISA检测方法的建立[J]. 中国畜牧兽医, 2022, 49(2): 677-686.
[10]	陈静, 吴燕, 李梅, 岳筠, 朱二鹏, 文明, 张双翔, 程振涛. 丝状支原体山羊亚种LPPA蛋白原核表达及间接ELISA方法的建立[J]. 中国畜牧兽医, 2022, 49(1): 318-327.
[11]	段安琴, 陆杏蓉, 马小娅, 梁莎莎, 邓廷贤. 干扰HSD17B4基因对水牛乳腺上皮细胞乳脂和酪蛋白的影响[J]. 中国畜牧兽医, 2021, 48(9): 3128-3137.
[12]	靳纬坤, 袁湘祥, 王锦辉, 侯林静, 郑梦伟, 吴正姣, 张为宇, 邸文达. 基于大片吸虫分泌排泄产物层析组分的牛片形吸虫病间接ELISA诊断方法的建立[J]. 中国畜牧兽医, 2021, 48(8): 3010-3018.
[13]	李新苹, 陈晓洁, 赵兵, 刘强德, 丁占强, 张飞, 唐慧芬, 曹剑, 侯凤, 刘洋, 王钢. 气肿疽梭菌CctA基因的原核表达及其间接ELISA检测方法的建立[J]. 中国畜牧兽医, 2021, 48(5): 1876-1882.
[14]	员晓庆, 李丽霞, 唐甜, 陈盛楠, 梁晓彤, 黄良宗, 司兴奎, 张浩吉, 孙秀涛, 段文学, 金宁一, 刘昊. 巴泰病毒G1_189aa-239aa肽段的原核表达、纯化及间接ELISA方法的建立[J]. 中国畜牧兽医, 2021, 48(10): 3770-3778.
[15]	王治平, 张云静, 孙玉洁, 徐鑫, 汪志艳, 黄柏成, 田克恭. 基于单克隆抗体捕获的猪血清和乳汁中PEDV IgA抗体间接ELISA方法的建立和评估[J]. 中国畜牧兽医, 2020, 47(7): 2248-2255.