【目的】 探讨湖羊蛋白酶体亚基β9(proteasome 20S subunit beta 9,PSMB9)基因编码区、启动子区序列特征、转录调控机制及其对成肌细胞增殖的影响。【方法】 采用克隆测序法获得湖羊PSMB9基因编码区序列,根据绵羊PSMB9基因组的定位确定其启动子区大小,并通过生物学软件分析PSMB9基因编码区和启动子区序列特性,采用Mega 5.0中的邻接法(Neighbor-Joining)构建基于PSMB9氨基酸序列的系统进化树;采用实时荧光定量PCR鉴定PSMB9基因在湖羊不同组织中的表达谱;利用双酶切法构建湖羊PSMB9基因过表达载体,采用CCK-8试剂盒检测细胞的增殖能力,通过实时荧光定量PCR检测PSMB9基因在C2C12细胞系中的过表达效果和增殖基因PCNA的表达水平。【结果】 湖羊PSMB9基因编码区长660 bp,编码219个氨基酸残基,其核苷酸序列和氨基酸序列与哺乳动物(如人、牛、猪和小鼠)的相似性较高,PSMB9氨基酸中活性位点和β亚基相互作用位点均高度保守;系统进化树显示,湖羊与牛先聚在一起,再与猪、人和小鼠聚在一起,说明PSMB9在哺乳动物中相对保守。PSMB9基因启动子区含有1个CpG岛、2个GC-box(CCGCCC)和2个E-box(CANNTG),且存在SP1、KLF4、STAT3、YY1、CREB1等多种转录因子潜在结合位点。组织表达谱显示,PSMB9基因在湖羊各组织中广泛表达,其中在脾脏中表达量最高,肌肉次之。与对照组相比,在C2C12细胞系中过表达PSMB9基因后极显著提升了细胞的增殖能力(P＜0.01),增殖标志基因PCNA表达水平极显著上调(P＜0.01)。【结论】 本研究成功克隆获得了湖羊PSMB9基因序列,该基因在哺乳动物中高度保守,启动子区含有重要调控元件、CpG岛和转录因子潜在结合位点。PSMB9基因在湖羊脾脏和肌肉组织中高表达,PSMB9基因过表达可促进成肌细胞的增殖。研究结果为进一步阐明PSMB9基因调控湖羊肌肉发育的分子机制提供依据。

【目的】 剑白香猪的毛色表型多为两头乌,但影响其毛色表型的候选基因鲜见报道。试验旨在筛选影响剑白香猪两头乌毛色的候选基因。【方法】 基于剑白香猪黑、白皮肤组织的转录组数据进行差异表达基因筛选,同时结合138头剑白香猪与130头北京黑猪50K芯片数据(Porcine SNP50 BeadChip)进行选择信号分析,通过GO功能和KEGG通路分析筛选影响剑白香猪毛色的候选基因。【结果】 在转录组分析中,554个基因在黑、白毛色皮肤组织中差异表达,其中295个上调,259个下调。共筛选到6个GO条目和2条KEGG通路,获得TYR、TYRP1、DCT、PLCB4等12个与毛色形成相关的候选基因。基于基因组数据进行群体间遗传分化指数(Fst)分析共筛选到3个GO条目、4条KEGG通路中PLCB4、FZD8、WNT2等32个候选基因可能参与剑白香猪毛色形成过程。【结论】 综合选择信号和转录组差异分析,两者共同筛选到的基因为PLCB4,可将其作为影响剑白香猪两头乌毛色表型的重要候选基因,为今后剑白香猪毛色形成相关分子调控机制研究提供参考。

【目的】 旨在对1株具有较强耐酸耐胆盐特性的猪源动物联合乳杆菌S7进行全基因组测序及生物信息学分析。【方法】 结合三代PacBio RS Ⅱ和二代Illumina HiSeq 2000测序技术对动物联合乳杆菌S7进行了全基因组测序,在此基础上使用GO、EggNOG、KEGG、CAZy、VFDB和CARD等数据库注释功能基因,利用TYGS(Type Strain Genome Server)构建系统发育树,并与2株同源模式菌株进行了共线性分析。【结果】 动物联合乳杆菌S7的基因组大小为2.03 Mb,GC含量为44.14%,共预测到1 993个编码基因,包含65个tRNA、19个rRNA、35个sRNA、29个持家基因、11个基因组岛、6个前噬菌体、4个CRISPR-Cas、8个插入序列和10个转座子;分别有1 521、1 567、1 185和60个基因在GO、EggNOG、KEGG和CAZy数据库中得到注释;在VFDB和CARD数据库中注释到181个毒力基因和110个耐药基因;另外有14个基因参与耐酸,2个基因参与耐胆盐,22个基因参与黏附和聚集;基因组中还包括与温度应激、氧化应激和细菌素合成等多种与益生功能相关的基因。系统发育树和共线性分析发现,该菌株与模式菌株Ligilactobacillus animalis P38的进化关系最近。【结论】 动物联合乳杆菌S7基因组中具有与耐酸、耐胆盐、黏附和聚集、温度应激、氧化应激和细菌素等相关的功能基因,可为菌株在饲料添加剂中的科学应用提供理论依据。

【目的】 探讨鸡热休克蛋白8(heat shock protein family A member 8,HSPA8)的生物学特性及其在应激状态下胸腺中的表达模式。【方法】 试验以固始鸡胸腺为材料,利用PCR技术扩增并克隆HSPA8基因CDS区,通过生物信息学方法分析其生物学特性和结构特点,并检测其在不同组织中的相对表达量。构建断喙应激和热应激模型,采用实时荧光定量PCR技术检测炎症因子和HSPA8基因在不同应激模型鸡胸腺中的表达情况。【结果】 鸡HSPA8基因CDS区长度为1 941 bp,共编码氨基酸646个,与红原鸡基因序列相似性为98.92%;HSPA8基因核苷酸序列的系统发育树结果表明,固始鸡与火鸡亲缘关系最近,与哺乳动物次之,与低等鱼类亲缘关系最远;HSPA8蛋白属于酸性蛋白,稳定性和亲水性强,不属于分泌蛋白且无跨膜结构域,有多个磷酸化和糖基化修饰位点,主要在细胞核内发挥作用,具有2个保守性结构域,与DNAJC5、HSPB1、DNAJA1和GAK等蛋白存在相互作用;HSAP8基因在雏鸡各组织中广泛表达,其中在胰腺中表达量最高,在胸肌中表达量最低;应激模型评价结果发现,断喙应激和热应激导致鸡血清皮质酮、白细胞介素-6(IL-6)和肿瘤坏死因子-α(TNF-α)等含量显著增加(P＜0.05),T细胞亚群(CD3⁺)和免疫球蛋白G(IgG)含量有所降低;断喙应激模型鸡胸腺中IL-1β、IL-6、TNF-α和IL-8基因表达量在第1天显著升高(P＜0.05),第5天显著降低(P＜0.05);热应激模型鸡胸腺中IL-1β、IL-6、TNF-α和IL-8基因表达量显著升高(P＜0.05);HSPA8基因在断喙后第1和3天胸腺中表达量显著升高(P＜0.05),第5天显著降低(P＜0.05);在持续热应激组中显著降低(P＜0.05)。【结论】 HSPA8基因参与鸡胸腺应激性免疫应答反应,可作为反映家禽是否处于应激性免疫抑制状态的可靠指标。以上结果为进一步研究HSPA8的免疫调控功能提供参考依据。

随着抗生素滥用引发的耐药性问题的日益严重,新型抗菌药物的开发利用迫在眉睫,传统中草药(traditional Chinese medicine,TCM)具有多靶点、副作用小、抗耐药性和广谱等优点,在抗菌方面具有广泛应用和显著效果。随着测序技术、高分辨率质谱等的发展,转录组学、蛋白质组学与代谢组学技术被广泛应用于中药抗菌机制的研究。转录组学技术可用于筛选和验证差异表达基因,以了解中药和细菌之间的相互作用途径。蛋白质组学可帮助识别中药中的活性成分,并解析其与致病菌蛋白质之间的相互作用。代谢组学技术可用于检测代谢产物的变化,以识别在中药和细菌之间的相关代谢物的差异。然而,单一的组学研究具有一定的局限性,多组学联合分析可更全面地了解细菌与宿主之间的相互作用及中药对细菌感染的调控机制。笔者从转录组学、蛋白质组学、代谢组学及多组学联用技术方面系统性总结了中药抗菌活性及中药影响群体感应、生物膜形成、物质代谢和氧化应激反应等抗菌机制的研究,旨在为中药抗菌机理的解析和抗菌药物筛选开发提供理论依据。

【目的】 研究大麻二酚(CBD)对脂多糖(LPS)诱导的小鼠乳腺上皮细胞(HC11)炎症反应及细胞凋亡的影响。【方法】 试验将HC11细胞分为对照组、LPS组和不同浓度CBD＋LPS共处理组(CBD浓度分别为2、4、6 μmol/L)。对照组细胞仅加入培养液,LPS组加入LPS处理,CBD＋LPS共处理组用不同浓度CBD预处理1 h后加入LPS,24 h后收集各组细胞样品。利用ELISA法检测细胞中炎症因子含量;使用实时荧光定量PCR、Western blotting分别检测细胞炎症因子及核因子κB(NF-κB)、丝裂原活化蛋白激酶(MAPK)信号通路相关基因mRNA和蛋白的表达水平;通过AnnexinV-FITC/碘化丙啶(PI)和JC-1染色法分别检测细胞凋亡率和线粒体膜电位水平。【结果】 与对照组相比,LPS组细胞中肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白细胞介素-1β(IL-1β)、IL-6含量及mRNA表达水平均极显著或显著升高(P＜0.01;P＜0.05),NF-κB p65、核因子-κB抑制蛋白α(IκBα)、细胞外信号调节激酶(ERK)、丝裂原活化蛋白激酶(p38)、应激活化蛋白激酶(JNK)的mRNA表达量和蛋白磷酸化水平极显著或显著升高(P＜0.01;P＜0.05)。与LPS组相比,不同浓度CBD与LPS共处理后细胞中TNF-α、IL-1β、IL-6含量及mRNA表达量均极显著或显著降低(P＜0.01;P＜0.05),NF-κB p65、IκBα、ERK、p38、JNK的mRNA表达量和蛋白磷酸化水平均极显著或显著降低(P＜0.01;P＜0.05)。细胞凋亡率和线粒体膜电位检测结果显示,与对照组相比,LPS组HC11细胞凋亡率显著升高(P＜0.05),线粒体膜电位显著降低(P＜0.05)。与LPS组相比,4 μmol/L CBD和LPS共处理后,HC11细胞凋亡率显著降低(P＜0.05),线粒体膜电位显著升高(P＜0.05)。【结论】 在LPS诱导的小鼠HC11细胞炎症及凋亡模型中,适宜浓度CBD能抑制NF-κB和MAPK信号通路的激活,从而抑制炎症因子的释放来缓解炎症反应;同时能降低LPS诱导的HC11细胞凋亡率、上调细胞线粒体膜电位,从而抑制细胞凋亡发生。

