本试验旨在构建高致病性猪繁殖与呼吸综合征病毒(HP-PRRSV)SX-1株非结构蛋白Nsp1的真核表达质粒,并对Nsp1蛋白锌指结构1(ZF1)进行定点突变,检测其在真核细胞中的表达活性。利用TRIzol法提取总RNA,RT-PCR扩增Nsp1目的基因,经双酶切构建pCI-neo-Nsp1真核表达质粒后对Nsp1蛋白锌指结构1的8C、10C、25C和28C的4个位点进行定点突变,成功获得分别突变为A和S的8个突变体。转染HeLa细胞,通过间接免疫荧光方法(IFA)和Western blotting检测Nsp1蛋白的活性。IFA结果显示,Flag抗体检测时蛋白质主要分布在细胞质和细胞核中,Myc抗体检测时蛋白质主要分布在细胞核中。Western blotting结果显示,Flag抗体检测时,S突变体出现大小约为44和20 ku条带,A突变体出现约为44 ku条带;Myc抗体检测时,S突变体出现大小约为44和27 ku条带,A突变体出现大小约为44 ku条带。试验结果表明,本试验成功构建了Nsp1突变体的真核表达质粒,证实其能在真核细胞中表达,为进一步研究Nsp1蛋白的锌指结构是否对机体Ⅰ型IFN产生起下调作用提供基础。

本研究旨在建立小亚璃眼蜱、亚洲璃眼蜱和残缘璃眼蜱的分子生物学鉴定方法,并探讨它们的系统发生关系。在新疆、内蒙古从动物体表采集寄生蜱,形态学鉴定后,PCR扩增测序获得3种璃眼蜱的16S rRNA及线粒体色素氧化酶亚基Ⅰ基因(cytochrome oxidaseⅠ,COⅠ)序列后进行同源性分析。用Mega 5.0和Mrbayes 3.2软件分别构建系统进化树,亚洲璃眼蜱、小亚璃眼蜱样本16S rRNA序列与GenBank中已知相应蜱虫16S rRNA序列聚类,而残缘璃眼蜱COⅠ序列与GenBank中已知残缘璃眼蜱COⅠ序列聚类,与形态学鉴定结果一致。在传统形态学分类的基础上,结合分子生物学鉴定方法能简易、准确鉴定小亚璃眼蜱、亚洲璃眼蜱和残缘璃眼蜱。

为研究体外培养猞猁细胞的生物学特性,深入开展猞猁基因组学及濒危野生动物保护工程,本试验获取猞猁不同组织细胞,用α-MEM培养液进行原代、传代培养,并对培养的细胞进行形态学观察、生长特性检测及核型分析。结果表明,猞猁不同组织细胞具有不同的生物学特性;心脏、躯体及睾丸来源的组织块分别在培养5~6、8~9、11~12 d时开始有成纤维样细胞从中长出,而在进行传代时,这3种组织来源的细胞生长速度没有表现出明显的差异,通常在4~5 d可铺满瓶底;核型分析结果表明,体外培养的猞猁细胞染色体数目为2n=38,为19对,其中18对为常染色体,1对为性染色体。上述结果可为今后猞猁不同组织细胞的深入研究提供试验材料和依据,也将为猞猁的细胞系构建提供参考。

Cathelicidins抗菌肽在家禽天然免疫系统中发挥重要作用,本研究将已构建的含Cathelicidins抗菌肽成熟肽的阳性克隆菌株Rosetta(DE3)/pET30-CathL1S、pET30-CathL2S、pET30-CathL3S分别在37℃、1.0 mmol/L IPTG的条件下进行诱导表达。SDS-PAGE和Western blotting分析结果表明,Cathelicidins成熟肽片段均在大肠杆菌中以融合形式成功表达,表达产物的表观分子质量分别为7、8、7.5 ku。琼脂糖孔穴扩散法检测结果显示,表达产物对多种革兰氏阴性菌和阳性菌均具有很好的抑制活性,其对金黄色葡萄球菌(Staphylococcus aureus)、枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)、藤黄微球菌(Micrococcus luteus)、大肠杆菌(Escherichia coli)、鸡白痢沙门氏菌C79-13 (Salmonella pullorum)、巴氏杆菌、鸭疫里默氏杆菌及绿脓杆菌等供试菌株均有较强的抑制作用,尤其对抗生素耐药菌株有明显的抑制作用。以雏鸡为实验模型研究重组抗菌肽对金黄色葡萄球菌的体内抗菌活性,结果表明,注射中、高剂量CathL-1抗菌肽试验组(5、10 mg/kg),在试验结束后取肝脏组织匀浆液涂布于TMP平板,未分离到葡萄球菌。各抗菌肽试验组平均增重均高于感染对照组,其中低剂量抗菌肽试验组(2.5 mg/kg)体内抑菌效果虽与普通抗生素相当,但其增重效果尤为明显。

本试验从疑似细小病毒感染的病死水貂中分离到1株病毒。经PCR鉴定、细胞培养、蛋白质电泳鉴定最终确定为水貂肠炎细小病毒(MEV),命名为MEV-WFD。对该分离病毒的衣壳蛋白VP2基因进行克隆测序分析,结果表明此病毒VP2基因3处碱基发生点突变,其中一处的突变导致第328处氨基酸残基由疏水性丙氨酸(Ala)变为亲水性苏氨酸(Thr)。将此株病毒VP2基因与GenBank上公布的所有MEV的VP2基因碱基序列进行同源性比较及进化树分析,结果表明该病毒与ZYL-1、MEV/LN/-10和Manzhouli的VP2基因同源率最高,为99.8%;进化树构建结果表明,该病毒与6株已公布的病毒属于同一进化分支。

