Q热贝纳柯克斯体TaqMan荧光定量PCR检测方法的建立

›› 2013, Vol. 40 ›› Issue (6): 69-72.

Q热贝纳柯克斯体TaqMan荧光定量PCR检测方法的建立

贾广乐, 王晓楠, 廖娟红, 林祥梅

中国检验检疫科学研究院, 北京 100121

收稿日期:2013-02-02 出版日期:2013-06-20 发布日期:2013-06-20
作者简介:贾广乐(1973―),男,山西人,博士生,副研究员,研究方向:动物检疫。
基金资助:
动物Q热检疫技术及标准研究(201110247)。

Establishment of Q Fever Coxiella burnetii TaqMan Fluorescent Quantitative PCR Detection Method

JIA Guang-le, WANG Xiao-nan, LIAO Juan-hong, LIN Xiang-mei

The Chinese Academy of Inspection and Quarantine, Beijing 100121, China

Received:2013-02-02 Online:2013-06-20 Published:2013-06-20

摘要/Abstract

摘要： 根据Q热贝纳柯克斯体(Coxiella burnetii)插入IS1111序列设计引物和探针,建立快速检测Q热的TaqMan实时荧光定量PCR方法。以梯度稀释含有目的扩增片段的重组质粒作为标准品,进行定量PCR反应。结果显示,该方法能够检测出10个拷贝数的阳性质粒;标准曲线相关系数为0.995,扩增效率为103%;结核分枝杆菌(M.tuberculosis)、衣原体(C.psittaci)、布鲁氏菌(Brucella.spp)及牛血液的核酸样本特异性检测结果均为阴性。本研究建立的TaqMan荧光定量PCR法灵敏度高、特异性好,对Q热的检测与鉴定中具有良好的应用前景。

关键词: Q热; 贝纳柯克斯体; 荧光定量PCR; TaqMan探针法

Abstract: Primers and probes were designed based on inserting sequence IS1111 of Q fever Coxiella burnetii, TaqMan Real-time quantitative PCR assay was developed for indentification Q fever. The recombinant plasmid containing the target sequence was constructed to detect the sensitivity and prepare the standard curve. The method could detect 10 of the plasmid copy number. Related coefficient was 0.995 of the standard curve, the amplification efficiency was 103%. The results of specific detection of nucleic acid sample for M. tuberculosis, Brucella. spp, C. psittaci and bovine blood were negative. TaqMan fluorescent quantitative PCR method was developed in this study and had high sensitivity and specificity. It had a good application prospects in the detection and identification of the Q fever.

Key words: Q fever; Coxiella burnetii; fluorescent quantitative PCR; TaqMan probe method

中图分类号:

S852.64

贾广乐, 王晓楠, 廖娟红, 林祥梅. Q热贝纳柯克斯体TaqMan荧光定量PCR检测方法的建立[J]. , 2013, 40(6): 69-72.

JIA Guang-le, WANG Xiao-nan, LIAO Juan-hong, LIN Xiang-mei. Establishment of Q Fever Coxiella burnetii TaqMan Fluorescent Quantitative PCR Detection Method[J]. , 2013, 40(6): 69-72.

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