【目的】 探讨人工补光对阿山马鹿茸生长及粪便激素水平的影响。【方法】 选取成年健康阿山马鹿36头,随机分为补光组和自然光照组,每组18头,补光组于2月1日起按照试验地点的日出日落时刻表,采用投光灯进行补光试验(于2月模拟3月光照,以此类推,直至5月底)。试验期间每隔7 d采用部分收粪法收集每个鹿圈的5个不同位点的新鲜粪便样品,并测量鹿茸长度,割茸时称量鲜茸重;采用酶联免疫法检测粪便中睾酮、雌二醇、褪黑素含量。采样监测持续到8月底。【结果】 与自然光照组相比,补光组马鹿提前10 d脱盘,两组马鹿头茬茸重无显著差异(P＞0.05),但补光组长茸时长较自然光照组延长11.18 d、二茬茸重提高28.30%(P＜0.05);补光组马鹿2、4月粪便睾酮含量显著或极显著低于自然光照组(P＜0.05;P＜0.01),2、3、5月粪便雌二醇含量显著或极显著高于自然光照组(P＜0.05;P＜0.01),2、3、4、5月粪便褪黑素含量极显著低于自然光照组(P＜0.01);补光结束后,两组间粪便激素水平及变化规律基本一致。【结论】 人工补光可促使马鹿提前脱盘,延长长茸时间,提高鹿茸产量,并一定程度上降低粪便睾酮和褪黑素水平、提高雌二醇水平。

【目的】 探究饲粮中添加刺梨渣(Rosa roxburghii Tratt. residue)对鲤鱼肠道组织形态、抗氧化能力、免疫力及代谢组学的影响,以期为刺梨渣饲料在贵州山区农村稻田养鱼中的推广应用提供科学依据。【方法】 选取180尾健康无病、初始体重为25 g±1 g的鲤鱼,随机分为正常组(基础饲料中不添加刺梨渣)和刺梨渣饲喂组(基础饲料中添加0.4%刺梨渣),每组设3个重复,每个重复30尾,试验期60 d。试验结束后,采集鲤鱼中段肠道,通过显微镜观察、ELISA检测和基于液相色谱的代谢组学技术分析鲤鱼肠道组织形态、抗氧化能力、免疫力及代谢组学。【结果】 与正常组相比,饲喂刺梨渣对鲤鱼肠道的正常结构无不良影响,且肠道绒毛长度和肌层厚度均极显著增加(P＜0.01);刺梨渣饲喂组鲤鱼肠道中谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)活性显著升高(P＜0.05),肿瘤坏死因子-α(TNF-α)含量显著降低(P＜0.05);刺梨渣饲喂组共显著富集到2-酮丁酸、L-(+)-乳酸、丙酸、琥珀酸、D-天冬氨酸、D-谷氨酰胺、黄嘌呤核苷、次黄嘌呤、胸腺嘧啶、尿嘧啶和D-焦谷氨酸等85种差异代谢物,这些代谢物主要富集到丙酸盐代谢,丙氨酸、天门冬氨酸和谷氨酸代谢,嘌呤代谢,嘧啶代谢等代谢通路。【结论】 饲粮中添加刺梨渣可提高鲤鱼肠道组织抗氧化性能和免疫指标,可通过影响嘌呤和嘧啶代谢以及相关代谢物D-谷氨酰胺、黄嘌呤核苷、次黄嘌呤、胸腺嘧啶、2'-脱氧尿苷-5'-单磷酸盐和尿嘧啶等来改善鲤鱼肠道健康,进而提高机体免疫力。

【目的】 分析不同驴皮转化效率德州公驴的背部和颈部皮肤、粪便微生物群落的差异定植规律。【方法】 基于3 000头驴皮厚度均一的德州黑毛驴(公)群体,饲喂相同基础饲粮,对背部和颈部皮肤厚度进行连续监测,筛选出驴皮(背部和颈部)厚度增量高、低组各7头,通过测定16S rRNA扩增所获序列,进行背部和颈部皮肤、粪便微生物群落的组成和功能分析。【结果】 驴皮厚度增量高、低组间驴皮厚度变化存在显著差异(P＜0.05),背部和颈部皮肤、粪便微生物Alpha多样性均无显著差异(P＞0.05),而主坐标分析(principal co-ordinates analysis,PCoA)显示两组间的微生物群落聚类有不同程度的差异(P＜0.05),韦恩图显示两组驴皮背部和颈部皮肤、粪便微生物均存在共有扩增子序列变异(amplicon sequence variant,ASV)或特有ASV。门水平显示,两组的不同部位以厚壁菌门、放线菌门、绿弯菌门、变形菌门、拟杆菌门等为主要优势菌;属水平显示,两组的不同部位以狭义梭菌属1、棒状杆菌属、链球菌属、鸟氨酸微菌属为优势菌属,其中链球菌属为粪便的优势菌属,鸟氨酸微菌属为颈部和背部皮肤的优势菌属。通过差异物种分析,与颈部驴皮厚度增量低组相比,23个属水平菌富集于颈部驴皮厚度增量高组;与背部驴皮厚度增量低组相比,7个属水平菌富集于颈部驴皮厚度增量高组;与驴皮厚度增量低组的粪便相比,13个属水平菌富集于驴皮厚度增量高组的粪便。【结论】 驴皮厚度增量不同的德州驴皮肤微生物群落结构、功能存在差异,相比粪便,皮肤组织的微生物多样性具有更高的趋势。本研究结果为解析德州驴微生物定植规律、驴皮转化效率潜在调控机制提供了理论依据。

【目的】 探讨“2＋2”(1对亲鸽1个繁殖周期哺育2只乳鸽)生产模式条件下种鸽饲粮粗蛋白质水平对乳鸽生长性能、屠宰性能及肠道微生物菌群及结构的影响。【方法】 选取繁殖性能相近的12~18月龄健康哺育期塔里木鸽种鸽60对,共分5个处理组,每个处理组12对种鸽,每对种鸽哺育2只乳鸽,饲喂能量水平为12.64 MJ/kg、粗蛋白质(CP)水平分别为12%、13%、14%、15%、16%的饲粮。预饲期3 d,正式试验期28 d。每3 d测定乳鸽体重,待乳鸽28日龄出雏后,每组选取8只乳鸽进行屠宰,并测定其屠宰性能及空肠肠道菌群结构。【结果】 ①种鸽饲粮粗蛋白质水平对乳鸽体重和平均日增重均有显著影响(P＜0.05)。乳鸽体重随着日龄增加呈线性增加,乳鸽平均日增重先降低后升高,呈二次曲线变化(P＜0.05),其中CP13%组乳鸽平均日增重最大。②种鸽饲粮粗蛋白质水平对乳鸽屠宰率、腹脂率、胸肌率和翅膀率均有显著影响(P＜0.05),其中CP16%组乳鸽屠宰率显著高于CP13%和CP14%组(P＜0.05)。③在门水平上,乳鸽肠道菌群各组排名前十的有放线菌门、厚壁菌门、TM7、蓝菌门、变形菌门、拟杆菌门、软壁菌门、OP11、绿弯菌门、芽单胞菌门,其中CP16%组变形菌门相对丰度显著高于CP14%、CP15%组(P＜0.05);在科水平上,各组排名前十的有棒状杆菌科、乳杆菌科、红蝽菌科、梭菌科、丹毒丝菌科、肠球菌科、韦荣球菌科、放线菌科、双歧杆菌科、Rs-045,其中CP14%、CP15%、CP16%组红蝽菌科相对丰度显著高于CP12%组(P＜0.05),CP14%、CP16%组双歧杆菌科相对丰度显著高于CP12%、CP13%组(P＜0.05);在属水平上,各组排名前十的有棒状杆菌属、乳杆菌属、奇异菌属、分节丝状菌属、肠球菌属、韦荣氏球菌属、双歧杆菌属、布雷德菌属、放线菌属、动弯杆菌属,其中CP14%、CP16%组双歧杆菌属相对丰度显著高于CP12%、CP13%组(P＜0.05);CP15%、CP16%组奇异菌属相对丰度显著高于CP12%组(P＜0.05);CP16%组韦荣氏球菌属相对丰度显著高于CP12%组(P＜0.05)。【结论】 在本试验条件下,“2＋2”生产模式下种鸽饲粮粗蛋白质水平为13%时乳鸽平均日增重最大,屠宰性能较优,种鸽不同粗蛋白质水平饲粮对乳鸽28日龄空肠菌群结构有一定影响。乳鸽生长性能较为适宜的种鸽饲粮粗蛋白质水平为13%。

【目的】 本试验分别采用硒代蛋氨酸法和改进体外三步法评估3种过瘤胃蛋氨酸(A、B、C)的生物利用率,并对两种方法所得结果进行相关性分析和回归分析,旨在探究两种方法之间的关系。【方法】 ①硒代蛋氨酸法:选用33头健康泌乳奶牛,按照随机区组试验设计分为3组,试验期共32 d,分为3个阶段,其中前7 d为预饲期(第0阶段),第8~22天为第1阶段,随后10 d为第2阶段。第0阶段奶牛仅饲喂基础饲粮,第1阶段所有奶牛均按照0.3 mg Se/kg DM补充硒酵母,第2阶段继续补充相同剂量的硒酵母,同时依据相同有效蛋氨酸的量(25 g/d),3组奶牛分别补充过瘤胃蛋氨酸A(33.3 g/d,A组)、B(29.4 g/d,B组)和C(56.82 g/d,C组)。在第22和32天采集奶样,用于硒、蛋氨酸和氮浓度的测定,以硒浓度/蛋氨酸浓度(硒浓度/氮浓度)比值的变化评估3种过瘤胃蛋氨酸的生物利用率。②改进体外三步法:选用3头安装瘤胃瘘管的泌乳奶牛,3种过瘤胃蛋氨酸各设置2个平行,3个重复,通过瘤胃孵育、体外模拟胃-小肠消化测定干物质(DM)和粗蛋白质(CP)的过瘤胃率和小肠消化率以评估其生物利用率。③分析两种方法之间的相关性并建立回归方程。【结果】 硒代蛋氨酸法结果表明,过瘤胃蛋氨酸A基于牛奶硒浓度/蛋氨酸浓度和牛奶硒浓度/氮浓度比值变化计算的生物利用率分别为:83.02％和81.42％,过瘤胃蛋氨酸B的分别为:72.94％和72.47％,过瘤胃蛋氨酸C的分别为:51.77％和50.98％。改进体外三步法结果显示,过瘤胃蛋氨酸A、B和C的生物利用率分别为86.87％、75.47％和59.56％。比较两种方法的测定结果,二者无显著差异(P＞0.05),且呈极显著正相关(r＝0.867~0.964,P＜0.01)。【结论】 在本试验条件下,硒代蛋氨酸法和改进体外三步法均能用于3种过瘤胃蛋氨酸的生物利用率的测定,且两种方法间存在较强的正相关关系。

【目的】 解析林下菊苣草地放养与传统笼养对北京油鸡盲肠菌群和代谢物的影响。【方法】 将体重相近的10周龄北京油鸡母鸡随机分为3组,即林下菊苣草地放养组(T1组,放养密度100只/667 m²;T2组,放养密度120只/667 m²)和传统笼养对照组(CK),草地放养组采用草地放养与基础饲粮补饲相结合方式,传统笼养组仅饲喂基础饲粮,试验期95 d。饲养试验结束后采集盲肠内容物,在16S rRNA高通量测序的基础上分析微生物群落丰富度和多样性、菌群结构,采用液相色谱-质谱联用(LC-MS)代谢组学分析差异代谢物和KEGG富集通路。【结果】 与CK组相比,T1组北京油鸡盲肠菌群的Sobs指数、Chao1指数、Ace指数和Shannon指数均有所提高,Simpson指数有所降低,但均未达到显著水平(P＞0.05);T2组北京油鸡盲肠菌群的Sobs指数、Chao1指数和Ace指数分别提高41.3%、33.6%和34.7%(P＜0.05)。与CK组相比,T1和T2组北京油鸡盲肠中扭链瘤胃球菌属、理研菌科_RC9菌属、欧陆森氏菌属、未分类毛螺菌科和瘤胃球菌科UCG-005菌属的相对丰度均有一定程度提高,但未达到显著水平(P＞0.05);T1和T2组北京油鸡盲肠差异代谢物主要富集在萜类化合物和聚酮类化合物的代谢、植物次生代谢产物的生物合成、脂质代谢和氨基酸代谢途径。【结论】 林下菊苣草地放养提高了北京油鸡盲肠内有益菌的相对丰度,影响了北京油鸡的脂质代谢途径和氨基酸代谢途径,可起到控制体脂、提高必需氨基酸含量和免疫性能等一系列良性作用。