以8株不同来源柔嫩艾美耳球虫分离株为研究对象,对其艾美耳球虫微线体3(Eimeria tenella microneme protein,EtMIC3)基因进行了RT-PCR扩增、测序及序列分析,并与GenBank上已发表的柔嫩艾美尔球虫相关序列进行比较,研究EtMIC3基因遗传变异情况。结果获得2976 bp的目的片段,各株与FJ374765.1 CDs的序列相似性在99.8%~99.9%之间,各株之间的序列相似性为99.9%~100.0%,各株编码的氨基酸序列与GenBank登记的柔嫩艾美耳球虫EtMIC3蛋白(ACJ11219)相似性在99.6%~99.9%之间,不同地理来源或耐药性虫株之间没有明显差异。本研究首次对中国EtMIC3基因进行了序列分析,结果显示不同来源株EtMIC3基因高度保守,为有效的疫苗候选因子,为进一步进行柔嫩艾美耳球虫基因工程疫苗构建的研究奠定了基础。

本试验旨在构建带有增强型绿色荧光蛋白报告基因EGFP及目的基因泛素化调节因子2(Smurf2)的真核表达载体pEGFP-N3-Smurf2,并转染小鼠肾小管上皮细胞检测其表达情况。用RT-PCR法扩增小鼠肾小管上皮细胞Smurf2的CDS区,构建克隆载体pEASY-Zero-Smurf2和真核表达载体pEGFP-N3-Smurf2,酶切并测序鉴定。运用脂质体转染法将pEGFP-N3-Smurf2真核表达载体转染小鼠肾小管上皮细胞,实时荧光定量PCR、免疫印迹检测Smurf2的表达。PCR结果显示扩增出Smurf2基因片段大小约为2247 bp;重组质粒pEGFP-N3-Smurf2的酶切鉴定及测序结果均表明Smurf2基因成功克隆到真核表达载体中;脂质体转染后检测结果显示,转染pEGFP-N3-Smurf2表达载体的肾小管上皮细胞中Smurf2基因mRNA表达量升高且EGFP-Smurf2重组蛋白有表达。本试验成功构建了含有增强型绿色荧光蛋白标记的Smurf2真核表达质粒,转染后能明显提高细胞内Smurf2的表达,为研究Smurf2基因的功能奠定了基础。

为了探测长期冷藏对蓝舌病样品的Real-time PCR检测结果和蓝舌病病毒活性的影响,本试验对18份4℃保存了10~18年的样品进行Real-time PCR检测,并对其中10份全血样品进行蓝舌病病毒分离和免疫酶染色,结果显示所有检测样品都为Real-time PCR阳性,从10份全血样品分离出5株蓝舌病病毒,通过免疫酶染色进一步证实为蓝舌病活病毒。研究结果提示冷藏蓝舌病病毒的活性高达18年,其稳定性超过目前现有的认识。

本研究旨在阐明中国豆状带绦虫囊尾蚴河南分离株线粒体核糖体大亚基基因(rrnL)部分序列(prrnL)和烟酰胺腺嘌呤二核苷酸(NADH)脱氢酶亚单位5基因(nad5)部分序列(pnad5)的遗传变异情况,并用prrnL和pnad5序列重构豆状带绦虫与其他带科绦虫的种系发育关系。采用聚合酶链式反应(PCR),扩增豆状带绦虫囊尾蚴分离株的线粒体prrnL和pnad5,将所测的序列用PAUP 4.0 Beta 10程序MP法绘制种系发育树,利用DNAStar 5.0中的MegAlign程序进行同源性分析。所获得的豆状带绦虫线粒体prrnL长度约为847 bp,pnad5为602 bp。所获rrnL序列与GenBank中豆状带绦虫相应序列的相似性为99.1%~100%,nad5为99.2%~100%;河南分离株之间rrnL序列的相似性为99.65%,nad5为99.5%;与GenBank中其他带科绦虫序列的相似度rrnL低于83.4%,nad5低于85.7%。种系发育分析结果表明,所有豆状带绦虫分离株和已知豆状带绦虫位于同一分支。由于豆状带绦虫分离株的线粒体rrnL和nad5基因序列种内很保守,种间差异较大,故可作为带科绦虫种间遗传变异研究的标记。

rfaD基因编码ADP-L-甘油-D-甘露庚糖-6-异构体酶,缺失该基因会导致LOS糖链缩短和疏水性增强,从而影响细菌的致病性。为进一步探索副猪嗜血杆菌(Haemophilus parasuis,Hps)ADP-L-甘油-D-甘露庚糖-6-异构体酶的功能,本研究对Hps SC096 株rfaD基因进行克隆及原核表达。根据GenBank上登录的NC_011852序列,设计引物扩增rfaD基因,获得927 bp目的片段,将其克隆至pMD19-T载体。经送样测序鉴定正确后,连接到pET-32a(+)上进行原核表达,并用IPTG诱导,将诱导产物进行SDS-PAGE和Western blotting分析。SDS-PAGE结果显示,H.parasuis rfaD基因能在E.coli BL21(DE3)中表达,重组蛋白分子质量约为50 ku,与预期分子质量大小一致。Western blotting分析结果表明,该蛋白质能与H.parasuis血清4型阳性高免血清产生特异性结合反应,具较好的反应原性。

为了寻找奶牛乳腺上皮细胞核中与乳蛋白合成相关的重要蛋白质,从翻译水平揭示乳蛋白合成的机理,本试验应用双向凝胶电泳技术和基质辅助激光解析电离飞行时间质谱(MALDI-TOF-MS)的方法,分析添加蛋氨酸后奶牛乳腺上皮细胞核磷酸化蛋白质的变化,并采用Western blotting验证。质谱分析鉴定出5个表达上调的细胞核磷酸化蛋白质,分别是葡萄球菌核酸域包含蛋白质1、甘氨酰-tRNA合成酶、Septin-6、Twinfilin-1和延长因子1-beta,这些蛋白质的功能涉及DNA转录、mRNA翻译、蛋白质合成、细胞分裂、细胞形态发生及细胞周期的调控。

依据GenBank中登录的坏死梭杆菌外膜蛋白(outer membrane protein,OMP)基因序列,设计1对引物进行PCR扩增OMP片段并克隆至pET-28a中,构建原核表达重组质粒pET-28a-OMP。将pET-28a-OMP转化到大肠杆菌BL21(DE3)感受态中,表达含2个His的重组蛋白。SDS-PAGE和Western blotting分析结果表明,该重组蛋白分子质量为93 ku,为包涵体表达,具有反应原性。本试验结果为坏死梭杆菌OMP免疫机制的研究提供了基础数据。