【目的】 研究褪黑素(melatonin,MT)对羊肉抗氧化能力和肉品质的影响,探究MT在体外条件下是否具有改善肉品质和延长货架期的能力。【方法】 选取体重相近(36.23 kg±0.31 kg)的5月龄湖羊,采集背最长肌分割后随机分为4组,对照组羊肉浸泡在蒸馏水中,试验Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ组羊肉分别浸泡在含3、6和9 ng/mL MT的溶液中,30 min后沥干装入自封袋4 ℃贮存,在试验第1天对其MT含量进行测定,在试验第1、4、7、10和13天对其抗氧化能力和肉品质进行测定,并在试验12、36、84、132、180、228 h测定羊肉中挥发性盐基氮(total volatile base nitrogen,TVB-N)含量。【结果】 与对照组相比,试验Ⅰ、Ⅱ和Ⅲ组羊肉MT含量极显著升高(P＜0.01);在试验第1、4、7天试验Ⅲ组羊肉总抗氧化能力(T-AOC)显著升高(P＜0.05),试验Ⅱ、Ⅲ组羊肉丙二醛(MDA)含量极显著降低(P＜0.01);在试验第7、10、13天试验Ⅱ、Ⅲ组羊肉pH显著降低(P＜0.05),试验Ⅰ组羊肉滴水损失极显著降低(P＜0.01),试验Ⅰ、Ⅱ和Ⅲ组羊肉货架期分别延长9.11、12.89、14.91 h。【结论】 MT在体外具有一定提高羊肉抗氧化和改善肉品质的能力,且可以延长羊肉货架期,建议添加浓度为3 ng/mL。

【目的】 探究花椒籽粕替代豆粕对肉鸡生长性能、屠宰性能、血清生化指标、抗氧化能力和免疫功能的影响,为减少肉鸡对豆粕的依赖提供有效的途径。【方法】 选取健康、体重相近(48.87 g±0.15 g)的1日龄爱拔益加肉仔鸡180只,随机分为3个处理组,每组6个重复,每个重复10只鸡。对照组(CON)肉鸡饲喂基础饲粮,试验组肉鸡使用2.5%(ZBM-1)和7.5%(ZBM-2)花椒籽粕替代基础饲粮中的豆粕。试验期42 d,研究花椒籽粕替代豆粕对肉鸡生长性能、屠宰性能、血清生化指标、抗氧化能力和免疫功能的影响。【结果】 ①与对照组相比,ZBM-2组肉鸡在1~21、22~42和1~42 d的平均日增重、平均日采食量和料重比均显著升高(P＜0.05)。②ZBM-2组肉鸡全净膛率显著高于对照组和ZBM-1组(P＜0.05)。③与对照组相比,ZBM-1和ZBM-2组肉鸡肌肉滴水损失和蒸煮损失均显著降低(P＜0.05)。④与对照组相比,ZBM-2组21 d肉鸡血清中白蛋白和球蛋白含量均显著升高(P＜0.05),而谷丙转氨酶活性显著降低(P＜0.05);ZBM-2组42 d肉鸡血清中白蛋白和球蛋白含量,以及碱性磷酸酶活性均显著升高(P＜0.05),而总胆固醇含量则显著降低(P＜0.05)。⑤与对照组相比,ZBM-2组21和42 d肉鸡血清中总抗氧化能力、免疫球蛋白A、免疫球蛋白M含量,以及超氧化物歧化酶和谷胱甘肽过氧化物酶活性均显著升高(P＜0.05),而丙二醛含量显著降低(P＜0.05)。【结论】 在本试验条件下,饲粮中使用花椒籽粕替代豆粕可以提高肉鸡肉品质、抗氧化能力和免疫功能。花椒籽粕在肉鸡饲粮中的添加量建议为2.5%。

【目的】 试验旨在研究饲料中添加发酵桑叶粉(FML)对黄羽肉鸡生长性能、抗氧化和免疫能力及肠道菌群结构的影响。【方法】 选取初始体重为(40.07±0.05) g的1日龄黄羽肉鸡540只,随机分为3组,每组6个重复,每个重复30只鸡。在育雏期、生长期和育成期分别投喂添加0(对照组)、4.5% FMLP(FML45组)和9.0% FMLP(FML90组)的3种等氮等能试验饲料,试验期为50 d。于21、42和50日龄以重复为单位对试验鸡空腹称重并统计采食量,计算生长性能;于50日龄每重复选取3只接近平均体重的试验鸡采血和屠宰,测定血清抗氧化指标;取回肠黏膜评价抗氧化和免疫功能,取回肠内容物测定肠道菌群结构。【结果】 与对照组相比,①FML90组试验鸡体重(BW)和平均日增重(ADG)均显著降低(P＜0.05),料重比(F/G)显著升高(P＜0.05),平均日采食量(ADFI)呈升高趋势(P=0.084),各组间死亡率无显著差异(P＞0.05)。②FML45和FML90组试验鸡血清中超氧化物歧化酶(SOD)活性显著升高(P＜0.05),各组间血清中丙二醛(MDA)含量、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)活性和总抗氧化能力(T-AOC)无显著差异(P＞0.05);FML45组试验鸡回肠T-AOC显著高于对照组和FML90组,各组间回肠中MDA含量、GSH-Px和SOD活性无显著差异(P＞0.05)。③FML90组试验鸡回肠中分泌型免疫球蛋白A(SIgA)含量显著增加(P＜0.05),各组间白介素1β(IL-1β)、IL-10、肿瘤坏死因子α(TNF-α)、转化生长因子β(TGF-β)和补体3(C3)含量均无显著差异(P＞0.05)。④各组间回肠菌群在门水平相对丰度无显著差异(P＞0.05);FML45和FML90组回肠普拉梭菌(Faecalibacterium)相对丰度显著升高(P＜0.05),真细菌未分类属(unclassified_o_Eubacteriales)和颤螺菌未分类属(unclassified_o_Oscillospiraceae)相对丰度显著降低(P＜0.05),考拉杆菌属(Phascolarctobacterium)相对丰度呈升高趋势(P=0.067);Ace指数和Chao1指数显著降低(P＜0.05)。【结论】 饲粮中添加发酵桑叶粉能增强肉鸡的免疫和抗氧化能力,提高肠道有益菌群的相对丰度,但过量添加会降低其生长性能,建议黄羽肉鸡饲粮中发酵桑叶粉的添加量为4.5%。

【目的】 试验旨在研究在饲粮中添加发酵香菇渣对育肥猪生长性能、肌肉品质和风味物质的影响。【方法】 选取100头体重接近(68.00 kg±0.50 kg)且健康状况基本一致的杜×长×大三元杂交育肥猪,随机分为2组,每组10个重复,每个重复5头猪,对照组育肥猪饲喂基础饲粮,试验组育肥猪在基础饲粮中添加3%的发酵香菇渣。预试期3 d,正试期59 d。待2组猪平均体重达到120 kg后,从每个重复里随机挑选1头接近平均体重的猪进行屠宰,共20头。试验结束后称重,统计试验猪生长性能;静脉采集血液检测血清生化指标;试验猪屠宰后进行胴体分割,测定胴体性状,采集背最长肌测定肌纤维类型基因mRNA表达水平、肉品质与风味物质。【结果】 与对照组相比,①试验组育肥猪的生长性能、胴体性状和血清生化指标没有显著变化(P＞0.05),但宰后24 h育肥猪背最长肌红度值a^*显著提高(P＜0.05),育肥猪背最长肌中干物质、粗蛋白质和粗脂肪含量均显著提高(P＜0.05);②试验组育肥猪背最长肌中油酸和总单不饱和脂肪酸比例均显著提高(P＜0.05);苦味氨基酸中亮氨酸含量显著下降(P＜0.05),鲜味氨基酸中谷氨酸含量和等效鲜味浓度均显著增加(P＜0.05);③试验组背最长肌滋味和咀嚼性均显著增强(P＜0.05),多汁性显著改善(P＜0.05);基于顶空固相微萃取-气相色谱-质谱联用法,在两个组中鉴定到共同的挥发性风味物质共12种,其中在试验组育肥猪背最长肌肉中正庚醇、3-甲基丁醇、苯乙醇、苯甲醛、己醛、癸醛、长叶烯和1-辛烯-3-醇的相对含量均显著提高(P＜0.05);④试验组育肥猪背最长肌中氧化型肌纤维肌球蛋白重链Ⅰ型和Ⅱa型的mRNA相对表达水平显著增加(P＜0.05)。【结论】 在饲粮中添加3%香菇渣对育肥猪的生长性能和胴体性状没有显著影响,但是能够提高宰后背最长肌肉色,增强呈味氨基酸和呈味核苷酸的协同作用,并能够促进挥发性风味物质的沉积,提高氧化型肌纤维比例,从而改善肌肉品质。

【目的】 饲料在贮存过程中因水分含量、环境温度、湿度等因素的影响,极易发生霉变并产生霉菌毒素,如何减少霉菌毒素对饲料的污染是目前亟待解决的问题。试验旨在研究凹凸棒石粉、沸石和蒙脱土3种铝硅酸盐类吸附剂及甘露低聚糖对黄曲霉毒素B₁(aflatoxin B₁,AFB₁)、脱氧雪腐镰刀菌烯醇(deoxynivalenol,DON)、玉米赤霉烯酮(zearalenone,ZEN)、赭曲霉毒素A(ochratoxins A,OTA)和T-2毒素5种毒素的体外吸附效果。【方法】 通过酶联免疫吸附法(ELISA)测定凹凸棒石粉、沸石、蒙脱土和甘露低聚糖在添加量为0.25%、0.5%、1%和2%时对5种毒素的吸附率,以及在不同pH条件下各吸附剂对5种毒素的吸附率及解吸率。【结果】 ①添加量、吸附剂及二者之间的互作对5种毒素吸附率均有极显著影响(P＜0.01)。其中,与其他3种添加量相比,添加量为2%时对5种毒素的吸附率极显著升高(P＜0.01);蒙脱土对5种毒素的吸附率极显著高于凹凸棒石粉、沸石和甘露低聚糖(P＜0.01)。②在添加量相同的条件下,甘露低聚糖、凹凸棒石粉和蒙脱土在pH 10.0时对AFB₁的吸附率极显著高于pH 4.0(P＜0.01);4种吸附剂在pH 10.0时对DON的吸附率极显著高于pH 4.0(P＜0.01);沸石在pH 10.0时对OTA的吸附率极显著高于pH 4.0(P＜0.01),凹凸棒石粉在pH 4.0时对OTA的吸附率极显著高于pH 10.0(P＜0.01)。在添加量为1%时,4种吸附剂在pH 10.0时对ZEN和T-2毒素的吸附率极显著高于pH 4.0(P＜0.01);在添加量为0.5%时,甘露低聚糖和沸石在pH 10.0时对ZEN的吸附率极显著高于pH 4.0(P＜0.01),凹凸棒石粉、沸石和蒙脱土在pH 4.0时对T-2毒素的吸附率极显著高于pH 10.0(P＜0.01)。③在pH 4.0的离心沉淀中加入pH 7.0的PBS后,蒙脱土对5种毒素的解吸率均极显著低于凹凸棒石粉和沸石(P＜0.01);再次在pH 7.0的离心沉淀中加入甲醇后,蒙脱土和沸石对5种毒素的解吸率均极显著低于凹凸棒石粉(P＜0.01)。【结论】 添加量为2%时,4种吸附剂对AFB₁、DON、ZEN、OTA和T-2毒素的吸附率从高到低为蒙脱土＞沸石＞凹凸棒石粉＞甘露低聚糖;4种吸附剂在pH 10.0且添加量为1%时对AFB₁、DON和ZEN的吸附率较高;将pH 4.0的吸附环境改为pH 7.0或甲醇后,3种吸附剂对DON、ZEN、OTA和T-2毒素的解吸率从低到高为蒙脱土＞沸石＞凹凸棒石粉。