为了探索不同血清型副鸡禽杆菌菌株外膜蛋白的差异,本试验采用FOCUS^TM Global Fractionation试剂盒制备副鸡禽杆菌A(221株)、B(0222株)、C(Modesto株)3个血清型参考菌株的外膜蛋白,进行SDS-PAGE凝胶电泳。结果表明,不同血清型参考菌株的电泳图谱相似,经凝胶定量软件分析,结果显示,主要条带均有7个,其分子质量相似,分别占A、B和C蛋白质总量的70.85%、68.6%和65.71%。 此外共有3个蛋白质条带分子质量相似,但蛋白质含量差异显著(P<0.05)。本试验为副鸡禽杆菌外膜蛋白的进一步研究提供了理论依据。

采用RT-PCR技术从滨州分离株中扩增出传染性法氏囊病病毒(infectious bursal disease virus,IBDV)VP4基因,将VP4基因插入到pGEX-4T-1载体上构建pGEX-4T-1-VP4,诱导表达并用谷胱甘肽-S-转移酶(GST)亲和层析柱纯化得到纯化的重组VP4蛋白。以兔抗鸡IgG为胶体金标记物,以重组IBDV VP4蛋白和羊抗兔IgG为硝酸纤维素膜检测线和质控线的包被物,制备一种能检测IBDV VP4蛋白抗体的胶体金试纸条。结果表明,该试纸条检测IBDV强毒(IBDV BC6/85)免疫的血清检测线显红色,为阳性反应;检测IBDV弱毒(IBDV NB)免疫的血清、新城疫病毒(Newcastle disease virus,NDV)标准阳性血清、禽流感H5和H9标准阳性血清、传染性支气管炎标准阳性血清及0.85%生理盐水检测线不显红色,为阴性反应。该试纸条与建立的ELISA方法相比,敏感度低2个滴度;检测320份临床血清,试纸条与ELISA的符合率达99.38%。提示,该试纸条使用方便、操作简单,10 min内可以用肉眼判断结果,可为区分IBDV的强弱毒提供参考数据,具有较大的应用价值。

根据Q热贝纳柯克斯体(Coxiella burnetii)插入IS1111序列设计引物和探针,建立快速检测Q热的TaqMan实时荧光定量PCR方法。以梯度稀释含有目的扩增片段的重组质粒作为标准品,进行定量PCR反应。结果显示,该方法能够检测出10个拷贝数的阳性质粒;标准曲线相关系数为0.995,扩增效率为103%;结核分枝杆菌(M.tuberculosis)、衣原体(C.psittaci)、布鲁氏菌(Brucella.spp)及牛血液的核酸样本特异性检测结果均为阴性。本研究建立的TaqMan荧光定量PCR法灵敏度高、特异性好,对Q热的检测与鉴定中具有良好的应用前景。

为建立评价流产布鲁氏菌疫苗株免疫保护力的小鼠模型,选取6周龄雌性BALB/c小鼠为试验动物,随机分为3组(n=40):A19免疫攻毒组、非免疫攻毒组和PBS对照组。A19免疫组腹腔接种BALB/c鼠A19 5.0×10⁴ CFU,非免疫攻毒组和PBS对照组均接种PBS液0.2 mL。免疫后45 d,A19免疫攻毒组和非免疫攻毒组BALB/c鼠以3.0×10⁴ CFU剂量的2308强毒株攻击,攻毒后15和45 d分别剖杀小鼠,取小鼠脾脏称重、细菌分离、病理组织学检测。结果表明,攻毒后15 d,A19免疫攻毒组与未免疫攻毒组和PBS对照组之间克脾指数差异显著(P<0.05);攻毒后45 d,A19免疫攻毒组与PBS对照组的克脾指数差异不显著(P>0.05),与未免疫攻毒组克脾指数差异显著(P<0.05);免疫攻毒组的小鼠组织病理变化明显轻于未免疫攻毒组。结果表明,用BALB/c鼠为试验动物,以A19为疫苗参考株建立动物实验模型可以应用于牛型布鲁氏菌疫苗免疫保护力评价。

根据GenBank中单孢子虫的基因保守序列,设计了3条特异性引物,通过对半套式PCR扩增条件的优化,本研究建立了检测贝类单孢子虫的半套式PCR方法。该方法对单孢子虫模板进行扩增,得到与预期相符的333 bp特异性条带,而对折光马尔太虫、派琴虫、副溶血弧菌、溶藻弧菌和河弧菌等病原体的扩增,结果均为阴性。敏感性试验结果表明,该技术最低能检测到0.011 fg单孢子虫质粒DNA。用该半套式PCR对青岛沿海的贝类样品进行检测,结果从牡蛎和菲律宾蛤仔中分别检出单孢子虫6和8份,提示青岛沿海的养殖贝类中存在单孢子虫感染。结果表明,本研究建立的半套式PCR方法可用于贝类单孢子虫的临床快速检测。

文章对重组动物干扰素基因序列的改造、原核表达条件的筛选、原核表达产物制备方法的研究及大规模生产工艺的研发等方面的发展状况进行了概述,旨在为其大规模生产提供一定的理论依据。

E3L蛋白是痘病毒的一类早期表达的非结构蛋白,其主要抑制宿主的先天性免疫,与病毒的致病力和宿主嗜性有关,但是目前对绵羊痘病毒E3L蛋白的研究较少。作者运用生物信息学的方法,用已知的E3L蛋白N端结构作为模板,并使用WebLab、SWISS-MODEL和ExPASY等在线软件预测其功能结构域和二、三级结构及氨基酸组成,对其作为Zα潜在家族成员的真实性、可靠性作出理论上的判断。分析结果表明,绵羊痘病毒E3L蛋白N端结构符合Zα家族蛋白的一些基本的结构特征,具有其他E3L蛋白N端相同的功能结构,为该蛋白质N端结构属于Zα蛋白家族提供了一些理论依据。

长期以来,猪都是科学研究中重要的生物模型,转基因猪在生物模型、器官移植和动物良种繁育等方面有着极其重要的研究及应用价值,而现在的转基因克隆猪的成功率及成活率都普遍偏低。诱导多能干细胞技术在再生医学和畜牧业等领域有着广泛而诱人的应用前景,但目前还较少被应用于转基因猪的研究中。作者对转基因技术和诱导多能干细胞技术的发展历程,特别是诱导多能干细胞技术在猪转基因研究中的应用进行简述,以期为开展相关研究的科研人员提供一定的参考。

分泌型IgA(secretory IgA,SIgA)作为一种包被于肠道黏膜的抗体,能保护肠道免受病原微生物和毒素的攻击而不引起炎症反应,对激活黏膜免疫和维持肠道内环境稳态起到重要作用。在动物肠腔中,SIgA能通过调节肠道上皮细胞受体的识别能力,阻断病原微生物侵入黏膜相关淋巴组织,随后在肠道蠕动和黏液绒毛的协助运动下,最终将病原微生物清除;且最近也有报道揭示SIgA在肠上皮胞吞转运作用下的新机制。因此,作者主要阐述SIgA在肠道黏膜免疫及其内环境方面发挥关键的生物学特征和功能,以及探讨胞吞转运机制下SIgA的潜在作用。

树突状细胞在抗原识别、递呈、诱导T细胞增殖和抗原特异性免疫反应中起中枢作用。近年来研究发现该细胞还可诱导机体的免疫耐受,这一作用是目前免疫耐受技术研究的热点。作者从中枢免疫耐受和外周免疫耐受2个角度阐述了树突状细胞在免疫耐受中的研究现状,并从调节性T细胞、表面抑制分子、成熟状态、微环境、细胞内信号传导5个方面对树突状细胞诱导免疫耐受的机制作了归纳总结。通过这一综述,以期为树突状细胞免疫耐受的研究提供相关资料。

鸭圆环病毒病给养鸭业造成严重的经济损失,鉴于此,本研究根据GenBank登录的鸭圆环病毒(duck circovirus,DuCV)保守区基因组序列(登录号:NC_005053.1),设计合成内、外2对引物,通过PCR反应条件的优化,建立了检测DuCV的巢式PCR检测方法。该方法对鸭病毒性肝炎病毒、鸭瘟病毒、鸭细小病毒、新城疫病毒的扩增结果均为阴性;第1轮扩增的灵敏度为10 pg,第2轮扩增的灵敏度为0.1 pg,通过巢式PCR,敏感性提高了100倍。本研究建立的巢式PCR方法具有特异性强、敏感性高、重复性好等优点,可以准确快速的用于鸭圆环病毒的病原检测。

试验选择756羽开产50周龄左右的罗曼褐壳蛋鸡,随机分为7组,试验1组为对照组,饲喂基础日粮;试验2组饲喂基础日粮+中草药(0.04%);试验3组饲喂基础日粮+中草药(0.04%)+酶制剂(0.01%);试验4组饲喂基础日粮+中草药(0.04%)+酶制剂(0.01%)+抗菌肽(0.1%);试验5组饲喂基础日粮+益生菌(2‰);试验6组饲喂基础日粮+益生菌(2‰)+酶制剂(0.01%);试验7组饲喂基础日粮+益生菌(2‰)+酶制剂(0.01%)+抗菌肽(0.1%)。结果表明,以试验4组效果最好,显著提高了产蛋率(P<0.05),降低了料蛋比(P<0.05),极显著提高了鸡蛋哈氏单位(P<0.01)。同时,与其他试验组相比,试验4组氨基酸总量最高,胆固醇含量最低。因此,推荐在蛋鸡日粮中添加中草药+酶制剂+抗菌肽组合对蛋鸡产蛋性能及蛋品质具有较好的效果。

试验旨在研究18%蛋白质水平下,不同赖氨酸与蛋氨酸比例(Lys/Met)对早期断奶藏羔羊复胃发育的影响。选取(55±2)日龄断奶、体重(10.85±0.65)kg藏羔羊42只,随机分为3组,每组14只,公、母各半,分别饲喂18%蛋白质水平下不同Lys/Met比例的羔羊早期断奶料,试验期20 d。对早期断奶藏羔羊各胃室重量和组织形态指标进行了测定。结果表明,Lys/Met比例为3.1∶1时,藏羔羊复胃和瘤胃增重最好,瘤网胃乳头增长,瓣胃角化层、黏膜上皮和中央肌层增厚,皱胃胃底腺黏膜增厚效果最好。提示,早期断奶料营养水平影响藏羔羊复胃的生长发育,适宜的Lys/Met比例能够促进其良好的生长发育,在18%蛋白质水平下,藏羔羊早期断奶料Lys/Met比例为3.1∶1时效果最佳。

试验旨在研究同一蛋白质水平(粗蛋白质为13%)不同料型对肉种鸽生产性能的影响。采用单因子试验设计,选用144对种鸽,随机分为4组,每组36个重复,每个重复1对种鸽。Ⅰ组饲喂柱状颗粒全价料,Ⅱ组饲喂球形颗粒全价料,Ⅲ组饲喂50%原粮和50%柱状颗粒料,Ⅳ组饲喂原粮和保健砂。预试期14 d,正试期106 d。结果显示:①整个试验期内,Ⅰ、Ⅱ组平均日耗料量均极显著低于其他2组(P<0.01),15~21日龄阶段Ⅲ组乳鸽平均日耗料量也极显著低于Ⅳ组(P<0.01);②Ⅰ、Ⅱ组均能使种鸽在繁殖期间体重极显著增加(P<0.01),但公鸽的增重比母鸽多;③乳鸽7日龄时,Ⅱ、Ⅲ组体重极显著高于Ⅳ组(P<0.01),但乳鸽14日龄时,这种显著差异消失;④Ⅰ组种蛋受精率极显著高于Ⅳ组(P<0.01),显著高于Ⅱ组(P<0.05),其余各组之间差异不显著(P>0.05)。提示,料型对种鸽生产性能有显著影响,但对啄羽现象无明显影响;建议在养鸽生产中推广柱状颗粒全价料型。