【目的】 试验旨在研究高精料饲粮中添加辣蓼对绵羊瘤胃发酵参数、菌群数量、乳酸代谢及酶活性的影响。【方法】 选取40只体重(23.26±0.33) kg的3月龄杜寒杂交公羔,随机分为4组,每组10只。基础饲粮精粗比为75∶25,辣蓼添加量分别为0(对照组)、5(L1组)、10(L2组)和15 g/d(L3组)。预饲期15 d,正式期60 d,共计75 d。正式期结束当天晨饲3 h后,对所有试验羊进行瘤胃液采集,用于后续瘤胃发酵参数、瘤胃微生物酶活、瘤胃乳酸代谢和瘤胃菌群的测定。【结果】 ①L3组绵羊瘤胃液中总挥发性脂肪酸(TVFA)含量显著高于对照组和L1组(P＜0.05),丙酸含量显著高于其他3组(P＜0.05),乙丙比显著低于对照组,氨态氮(NH₃-N)含量显著低于L1组和对照组(P＜0.05),微生物蛋白(MCP)含量显著高于L1组和对照组(P＜0.05);L2组绵羊瘤胃液中丙酸和MCP含量显著高于对照组(P＜0.05),乙丙比和NH₃-N含量显著低于对照组(P＜0.05);L1组绵羊瘤胃液中NH₃-N含量显著低于对照组(P＜0.05)。②L2和L3组绵羊瘤胃液中纤维二糖酶活性显著高于对照组(P＜0.05),蛋白酶活性显著低于对照组(P＜0.05);L3组绵羊瘤胃液中蛋白酶活性还显著低于L1组(P＜0.05),α-淀粉酶活性显著高于L1组和对照组(P＜0.05)。③L3组绵羊瘤胃液中乳酸含量显著低于对照组和L1组(P＜0.05),乳酸脱氢酶活性显著低于其他3组(P＜0.05);3个试验组绵羊瘤胃液中丙酮酸含量和丙酮酸激酶活性均显著高于对照组,且L3组显著高于L2和L1两组(P＜0.05)。④L3组绵羊瘤胃液中总产甲烷菌数量显著低于对照组(P＜0.05),总原虫和栖瘤胃普雷沃氏菌数量显著低于L1组和对照组(P＜0.05),白色瘤胃球菌数量显著高于对照组(P＜0.05),嗜淀粉瘤胃杆菌数量显著高于L1组和对照组(P＜0.05);L2组绵羊瘤胃液中总原虫和栖瘤胃普雷沃氏菌数量均显著低于对照组(P＜0.05),嗜淀粉瘤胃杆菌数量显著高于对照组(P＜0.05)。【结论】 高精料饲粮中添加辣蓼可以调控瘤胃菌群,改善瘤胃发酵,降低乙丙比,增加MCP含量,降低NH₃-N浓度,通过调控乳酸代谢相关酶活性减少乳酸的堆积,本试验条件下最适添加量为15 g/d。

【目的】 本试验旨在研究地顶孢霉培养物对北京鸭生长性能、屠宰性能、血常规及血清生化、抗氧化指标的影响。【方法】 选取216只1日龄健康雄性北京鸭(51.36 g±0.15 g),随机分成3组,每组8个重复,每重复12只鸭,分别饲喂在玉米-豆粕型基础饲粮中添加0(对照组)、0.1%、0.2%地顶孢霉培养物的饲粮,饲喂期42 d。统计试验鸭生长性能和屠宰性能,并采集全血和血清样品,测定血常规、血清生化生理和抗氧化指标。【结果】 ①饲粮中添加0.1%和0.2%地顶孢霉培养物对北京鸭生长性能均无显著影响(P＞0.05)。②0.1%地顶孢霉培养物组北京鸭胸肌率显著高于对照组和0.2%添加组(P＜0.05);0.2%地顶孢霉培养物组北京鸭肝脏指数显著低于对照组(P＜0.05)。③与对照组相比,0.2%地顶孢霉培养物组北京鸭血液中淋巴细胞(LYM)和中间细胞数量(MID)以及红细胞宽度标准差(RDW-SD)显著提高,红细胞(WBC)和粒细胞数量(GRA)显著降低(P＜0.05)。④与对照组相比,0.1%和0.2%地顶孢霉培养物组北京鸭血清葡萄糖含量显著降低(P＜0.05),0.1%地顶孢霉培养物组北京鸭血清中甘油三酯含量显著降低(P＜0.05)。⑤与对照组相比,0.1%和0.2%地顶孢霉培养物组42日龄北京鸭血清中总超氧化物歧化酶(T-SOD)、过氧化氢酶(CAT)和谷胱甘肽还原酶(GR)活性均显著提高(P＜0.05);与对照组和0.1%地顶孢霉培养物组相比,0.2%地顶孢霉培养物组42日龄北京鸭血清中谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)活性和总抗氧化能力(T-AOC)均显著提高(P＜0.05)。【结论】 饲粮中添加0.1%和0.2%地顶孢霉培养物未能提高北京鸭生长性能和器官发育,但可显著提高北京鸭胸肌率、机体免疫和抗氧化能力,促进机体葡萄糖和脂肪代谢。

【目的】 研究晋南牛、平陆山地牛和"太行云牛"3个群体的遗传多样性、遗传结构和遗传分化情况,为山西地方牛品种保护提供数据支持。【方法】 采用12个微卫星标记对3个群体共230个个体进行PCR扩增、测序和分型,并对各群体的等位基因数、遗传杂合度、多态信息含量以及群体间的遗传距离等参数进行评估。【结果】 12个微卫星标记中等位基因数为2~15个。3个群体的有效等位基因数、观测杂合度、期望杂合度、多态信息含量的平均值分别为3.205~4.611、0.680~0.735、0.646~0.750和0.601~0.716。Hardy-Weinberg平衡(HWE)检测结果显示,除晋南牛在HAUT27座位上显著偏离HWE外(P＜0.05),其余标记均未偏离HWE(P＞0.05)。F统计量结果显示,群体内近交系数(F_IS)为―0.012,群体平均近交系数(F_IT)为0.043,群体分化系数(F_ST)为0.054。UPGMA系统发育树结果表明,平陆山地牛和晋南牛聚为一支,"太行云牛"则单独为一支。主坐标分析(PCoA)结果显示,晋南牛和平陆山地牛两个群体间存在较近的亲缘关系,且不同群体间存在一定的遗传交流。STRUCTURE结果进一步发现,3个群体间存在一定的群体混杂现象。【结论】 山西3个地方牛群体内遗传多样性水平较高,各种群的系统发育关系相对独立,且晋南牛与平陆山地牛之间存在较多的基因交流。本研究结果有助于深入理解山西地方牛群体的遗传结构,并对品种保护方案的制订提供了重要的数据基础。

【目的】 基于对世界家马群体结构和遗传多样性的分析,建立藏马特异性遗传标签,为藏马的鉴定提供理论基础。【方法】 利用世界范围内47个品种共404匹马的基因组重测序数据,基于全基因组范围的单核苷酸多态性(SNP)位点进行群体结构和遗传多样性分析,并构建藏马特异性遗传标签。【结果】 全基因组重测序共获得了8 917 800个高质量的SNPs;世界家马群体结构分析结果显示,设特兰矮马与其他群体之间存在显著的祖先遗传差异;群体遗传多样性分析结果表明,中东、欧美的家马以及其他亚洲地区家马经历强烈的选育压力后遗传多样性下降,而中国家马保持了良好的遗传多样性;构建的包含110个SNPs位点的藏马特异性标签能够有效区分藏马与世界范围内的其他家马,识别准确率达到100%。【结论】 世界家马群体结构复杂,西方马群体具有更为相似的遗传背景和较低的遗传多样性,而中国家马拥有较高的遗传多样性,具有更大的选育潜力。本研究构建的藏马特异性遗传标签为世界范围内藏马品种的鉴定提供了理论依据,同时也为中国地方马的保护和开发提供了新的技术支持。

【目的】 睾丸支持细胞(Sertoli cells,SCs)位于生精小管内上皮,为不同分化阶段雄性生殖细胞发育提供物理构架和能量物质支持,对精子发生过程产生至关重要的作用。试验旨在研究新鲜绵羊睾丸组织样品获取不便的情况下,从冷冻保存的彭波半细毛羊睾丸组织分离支持细胞的技术方法。【方法】 将冷冻保存液预处理后冻存的彭波半细毛羊睾丸组织进行复苏,采用苏木精-伊红(HE)染色检测复苏后睾丸组织形态,利用组合酶消化法、差速贴壁法进行睾丸组织支持细胞分离纯化培养,观察细胞生长规律,绘制生长曲线,采用RT-PCR和免疫荧光染色(IF)技术进行睾丸支持细胞特异性基因鉴定。【结果】 冻存复苏睾丸组织曲细精索及睾丸间质保存完好。组合酶消化后能获得满足试验需要的生精上皮细胞混悬液,分离培养2~4 h后支持细胞贴壁,形态呈梭形或不规则多边形,培养3~4 d后汇合,其中培养1~2 d生长速度缓慢,培养3~6 d进入对数期,增殖速度加快,培养7~8 d后增殖速度下降。RT-PCR检测显示,GNDF、WT1、ABP、SOX9基因均在彭波半细毛羊睾丸支持细胞中特异性表达;免疫荧光染色显示,特异性抗体GATA4、Vimentin免疫阳性。【结论】 经冻存液预处理的冷冻保存睾丸组织复苏后,可分离出满足试验条件的原代支持细胞,应用于科学试验研究。