本试验旨在研究不同组合益生菌对育成期水貂生长性能和营养物质消化率及氮平衡的影响。选择96只60日龄、健康状况良好的水貂,随机分为4组,每组24只,公、母各半。对照组饲喂基础日粮,试验1、2、3组分别在基础日粮中添加0.06 g地衣芽孢杆菌+0.06 g枯草芽孢杆菌、6 g安琪酵母+12 mL乳酸菌、0.06 g地衣芽孢杆菌+0.06 g枯草芽孢杆菌+6 g安琪酵母+12 mL乳酸菌。在水貂育成期内进行饲养与消化代谢试验,分析不同组合益生菌对水貂平均日采食量、平均日增重、料重比、粗蛋白质和粗脂肪的消化率及沉积氮、蛋白质生物学价值和净蛋白质利用率的影响。结果表明,与对照组相比,试验1组公貂的干物质消化率和试验2组公貂的脂肪消化率显著下降(P<0.05),但不同组水貂的生长性能和氮平衡及母貂的营养物质消化率未受到益生菌的影响(P>0.05)。提示,日粮中添加益生菌不会显著改善育成期水貂的生长性能、营养物质消化率及氮平衡,故在水貂健康的前提下,无需在育成貂日粮中添加益生菌。

选用24~26日龄"长×大"二元杂交断奶仔猪96头(平均体重6.84 kg±0.16 kg),研究不同形式氧化锌对断奶仔猪生长性能和腹泻的影响。试验仔猪按完全随机区组设计分为4组,每组3个重复,每个重复8头仔猪。对照组饲喂基础日粮,试验1、2、3组分别在基础日粮中添加2800 g/t普通氧化锌、800 g/t包膜氧化锌、500 g/t纳米氧化锌,试验期14 d。结果表明,与对照组相比,试验1、2、3组断奶仔猪平均日增重分别提高了15.26%(P<0.05)、9.88%(P<0.05)和14.69%(P<0.05),料重比降低了9.59%(P<0.05)、7.53%(P<0.05)和10.27%(P<0.05);腹泻率降低了66.67%(P<0.05)、55.55%(P<0.05)和55.55%(P<0.05)。试验1、2、3组之间断奶仔猪的平均日增重、料重比及腹泻率均无显著差异(P>0.05),说明包膜氧化锌和纳米氧化锌是一种代替高剂量普通氧化锌的可行选择。

使用微生态制剂来替代抗生素用于动物疫病防制是未来的发展趋势,而乳酸菌是目前微生态制剂最主要的成分。试验旨在筛选弯曲杆菌中具有高抑菌活性并耐受动物胃肠道环境的乳酸菌。从广东不同地区采集家禽粪便样品,对分离的乳酸菌进行生化鉴定、PCR鉴定及16S rDNA测序。同时,对分离菌株进行鸡源空肠弯曲杆菌、鸭源空肠弯曲杆菌和鹅源结肠弯曲杆菌的抑菌试验,以及模拟胃肠道环境的耐酸、耐胆盐和耐胰蛋白酶试验。结果表明,唾液乳杆菌R3对不同禽源的弯曲杆菌都具有高抑菌活性和耐受能力。因此,唾液乳杆菌R3为开发防控家禽弯曲杆菌疾病的微生态制剂提供了候选株。

为研究促进精子发生的体外培养体系,通过无血清睾丸组织培养法,将成年牛睾丸组织块种植于培养板, 观测不同时间睾丸细胞的迁出和形态变化。通过油红O染色鉴定具有分泌功能的支持细胞,通过碱性磷酸酶和免疫组化染色鉴定集落样生长的精原干细胞。结果发现该体系可获得生长良好的多种类型细胞,包括表达AP、Oct-4和GFRα1的精原干细胞及具有分泌功能的睾丸支持细胞,并可获得大量精子。说明,该无血清培养体系可作为一个重要的工具来研究生物学和化学因素对雄性生殖系统的影响,也为研究精子体外发生和移植提供了材料。

本试验旨在建立中国农业大学教授专家团队培育的小型猪(命名为"中国实验用小型猪")血液生理和生化指标的正常参考值范围,为小型猪作为人类疾病模型提供参考依据。用全自动化生化仪测定1、3、6和12月龄中国实验用小型猪血液的9项生理指标和22项生化指标,对同一月龄不同性别的血液测定值进行单因素独立样本t检验。试验结果显示,中国实验用小型猪绝大多数血液生理生化指标同一月龄不同性别间差异不显著(P>0.05),仅红细胞体积分布宽度和肌酐等指标存在显著差异(P<0.05)。中国实验用小型猪血液指标与巴马小型猪、贵州小型猪和五指山小型猪相比,大多数血液测定值接近。试验结果表明,中国实验用小型血液生理生化指标稳定,与人类正常参考值相比,小型猪9项血液生理指标中有4项和人类相接近,22项血液生化指标中有15项和人类相接近。

随着人们生活水平的不断提高,肿瘤、癌症、药物敏感、免疫缺陷和病毒性感染病等恶性疾病也相继大量出现,而用于检测细胞活性及其免疫力的相关试验都将要求趋于快速、简捷和准确的特点。通过近年来国内外检测细胞活力及其免疫力的试验,作者对推知待测样品水平的方法,包括淋巴细胞转化试验、酶联免疫吸附试验、细胞毒性T细胞检测、白细胞介素12检测及流式细胞术等的研究概况进行综述。

利用14个微卫星标记分析了攀枝花地方黑山羊、建昌黑山羊、云岭黑山羊、金堂黑山羊、乐至黑山羊5个品种(群体)的遗传多样性及亲缘关系。结果显示,14个微卫星座位多态信息含量(PIC)在0.5129~0.7646之间,均为高度多态位点;5个黑山羊品种(群体)的平均多态信息含量(PIC)为0.6405~0.6856,平均杂合度(H)在0.6985~0.7371之间,说明遗传多样性丰富;群体间平均遗传分化系数(Fst)为0.0296,说明群体间的变异仅为2.96%,群体间存在基因交流;攀枝花黑山羊和金堂黑山羊2个群体之间的Nei氏遗传距离最大(D=0.1286),金堂黑山羊和乐至黑山羊之间的遗传距离最小(D=0.0365);NJ聚类图中,攀枝花黑山羊、建昌黑山羊和云岭黑山羊聚为一类,金堂黑山羊和乐至黑山羊聚为一类,聚类结果与群体的地理分布较为一致。