【目的】 西藏地区规模化饲养奶牛具有重要经济和社会意义,但荷斯坦牛引入高原后的生长和产奶性能通常有较大下降,本研究旨在探究荷斯坦牛在高原的体型性状和产奶性状的影响因素及其与产奶性状的相关性。【方法】 收集了西藏拉萨某规模化牧场237头荷斯坦牛的20个体型外貌性状线性鉴定记录以及895条生产性能测定记录,并计算了5个部位得分(体躯容量、尻部、肢蹄、泌乳系统和乳用特征)和体型总分,使用SAS 9.2软件的GLM程序对来源牧场、胎次和鉴定员等因素进行多因素方差分析,分析西藏地区奶牛体型外貌部位得分的影响因素,并利用IBM SPSS Statistics 21.0软件的Pearson相关性分析程序计算5个部位得分、体型总分与日产奶量之间的相关系数。【结果】 西藏地区荷斯坦牛20个体型外貌性状线性评分均值与最优分差值的绝对值介于0.30(体高)~3.70(后乳房附着高度)之间,5个部位得分及体型总分均值介于78.97(尻部)~87.72(体躯容量);平均日产奶量为21.23 kg,平均乳脂率和乳蛋白率分别为4.45%和3.75%,体细胞数介于(0.30~28.60)×10⁴/mL。方差分析结果表明,来源牧场和鉴定员对体型总分存在显著影响(P<0.05),入藏时长和泌乳天数对部位得分及体型总分均无显著影响(P>0.05),胎次效应仅对肢蹄得分存在显著影响(P<0.05);5个部位得分与体型总分均存在中等至高度相关(0.395~0.857),体型性状与日产奶量之间的相关性均较低,相关系数介于―0.021(体躯容量和日产奶量)~0.117(尻部和日产奶量)之间。【结论】 西藏荷斯坦牛体型性状受到多种饲养管理因素的显著影响,并与产奶性状存在相关性,本研究为将来开展适应高原环境的荷斯坦牛新品系选育奠定了数据基础。

哺乳动物卵母细胞减数分裂纺锤体的正常组装是确保减数分裂中染色体精确分离的关键。在细胞分裂过程中,将一整套染色体传递给子细胞对发育和组织稳态至关重要。双极纺锤体的组装异常通常会引起染色体错误分离,染色体分离错误又极容易导致自然流产以及染色体出生缺陷。因此,探究纺锤体组装机制对了解减数分裂进程是必需的。在体细胞中,有丝分裂纺锤体组装是由中心体充当微管组织中心介导。而哺乳动物卵母细胞中缺乏典型的中心体,依靠微管组织中心等其他途径来组装纺锤体。尽管有助于纺锤体组装的组分和途径有很多描述,但关于无中心体纺锤体的组装和功能机制仍有待完善。作者介绍了哺乳动物卵母细胞中无中心体纺锤体组装的过程,着重讲述了微管成核、纺锤体的双极化与伸长和染色体排列与分离涉及的分子机制,以及纺锤体检验点(SAC)在纺锤体组装中的作用机制。此外,还讨论了染色体与微丝在减数分裂过程中参与纺锤体组装作用机制,旨在为哺乳动物卵母细胞双极纺锤体组装及染色体分离机制的研究提供借鉴。

【目的】 探究磷脂磷酸酶3(PLPP3)基因多态位点与北京黑猪背部脂肪厚度及其脂肪酸含量的相关性,为北京黑猪背部脂肪厚度和脂肪酸含量的遗传改良提供参考。【方法】 本研究采集239头北京黑猪耳组织样,获得基因组重测序数据。测定北京黑猪不同部位(肩部最厚处、第6和第7胸椎结合处、胸腰结合处、腰荐结合处)的背部脂肪厚度及左侧胴体第6和7胸椎背部脂肪中5种脂肪酸(棕榈酸、硬脂酸、油酸、亚油酸、α-亚麻酸)的含量。利用测序结果研究PLPP3基因的单核苷酸多态性(SNP)位点的群体遗传特性、单倍型连锁情况,将SNP位点与各部位背部脂肪厚度及脂肪酸含量进行关联分析。进行启动子区SNP转录因子(transcription factor,TF)预测,并运用实时荧光定量PCR技术检测PLPP3功能位点不同基因型个体背部脂肪中基因的表达差异。【结果】 该北京黑猪群体中PLPP3基因包含8个SNPs,共5个SNPs显示中度多态性(0.25＜PIC＜0.5),3个SNPs为低度多态性(PIC＜0.25),g.155894136 C＞T位点呈现哈代-温伯格平衡状态(P＞0.05)。单倍型连锁分析显示,g.155800228 G＞A和g.155800259 A＞C位点之间存在较强的连锁(D’=91%);g.155891807 G＞A和g.155891715 A＞G位点之间存在一定的连锁性(D’＞80%)。基因多态位点与背部脂肪厚度性状的关联分析结果表明,g.155800222 C＞A、g.155891715 A＞G、g.155891807 G＞A、g.155894136 C＞T位点不同基因型个体的背部脂肪厚度存在显著差异(P＜0.05)。基因多态位点与脂肪酸含量的关联分析显示,g.155800222 C＞A、g.155800228 G＞A位点不同基因型个体背部脂肪中的棕榈酸含量和亚油酸/α-亚麻酸存在显著差异(P＜0.05)。启动子区SNPs TF预测发现,g.155800228 G＞A位点的变异,导致与其结合的TF由SPI1变为MYB。进一步分析g.155800228 G＞A位点不同基因型个体背部脂肪组织PLPP3基因的表达情况,发现AA基因型个体PLPP3基因mRNA水平显著高于GG基因型(P＜0.05)。【结论】 PLPP3基因的多态位点不同基因型个体的北京黑猪不同部位背部脂肪厚度及部分脂肪酸含量存在显著差异。这些多态位点可作为北京黑猪背部脂肪厚度和脂肪酸含量的潜在分子标记,为北京黑猪的选育提供理论支撑。

【目的】 探究SOX12基因对猪流行性腹泻病毒(Porcine epidemic diarrhea virus,PEDV)复制的影响,以期为抗PEDV育种提供有效分子标记。【方法】 本研究合成3条SOX12基因干扰序列(siRNA1、siRNA2、siRNA3)及其阴性对照(siNC)并转染至非洲绿猴肾细胞(Vero细胞),转染48 h后收集细胞,利用实时荧光定量PCR检测干扰效率。将有效的干扰片段和siNC分别转染至Vero细胞24 h后,用感染复数为0.05的PEDV感染细胞,分为4组:感染PEDV 12 h试验组(12 hpi-siRNA)、感染PEDV 12 h对照组(12 hpi-siNC)、感染PEDV 24 h试验组(24 hpi-siRNA)及感染PEDV 24 h对照组(24 hpi-siNC),利用实时荧光定量PCR检测PEDV N及SOX12基因的表达水平,通过Western blotting检测各组细胞PEDV N蛋白表达水平,利用组织半数感染量(50% tissue culture infective dose,TCID₅₀)检测PEDV的病毒滴度,并利用间接免疫荧光(indirect immunofluorescence assay,IFA)法检测各组细胞中PEDV复制情况。通过GeneMANIA网站预测SOX12基因的互作基因,利用实时荧光定量PCR检测抑制SOX12基因表达后其互作基因的表达变化。【结果】 SOX12基因3条干扰片段的干扰效率为30%~60%,其中siRNA3干扰效率最高,可达60%。与12 hpi-siNC和24 hpi-siNC组相比,12 hpi-siRNA和24 hpi-siRNA组PEDV N基因的转录和蛋白表达水平均显著降低(P＜0.05)。病毒滴度表型测定结果表明,12 hpi-siRNA和24 hpi-siRNA组的PEDV病毒滴度显著低于各自对照组(P＜0.05);IFA结果也表明,12 hpi-siRNA和24 hpi-siRNA组的PEDV复制明显少于对照组。基因互作预测及实时荧光定量PCR检测结果显示,与siNC组相比,干扰SOX12基因的表达后,其互作基因SOX17、DDX51、ZMIZ2、SSRP1、TAF6和ABCB8的表达水平均显著降低(P＜0.05)。【结论】 本研究揭示了SOX12基因在PEDV感染Vero细胞过程中的调控作用,发现SOX12基因的下调表达能显著抑制PEDV复制和其互作基因SOX17、DDX51、ZMIZ2、SSRP1、TAF6和ABCB8的表达。

【目的】 本研究通过优化试验条件,建立基于HDR-CRISPR/Cas9基因编辑技术快速、准确地将外源基因定向插入鸭肠炎病毒(Duck enteritis virus,DEV)基因组的方法,为以DEV为载体的重组疫苗的研制奠定基础。【方法】 分离并扩繁DEV疫苗株,测定其病毒滴度。根据DEV疫苗株UL26、UL27基因间非编码区序列,设计合成向导RNA(gRNA),经双链退火获得目的片段,通过基因克隆技术将其插入PX459-V2.0载体获得gRNA-Cas9质粒。同时,通过常规基因克隆技术将增强型绿色荧光蛋白(EGFP)报告基因插入PVAX-1载体,构建含有真核表达盒P_CMV-EGFP-BGH pA的重组表达质粒。以DEV疫苗株基因组为模板,扩增gRNA上、下游同源臂序列,通过融合PCR将同源臂序列与真核表达盒P_CMV-EGFP-BGH pA进行连接并克隆至PUC19载体获得供体质粒PUC19-UP-EGFP-DOWN。采用先转染质粒后感染亲本DEV的策略构建重组病毒rDEV-EGFP,通过控制单一变量法优化重组病毒构建的试验条件,根据不同条件下绿色荧光蚀斑数量确定最佳条件。利用有限稀释法筛选并纯化表达绿色荧光的蚀斑,获得重组病毒rDEV-EGFP,并对其进行遗传稳定性及体外复制能力的评估。【结果】 PCR扩增及测序结果显示,成功构建靶向DEV基因组UL27与UL26基因间非编码区序列的gRNA-Cas9质粒及包含EGFP真核表达盒的供体质粒。鸡胚成纤维细胞(chick embryo fibroblast,CEF)中转染gRNA-Cas9及供体质粒后感染DEV,在荧光显微镜下可观察到绿色荧光蚀斑,表明成功利用HDR-CRISPR/Cas9基因编辑技术将EGFP报告基因敲入DEV基因组。优化后的最佳试验条件为:DEV感染复数(MOI)为0.2、gRNA-Cas9质粒与供体DNA转染比例为1∶2、供体DNA的转染形式为DNA片段、转染与感染时间间隔为6 h、重组病毒收取时间为DEV感染后48 h,优化后EGFP报告基因的敲入效率显著提高(P＜0.05)。重组病毒rDEV-EGFP在CEF中连续传代15次,EGFP真核表达盒仍稳定整合在UL26与UL27基因之间的非编码区,具有良好的遗传稳定性。生长曲线结果显示,重组病毒rDEV-EGFP在CEF中的复制能力与DEV疫苗株无明显差异,生长趋势一致,具有良好的体外复制能力。【结论】 本研究建立了一种基于HDR-CRISPR/Cas9基因编辑技术快速构建重组DEV的方法,成功构建了具有良好遗传稳定性及体外复制能力的重组病毒rDEV-EGFP,为重组DEV载体疫苗候选株的研制提供了理论依据及技术平台。

【目的】 探究水禽源坦布苏病毒(Tembusu virus,TMUV)流行毒株遗传变异情况及其膜前体蛋白(prM)和囊膜蛋白(E)的分子特征。【方法】 利用仓鼠肾细胞(BHK-21)对疑似TMUV感染的鸭、鹅肝脏组织样品进行病毒分离,通过全基因克隆、测序、拼接获得分离株全基因序列。运用ModelFinder、MrBayes软件进行开放阅读框(open reading frame,ORF)、E基因的遗传进化分析;以GenBank数据库中TMUV MM1775株为参考,对分离株prM和E蛋白进行氨基酸突变位点分析;利用生物信息学在线软件对prM、E蛋白的跨膜区域、B细胞抗原表位、二级结构与三级结构进行预测。【结果】 试验分离获得2株水禽源TMUV分离株,分别命名为FSE、ZJ2。全基因组遗传进化分析显示,分离株FSE、ZJ2分别属于Cluster 2.1.1与Cluster 2.2。氨基酸变异位点分析结果显示,FSE、ZJ2株prM和E蛋白中均存在多个氨基酸变异位点。生物信息学分析结果显示,FSE、ZJ2株E蛋白均存在2个跨膜区;prM、E蛋白中均存在多个线性B细胞抗原表位,与疫苗株DF-2的prM、E蛋白抗原表位氨基酸序列相比,FSE株prM蛋白存在E73H氨基酸位点突变,E蛋白存在A157V氨基酸位点突变;二级结构均以无规则卷曲为主,三级结构预测结果与二级结构相一致。【结论】 本研究从广东地区分离得到2株Cluster 2 TMUV,2株分离株prM、E蛋白均存在多个氨基酸突变位点,表明TMUV在广东地区的流行过程中仍在不断发生变异。

近年来,全球范围内抗生素耐药性细菌的频繁出现给公共卫生带来了极大挑战,促使科研界探寻传统抗生素之外的新型抗菌策略。噬菌体作为细菌的天敌,其独特的抗菌特性使之成为抗生素治疗潜在的替代方案,吸引了广泛的研究兴趣。噬菌体通过直接破坏细菌细胞结构,如细胞膜和细胞壁,引发细菌裂解,或间接干预细菌代谢路径及生命过程,有效抑制细菌生长,表现出多样化的抑菌机制。鉴于此,全面剖析噬菌体编码的抑菌蛋白种类、作用机制及其协同效应,对于指导新型噬菌体疗法的开发与优化、发掘抗菌治疗的新靶标具有重要的科学价值。笔者汇总并评析了近期噬菌体抑菌蛋白研究的前沿动态,特别聚焦于蛋白的分类、作用机理及其对细菌生命周期的多维度影响,旨在通过详尽探讨这些分子如何精准靶向并抑制细菌的关键生理过程,包括裂解细胞结构,干扰DNA复制、蛋白质合成及细胞壁合成等,揭示噬菌体蛋白在抗菌领域的创新应用潜力。同时,介绍了噬菌体蛋白在不同应用场景下的有效性,如临床治疗、食品安全及环境保护,进一步强调其实际转化意义,以增进对噬菌体蛋白抗菌机制的科学理解,为应对抗生素耐药性危机提供创新视角与策略导向,促进对抗菌研究新方式的探索。

【目的】 了解2023年华南地区猪场猪繁殖与呼吸综合征病毒(Porcine reproductive and respiratory syndrome virus,PRRSV)的遗传变异情况,为华南地区PRRSV的防控提供理论依据。【方法】 采用实时荧光定量PCR方法对华南地区不同猪场采集的328份样品进行PRRSV检测,对来自不同猪场具有代表性的29个PRRSV阳性样品ORF5基因进行测序和遗传进化分析。【结果】 所有样本中PRRSV的阳性率为54.27%(178/328),获得29株PRRSV。ORF5基因序列分析结果显示,所获得的PRRSV 毒株均属于基因Ⅱ型毒株,29株PRRSV ORF5基因之间的核苷酸序列相似性为83.7%~100%,氨基酸序列相似性为83.0%~100%。其中6株属于以重组毒株NADC30-like为代表的谱系1,2株属于以经典毒株VR2332为代表的谱系5,21株属于以高致病性毒株JXA1为代表的谱系8。ORF5基因氨基酸突变主要集中在2个高变区、1个诱饵表位和3个跨膜区。谱系1的5株毒株的诱饵表位区域发生了V27A突变,谱系5的2株毒株的诱饵表位区域发生了V29A突变。在中和表位区域,谱系1的8株毒株发生了I39L突变,谱系8的5株毒株发生了I39F突变。在毒力相关位点中,部分毒株发生了R13Q、R151K、R151I、R151G突变。此外,谱系1的N-糖基化位点变异较多,主要集中在第30－32、32－34、33－35、34－36、35－37、57－59位氨基酸处,而谱系5和谱系8的N-糖基化位点相对保守。【结论】 目前华南地区猪场的PRRSV阳性率仍较高,PRRSV流行以多谱基因Ⅱ型为特征,谱系8和谱系1毒株占比较高,并且变异复杂多样,需加强对PRRSV的监测,以掌握PRRSV毒株之间的遗传变异情况,及时做好防控。

鸡传染性贫血病(chicken infectious anemia,CIA)是临床上最常见的免疫抑制性传染病之一,尚无特异性治疗方法,严重威胁动物健康和养殖业的经济效益。虽然已有部分地区以活疫苗进行CIA的临床预防,但其安全性问题及病毒培养和生产效率低是制约活疫苗推广应用的主要瓶颈。笔者从引起CIA的鸡传染性贫血病毒(Chicken infectious anemia virus,CIAV)的病原学与流行特征、传统疫苗与新型疫苗激发宿主的免疫应答特征与免疫保护力等方面进行全面分析,剖析现有疫苗的优缺点,结合新型疫苗的理论与技术优势,提出CIA高效疫苗的研发方向,为CIA疫苗的研发提供新的思路和科学依据。

【目的】 研究从鹅肠道分离出的8株潜在益生菌的生物学特性,为后续合理开发和利用菌株提供参考。【方法】 通过形态学观察、生化鉴定、PCR鉴定、16S rRNA基因测序对菌株进行鉴定。通过菌株产酸性能、最适生长温度、耐酸性能、耐胆盐性能、抑菌活性、产酶性能等试验对菌株进行生物学特性检测。通过药敏试验和耐药基因检测分析菌株耐药情况。【结果】 将从鹅肠道分离的8株菌分别命名为A1~A5和X1~X3。通过形态学观察、生化鉴定初步判断菌株A1~A5为芽孢杆菌,菌株X1~X3为乳酸菌。分离株16S rRNA基因PCR扩增均获得大小约为1 500 bp的条带。16S rRNA基因序列相似性比对结果鉴定菌株A1、A2为枯草芽孢杆菌,菌株A3~A5分别为贝莱斯芽孢杆菌、解淀粉芽孢杆菌和地衣芽孢杆菌,菌株X1~X3分别为发酵乳杆菌、罗伊氏乳杆菌和副干酪乳杆菌。产酸性能结果显示,菌株X1~X3具有较强的产酸性能,菌株X1产酸性能最好,36 h时pH可达到3.84。8株菌最适生长温度均为37 ℃。耐酸耐胆盐性能试验结果显示,8株菌均具有良好的耐受性,其中菌株A2耐受性最好,当pH为4.0,胆盐浓度为0.9%时,存活率可达70%以上。抑菌试验结果显示,8株菌均具有良好的抑菌效果,抑菌圈直径均在10.00 mm以上,其中菌株A2抑菌性最强。产酶性能试验结果显示,菌株A1~A5具有较强的产酶性能,菌株A2产酶效果最好,淀粉酶圈直径可达15.5 mm,纤维素酶圈直径可达14.3 mm。药敏试验结果显示,8株菌对大部分抗菌药都保持中度以上敏感。耐药基因分析表明,四环素类基因TetA(25.0%)、喹诺酮类基因GyrA(12.5%)和大环内酯类基因ErmF(12.5%)为主要耐药基因,其中菌株A3携带四环素类基因TetA(480 bp),菌株A4菌株携带喹诺酮类基因GyrA(382 bp)和四环素类基因TetA(480 bp),菌株X1携带大环内酯类基因ErmF(306 bp)。【结论】 从鹅肠道分离的8株菌中枯草芽孢杆菌A2有较强的益生性,具有作为鹅源微生态制剂的潜力。

【目的】 探讨地菍总黄酮(total Flavonoids from Melastoma dodecandrum Lour.,TFMD)对糖尿病肾病(DN)小鼠脂质过氧化的作用,对TFMD在肾脏功能保护及抗脂质过氧化方面的药用价值进行探索,为瑶药地菍的临床应用研究提供试验依据。【方法】 将90只SPF级雄性C57BL/6J小鼠随机分成2组:空白组(n＝10)及造模组(n＝80)。空白组小鼠给予普通饲料,造模组小鼠给予高脂饲料,连续饲养6周后,各组小鼠禁食不禁水12 h后,造模组小鼠腹腔注射链脲佐菌素(STZ)0.05 g/kg,空白组小鼠注射等剂量柠檬酸钠缓冲液,连续注射5 d后,分别在末次注射72 h及1周后测量各组小鼠空腹血糖(FBG)。将连续2次FBG≥16.7 mmol/L的小鼠随机分为5组:DN模型组(高脂饲料)、二甲双胍组(高脂饲料＋0.5 g/kg 二甲双胍)及TFMD高(高脂饲料＋1.2 g/kg TFMD)、中(高脂饲料＋0.8 g/kg TFMD)、低(高脂饲料＋0.6 g/kg TFMD)剂量组,每组10 只,连续给药10周。给药过程中观察小鼠一般生理状况,每周检测FBG。给药10周后,使用代谢笼收集各组小鼠24 h尿液,剪尾采血检测各组小鼠FBG,计算各组小鼠肾脏指数;同时检测各组小鼠尿液中尿蛋白(UP)和尿微量白蛋白(MAU)、血清尿素氮(BUN)和血清肌酐(SCr)水平及肾脏组织中谷胱甘肽(GSH)、超氧化物歧化酶(SOD)活性和丙二醛(MDA)水平。Western blotting检测各组小鼠肾脏组织Nephrin、podocin、PTGS2、ACSL4蛋白的表达量;制作各组小鼠肾脏组织HE及PAS染色切片并观察病理改变。【结果】 与空白组相比,DN模型组小鼠体重、GSH和SOD水平均极显著降低(P＜0.01),FBG、肾脏指数、MAU、UP、SCr、BUN及MDA水平均极显著升高(P＜0.01),肾脏组织Nephrin、podocin蛋白表达量均极显著降低(P＜0.01),PTGS2、ACSL4蛋白表达量显著升高(P＜0.05),肾脏组织光镜下可见严重损伤,表明DN模型构建成功。与DN模型组相比,TFMD能改善DN小鼠的消瘦状况,极显著或显著降低小鼠肾脏指数及FBG(P＜0.01;P＜0.05),极显著降低小鼠体内UP、MAU、SCr、BUN水平(P＜0.01),显著提高小鼠肾脏组织Nephrin、podocin水平(P＜0.05),TFMD组小鼠肾脏组织损伤得到不同程度恢复。与DN模型组相比,TFMD显著或极显著提高小鼠肾脏组织GSH和SOD活性(P＜0.05;P＜0.01),极显著或显著降低MDA水平(P＜0.01;P＜0.05),显著或极显著下调肾脏组织中脂质过氧化相关蛋白PTGS2、ACSL4的表达(P＜0.05;P＜0.01),提升机体抗氧化能力及减缓机体脂质过氧化及其产物堆积。【结论】 TFMD可明显延缓高脂饮食联合STZ诱导小鼠DN的发生发展进程,其机制与调控脂质过氧化及氧化应激、调控PTGS2/ACSL4信号通路相关。