为探究睾丸注射法制备转基因动物的可能性,将携带有徐淮山羊过氧化氢酶体激活增殖受体γ(PPARγ)和绿色荧光蛋白标签的重组载体经脂质体包裹后,将线性化的重组质粒pEGFP-PPARγ通过随机打点注射入性成熟的湖羊睾丸内,采用常规PCR、基因组DNA点杂交及蛋白免疫印迹技术检测外源PPARγ基因在湖羊体内稳定整合的能力,并检测F1代阳性个体屠宰性能、肌内脂肪含量、器官重量及肉品质。F1代羔羊检测转基因羊阳性率为13.7%,证实外源基因在转基因后代体内成功表达。阳性个体胴体重和屠宰率极显著低于对照组个体(P<0.01),阳性个体骨肉比极显著高于对照组个体(P<0.01);阳性个体背最长肌脂肪含量显著高于对照组个体(P<0.05),腰肌内脂肪含量与股二头肌内脂肪含量差异不显著(P>0.05);阳性个体肺脏和小肠极显著大于对照组个体(P<0.01),阳性个体脾脏显著大于对照组个体(P<0.05),阳性个体心脏和肺脏显著小于对照组个体(P<0.05),肝脏、肾脏、胃、睾丸、皮、头之间差异不显著(P>0.05);阳性个体股二头肌嫩度显著低于对照组个体(P<0.05),pH、肉色、失水率之间差异不显著(P>0.05)。

为探讨血管内皮生长因子(vascular endothelial growth factor,VEGF)在辽宁绒山羊胎儿期皮肤毛囊发育中的表达规律及其与皮肤微血管密度(microvessel density,MVD)的关系,采用免疫组化方法对VEGF辽宁绒山羊胎儿期不同阶段的表达及MVD进行检测。结果表明,VEGF在辽宁绒山羊胎儿期75 d后的各个时期皮肤毛乳头及毛囊内根鞘上表达,同时随着胎龄的增加,VEGF阳性区域的平均光密度亦随之增加;且皮肤中MVD也随着日龄的增加而逐渐增加,毛囊上的VEGF平均光密度与MVD呈极强正相关(r=0.966,P=0.007)。

为探讨荷斯坦牛和西门塔尔牛冻精的精液品质及体外受精后胚胎发育能力的差异,利用目测法、低渗膨胀法和考马斯亮蓝染色法评估了荷斯坦牛和西门塔尔牛冻精的活力、质膜完整率和顶体完整率,并比较了二者冻精体外受精后胚胎的卵裂率和囊胚率。结果表明,荷斯坦牛和西门塔尔牛冻精的活力(30.4%和27.2%)、质膜完整率(41.96%和36.22%)和顶体完整率(77.02%和73.02%)均无显著差异(P>0.05),但荷斯坦牛冻精体外受精后的卵裂率(57.5%和48.6%)和囊胚率(30.3%和23.2%)显著高于西门塔尔牛冻精(P<0.05)。提示,不同品种公牛精液体外受精后的发育能力有显著差异(P>0.05)。

本试验选用1~3胎次患有隐性乳房炎的体重600 kg泌乳荷斯坦牛36头,随机均分为对照组和试验组,试验组奶牛每天服用200 g的红岩草提取物。乳酶活性测定结果表明,试验7 d组和14 d组的髓过氧化物酶(MPO)、乳酸脱氢酶(LDH)、乳过氧化物酶(LP)、N-乙酰-B-氨基葡糖糖苷酶(NAG)活性均极显著低于对照组(P<0.01);CMT法检测结果表明,试验7 d组和14 d组的治愈率分别为55.56%和77.78%;药物安全性评价结果表明,本试验中的红岩草提取物添加量并未造成试验7 d和14 d组奶牛的肝脏、肾脏功能指标变化,具有较高的安全性,可用于兽医临床。

为了研究硼元素对大鼠淋巴结和视网膜组织结构的影响,试验选用断乳(21 d±2 d)清洁级SD大鼠60只,适应性饲养1周后,随机分为对照组和试验Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ、Ⅴ组,各组分别通过饮水添加0、40、80、160、320和640 mg/L硼,试验期60 d。结果显示,与对照组相比,试验Ⅰ和Ⅱ组大鼠淋巴结皮质内淋巴小结数量增多,体积增大,淋巴细胞密集,副皮质区增厚,髓质内髓索明显增粗;视网膜组织结构发育良好,节细胞层、内核层和外核层细胞数量有所增多。试验Ⅲ组大鼠淋巴结皮质内淋巴小结减少,体积变小,副皮质区变薄,淋巴细胞排列较为疏松;视网膜组织结构出现轻微损伤,内核层变薄,节细胞层细胞数量排列疏松,数量减少。试验Ⅳ和Ⅴ组大鼠淋巴结皮质内淋巴小结体积显著减小,生发中心不明显甚至消失,淋巴细胞明显减少,副皮质区变薄,髓索变细;视网膜节细胞层变薄,数量减少,部分细胞出现空泡,内核层和外核层细胞排列疏松。说明饮水添加40~80 mg/L硼对大鼠淋巴结和视网膜组织结构发育具有一定的促进作用,而添加320~640 mg/L硼则对大鼠淋巴结和视网膜组织结构产生明显的损伤作用。

本研究对实验室合成的一种用于治疗动物腹泻的药物囊性纤维化跨膜传导调节因子(cystic fibrosis transmembrane conductance regulator,CFTR)抑制剂——类噻唑烷酮进行了毒理学安全性评价。将受试物通过灌胃给予试验动物,通过全身毒性试验、小鼠精子致变试验、小鼠骨髓嗜多染红细胞微核试验和Ames试验进行安全性评价。结果显示,受试物没有全身急性毒性;在体内没有对生殖细胞致突变作用;不会对染色体和细胞有丝分裂造成损伤;没有诱变性。本研究为进一步将该类噻唑烷酮应用于治疗仔猪腹泻提供可靠的试验依据。

在中兽医药学理论指导下,根据相关文献报道确定了清热类、祛湿类、理血类、理气类等114味中草药,以鸡大肠杆菌O78作为目标菌株,进行体外抑菌试验,筛选出6种具有一定抗菌作用的中药,包括芦荟、穿心莲、大蒜、锦灯笼、乌梅和石榴皮,其抑菌圈分别是15、12、12、11、11和7 mm。运用硅胶柱层析、凝胶柱层析、ODS柱层析对芦荟的抗菌成分进行了分离、纯化,经质谱、红外光谱和核磁共振分析得到抗菌单体物质,确定为延胡索酸。进一步抗菌活性研究结果显示,延胡索酸对金黄色葡萄球、链球菌、大肠杆菌和沙门氏菌的最小抑制浓度(MIC)分别是50、50、780和780 μg/mL,最小杀菌浓度(MBC)分别是100、100、1560和780 μg/mL。

为探讨促孕散治疗持久黄体的作用机理,本研究通过直肠检查结合B超直肠检查对持久黄体奶牛做出诊断后口服促孕散,应用B超每3 d对黄体直径、卵泡数量、卵巢长度、卵巢宽度、子宫角纵径和子宫颈纵径进行测量,并统计1次,与用药前进行对比。30头持久黄体奶牛口服促孕散后,治疗有效头数25头,有效率为83.3%。停药后第1天卵巢出现小卵泡和中等卵泡,停药后分别在第10和19天大卵泡数量最多,部分奶牛出现发情并排卵,与用药前卵巢相比,结果发现左、右侧卵巢长在停药后均降低,但差异不显著(P>0.05);左、右卵巢宽在停药后均降低,但差异不显著(P>0.05);子宫颈纵径和子宫角纵径均在停药后升高,但差异不显著(P>0.05)。结果表明,B超是诊断奶牛持久黄体的有效手段,中药促孕散对持久黄体奶牛卵巢和子宫形态等指标具有一定的影响,可以促进黄体的溶解。

口蹄疫是一种高度传染的病毒性疫病,及早诊断意义重大。分子生物学检测方法在口蹄疫病诊断和病毒分型过程中具有许多优势,已经广泛应用。作者对实时荧光PCR法、多重PCR法、核酸杂交法、基因芯片法、环介导等温扩增法及核酸序列依赖扩增法等进行分析和比较,对各种方法的检测效率、灵敏度、优缺点及国内外的研究情况进行综述,为口蹄疫病毒分子生物学检测方法的应用与深入开发提供参考。

猪繁殖与呼吸综合征(porcine reproductive and respiratory syndrome,PRRS)是由猪繁殖与呼吸综合征病毒引起的一种猪传染性疾病,该病能引起母猪的繁殖障碍和新生仔猪呼吸症状,严重影响养猪业的健康发展,因此对该病的研究具有重要意义。近年来,该病在世界范围内的流行和分布日趋广泛,造成世界养猪业严重经济损失,因此受到国内外学者的高度重视,对该病的研究也日益深入,在疫病的诊断方法及防控机制等方面取得了重要进展。文章就近年来PRRS诊断方法及疫苗的发展两方面进行了综述。

本试验旨在了解桑杏平喘颗粒的安全性,为临床用药提供数据支持。选用健康Wistar大白鼠80只,随机分成4组(1个对照组和3个试验组),每组20只,雌雄各半。对照组灌服生理盐水,试验组分别以桑杏平喘颗粒煎剂相当于30、15、3 g/kg体重(按照原药材计)灌胃给药,连续给药30 d,记录体重变化,在给药10、20、30 d后采血,测定血常规指标,30 d时取心脏、肝脏、脾脏、肺脏、肾脏称重并计算脏器系数,制作心脏、肝脏、脾脏、肺脏、肾脏组织切片,进行病理组织学检查。试验结果表明,桑杏平喘颗粒对动物机体影响较小,是一种适合临床应用的低毒、安全的中兽药制剂。

本试验分离纯化1株致使罗非鱼具有链球菌发病症状的病原菌,药敏试验结果表明,该菌对氯霉素等10种药物敏感。PCR扩增该菌的cfb基因,将扩增片段测序后与GenBank上登录的罗非鱼无乳链球菌的cfb基因序列进行比对。同时对该病原菌的生物学特性进行研究,包括培养时间和pH对该菌生长的影响;培养温度对其致病力的影响;探讨了不同攻毒方式(腹腔、胸腔和背部肌肉注射)与鱼发病快慢的关系;并对不同规格(100和10 g左右)的罗非鱼对该菌的易感性进行分析。试验结果表明,该病原菌为无乳链球菌(Streptococcus agalactiae);该菌的最适培养时间为11.5 h,最适培养pH为7.5;腹腔、胸腔和背部肌肉注射后,其发病时间几乎一致,但胸腔注射的试验鱼死亡速度最慢,背部肌肉注射是较安全可行的攻毒方式;33℃培养的无乳链球菌攻毒的罗非鱼发病最快,死亡最集中;100 g的试验鱼比10 g的试验鱼更易感染。

1例两后肢内翻犬,经一般检查和X射线检查确诊为双侧髌骨内侧脱位,对其实施外侧韧带叠加术,两患肢恢复正常。文章就髌骨脱位的诊断和治疗提出了建议,以期对犬髌骨脱位的临床诊疗提供一些参考。

floR是氟苯尼考特异性耐药基因之一,当前宠物犬源大肠杆菌氟苯尼考耐药基因floR的研究报道很少,故本试验利用PCR方法对宠物犬源大肠杆菌氟苯尼考耐药基因floR进行检测,并采用微量肉汤稀释法测定宠物犬源大肠杆菌对10种抗菌药物的最小抑菌浓度(MIC)。结果显示,20株宠物犬源大肠杆菌中floR耐药基因的阳性菌株数为9株,阳性检出率为45%;对氟苯尼考的耐药率为65%,并呈现3~7重的多重耐药性。结果表明,随着氟苯尼考在兽医临床的广泛应用,其耐药率越来越高,需不断加强对氟苯尼考等抗菌药物的耐药性监控。