【目的】 探究新疆伊犁某规模化猪场霍氏肠杆菌的耐药特征及致病性,为霍氏肠杆菌的防治提供参考。【方法】 对采集的猪肛拭子、鼻拭子样品进行细菌分离与纯化,通过革兰染色及形态学观察、菌落形态特征、生化特性、种属特异性检测、16S rRNA测序分析对其进行鉴定;采用K-B法测定分离株对20种常用抗菌药物的敏感性;利用PCR方法检测分离株携带耐药基因和毒力基因情况,并通过动物试验分析其致病性;采用玻璃管法和微量滴定板法测定分离株的生物被膜形成能力。【结果】 试验成功分离获得1株细菌,并命名为H1,该分离株在营养琼脂培养基上可形成表面凸起、光滑、湿润的乳白色菌落;革兰染色后菌体呈红色短杆状,散在排列。生化鉴定结果显示,分离株的葡萄糖、乳糖、尿素等生化试验均呈阳性;硫化氢、苯丙氨酸等生化试验均呈阴性。PCR扩增结果显示,Eh特异性基因、16S rRNA分别扩增出487、1 476 bp的目的条带;测序比对结果显示分离株与霍氏肠杆菌的相似性达100%,综合判定分离株H1为霍氏肠杆菌。分离株对恩诺沙星、氟苯尼考、复方新诺明等15种药物耐药,对多黏菌素B、环丙沙星等5种抗菌药物敏感,携带bla_CTX-M-1、tem、sul1、sul2、sul3、tetA、tetM、qnrB 8种耐药基因以及fimA、csdg、papD、ompA、cpa 5种毒力基因。动物致病性试验结果显示,分离株对小鼠具有一定的致病性,感染后引起十二指肠、肝脏、脾脏和肾脏损伤,具有较强的生物被膜形成能力。【结论】 本研究分离获得1株霍氏肠杆菌,其表现多重耐药,携带多种耐药基因和毒力基因,对小鼠有一定的致病性,生物被膜形成能力强。试验结果为猪霍氏肠杆菌的防控提供了科学依据。

【目的】 从梅花鹿瘤胃液中分离和鉴定出具有益生菌潜能的酵母菌,并对其体外益生功能进行评价,为其在动物营养与饲料中应用以及鹿源益生菌制剂的研制提供参考。【方法】 采用YPD固体培养基从健康雄性梅花鹿瘤胃液中分离出酵母菌菌株,对分离株进行形态学观察、生理生化和分子生物学鉴定,测定其生长性能及产酸性能,并绘制生长曲线;探究其在不同pH、不同浓度胆盐及人工胃液和人工肠液中的耐受性;采用纸片扩散法(K-B法)检测菌株的药物敏感性,并对菌株进行小鼠安全性试验。【结果】 从梅花鹿瘤胃液中分离到1株优势酵母菌,并将其命名为DZ018,其菌落菌体形态特征、生理生化特性和ITS rRNA序列均与藿香假丝酵母菌(Candida rugosa)的特征相符。生长性能测定结果显示,分离株在YPD液体培养基中生长迅速,培养2 h时进入对数生长期,且具有一定的产酸能力。耐受性评价结果显示,分离株对低pH有较好的耐受性,在pH为2.5~6.5范围内均能正常生长,最适生长pH为4.5;对胆盐耐受性较强,在0.3%和1.0%胆盐中存活率均＞100%,在2.0%胆盐中存活率可达74.27%;在人工胃液和人工肠液中的存活率分别为31.64%和64.80%。药敏试验结果显示,分离株对氟胞嘧啶、氟康唑和酮康唑表现敏感,对两性霉素B耐药。小鼠安全性试验结果显示,分离株对小鼠生长性能和脏器系数均无不良影响。【结论】 本研究从梅花鹿瘤胃液中分离获得1株具有一定益生潜力的藿香假丝酵母菌DZ018,其耐受性强、安全性好。试验结果为鹿源益生菌在鹿科动物生产中的应用及微生态制剂的开发提供参考和理论依据。

细菌耐药性问题是一个全球性公共卫生问题,严重威胁动物及人类健康。动物源细菌耐药性问题在中国较为突出,严重威胁养殖安全,新型抗菌药物或抗生素替代物的研发已经迫在眉睫。松萝酸,又名地衣酸,是松萝属、石蕊属等植物提取物中的主要活性成分之一,因具有抗菌、抗炎、抗肿瘤、抗病毒、抗结核、抗寄生虫和镇痛解热等多种药理学活性而被广泛关注。研究表明,松萝酸对革兰阳性菌具有较强的抗菌活性,其作用机制涉及对核酸和蛋白质合成的抑制、干扰外排泵、破坏细胞膜的完整性、破坏细菌代谢稳态及抑制生物膜形成等多个方面,是一种潜在的天然抗菌药物。松萝酸也是一种较强的抗菌增效剂,能够逆转多重耐药细菌对多黏菌素等多种抗菌药物的耐药性。目前,松萝酸的低溶解性及潜在的毒性问题仍是限制其临床应用的主要因素。笔者综述了松萝酸的抗菌活性、作用机制、潜在毒性以及纳米制剂的研究进展,旨在为松萝酸的深入研究和临床应用提供科学依据。

【目的】 对广东地区某规模化林麝养殖场易导致成年林麝肺炎等疾病的肺炎克雷伯菌进行耐药性及毒力基因分析,为有效防控由肺炎克雷伯菌引发的疾病提供参考依据。【方法】 采集广东某林麝场成年林麝粪便共81份,采用细菌分离培养、形态学观察、生化分析和PCR扩增16S rRNA和溶血酵素基因的方法分离纯化肺炎克雷伯菌。通过血清型鉴定、药敏试验和PCR扩增耐药基因和毒力基因等方法研究分离菌株特性。【结果】 分离菌在麦康凯平板上形成粉红色、光滑、湿润的单菌落;革兰染色镜检显示,菌体呈红色的短杆状,可判断为革兰阴性杆菌。通过生化试验选取与肺炎克雷伯菌生化特性一致的菌株进行PCR扩增。16S rRNA基因PCR扩增结果显示,获得大小约为1 542 bp的条带。共33株分离株与GenBank数据库肺炎克雷伯菌16S rRNA基因核苷酸序列相似性＞98%,且特异性基因khe检测为阳性,即本研究从81份样品中成功分离鉴定出33株肺炎克雷伯菌。血清型检测结果显示,分离株中优势血清型是K57。药敏试验结果显示,分离株对青霉素类、氨基糖苷类、四环素类、磺胺类、氯霉素类、喹诺酮类、单环β-内酰胺类药物均有不同程度的耐药性;对头孢菌素类和碳青霉烯类药物敏感。检测的12种耐药基因中,bla_SHV和oqxA基因检出率均为96.97%;aac(6')-Ⅰb-cr、rmtB、tetA、tetM、sul1、sul2、oqxB和floR基因检出率分别为57.58%、51.52%、78.79%、84.85%、72.73%、66.67%、87.88%和51.52%;未检测出bla_KPC和bla_NDM基因。检测的9种毒力基因中,wabG、uge、mrkD、entB和ureA基因检出率较高,分别为90.91%、96.97%、96.97%、100%和100%;aerobactin和allS基因检出率较低,分别为6.06%和18.18%;未检出ybtA基因。【结论】 本研究成功分离鉴定出33株林麝源肺炎克雷伯菌,优势血清型是K57,存在多重耐药情况,耐药基因和毒力基因携带率高。本研究结果可为林麝源肺炎克雷伯菌所致疾病的防控提供数据支持。

【目的】 肺炎克雷伯菌感染是奶牛乳腺炎的常见病因,其诱导的临床型乳腺炎发病急、临床症状重,牛奶产量和质量降低,给奶牛场造成巨大的经济损失。本研究旨在探究奶牛乳腺炎源性不同序列型(sequence type,ST)肺炎克雷伯菌的毒力作用,筛选肺炎克雷伯菌发挥感染作用的潜在关键毒力基因。【方法】 采用多位点序列分型(multi-locus sequence typing,MLST)分析山东、湖北2个大型奶牛场的129株临床乳腺炎源性肺炎克雷伯菌的ST型分布,并选择3种检出率较高的ST型肺炎克雷伯菌感染小鼠建立乳腺炎模型,探究小鼠乳腺的形态学损伤及炎性因子表达变化。通过分析肺炎克雷伯菌的感染特性与毒力基因分布,筛选与肺炎克雷伯菌感染相关的关键毒力基因。【结果】 129株肺炎克雷伯菌共分为79种ST型,其中ST107占比最高,为19.37%;其次为ST2324(7.75%)和ST13(3.87%)。与ST107和ST13型相比,感染后24 h,ST2324型肺炎克雷伯菌诱导小鼠临床评分和乳腺载菌量均显著升高(P＜0.05);乳腺内腺泡轮廓消失和大量炎性细胞浸润,乳腺中白细胞介素-1β(IL-1β)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)和细胞色素C(Cyt C)) mRNA表达量均显著升高(P＜0.05)。毒力基因检测结果显示,3种不同ST型分离株共检测到74个毒力基因,其中ST2324型分离株中检出了ST13和ST107型分离株没有检出的毒力基因manB、pla和pilW。【结论】 本研究从129株肺炎克雷伯菌中共检出79种ST型,其中ST2324、ST107和ST13检出率较高,ST2324型肺炎克雷伯菌对小鼠致病性最强,且携带的毒力基因manB、pla和pilW与肺炎克雷伯菌的高致病性密切相关。本研究结果为进一步解析肺炎克雷伯菌感染奶牛乳腺炎的机制提供了理论参考。

【目的】 从鸡肠道内筛选出兼具高产酶活性和抑菌特性的芽孢杆菌,并测定其益生特性,为家禽微生态制剂的开发提供优质原籍菌株,以促进家禽产业的健康发展。【方法】 试验以白羽肉鸡为对象,从其肠道内容物及黏膜中筛选菌株,通过形态学观察、产酶活性和抑菌特性测定筛选出优质芽孢杆菌;进一步测定分离株的菌落菌体形态、体外生长特性、耐受性、肠道黏附性和药物敏感性,评估其基本益生特性;利用生理生化和分子生物学试验鉴定分离株的种属类型。【结果】 本试验分离纯化获得9株菌株,分别命名为P1~P9。形态学鉴定结果显示,7株为革兰阳性菌,2株为革兰阴性菌。通过产酶活性和抑菌特性筛选出最优分离株P2,其蛋白酶、纤维素酶、淀粉酶、脂肪酶的产酶透明圈直径分别为46.86、41.52、20.70、14.47 mm,对大肠杆菌、金黄色葡萄球菌和鸡白痢沙门菌的抑菌圈直径分别为14.77、24.05、19.19 mm。分离株P2的菌落形态为圆形、乳白色,表面有褶皱凸起,不透明,具有黏稠感,为短杆状菌,单个菌体大小为(1.46±0.07) μm×(0.81±0.03) μm。分离株P2的生长性能良好,对强酸和强胆盐具有很强的耐受性,具有一定的肠道黏附性,其黏附能力为146.52 CFU/cell。药敏试验结果显示,分离株P2对庆大霉素、卡那霉素、克林霉素、万古霉素、氨苄西林、链霉素、氯霉素、红霉素表现敏感。生理生化和分子生物学鉴定结果显示,分离株P2为暹罗芽孢杆菌,并将其命名为CPU-B1。【结论】 本研究筛选得到1株鸡源暹罗芽孢杆菌CPU-B1,该分离株产酶活性和抑菌特性强,具有优异的生长特性、耐受性、肠道黏附性,可进一步开发为微生态制剂应用于家禽产业中。

【目的】 获得产气荚膜梭菌Alpha毒素(Clostridium perfringens alpha-toxin,CPA)的重组突变体,评价其毒力和抗原性,进而制备针对CPA的单克隆抗体,并评价单克隆抗体特性。【方法】 通过人工合成含6个氨基酸突变(第56和130位的天冬氨酸突变为甘氨酸、第275、307和331位的酪氨酸突变为苯丙氨酸、第336位的天冬氨酸突变为天冬酰胺)的CPA基因片段,并将其克隆至pET-30a(＋)载体,转化大肠杆菌BL21(DE3)感受态细胞进行诱导表达与纯化,获得重组蛋白rCPA_m6,并检测其毒力与免疫原性。将rCPA_m6作为包被抗原建立CPA抗体的间接ELISA检测方法,并用灭活的天然CPA作为免疫原按照常规方法免疫BALB/c小鼠,制备单克隆抗体,对其功能进行鉴定。【结果】 重组蛋白rCPA_m6在大肠杆菌BL21(DE3)感受态中能够以可溶性和包涵体两种形式表达。毒力测定结果显示,100 μg/只rCPA_m6攻毒后,小鼠全部存活。免疫原性分析结果显示,1×最小致死量(MLD)的天然CPA攻毒后,对照组小鼠全部死亡,10和20 μg/只rCPA_m6免疫组小鼠存活率为100%。利用rCPA_m6成功建立了CPA抗体的间接ELISA检测方法,并筛选获得4株分泌抗CPA的单克隆抗体杂交瘤细胞株,分别命名为6E3、6B8、10A11、13D10,且4种细胞上清抗体效价均≥1∶3 200,其中单克隆抗体6B8细胞上清能中和天然CPA,且能与rCPA_m6发生反应。【结论】 试验成功获得具有良好的安全性和免疫原性的重组蛋白rCPA_m6,制备的CPA单克隆抗体6B8具有一定的中和活性及较高的特异性和敏感性。研究结果为CPA亚单位疫苗的研制提供了候选抗原,同时为CPA中毒症的治疗以及抗原/抗体检测方法的建立提供了物质基础。

抗菌药是治疗细菌感染的关键药物,也是现代医学中至关重要的基础药物之一。但当前现有抗菌药物耐药性日益严重以及新抗菌药物发现渠道不足的问题已受到关注并亟需解决。抗菌药透过细菌的外膜屏障且在作用靶点位置蓄积至有效浓度才能发挥抗菌作用。因此,测定细菌内抗菌药物的含量,有助于建立药物在细菌内蓄积特性与其结构之间的关系,为新型抗菌药物设计提供指导。目前,已有多种检测方法被开发用于细菌内抗菌药物浓度测定。笔者首先简要介绍了革兰阳性菌和革兰阴性菌细胞膜的结构差异,再从早期的放射性测定法、荧光测定法及基于质谱开发的新型方法(包括液相色谱串联质谱检测法、固相萃取-质谱测定法、纳米流体-质谱联用技术、飞行时间二次离子质谱和生物探针与质谱的联合应用)入手,介绍各检测方法及当前的应用,并总结概述了上述方法的优缺点,对其今后的发展进行了展望,以期为后续细菌内抗菌药物积累测定方法的应用提供建议,为设计和发现新的抗菌药物尤其是抗革兰阴性菌新药提供参考。

【目的】 了解中、俄、朝边境地区珲春敬信湿地候鸟携带病原菌情况,为候鸟疫病防控提供科学依据。【方法】 本研究在珲春敬信湿地采集155份候鸟白额雁新鲜粪便样本,用PBS进行稀释,接种到LB固体培养基和血液琼脂培养基上培养,挑取单个菌落进行分离纯化后,采用革兰染色镜检、生化鉴定、16S rRNA基因PCR扩增及测序等方法进行细菌分离鉴定,并对分离菌进行耐药性分析。【结果】 分离菌为革兰阴性菌,呈紫红色短杆状。生化鉴定结果显示,分离菌尿素、赖氨酸脱羧酶、鸟氨酸脱羧酶、半固体等呈阳性;硫化氢、苯丙氨酸、葡萄糖酸盐等呈阴性。PCR扩增出大小为1 500 bp的单一条带,扩增序列与NCBI中恶臭假单胞菌MZ836867序列相似性最高,为99.6%。系统进化树显示,分离菌与恶臭假单胞菌MZ836867属于同一个分支,说明分离菌为恶臭假单胞菌。药敏试验结果显示,分离菌对氯霉素、复方新诺明、诺氟沙星等13种药物敏感;对多黏菌素B、克林霉素、亚胺培南等9种药物中介;对万古霉素、氟苯尼考、林可霉素、苯唑西林等8种药物耐药,其中对林可霉素、苯唑西林2种药物耐药性最强。【结论】 本研究从珲春敬信湿地候鸟白额雁粪便中成功分离出具有耐药性的恶臭假单胞菌,为珲春敬信湿地候鸟白额雁肠道菌群的深入研究提供了参考。

【目的】 探明新疆部分地区奶牛养殖场患病奶牛乳和环境中大肠杆菌流行情况及耐药性,为该地区大肠杆菌的临床合理用药提供依据。【方法】 试验采用平板划线法对新疆部分地区的4个集约化养殖场171份样本(55份患病奶牛乳样本、116份环境样本)进行细菌分离纯化,采用形态学观察、革兰染色镜检、生化鉴定及分子生物学方法对大肠杆菌分离株进行鉴定,并利用微量肉汤稀释法及PCR法对大肠杆菌分离株进行16种抗菌药物的耐药表型及耐药基因分析。【结果】 从171份样本中共分离出45株大肠杆菌,其中8株来自患病奶牛乳样本,分离率为14.55%(8/55),37株来自环境样本,分离率为31.90%(37/116)。所有分离株均呈粉红色圆形菌落,革兰染色镜检呈红色、短杆的革兰阴性菌。生化鉴定结果显示,分离菌乳糖、甘露醇、靛基质与MR检测呈阳性,氧化酶、H₂S、VP和西蒙氏柠檬酸盐检测呈阴性,符合大肠杆菌生化特点。药敏试验结果显示,大肠杆菌分离株对头孢噻吩、氨苄西林、链霉素和四环素表现不同程度的耐药性,耐药率分别为82.22%、48.89%、33.33%和33.33%,而对美罗培南、卡那霉素、庆大霉素、环丙沙星和复方新诺明表现较高的敏感性,敏感率均在85.00%以上,其中有16株大肠杆菌为多重耐药菌,多重耐药率为35.56%。耐药基因检测结果显示,大肠杆菌分离株β-内酰胺类耐药基因bla_TEM的阳性率为13.33%,氨基糖苷类耐药基因addA1和strA的阳性率分别为6.66%和11.11%,四环素类耐药基因tetA和tetC的阳性率分别为13.33%和33.33%。【结论】 新疆部分地区奶牛养殖场分离的大肠杆菌主要对β-内酰胺类抗生素高度耐药,且多重耐药情况严重。

【目的】 探究复方中药制剂除湿利肺消毒散(简称XDS)对鸡传染性支气管炎病毒(IBV)人工感染试验鸡的预防和治疗作用。【方法】 将25枚9日龄SPF鸡胚随机分为5组,经尿囊腔分别接种不同剂量的XDS(1.33、0.665、0.332、0.166、0 g/0.1 mL)与IBV病毒液(10³ EID₅₀)混合液,对照组使用无菌PBS代替XDS。37 ℃孵育36 h,收集尿囊液用于病毒定量。将60只试验鸡随机分为预防组、治疗组、模型组和对照组,每组15只。前3组试验鸡在15日龄通过滴鼻点眼接种0.1 mL 10⁵ EID₅₀/0.1 mL的IBV(gx2021/12-z株),对照组以相同的方式接种同体积无菌PBS。预防组鸡自12日龄通过饮水以含XDS生药量2.66 g/(d·只)给药3 d,治疗组鸡自感染后1 d以相同途径和剂量给药5 d,对照组和模型组鸡不给药。试验期间监测试验鸡死亡率、体重增长情况及临床症状,并在感染后3、7、14 d采集各组鸡肾脏及气管组织,通过苏木精、伊红(HE)染色组织后,用于病理组织学观察,通过实时荧光定量PCR检测各组鸡气管中免疫相关基因(Toll样受体7(TLR7)、干扰素调节因子7(IRF7)、α-干扰素(IFN-α)和IFN-β)、促炎性细胞因子基因(肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白细胞介素-1β(IL-1β)、IL-6和IL-8)的表达水平及气管和肾脏的病毒载量。【结果】 给药浓度0.332、0.665和1.33 g/0.1 mL组鸡胚尿囊液病毒载量均显著低于对照组(P＜0.05),且病毒载量随给药剂量增大而降低。预防组和治疗组鸡全部存活,而模型组鸡死亡率为20%。在临床症状方面,与模型组相比,预防组及治疗组中XDS可有效缓解IBV感染导致鸡的气管啰音、张口呼吸等临床症状;在感染后14 d,模型组鸡体重显著低于对照组(P＜0.05),而其他各组鸡体重与对照组均无显著差异(P＞0.05)。HE染色结果显示,IBV感染后7 d模型组鸡气管纤毛上皮细胞脱落、坏死,而治疗组鸡气管黏膜层完整性较好;IBV感染后14 d模型组鸡肾小管结构破坏,而治疗组鸡肾脏未见明显病理改变,预防组气管及肾脏损伤程度介于模型组和治疗组之间。在病毒载量方面,实时荧光定量PCR结果显示,预防组鸡气管及肾脏的病毒载量在感染后3和14 d显著低于模型组(P＜0.05),治疗组鸡气管及肾脏的病毒载量在观察期内均显著低于模型组(P＜0.05)。预防组和治疗组鸡气管免疫相关基因TLR7、IFN-α表达水平在感染后3 d显著高于模型组(P＜0.05);IBV感染后7 d,预防组鸡气管TLR7基因表达水平显著高于模型组(P＜0.05),治疗组鸡气管基因TLR7、IRF7、IFN-α、IFN-β表达水平均显著高于模型组(P＜0.05)。在IBV感染后3和7 d预防组和治疗组鸡气管TNF-α、IL-1β、IL-6、IL-12基因表达水平均显著低于模型组(P＜0.05)。【结论】 除湿利肺消毒散可有效缓解IBV感染鸡的临床症状,促进鸡体重增长,降低感染鸡气管及肾脏病毒载量并减轻组织病理损伤,维持鸡体内的免疫稳态,对鸡传染性支气管炎具有较好的预防和治疗作用。

【目的】 获得抗菌肽LL-1的完整基因序列,并研究其生物学特性及抗菌效果,为进一步研究开发抗菌肽药物奠定基础。【方法】 本研究通过桃蛀螟转录组测序和比对分析发现一种抗菌肽,命名为LL-1。通过RACE扩增技术获得其完整基因序列,从而推导其氨基酸序列。通过多重序列比对,获得其裂解后的成熟多肽并进行化学合成。通过建立大肠杆菌感染鸡肉模型,评价LL-1的抑菌效果,并检测其耐盐和耐高温特性。【结果】 LL-1基因全长 474 bp,ORF长192 bp,编码63个氨基酸残基,成熟的LL-1含有39个氨基酸残基,为天蚕素抗菌肽。50 mg/kg的LL-1能极显著抑制大肠杆菌在鸡肉中增殖(P<0.01)。耐温度特性分析结果表明,在4~50 ℃范围内,温度对抗菌肽LL-1的抑菌效果没有显著影响;与37 ℃相比,当100 ℃处理1 h后,抗菌肽LL-1的抑菌活性显著降低(P<0.05)。耐盐特性分析结果表明,在0~200 mmol/L NaCl溶液处理后,抗菌肽LL-1的抑菌效果未出现显著变化(P>0.05)。【结论】 抗菌肽LL-1具有较好的稳定性及抗菌活性,具有开发成新型药物的潜力。