猫牛痘病毒感染是由牛痘病毒引起的猫及其他猫科动物的病毒性传染病,可引起猫的皮肤结块、口腔溃疡、系统性疾病或坏死性肺炎,偶尔还可引起人的皮肤损伤和淋巴炎。文章就猫牛痘病毒感染的病原学、流行病学、临床症状、诊断和治疗作一综述,以期为该病的研究和防制提供资料。

鸭大肠杆菌病是由致病性大肠杆菌引起的多病型疾病的总称。临床病型众多,其中以雏鸭或小鸭败血症和产蛋母鸭的卵黄性腹膜炎(蛋子瘟)危害最为严重,该病是目前对养鸭业危害较大的传染病。2012年3月,盘锦市某大型养鸭场饲养2000多只樱桃谷鸭,从186日龄开始陆续发病,主要表现为产蛋率迅速下降,病鸭精神萎顿,食欲减退,下痢,发病后期病鸭的腹部膨大、下垂,病死率约为4%。通过临床观察、病理剖检及实验室检查,确诊为鸭大肠杆菌病。根据药敏试验结果,选用极度敏感的丁胺卡那霉素治疗并采取综合性措施,迅速控制了病情。

为了解广西部分县市猪群常见疫病流行情况,本次调查通过RT-PCR或PCR方法,对采集到的26份病料进行病原学检测,主要检测猪瘟病毒(CSFV)、猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)、猪圆环病毒2型(PCV2)、伪狂犬病病毒(PRV)、猪细小病毒(PPV)、乙脑病毒(JEV)和牛病毒性腹泻病毒(BVDV)。结果显示,抽检地区猪群多发生混合感染,以3重或多重感染为主,疫病潜在流行态势较为复杂。

1头进行了瘤胃瘘管手术的黄牛发病死亡,临床症状表现为肌肉强直性痉挛。本试验取其手术伤口部位的炎性肌肉进行了细菌分离,分离到1株破伤风梭菌CT-JX-1。该分离菌株为具有顶端芽孢的革兰氏阳性杆菌;在普通琼脂培养基形成出灰白色、扁平、粗糙的菌落,菌落中心部分致密,外缘呈蜘蛛网状;该菌株能液化明胶,对多种糖均不发酵。

从辽宁某猪场采集病料,经处理后接种BHK-21细胞进行猪伪狂犬病病毒(pseudorabies virus,PRV)分离,结果有2份病料在该细胞上盲传后可见典型的CPE,经测定其毒价为10^-7.8 TCID₅₀/mL。间接免疫荧光试验可见黄绿色荧光,用电镜对纯化的病毒进行观察,可见有囊膜包裹的圆形病毒粒子,直径为140~200 nm。该病毒对氯仿、乙醚、酸和热敏感。对有CPE的细胞培养物进行RT-PCR,结果为阳性。接种试验动物出现典型的猪伪狂犬病临床症状且死亡。结果表明,成功分离到1株PRV。

奶牛冬痢病是一种世界范围内常见的急性肠道传染病,以患病个体排棕色稀便和下痢便血为主要特征,发病突然,传播速度快,可显著降低奶牛产量,给养殖户造成严重的经济损失。对该病要严格预防,一旦发病要早发现,早治疗,切断病原传播途径,防止传染。同时,要加强奶牛场的综合管理。

本试验旨在应用酶联免疫吸附法(ELISA)检测动物组织中氯霉素的残留。根据试剂盒操作说明对样本进行前处理,样品中的氯霉素与氯霉素酶结合物竞争结合酶标板微孔中固相化的氯霉素特异性抗体,根据酶催化显色剂显色的深浅来判断样品中氯霉素含量。试验结果显示,该方法对样品的检测限在0.1 μg/kg以下;以20~300 ng/kg浓度的氯霉素添加到动物源性产品中,其回收率范围74.4%~105.4%;变异系数在15%以下。结果表明建立的ELISA试剂盒能满足检测动物源性产品中氯霉素残留的需要。

近年来,动物细胞悬浮培养技术备受关注,该技术已广泛应用于各类生物制品及兽用疫苗的研究和生产过程中。细胞悬浮培养生产兽用疫苗既能降低成本, 也能提高产品质量。以生物反应器技术为基础的细胞悬浮培养技术平台正逐步被建立起来且日趋成熟,成为推动兽用疫苗生产快速发展的主要动力。文章介绍了细胞悬浮培养技术,并就该技术在兽用疫苗生产中的应用进行了论述。

乳汁体细胞数(somatic cell count,SCC)是检查奶牛乳房炎和牛奶质量的指标,为了解南宁某规模化奶牛场奶水牛SCC情况及SCC与其他乳成分的关系,试验随机选取该场152份泌乳早期乳样,测定其SCC、乳汁比重、蛋白质、脂肪、总固形物、非脂固形物及乳糖的含量,并对其进行相关性分析。结果表明,SCC小于50万/mL的乳样占被检奶样总数的88.16%,大于100万/mL的占1.97%;乳汁比重、乳蛋白、乳糖和非脂固形物含量均随着SCC的升高而下降,而乳脂含量随着SCC的升高而呈上升趋势;SCC与乳糖及非脂固形物含量呈极显著负相关(P<0.01)。因此,奶水牛乳中SCC不仅与乳糖和非脂固形物含量密切相关,也提示其与奶水牛产后营养代谢状况有关。

血凝试验和血凝抑制试验是检验新城疫、禽流感等疫病抗体效价的一种常用方法,该方法具有所需器材简单、操作方便、试验结果判定快速等优点,对保护动物健康和减少养殖损失有重要的临床指导意义。但该试验影响因素很多,常导致试验结果不准确。文章从试验器材、稀释液、抗原和阳性血清、待检血清、红细胞及其他影响因素进行综合分析,旨在避免或减少不利因素的影响,提高试验的准确性。

采用平板划线分离法从健康奶牛瘤胃液中分离得到1株细菌Y-1,体外模拟瘤胃环境增殖Y-1,进行形态学观察、生化反应和16S rDNA基因同源性比较,并对其进行系统发育树的构建等系统鉴定。结果表明,该细菌为浸麻类芽孢杆菌(Paenibacillus macerans),本研究还对瘤胃液中存在该菌的原因做了分析。